專利名稱：一種喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及喜樹堿類藥物領(lǐng)域，尤其涉及喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物及其制造方法。
背景技術(shù)：
喜樹堿是從我國特有的珙桐科植物喜樹中提取的生物堿，喜樹堿及其衍生物能選擇性抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I干擾DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而達(dá)到殺傷細(xì)胞的作用。喜樹堿類藥物的優(yōu)點(diǎn)是抗癌譜廣、無交叉耐藥，對原發(fā)性肝癌、胃癌、頭頸部表皮癌、慢性粒細(xì)胞白血病、直腸癌和膀胱癌等多種惡性腫瘤均有效?；谝陨咸攸c(diǎn)，喜樹堿類藥物被看作是繼紫杉醇后在世界范圍具有顯著影響力的植物抗癌藥。
從分子結(jié)構(gòu)看，喜樹堿類藥物的母體結(jié)構(gòu)由處于同一平面的A、B、C、D、E五環(huán)構(gòu)成，其中AB環(huán)為喹啉環(huán)，C環(huán)為吡咯環(huán)，D環(huán)為吡啶環(huán)，E環(huán)為羥基內(nèi)酯環(huán)。羥基內(nèi)酯環(huán)是該類藥物的抗癌活性中心，但其結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，對熱、光、堿等敏感，在PH7或以上時大部分的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)開環(huán)變成羥基羧酸鹽，活性顯著降低，副作用增加。通常，喜樹堿類藥物還呈現(xiàn)出快速分布消除的藥動學(xué)特征，半衰期只有幾分鐘或幾十分鐘，需要反復(fù)給藥或延長療程。上述問題的存在一定程度上影響了喜樹堿類藥物的臨床使用。采用脂質(zhì)體技術(shù)解決喜樹堿類藥物的上述問題的研究已有較多的文獻(xiàn)和專利，因?yàn)橹|(zhì)體在改善喜樹堿類藥物的藥動學(xué)特征和腫瘤靶向性方面具有潛在優(yōu)勢，而且在制劑的安全性和穩(wěn)定性方面比乳劑、納米粒等納米給藥系統(tǒng)更好。目前，已有的專利大多關(guān)注的是保護(hù)喜樹堿類藥物的內(nèi)酯環(huán)，如中國專利(申請?zhí)?00310112772.6)《喜樹堿、羥基喜樹堿脂質(zhì)組合物及其制備方法》，該發(fā)明涉及的為抗癌藥喜樹堿、羥基喜樹堿脂質(zhì)組合物及其制備方法。喜樹堿、羥基喜樹堿脂質(zhì)組合物優(yōu)點(diǎn)在于既可解決主藥水不溶性，同時，又可保護(hù)主藥化學(xué)結(jié)構(gòu)中活性功能團(tuán)S內(nèi)酯不使開環(huán)而影響療效。又如中國專利(申請?zhí)?00410084647. 3)《10-羥基喜樹堿長循環(huán)脂質(zhì)體及其凍干制劑》，該發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及10-羥基喜樹堿長循環(huán)脂質(zhì)體，長循環(huán)脂質(zhì)體的凍干制劑及其制備方法。該發(fā)明公開了該制劑的可工業(yè)化實(shí)施的方法，用卵磷脂、大豆磷脂或氫化卵磷脂和PEG修飾的脂質(zhì)為膜材，用膽固醇作穩(wěn)定劑，用海藻糖或蔗糖作凍干保護(hù)劑，用乙醇和二氯甲烷作溶劑。該發(fā)明10-羥基喜樹堿長循環(huán)脂質(zhì)體制劑具有良好抗癌作用，其毒性小、病人耐受性好、水溶性及穩(wěn)定性提高、相對成本較低。上述兩個專利文獻(xiàn)中，采用的技術(shù)是將喜樹堿類藥物鑲嵌在磷脂雙分子層中制備成脂質(zhì)體。由于喜樹堿類藥物水難溶脂難溶且在通常的溶劑中溶解度有限，因此上述技術(shù)制備的脂質(zhì)體的載藥量較小，難以達(dá)到臨床要求的劑量。事實(shí)上，喜樹堿類藥物的開環(huán)與閉環(huán)是可逆的，當(dāng)pH彡5時喜樹堿類藥物主要是以閉環(huán)形式存在；細(xì)胞內(nèi)的pH在5左右，細(xì)胞內(nèi)有條件將開環(huán)的喜樹堿類藥物轉(zhuǎn)化成閉環(huán)的活性形式。因?yàn)殚_環(huán)的喜樹堿類藥物水溶性好，可以制成較高的濃度，所以將藥物包載在脂質(zhì)體內(nèi)水相可以提高喜樹堿類藥物的載藥量，然后通過脂質(zhì)體的靶向作用在腫瘤部位轉(zhuǎn)化成內(nèi)酯獲得更強(qiáng)的藥效。但是，另一個值得注意的問題是，我們必須保證脂質(zhì)體內(nèi)的藥物能夠穩(wěn)定的被包裹在脂質(zhì)體中，在到達(dá)腫瘤部位前不會將藥物泄漏。