專利名稱：提取物和制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有規(guī)定量的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物和以該提取物為有效成分的制劑等。
背景技術(shù)：
醫(yī)藥品是只有確保其品質(zhì)才能受到制造銷售的許可的商品。在日本，在藥事法第14條中對(duì)此進(jìn)行了規(guī)定。在其他各國(guó)，在醫(yī)藥品的性質(zhì)上，這樣的處理基本上也是同樣的。這樣在醫(yī)藥品中品質(zhì)的確保被認(rèn)為很重要是因?yàn)槠焚|(zhì)會(huì)保證醫(yī)藥品的有效性和安全性。反過來說，品質(zhì)沒有得到確保的醫(yī)藥品，不能保證有效性和安全性，就缺少作為醫(yī)藥品的資格。在日本，作為 醫(yī)藥品的生產(chǎn)中所使用的原料物質(zhì)且成為醫(yī)藥品的有效成分的物質(zhì)被稱為“原藥”。另外，原藥和醫(yī)藥品也同樣必須確保其品質(zhì)。原因是醫(yī)藥品的品質(zhì)依賴于原藥的品質(zhì)。另外，在日本的藥事相關(guān)法令中，原藥被規(guī)定為專門用于制造其它醫(yī)藥品的醫(yī)藥品，定義上，原藥被包含在醫(yī)藥品中。但是，在本申請(qǐng)中，為了方便，有時(shí)分別稱醫(yī)藥品和原藥，此時(shí)的醫(yī)藥品是指除去原藥以外的醫(yī)藥品?！愣?，醫(yī)藥品和原藥由規(guī)定的制造方法制造，從而制造規(guī)定品質(zhì)的醫(yī)藥品和原藥。另外，在實(shí)際中是否具有規(guī)定的品質(zhì)，由制造后進(jìn)行的試驗(yàn)和檢查來確認(rèn)。在那樣的試驗(yàn)和檢查的結(jié)果不符合預(yù)先確定的基準(zhǔn)時(shí)，該醫(yī)藥品和原藥不被許可上市、銷售等。這樣操作來對(duì)醫(yī)藥品和原藥管理其品質(zhì)。痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物(以下有時(shí)稱為“本提取物”)是含有從接種痘苗病毒而發(fā)痘的兔的炎癥皮膚組織中提取分離的非蛋白性的活性物質(zhì)的提取物。本提取物在被提取后的狀態(tài)下為液體，但通過干燥也能夠制成固體。含有本提取物為有效成分的制劑(以下有時(shí)稱為“本制劑”)，如后所述，作為醫(yī)藥品非常有用。此時(shí)，因?yàn)楸咎崛∥锸潜局苿┑挠行С煞?，所以本提取物就成為本制劑的原藥。作為本制劑，申?qǐng)人在日本制造銷售的具體商品中有“含有痘苗病毒接種家兔炎癥皮膚提取液的制劑”(商品名:NEUR0TR0PIN [注冊(cè)商標(biāo)]，以下稱為“NTP制劑”)。在NTP制劑中，有注射劑(以下稱為“NTP注射劑”)和片劑(以下稱為“NTP片劑”)，均為醫(yī)療用醫(yī)藥品(ethical drug)。作為NTP制劑有效成分的痘苗病毒接種家兔炎癥皮膚提取液(以下稱為“NTP提取液”)是NTP制劑的原藥。NTP提取液包含在本提取物中，NTP制劑(NTP注射劑和NTP片劑)包含在本制劑中。NTP注射劑的適應(yīng)癥為“腰痛癥、頸肩腕綜合征、癥狀性神經(jīng)痛、伴隨皮膚病(濕疹、皮膚炎、蕁麻疹)的搔癢、過敏性鼻炎、亞急性視神經(jīng)脊髓病(SMON)后遺癥的冷感-知覺異常-疼痛”。NTP片劑的適應(yīng)癥為“帶狀皰疹后神經(jīng)痛、腰痛癥、頸肩腕綜合征、肩周炎、變形性關(guān)節(jié)炎”。NTP制劑是申請(qǐng)人創(chuàng)制并作為醫(yī)藥品開發(fā)得到的制劑。就NTP制劑而言，其有效性和安全性中的優(yōu)異特點(diǎn)受到較高評(píng)價(jià)，長(zhǎng)年被銷售，在日本的醫(yī)藥品市場(chǎng)中確立了堅(jiān)固地位。另外，現(xiàn)在NTP制劑被出口到中國(guó)，以“神經(jīng)妥樂平/NEUR0TR0PIN”的商品名銷售。在中國(guó)的NTP制劑的適應(yīng)癥與日本相同。這樣，本制劑作為醫(yī)藥品十分有用，本提取物作為本制劑的原藥也十分有用。但是，如上所述，本提取物是從接種痘苗病毒而發(fā)痘的兔的炎癥皮膚組織中提取分離的提取物。因此，本提取物含有極多的物質(zhì)(成分)，使用本提取物制造的本制劑也仍然含有極多的物質(zhì)(成分)。因此，怎樣管理本提取物和本制劑的品質(zhì)是非常重要的事項(xiàng)。許多醫(yī)藥品是以I種或最多2 3種物質(zhì)(成分)作為有效成分的制劑，通常，這些物質(zhì)是被化學(xué)合成的化合物。因此，測(cè)定該制劑中的該化合物的含量，如果含有規(guī)定的量，則從該制劑的有效成分含量的方面出發(fā)的品質(zhì)就得到保證。但是，本提取物是來自接種痘苗病毒而發(fā)痘的兔的炎癥皮膚組織的提取物，含有極多種類的物質(zhì)。以本提取物為有效成分的本制劑，當(dāng)然也同樣含有極多種類的物質(zhì)。這樣，本提取物和本制劑不是以特定的I種或數(shù)種物質(zhì)作為有效成分，所以不能進(jìn)行將有效成分作為物質(zhì)進(jìn)行特別規(guī)定的通常的醫(yī)藥品中那樣的品質(zhì)管理。