研究表明，喜樹堿類藥物開環(huán)后的羥基羧酸鹽與血漿蛋白的結(jié)合能力非常強(qiáng)，導(dǎo)致喜樹堿類藥物脂質(zhì)體產(chǎn)生突釋[《Influence of serum and albuminsfrom different species on stability of camptothecin-loaded micelles)) (((Journalof Controlled Release, Volumel04, Issue2, 18May2005, Pages313321》)和《輕基喜樹喊月旨質(zhì)體的制備及質(zhì)量評價研究》(《藥學(xué)與臨床研究》2008年第4期4頁274-277頁)]，藥物很快被清除，往往難以到達(dá)腫瘤部位發(fā)揮藥效。目前，提高喜樹堿類藥物在脂質(zhì)體中的載藥量并保證藥物在脂質(zhì)體中的穩(wěn)定是領(lǐng)域內(nèi)研究的重點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有高效穩(wěn)定特征的喜樹堿類抗癌藥物的脂質(zhì)體組合物，可直接用生理鹽水或葡萄糖溶液分散供靜脈給藥。進(jìn)一步說，本發(fā)明提供的高效穩(wěn)定的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物是通過將喜樹堿 類藥物分散到氨基化合物溶液中，兩者通過分子間或離子鍵作用形成水溶性的藥物復(fù)合物，然后將該藥物復(fù)合物溶液包裹在脂質(zhì)體內(nèi)腔。該藥物復(fù)合物可以形成較高的溶液濃度，相比其難溶性的內(nèi)酯環(huán)形式而言在單位脂質(zhì)體制劑中被包載的藥量可增加廣2倍，具有較高的傳遞劑量。因?yàn)橄矘鋲A類藥物的內(nèi)酯環(huán)在生理PH下容易開環(huán)，且開環(huán)產(chǎn)物與血漿蛋白具有很強(qiáng)的親和性，所以內(nèi)酯環(huán)型的喜樹堿類藥物被包載在脂質(zhì)體中應(yīng)用到體內(nèi)時開環(huán)平衡被破壞導(dǎo)致泄漏嚴(yán)重。本發(fā)明的脂質(zhì)體內(nèi)腔包裹的藥物-氨基復(fù)合物不易穿過脂質(zhì)體的磷脂雙分子層、對生理PH穩(wěn)定、藥物復(fù)合物的解離平衡在體內(nèi)能夠保持穩(wěn)定。因此本發(fā)明的脂質(zhì)體在體內(nèi)時具有穩(wěn)定不易泄漏的特點(diǎn)，從而保證了脂質(zhì)體將高劑量的藥物靶向傳遞至腫瘤部位，然后在腫瘤細(xì)胞的酸性條件下藥物能夠轉(zhuǎn)變成內(nèi)酯環(huán)活性形式發(fā)揮藥效。通過以上所述的技術(shù)手段，本發(fā)明的脂質(zhì)體不僅具有體內(nèi)高效穩(wěn)定的特點(diǎn)，另外還可以降低抗癌藥物的毒副作用，具有良好的臨床價值。本發(fā)明的另一目的是提供了制備上述高效穩(wěn)定喜樹堿類藥物脂質(zhì)體的制備方法。通過采用復(fù)乳化法或反相蒸發(fā)法生產(chǎn)脂質(zhì)體，可以實(shí)現(xiàn)幾升至上百升的規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，由下述重量配比原料及輔料組成喜樹堿類藥物5 25份、磷脂40 100份、膽固醇6 50份、維生素El 8份、氨基化合物10 100份。所述的喜樹堿類藥物為同類的喜樹堿、10-輕基喜樹堿、7-乙基-10-輕基喜樹堿的至少一種，或同類的伊立替康、拓?fù)涮婵?、勒托替康中的至少一種。所述的磷脂為大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆磷脂中的至少一種。所述的氨基化合物為葡甲胺、甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、精氨酸、賴氨酸、殼聚糖、水溶性殼聚糖衍生物、聚乙烯亞胺及其衍生物、PAMAM及其衍生物中的至少一種。所述的氨基化合物為葡甲胺、賴氨酸中的至少一種。所述的任一喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的脂質(zhì)體水相為喜樹堿類藥物與氨基化合物形成的水溶液；喜樹堿類藥物的分子數(shù)與氨基化合物中單個氨基化合物分子的胺基個數(shù)比例為1:廣1:10。所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，采用復(fù)乳化法，包括以下步驟
(I)將磷脂、膽固醇和維生素E共溶于有機(jī)溶劑，如氯仿、二氯甲烷、乙醇或乙醚中的一種或兩種的混合溶劑中形成有機(jī)相，；(2)在飽和的氨基化合物水溶液中，按喜樹堿類藥物的分子數(shù)與氨基化合物中單個氨基化合物分子的胺基個數(shù)為1:廣1:10的比例加入喜樹堿類藥物，于25 100°C攪拌至澄清，冷至室溫后作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為I: f 20:1混合，8000^14000轉(zhuǎn)/分高速 攪拌I 5分鐘制得W/0初乳；(4)快速將初乳傾入f 100倍體積的純化水，以100(Γ5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速攪拌10^30分鐘二次乳化；(5)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成脂質(zhì)體混懸液；(6)將混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在3(Tl20MPa下均質(zhì)3次，冷至室溫，加入與占脂質(zhì)體溶液質(zhì)量百分比為2 15%的凍干保護(hù)劑；(7)超濾除菌，灌裝，冷凍干燥后得到喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物成品。其中所述的步驟(6)的凍干保護(hù)劑選自甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、右旋糖苷、聚乙二醇和PVP中的至少一種。所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，采用反相蒸發(fā)法，包括以下步驟((I)將磷脂、膽固醇及維生素E溶于有機(jī)溶劑，如氯仿、二氯甲烷、乙醇或乙醚中的一種或兩者的混合溶劑中形成有機(jī)相；(2)在飽和的氨基化合物水溶液中，按喜樹堿類藥物的分子數(shù)與氨基化合物中單個氨基化合物分子的胺基個數(shù)為I:廣1:10的比例加入喜樹堿類藥物，于25 100° C攪拌至澄清，冷至室溫后作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為I:廣8:1以50(Γ5000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢鑿V10分鐘混合攪拌乳化；(4)乳液轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，水浴溫度為35 60° C、壓力為-O. 06 -O. 02MPa，蒸發(fā)有機(jī)溶劑，乳液先變成膠團(tuán)狀，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)膠團(tuán)溶解即形成帶乳光的脂質(zhì)體混懸液；(5)混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在3(Tl20MPa下勻化3次，冷至室溫，加入與占脂質(zhì)體溶液質(zhì)量百分比為2 15%的凍干保護(hù)劑；(6)超濾除菌，灌裝，冷凍干燥后得到喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物成品。所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述的步驟(6)的凍干保護(hù)劑選自甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、右旋糖苷、聚乙二醇和PVP中的至少一種。


圖I為采用復(fù)乳化法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的流程圖。圖2為采用反相蒸發(fā)法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的流程圖。圖3是本發(fā)明制備的脂質(zhì)體與按普通薄膜分散法制備的10-羥基喜樹堿脂質(zhì)體分別在ρΗ7· 4的PBS和含O. 5%人源血漿的pH7. 4PBS中的釋放曲線圖。圖4本發(fā)明制備的脂質(zhì)體與市售制劑、薄膜法脂質(zhì)體的大鼠體內(nèi)血藥濃度-時間曲線對比圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I、采用復(fù)乳化法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，采用復(fù)乳化法，包括以下步驟(I)大豆磷脂56g、膽固醇Sg和維生素E2. Sg共溶于適量二氯甲烷溶劑中，作為有機(jī)相；(2) 25mL飽和葡甲胺溶液中加入10-羥基喜樹堿5g，于50°C攪拌至澄清，冷至室溫作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為2:1混合，8000轉(zhuǎn)/分高速攪拌I分鐘制得W/0初乳； (4)快速將W/0初乳傾入450ml注射用水二次乳化，以5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速攪拌10分鐘；(5)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，以35°C恒溫減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成脂質(zhì)體混懸液；(6)將混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在75MPa下均質(zhì)3次,冷至室溫,加入葡萄糖15g溶解在混懸液中，加入注射用水調(diào)整體積為500mL ；(7)超濾除菌，濾液按2mL/瓶在無菌條件下，灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑為160nm，包封率為87%。