因此，申請(qǐng)人制造的本提取物和本制劑，即NTP提取液和NTP制劑的有效成分定量(quantitative determination),通過測(cè)定其生物活性(效價(jià)、titer)的方法進(jìn)行。上述方法是使用作為疼痛閾值比正常動(dòng)物低的慢性應(yīng)激動(dòng)物的SART應(yīng)激(反復(fù)寒冷負(fù)荷)動(dòng)物求出鎮(zhèn)痛系數(shù)的生物學(xué)試驗(yàn)方法(“日藥理志”、第72卷、第5號(hào)、573-584頁(yè)、1976年)。通過該文獻(xiàn)所記載的方 法，使用作為疼痛閾值比正常動(dòng)物低的慢性應(yīng)激動(dòng)物的SART應(yīng)激(反復(fù)寒冷負(fù)荷)動(dòng)物，由炎癥足加壓(Randall-Selitt0)法進(jìn)行鎮(zhèn)痛試驗(yàn)求出鎮(zhèn)痛系數(shù)。該方法是在小鼠的尾部施加壓力刺激，以直到小鼠顯示逃避反應(yīng)的加壓重量為指標(biāo)，測(cè)定鎮(zhèn)痛效果的方法。所謂鎮(zhèn)痛系數(shù)是將在投與藥物后測(cè)定的加壓重量除以藥物投與前測(cè)定的加壓重量得到的值。關(guān)于NTP提取液和NTP制劑，以顯示申請(qǐng)人規(guī)定的一定值以上的鎮(zhèn)痛系數(shù)的情況作為鎮(zhèn)痛效果陽性，求出被判斷為陽性的動(dòng)物只數(shù)的比例，作為鎮(zhèn)痛有效率(％)。從該值，根據(jù)對(duì)于稀釋為各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定的結(jié)果求出ED5tl值。作為申請(qǐng)人關(guān)于NTP制劑使用的生物活性(效價(jià))的單位的“Neurotropin單位(NU)”,通過將ED5tl值為投與量100mg/kg (小鼠體重)的本提取物Img顯示的活性設(shè)為INeurotropin單位來定義。然后，關(guān)于各NTP制劑測(cè)定ED5tl值，與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較來定量鎮(zhèn)痛活性(有效成分量)。以下，在本申請(qǐng)中，作為本提取物和本制劑的有效成分量(效價(jià))的尺度，使用“單位”這樣的表示，但實(shí)質(zhì)上與NTP提取液和NTP制劑中使用的“Neurotropin單位”意義相同。但是，在申請(qǐng)人制造的本提取物和本制劑，即NTP提取液和NTP制劑中，在上述鎮(zhèn)痛活性的定量以外，還進(jìn)行如下的多個(gè)確認(rèn)試驗(yàn)，規(guī)定必須符合這些試驗(yàn)。.由液相色譜法進(jìn)行的氨基酸的確認(rèn)試驗(yàn).由紫外可見吸光度測(cè)定法進(jìn)行的紫外部吸收物質(zhì)的確認(rèn)試驗(yàn).由顯色反應(yīng)法進(jìn)行的磷的確認(rèn)試驗(yàn).由液相色譜法進(jìn)行的核酸堿基的確認(rèn)試驗(yàn).由in vitro試驗(yàn)法進(jìn)行的血管舒緩素樣物質(zhì)產(chǎn)生抑制作用的確認(rèn)試驗(yàn)一般而言，對(duì)于制造來自動(dòng)物和植物這樣的生物的提取物和含有該提取物為有效成分的制劑的制造者來說，由于不需要用于試驗(yàn)和檢查的時(shí)間、勞動(dòng)、費(fèi)用，另外制造品變得不合格的可能性也降低，所以該制劑必須符合的基準(zhǔn)少是有利的。但是，從保證上述那樣的提取物和制劑品質(zhì)的觀點(diǎn)出發(fā)，希望應(yīng)該符合的基準(zhǔn)被更嚴(yán)格地規(guī)定。本發(fā)明是從這樣的觀點(diǎn)出發(fā)，關(guān)于申請(qǐng)人制造的本提取物和本制劑，作為應(yīng)該符合的新基準(zhǔn)而深入研究適合的基準(zhǔn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)的發(fā)明。由此，本提取物和本制劑的品質(zhì)變得更加穩(wěn)定。另外，由此，本提取物和本制劑的有效性和安全性受到更加嚴(yán)格地保證。作為公開本提取物或本制劑的文獻(xiàn)，存在專利文獻(xiàn)I至3。在這些文獻(xiàn)中有關(guān)于在本提取物或本制劑中的氨基酸和核酸堿基的含量的記載。另外，相同關(guān)于本提取物或本制齊U，在專利文獻(xiàn)4中有關(guān)于硅類含量的記載。但是，在這些專利文獻(xiàn)I至4中，關(guān)于本提取物或本制劑含有多少N-乙?；窠?jīng)氨酸這樣的特定物質(zhì)卻沒有任何記載。況且，在這些文獻(xiàn)中，關(guān)于將本提取物或本制劑中的N-乙?；窠?jīng)氨酸含量作為用于本提取物或本制劑品質(zhì)管理的指標(biāo)既沒有記載也沒有啟示?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1:中國(guó)專利公開CN1205233A公報(bào)專利文獻(xiàn)2:國(guó)際公開W02004/060381號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3:中國(guó)專利公開CN1613305A公報(bào)專利文獻(xiàn)4:日本特開平7 - 97336號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的課題

如上所述，在本提取物和本制劑中，沒有鑒定單一物質(zhì)作為有效成分。因此，本提取物和本制劑的品質(zhì)，通過使用SART應(yīng)激小鼠求出鎮(zhèn)痛系數(shù)的生物學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行的效價(jià)檢測(cè)和多個(gè)確認(rèn)試驗(yàn)等來確保。另外，盡管如此，在本提取物和本制劑中包含的各種成分在每個(gè)制造批次中不可避免地有相當(dāng)程度的偏差。但是，既然本制劑作為治療疾病的醫(yī)藥品而使用，就希望其品質(zhì)盡可能保持一定。更穩(wěn)定地確保本提取物和本制劑的品質(zhì)，關(guān)系到將本提取物和本制劑的有效性和安全性制造得更恒定，是非常有意義的。用于解決課題的方法本發(fā)明是以在本提取物和本制劑中含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量作為指標(biāo)來確保本提取物和本制劑的品質(zhì)的發(fā)明?；诖?，本發(fā)明提供:含有所規(guī)定量的N-乙?；窠?jīng)氨酸的本提取物和本制劑、由N-乙?；窠?jīng)氨酸的含量管理或評(píng)價(jià)本提取物和本制劑的品質(zhì)的方法、或以那樣的方法進(jìn)行品質(zhì)管理得到的本提取物和本制劑。發(fā)明的效果本發(fā)明涉及的本提取物和本制劑是含有規(guī)定量的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的提取物和制劑。由此，本提取物和本制劑的品質(zhì)得到更穩(wěn)定的確保，本提取物和本制劑的有效性和安全性變得更恒定。
具體實(shí)施例方式
N-乙酰基神經(jīng)氨酸是涎酸的一種。涎酸是神經(jīng)氨酸的?；苌锏目偡Q，在自然界中存在多種涎酸，其中，N-乙?；窠?jīng)氨酸最多，N-羥乙酰神經(jīng)氨酸第二位多。涎酸作為糖蛋白、糖脂質(zhì)、糖肽等的構(gòu)成成分在生物體內(nèi)廣泛分布，特別存在于動(dòng)物或細(xì)菌的細(xì)胞膜表面，承擔(dān)著參與細(xì)胞的特異性識(shí)別機(jī)理等重要的生物學(xué)功能。另外，涎酸作為與癌、炎癥、免疫、病毒感染、細(xì)胞分化、激素受體等相關(guān)的物質(zhì)，在醫(yī)學(xué)和藥學(xué)中受到重視，關(guān)于含有涎酸的生物體成分、涎酸及其衍生物進(jìn)行著各種研究。關(guān)于該涎酸、特別關(guān)于N-乙?；窠?jīng)氨酸，申請(qǐng)人意外地發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)具有鎮(zhèn)痛作用，特別具有對(duì)神經(jīng)性疼痛(neuropathic pain disease)等的非炎癥性疼痛疾病(non-1nf lammatory pain disease)的效果,基于這樣的發(fā)現(xiàn)而取得了專利(日本特許第4005115號(hào)、中國(guó)授權(quán)公告號(hào)CN101600438B)。因?yàn)樯暾?qǐng)人制造銷售的NTP制劑的特征也是對(duì)神經(jīng)性疼痛等的治療效果，所以作為用于更嚴(yán)格地管理本提取物和本制劑的品質(zhì)的指標(biāo)，N-乙?；窠?jīng)氨酸是合理的物質(zhì)(成分)。接著，說明制造本提取物和本制劑的方法。本提取物能夠通過采集在兔的皮膚中接種痘苗病毒而發(fā)痘的炎癥皮膚，進(jìn)行破碎，加入提取溶劑處理后，除去組織片，進(jìn)行除蛋白處理，將其在酸性條件下使其吸附于吸附劑，接著在堿性條件下將有效成分洗脫而得到。其中，痘苗病毒(vaccinia virus)可以是任意株的痘苗病毒。作為例子，可以列舉利斯特(Lister)株、大連(Dairen)株、池田(Ikeda)株、EM-63株、紐約市公眾衛(wèi)生局(NewYork City Board of Health)株等。

另外,兔只要屬于兔形目就可以為任意的兔。作為例子,有穴兔、家兔(將穴兔馴化的兔)、野兔(日本野兔)、鼠兔、雪兔等。其中，適合使用家兔。在日本，有從過去被飼養(yǎng)的作為家畜或?qū)嶒?yàn)用動(dòng)物而頻繁使用的稱為家養(yǎng)兔(4 -々寸jO的兔，但這也是家兔的別稱。在家兔中存在多個(gè)品種(breed)，但能夠優(yōu)選使用稱為日本白色種和新西蘭白色種(新西蘭白)的品種。作為本提取物的基本的提取工序，例如，使用以下那樣的工序。(A)采集皮內(nèi)接種痘苗病毒、使其發(fā)痘的兔的皮膚組織，將發(fā)痘組織破碎，加入水、苯酚水、生理鹽水或加有苯酚的甘油水等的提取溶劑進(jìn)行數(shù)日的提取處理后，由過濾或離心分離，得到組織片被除去的粗提取液(濾液或上清液)。(B)將在(A)中得到的粗提取液調(diào)整為酸性的pH進(jìn)行加熱，過濾或離心分離進(jìn)行除蛋白處理。接著，將除蛋白后的溶液調(diào)整為堿性的pH進(jìn)行加熱，再過濾或離心分離，得到除蛋白處理后的濾液或上清液。