實(shí)施例2、采用復(fù)乳化法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，采用復(fù)乳化法，包括以下步驟(I)氫化大豆磷脂72g、膽固醇33g和維生素El. Og共溶于適量二氯甲烷溶劑中，作為有機(jī)相；(2)在50mL飽和葡甲胺水溶液中加入10-羥基喜樹堿9. Og,于50°C攪拌至澄清，冷至室溫作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為10:1混合，14000轉(zhuǎn)/分高速攪拌I分鐘制得W/0初乳；(4)快速將W/0初乳傾入4L注射用水二次乳化，以5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速攪拌30分鐘；(5)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，以60°C恒溫減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成脂質(zhì)體混懸液；(6)將混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在75MPa下均質(zhì)3次，冷至室溫，加入甘露醇255g溶解在混懸液中，加注射用水調(diào)節(jié)體積至5L ；(7)超濾除菌，濾液按2mL/瓶在無菌條件下，灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑為85nm，包封率為95%。實(shí)施例3、采用復(fù)乳化法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，采用復(fù)乳化法，包括以下步驟
(I)蛋黃卵磷脂48g、膽固醇15g和維生素E2.5g共溶于適量二氯甲烷溶劑中，作為有機(jī)相；(2)在20mL飽和葡甲胺水溶液中加入伊立替康5g，于50°C攪拌至澄清，冷至室溫作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為5:1混合，8000轉(zhuǎn)/分高速攪拌I分鐘制得W/0初乳；(4)快速將W/0初乳傾入450mL注射用水二次乳化，以5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速攪拌10分鐘；(5)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，以35°C恒溫減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成脂質(zhì)體混懸液；(6)將混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在75MPa下均質(zhì)3次,冷至室溫,加入葡萄糖50g溶解在混懸液中，加注射用水調(diào)節(jié)體積至500mL ；(7)超濾除菌，濾液按2ml/瓶在無菌條件下，灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑為175nm，包封率為85%。實(shí)施例4、采用復(fù)乳化法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，采用復(fù)乳化法，包括以下步驟(I)大豆磷脂60g、膽固醇IOg和維生素E6g共溶于適量二氯甲烷溶劑中，作為有機(jī)相；(2)在IOmL飽和賴氨酸水溶液中加入10-羥基喜樹堿10g，于60°C攪拌至澄清，冷 至室溫作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為10:1混合，8000轉(zhuǎn)/分高速攪拌I分鐘制得W/0初乳；(4)快速將W/0初乳傾入450mL注射用水二次乳化，以5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速攪拌10分鐘；(5)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，以35°C恒溫減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成脂質(zhì)體混懸液；(6)將混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在75MPa下均質(zhì)3次，冷至室溫，加入甘露醇30g溶解在混懸液中，加入注射用水調(diào)節(jié)體積至500mL ；(7)超濾除菌，濾液按2ml/瓶在無菌條件下，灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑為205nm，包封率為82%。實(shí)施例5、采用反相蒸發(fā)法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，采用反相蒸發(fā)法，包括以下步驟(I)將氫化大豆磷脂75g、膽固醇20g及維生素El. 5g溶于適量二氯甲烷溶劑中形成有機(jī)相；(2) SOmL葡甲胺飽和溶液中加入10-羥基喜樹堿15g于50° C攪拌至澄清；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相與水相體積比為1:1混合，5000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢鐸分混合攪拌乳化；