(C)將在(B)中得到的濾液或上清液調(diào)整為酸性的pH，使其吸附于活性碳、高嶺土等的吸附劑。(D)在(C)中得到的吸附劑中加入水等的提取溶劑，調(diào)整為堿性的pH，通過將吸附成分洗脫，得到痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物(本提取物)。以上是基本的工序，如下將更詳細(xì)地?cái)⑹鲞@些工序。關(guān)于(A)米集在兔的皮膚中將痘苗病毒進(jìn)行皮內(nèi)接種使其發(fā)痘的炎癥皮膚組織。米集的皮膚組織以苯酚溶液等進(jìn)行清洗、消毒。破碎該炎癥皮膚組織，加入其I至5倍量的提取溶劑。其中，所謂破碎是指使用絞肉機(jī)等細(xì)致地破碎為肉末狀。另外，作為提取溶劑，能夠使用蒸餾水、生理鹽水、弱酸性至弱堿性的緩沖液等，也可以適當(dāng)添加苯酚等的殺菌-防腐劑、甘油等的穩(wěn)定劑、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂等的鹽類等。此時(shí)，也能夠通過冷凍融化、超聲波、細(xì)胞膜溶解酶或表面活性劑等的處理來破壞細(xì)胞組織使提取變得容易。將得到的懸濁液放置5日至12日。此期間，可以邊適當(dāng)攪拌或不攪拌邊加溫到30至45°C。通過將得到的液體過濾或離心分離等除去組織片，得到粗提取液(濾液或上清液)。關(guān)于(B)對(duì)在(A)中得到的粗提取液進(jìn)行除蛋白處理。除蛋白能夠由通常進(jìn)行的公知方法實(shí)施，能夠應(yīng)用加熱處理、由蛋白質(zhì)變性劑(例如酸、堿、脲、胍、丙酮等有機(jī)溶劑等)的處理、等電點(diǎn)沉淀、鹽析等的方法。接著，通過除去不溶物的通常方法，例如使用濾紙(纖維素、硝酸纖維素等)、玻璃過濾器、硅藻土制品、塞茨過濾板等的過濾、超濾、離心分離等，得到除去了析出的不溶蛋白質(zhì)的濾液或上清液。關(guān)于(C)將在(B)中得到的濾液或上清液調(diào)整為酸性、優(yōu)選調(diào)整為pH3.5至5.5，進(jìn)行向吸附劑的吸附操作。作為能夠使用的吸附劑，能夠列舉活性碳、高嶺土等，在提取液中添加吸附劑進(jìn)行攪拌或使提取液通過吸附劑填充柱，能夠使有效成分吸附于該吸附劑。在提取液中添加吸附劑時(shí)，通過過濾或離心分離等除去溶液，能夠得到吸附有活性成分的吸附劑。關(guān)于(D) 為了使活性成分從(C)中得到的吸附劑中洗脫(脫離)，在該吸附劑中加入洗脫溶齊U，調(diào)整為堿性、優(yōu)選調(diào)整為PH9至12，在室溫或適當(dāng)加熱、或者攪拌進(jìn)行洗脫，以過濾或離心分離等通常的方法除去吸附劑。作為所使用的洗脫溶劑，能夠使用堿性溶劑，例如，能夠使用調(diào)整為堿性PH的水、甲醇、乙醇、異丙醇等或它們的適當(dāng)?shù)幕旌先芤?，能夠?yōu)選使用調(diào)整為pH9至12的水。洗脫溶劑的量能夠適當(dāng)設(shè)定。為了將這樣操作得到的洗脫液作為原藥使用，能夠?qū)H適當(dāng)?shù)卣{(diào)整到中性附近等，最終得到痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物(本提取物)。本提取物在制成時(shí)為液體，因此也能夠通過適當(dāng)濃縮、稀釋制成所希望濃度的提取物。從本提取物制造制劑時(shí)，優(yōu)選施加加熱滅菌處理。為了制成注射劑，例如，能夠加入氯化鈉等配制與生理鹽水等滲的溶液。另外，也能夠通過對(duì)液體狀態(tài)的本提取物進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s干燥固化等的操作，制造片劑等的口服用固體制劑。從本提取物制造這樣的口服用固體制劑的具體方法，在日本特許第3818657號(hào)和日本特許第4883798號(hào)的說明書中有記載。本制劑是這樣操作得到的注射劑或口服用固體制劑等。在本提取物和本制劑中的N-乙?；窠?jīng)氨酸的含量，能夠由通常所使用的定量法測(cè)定。具體而言，例如，能夠使用利用液相色譜質(zhì)譜分析儀(LC-MS)或毛細(xì)管電泳質(zhì)譜儀(CE-MS)的測(cè)定法、由DMB (1，2-二氨基-4，5-亞甲基二氧苯)的熒光標(biāo)識(shí)法、酶法等。在任意I種方法中，都能夠使用以校正用的N-乙?；窠?jīng)氨酸試樣制作的校正曲線，將本提取物和本制劑中的N-乙?；窠?jīng)氨酸進(jìn)行定量。以上述那樣的方法測(cè)定申請(qǐng)人制造的本提取物和本制劑中所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的含量。其結(jié)果，在本提取物和本制劑中，雖然有偏差，但每I單位含有4000ng以上的N-乙?；窠?jīng)氨酸。進(jìn)一步而言，在本提取物和本制劑中，每I單位含有4000 18000ng的N-乙?；窠?jīng)氨酸。因此，在以本提取物和本制劑中的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的含量作為指標(biāo)管理本提取物和本制劑的品質(zhì)時(shí)，判斷能夠?qū)⑦@樣的含量設(shè)定為基準(zhǔn)。另外，對(duì)申請(qǐng)人而言，確認(rèn)了在本提取物和本制劑的制造方法上有變動(dòng)時(shí)，N-乙?；窠?jīng)氨酸的含量有時(shí)會(huì)低于每I單位4000ng以下。