(4)乳液轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，水浴溫度為60° C、壓力為-O. 06'0. 02MPa，蒸發(fā)有機(jī)溶劑，乳液先變成膠團(tuán)狀，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)膠團(tuán)溶解即形成帶乳光的脂質(zhì)體混懸液；(5)混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在120MPa下勻化3次，冷至室溫，加入凍干保護(hù)劑葡萄糖15g,加入注射用水調(diào)節(jié)體積至500mL ；(6)超濾除菌，濾液按2ml/瓶在無菌條件下，灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑約為145nm，包封率為85%。實(shí)施例6、采用反相蒸發(fā)法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，采用反相蒸發(fā)法，包括以下步驟 (I)將蛋黃卵磷脂100g、膽固醇50g及維生素E3g溶于適量二氯甲烷溶劑中形成有機(jī)相；(2) 20mL賴氨酸飽和溶液中加入10-羥基喜樹堿IOg于60° C攪拌至澄清，冷至室溫作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為8:1以2000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢鐸分鐘混合攪拌乳化；(4)乳液轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，水浴溫度為60° C、壓力為-O. 06^-0. 02MPa，蒸發(fā)有機(jī)溶劑，乳液先變成膠團(tuán)狀，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)膠團(tuán)溶解即形成帶乳光的脂質(zhì)體混懸液；(5)混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在120MPa下勻化3次，冷至室溫，加入凍干保護(hù)劑甘露醇150g，加注射用水調(diào)節(jié)體積至I. 5L ；(6)超濾除菌，濾液按2ml/瓶在無菌條件下，灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑約為120nm，包封率為87%。實(shí)施例7、采用反相蒸發(fā)法制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物(I)將大豆磷脂80g、膽固醇20g及維生素E4g溶于二氯甲烷溶劑中形成有機(jī)相；(2) 30mL賴氨酸飽和溶液中加入拓?fù)涮婵?5g于60° C攪拌至澄清，冷至室溫作為水相；(3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為5:1以5000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢鐸分鐘混合攪拌乳化；(4)乳液轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，水浴溫度為60° C、壓力為-O. 06^-0. 02MPa，蒸發(fā)有機(jī)溶劑，乳液先變成膠團(tuán)狀，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)膠團(tuán)溶解即形成帶乳光的脂質(zhì)體混懸液；(5)混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在120MPa下勻化3次，冷至室溫，加入凍干保護(hù)劑甘露醇75g，加注射用水調(diào)節(jié)體積至IL ；(6)超濾除菌，濾液按2ml/瓶在無菌條件下，灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑約為130nm，包封率為90%。對比試驗(yàn)實(shí)施例I