其中，從上述說明可知，所謂“每I單位”是指在本提取物和本制劑中的每有效成分含量的意思。在申請(qǐng)人制造的本提取物(NTP提取液)中，含有1.2單位/mL的有效成分。在使用其制造的注射劑用的本制劑(NTP注射劑)也同樣含有1.2單位/mL的有效成分。在NTP注射劑中，存在容量3mL的注射劑和ImL的注射劑。因此，在3mL的制劑中含有3.6單位的有效成分，在ImL的制劑中含有1.2單位的有效成分。另一方面，在申請(qǐng)人制造的口服用本制劑(NTP片劑)中，每I片含有4單位的有效成分。然而，本提取物能夠濃縮或稀釋。另外，本制劑也能夠制造含有各種單位的制劑。此時(shí),在本提取物和本制劑的每份分量(每lmL、每lmg、每I管、每I片等)中所含有的有效成分的量也可以變化。因此，基本上意味著以與本提取物和本制劑的有效成分的量的關(guān)系規(guī)定N-乙酰基神經(jīng)氨酸的含量。原因是這涉及與本提取物和本制劑的有效性和安全性的關(guān)系的緣故。因此，申請(qǐng)人以每有效成分的含量(“每I單位”)規(guī)定本提取物和本制劑中的N-乙?；窠?jīng)氨酸的含量。另一方面，申請(qǐng)人從現(xiàn)在制造銷售NTP制劑出發(fā)，以具體的注射劑的每ImL和每I管或以片劑每I片進(jìn)行規(guī)定，也由于在與投與量的關(guān)系上具有一定的意義，所以也進(jìn)行那樣的規(guī)定。但是，在NTP注射劑中，在日本和中國(guó)存在申請(qǐng)人以外的公司(以下稱為“其它公司”)制造的仿制品(generic drug)或類似制劑(similardrug)(以下將這些稱為“其它公司注射劑”)。這些其它公司注射劑也與NTP制劑同樣地使用SART應(yīng)激小鼠，以鎮(zhèn)痛效果為指標(biāo)，進(jìn)行作為有效成分的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物(本提取物)的定量。在表示上，這些其它公司注射劑的有效成分含量，如作為在日本的多個(gè)其它公司注射劑的“ R0SEM0RGENIn.”(注冊(cè)商標(biāo))、“NABUT0PINInj.”(注冊(cè)商標(biāo))和“N0LP0RT Inj.”(注冊(cè)商標(biāo))那樣，既有簡(jiǎn)單表示為“單位”的注射劑，也有作為在中國(guó)的其它公司注射劑的“恩再適/ANALGECINE”(注冊(cè)商標(biāo))那樣地表示為“Analgecine單位”或“AGC單位”的注射劑。但是，即使是在這些任意制劑中，有效成分的含量也與NTP注射劑同樣地為每ImL為1.2單位或1.2Analgecine(1.2AGC)單位，在3mL裝的制品I管中含有3.6單位或3.6Analgecine (3.6AGC)單位。結(jié)果,在NTP制劑中使用的“Neurotropin單位”和其它公司使用的“單位”或“Analgecine單位”只是表示方法不同， 作為規(guī)定有效成分含量的單位是相同的尺度。因此，在本申請(qǐng)中，不僅NTP制劑，還包含所有的其它公司的注射劑，作為表示有效成分即本提取物的含量的表示都使用“單位”。這樣，多個(gè)以痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物作為有效成分的制劑，以“單位”表示有效成分，就該制劑而言，“單位”表示對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是明確的。從以上可知，在本申請(qǐng)中，“本制劑”是包含NTP制劑(NTP注射劑和NTP片劑)和其它公司注射劑的概念。另外，其它公司作為NTP制劑的仿制品或類似品將要制造、銷售片齊U (以下稱為“其它公司片劑”)時(shí)，也是還包含其它公司片劑的概念。以下，作為實(shí)施例表示本提取物和本制劑制造的具體例、以及在本提取物和本制劑中的N-乙?；窠?jīng)氨酸含量的測(cè)定結(jié)果，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的記載任何限制。實(shí)施例實(shí)施例1 (本提取物的制造)在健康成熟家兔的皮膚中皮內(nèi)接種痘苗病毒，切下并采集發(fā)痘的皮膚。采集的皮膚以苯酚溶液進(jìn)行清洗、消毒后，除去多余的苯酚溶液，進(jìn)行破碎，加入苯酚溶液混合，放置3 7日后，進(jìn)而邊攪拌3 4日邊在35 40°C加溫。然后，以鹽酸將固液分離得到的提取液調(diào)整到PH4.5 5.2，以90 100°C加熱處理30分鐘后，過濾除去蛋白。再以氫氧化鈉將濾液調(diào)整到PH9.0 9.5，以90 100°C加熱處理15分鐘后，進(jìn)行固液分離。以鹽酸將得到的除蛋白液調(diào)整到pH4.0 4.3，加入除蛋白液質(zhì)量的2%量的活性碳，攪拌2小時(shí)后，進(jìn)行固液分離。在采集的活性碳中加水，以氫氧化鈉調(diào)整到pH9.5 10，以60°C攪拌90 100分鐘后，進(jìn)行離心分離得到上清液。在以離心分離沉淀的活性碳中再加入水后，以氫氧化鈉調(diào)整到PH10.5 11，以60°C攪拌90 100分鐘后，進(jìn)行離心分離得到上清液。合并兩上清液，以鹽酸中和，得到本提取物。實(shí)施例2 (N-乙?；窠?jīng)氨酸含量的測(cè)定方法)如下以高效液相色譜質(zhì)譜分析儀(LC-MS)測(cè)定本提取物和本制劑的N-乙?；?br> 經(jīng)氨酸含量。以水10倍稀釋按照實(shí)施例1制造的本提取物(1.2單位/mL)，注入LC-MS。使用按照實(shí)施例1所制造的本提取物來制造的本制劑(NTP注射劑)也同樣以水10倍稀釋，注入LC-MS。使用按照實(shí)施例1所制造的本提取物來制造的本制劑(NTP片劑)，將3片以甲醇/氯仿(I: l)3mL清洗3次，除去膜包衣層，干燥后，加入12mL水進(jìn)行懸濁(I單位/mL)，離心后將上清液以水10倍稀釋，注入LC-MS。就N-乙酰基神經(jīng)氨酸而言，配制水溶液的標(biāo)準(zhǔn)溶液制成校正曲線。LC-MS在HPLC部中使用Agilent生產(chǎn)的1100系列，在質(zhì)譜分析裝置中使用API3000 (Applied Biosys`tems/MDS Sciex 生產(chǎn))。分析條件如下。柱:InertsiI0DS-3 ( Φ 2.1X 150mm)柱溫:25°C，流速:200μ L/ 分鐘流動(dòng)相:甲醇/0.05%甲酸甲醇％/ 分鐘:0/0-0/1-44/8-100/8.1-100/11進(jìn)樣量:5 μ L，樣品室設(shè)定溫度:4°C檢測(cè):正離子檢測(cè)MRM在表I中表示LC-MS的測(cè)定條件。表I中的各參數(shù)的意義如下。.DP:施加于孔板的電壓.FP:施加于聚焦環(huán)的電壓.CE:碰撞能量.CXP:施加于Q2出口的電壓.NEB:霧化器氣體的壓力.⑶R:氣簾氣體的壓力.IS:離子噴霧器的電壓.CAD:碰撞氣體的壓力.TEM:葉輪氣體溫度(turbo gas temperature)[表I ]
檢測(cè)離子(Q1/Q3) [DP~[FP~[CE~|CXP lNEB ICUR IlS~|CAD ITEM
權(quán)利要求
1.一種痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物，其特征在于: 每I單位含有4000ng以上的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
2.一種痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物，其特征在于: 每I單位含有4000 22500ng的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
3.一種作為液體的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物，其特征在于: 每ImL含有4800ng以上的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
4.一種作為液體的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物，其特征在于: 每ImL含有4800 27000ng的N-乙酰基神經(jīng)氨 酸。
5.一種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的制劑，其特征在于: 每I單位含有4000ng以上的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
6.一種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的制劑，其特征在于: 每I單位含有4000 22500ng的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
7.一種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑，其特征在于:每ImL含有4800ng以上的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
8.一種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑，其特征在于:每ImL含有4800 27000ng的N-乙酰基神經(jīng)氨酸。
9.一種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的3mL裝的注射劑，其特征在于: 每I管含有14400ng以上的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
10.一種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的3mL裝的注射劑，其特征在于: 每I管含有14400 8IOOOng的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
11.一種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的片劑，其特征在于:每I片含有16000ng以上的N-乙酰基神經(jīng)氨酸。