制備喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，采用普通膜分散法，包括以下步驟(I)10_羥基喜樹堿5g、氫化大豆磷脂150g、膽固醇IOg和維生素El. Og共溶于適量的二氯甲烷-乙醇(5:1，v/v)混合溶劑，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上；(2)于60° C下，壓力為-0.06'0.02MPa旋干成膜，再提高負(fù)壓抽干殘余的溶劑，用500mL注射用水洗脫脂質(zhì)膜，保溫進(jìn)行水合，充分水合即得到脂質(zhì)體混懸液；
(3)將混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在75MPa下勻化3次，冷至室溫，加入葡萄糖12. 5g溶解在脂質(zhì)體溶液中；(4)超濾除菌，濾液按2mL/瓶在無菌條件下灌封于西林瓶，冷凍干燥，即得淺黃色疏松塊狀脂質(zhì)體制劑。每瓶凍干脂質(zhì)體用5mL注射用水復(fù)溶，手振搖10余次，可快速分散成脂質(zhì)體溶液，平均粒徑約為240nm，包封率為57%。試驗(yàn)方法分別取一定量的按本發(fā)明制備的和按普通薄膜分散法制備的10-羥基喜樹堿脂質(zhì)體凍干粉末加到透析袋中，扎緊袋口 ；然后按中國藥典2010版轉(zhuǎn)籃法，將裝藥透析袋裝入轉(zhuǎn)籃，分別以900mL pH7. 4的PBS和添加了 O. 5%人源血漿的pH7. 4PBS作溶出介質(zhì)模擬考察脂質(zhì)體制劑在體內(nèi)的釋放行為。結(jié)果見附圖3，其中實(shí)線表示按本發(fā)明方法制備的脂質(zhì)體凍干粉的釋放曲線，虛線則表示按普通薄膜分散法制備的脂質(zhì)體凍干粉的釋放曲線。對比研究表明，按本發(fā)明方法制備的脂質(zhì)穩(wěn)定性良好，不易泄漏，而按普通的薄膜分散法制備的10-羥基喜樹堿脂質(zhì)體較容易泄漏，不利于藥效的發(fā)揮。對比試驗(yàn)實(shí)施例2本發(fā)明方法脂質(zhì)體與市售制劑、薄膜法脂質(zhì)體的大鼠體內(nèi)血藥濃度-時間曲線對比分析試驗(yàn)方法將體重為220±20g的SOD雄性大鼠隨機(jī)分成三組，按10mg/kg劑量尾靜脈注射分別給予10-羥基喜樹堿的本發(fā)明法脂質(zhì)體、10-羥基喜樹堿的市售制劑(拓喜，武漢李時珍藥業(yè)有限公司)和10-羥基喜樹堿的薄膜法自制脂質(zhì)體三種受試制劑，分別在
O.083,0. 25,0. 5,0. 75、I. 5,2. 5、4、6、8、12h等時間點(diǎn)眼靜脈叢取血200 μ L (每個時間點(diǎn)6只大鼠，η=6)，離心取上層血漿，HPLC法分析血漿中的10-羥基喜樹堿的濃度，繪制血漿藥物濃度-時間曲線。以二房室模型擬合血藥濃度時間曲線，計算主要藥動學(xué)參數(shù)。表I三種制劑的主要藥動學(xué)參數(shù)(η=6)
權(quán)利要求
1.一種喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，其特征在于由下述重量配比原料及輔料組成喜樹堿類藥物5 25份、磷脂40 100份、膽固醇6 50份、維生素El 8份、氨基化合物10 100份。
2.如權(quán)利要求I所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的喜樹堿類藥物為喜樹堿、10-羥基喜樹堿、7-乙基-10-羥基喜樹堿、伊立替康、拓?fù)涮婵怠⒗胀刑婵抵械闹辽僖环N。
3.如權(quán)利要求I所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物， 其特征在于所述的磷脂為大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆磷脂中的至少一種。
4.如權(quán)利要求I所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的氨基化合物為葡甲胺、甘氨酸、丙氨酸、組氨酸、精氨酸、賴氨酸、殼聚糖、水溶性殼聚糖衍生物、聚乙烯亞胺及其衍生物、PAMAM及其衍生物中的至少一種。
5.如權(quán)利要求4所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的氨基化合物為葡甲胺、賴氨酸中的至少一種。
6.如權(quán)利要求f5所述的任一喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的脂質(zhì)體水相為喜樹堿類藥物與氨基化合物形成的水溶液；喜樹堿類藥物的分子數(shù)與氨基化合物中單個氨基化合物分子的胺基個數(shù)比例為I:廣1:10。