12.—種含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的片劑，其特征在于:每I片含有16000 90000ng的N-乙?；窠?jīng)氨酸。
13.如權(quán)利要求5或6所述的制劑，其特征在于: 其為鎮(zhèn)痛劑。
14.如權(quán)利要求7 10中任一項(xiàng)所述的注射劑，其特征在于: 其為鎮(zhèn)痛劑。
15.如權(quán)利要求11或12所述的片劑，其特征在于: 其為鎮(zhèn)痛劑。
16.—種管理痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的品質(zhì)的方法，其特征在于: 其是通過測(cè)定所述提取物所含有的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
17.如權(quán)利要求16所述的管理痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的品質(zhì)的方法，其特征在于: 所述提取物每I單位中，所述提取物所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量為4000ng以上時(shí)，設(shè)定所述提取物的品質(zhì)為合格。
18.如權(quán)利要求16所述的管理痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的品質(zhì)的方法，其特征在于: 所述提取物每I單位中，所述提取物所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量為4000 22500ng時(shí)，設(shè)定所述提取物的品質(zhì)為合格。
19.一種痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物，其特征在于: 其是以權(quán)利要求16 18中任一項(xiàng)所述的方法進(jìn)行品質(zhì)管理得到的。
20.一種管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的制劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 其是通過測(cè)定所述制劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
21.如權(quán)利要求20所述的管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的制劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 所述制劑中的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物每I單位中，所述制劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氣Ife的量為4000ng以上時(shí)，設(shè)定所述制劑的品質(zhì)為合格。
22.如權(quán)利要求20所述的管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的制劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 所述制劑中的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物每I單位中，所述制劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量為4000 22500ng時(shí)，設(shè)定所述制劑的品質(zhì)為合格。
23.一種制劑，其特征在于: 其是以權(quán)利要求20 22中任一項(xiàng)所述的方法進(jìn)行品質(zhì)管理得到的。
24.一種管理含有 痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 其是通過在所述注射劑中，測(cè)定所述注射劑所含有的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
25.如權(quán)利要求24所述的管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 在所述注射劑中，所述注射劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量在所述注射劑每ImL中為4800ng以上時(shí)，設(shè)定所述注射劑的品質(zhì)為合格。
26.如權(quán)利要求24所述的管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 在所述注射劑中，所述注射劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量在所述注射劑每ImL中為4800 27000ng時(shí)，設(shè)定所述注射劑的品質(zhì)為合格。