7.如權(quán)利要求I所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，采用復(fù)乳化法，包括以下步驟 (1)將磷脂、膽固醇和維生素E共溶于有機(jī)溶劑，如氯仿、二氯甲烷、乙醇或乙醚中的一種或兩種的混合溶劑中形成有機(jī)相； (2)在飽和的氨基化合物水溶液中，按喜樹堿類藥物的分子數(shù)與氨基化合物中單個氨基化合物分子的胺基個數(shù)為I:廣1:10的比例加入喜樹堿類藥物，于25 100°C攪拌至澄清，冷至室溫后作為水相； (3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為I:Γ20:1混合，8000^14000轉(zhuǎn)/分高速攪拌Γ5分鐘制得m初乳； (4)快速將初乳傾入1 100倍體積的純化水，以1000 5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速攪拌10 30分鐘二次乳化； (5)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成脂質(zhì)體混懸液； (6)將混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在3(Tl20MPa下均質(zhì)3次，冷至室溫，加入與占脂質(zhì)體溶液質(zhì)量百分比為2 15%的凍干保護(hù)劑； (7)超濾除菌，灌裝，冷凍干燥后得到喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物成品。
8.如權(quán)利要求7所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述的步驟(6)的凍干保護(hù)劑選自甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、右旋糖苷、聚乙二醇和PVP中的至少一種。
9.如權(quán)利要求I所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，采用反相蒸發(fā)法，包括以下步驟 (1)將磷脂、膽固醇及維生素E溶于有機(jī)溶劑，如氯仿、二氯甲烷、乙醇或乙醚中的一種或兩者的混合溶劑中形成有機(jī)相； (2)在飽和的氨基化合物水溶液中，按喜樹堿類藥物的分子數(shù)與氨基化合物中單個氨基化合物分子的胺基個數(shù)為I: f 1:10的比例加入喜樹堿類藥物，于25 100° C攪拌至澄清，冷至室溫后作為水相； (3)將步驟(I)和步驟(2)的溶液按有機(jī)相和水相體積比為I:I 8:1以500 5000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢鑿V10分鐘混合攪拌乳化； (4)乳液轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，水浴溫度為35 60°C、壓力為-O. 06^-0. 02MPa，蒸發(fā)有機(jī)溶齊U，乳液先變成膠團(tuán)狀，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)膠團(tuán)溶解即形成帶乳光的脂質(zhì)體混懸液； (5)混懸液用高壓勻質(zhì)機(jī)在3(Tl20MPa下勻化3次，冷至室溫，加入與占脂質(zhì)體溶液質(zhì)量百分比為2 15%的凍干保護(hù)劑； (6)超濾除菌，灌裝，冷凍干燥后得到喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物成品。
10.如權(quán)利要求9所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述的步驟(6)的凍干保護(hù)劑選自甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、右旋糖苷、聚乙二醇和PVP中的至少一種。
全文摘要
一種喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物，由下述重量配比原料及輔料組成喜樹堿類藥物5~25份、磷脂40~100份、膽固醇6~50份、維生素E1~8份、氨基化合物10~100份。所述的喜樹堿類藥物脂質(zhì)體組合物的制備方法，采用復(fù)乳化法和反相蒸發(fā)法制備。氨基化合物水溶液對喜樹堿類藥物有增溶作用，通過分子間或離子鍵作用能夠形成一種水溶性復(fù)合物。復(fù)合物對生理pH穩(wěn)定、有較高的溶液濃度，將其包裹在脂質(zhì)體內(nèi)腔，即可增加藥物的傳遞量，也避免了內(nèi)酯環(huán)型喜樹堿類藥物在體內(nèi)因pH和血漿蛋白的影響而大量開環(huán)泄露的問題。復(fù)合物穩(wěn)定的被包裹在脂質(zhì)體內(nèi)，通過脂質(zhì)體的靶向作用到達(dá)腫瘤部位，然后在腫瘤細(xì)胞的酸性條件下藥物能夠以內(nèi)酯環(huán)形式發(fā)揮藥效，具有增加藥效和降低毒性的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A61K47/48GK102961335SQ20121051966
公開日2013年3月13日 申請日期2012年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月6日
發(fā)明者楊經(jīng)安, 王志國, 崔婧, 李寧, 王麗麗 申請人:深圳海王藥業(yè)有限公司