27.如權(quán)利要求24所述的管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 在含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的3mL裝的注射劑中，所述注射劑每I管中，所述注射劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量為14400ng以上時(shí)，設(shè)定所述注射劑的品質(zhì)為合格。
28.如權(quán)利要求24所述的管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 在含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的3mL裝的注射劑中，所述注射劑每I管中，所述注射劑所含有的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的量為14400 81000ng時(shí)，設(shè)定所述注射劑的品質(zhì)為合格。
29.一種注射劑，其特征在于:其是以權(quán)利要求24 28中任一項(xiàng)所述的方法進(jìn)行品質(zhì)管理得到的。
30.一種管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的片劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 其是通過在所述片劑中，測(cè)定所述片劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
31.如權(quán)利要求30所述的管理含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的片劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 在所述片劑中，所述片劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量在所述片劑的每I片中為16000ng以上時(shí)，設(shè)定所述片劑的品質(zhì)為合格。
32.如權(quán)利要求30所述的含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的片劑的品質(zhì)的方法，其特征在于: 在所述片劑中，所述片劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量在所述片劑的每I片中為16000 90000ng時(shí)，設(shè)定所述片劑的品質(zhì)為合格。
33.一種片劑，其特征在于: 其是以權(quán)利要求30 32中任一項(xiàng)所述的方法進(jìn)行品質(zhì)管理得到的。
34.一種評(píng)價(jià)含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的方法，其特征在于: 其是通過測(cè)定所述提取物所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
35.一種評(píng)價(jià)含有痘苗病 毒接種兔炎癥皮膚提取物的制劑的方法，其特征在于: 其是通過測(cè)定所述制劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
36.一種評(píng)價(jià)含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的注射劑的方法，其特征在于: 其是通過測(cè)定所述注射劑所含有的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
37.一種評(píng)價(jià)含有痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物的片劑的方法，其特征在于: 其是通過測(cè)定所述片劑所含有的N-乙酰基神經(jīng)氨酸的量而進(jìn)行的。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供品質(zhì)更穩(wěn)定的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物和含有該提取物作為有效成分的制劑等。通過將痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物和含有該提取物作為有效成分的制劑所含有的N-乙?；窠?jīng)氨酸的量作為指標(biāo)，能夠確保該提取物和制劑的品質(zhì)更加穩(wěn)定。以這樣的方法而品質(zhì)更穩(wěn)定的痘苗病毒接種兔炎癥皮膚提取物和含有該提取物作為有效成分的制劑，其有效性和安全性也有更嚴(yán)格的保證，是有用性非常高的提取物和制劑。
文檔編號(hào)A61K35/36GK103110663SQ20121052862
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2012年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月10日
發(fā)明者中澤良隆, 芝山洋二, 中村耕 申請(qǐng)人:日本臟器制藥株式會(huì)社