專利名稱：一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種納米材料技術(shù)領(lǐng)域的脂質(zhì)體制備方法，特別是涉及一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法。
背景技術(shù)：
腫瘤是威脅人類健康和生命的主要疾病，近年來其發(fā)病率呈明顯的上升趨勢(shì)。在治療上，外科手術(shù)不能徹底清除腫瘤細(xì)胞和腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)，從而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)；化療藥物靜注給藥后，對(duì)腫瘤組織無選擇性，具有嚴(yán)重的全身性毒副作用；放療往往會(huì)引起患者嚴(yán)重的局部皮膚反應(yīng)、血象變化、局部粘膜反應(yīng)等。由于腫瘤組織對(duì)具有一定粒徑的納米顆粒 (10-500 nm)具有EPR (高通透性和滯留)效應(yīng)，即處在血循環(huán)中的納米顆粒可被動(dòng)靶向至腫瘤組織，發(fā)揮所包載藥物的抗腫瘤作用。目前，已有多種利用此效應(yīng)用于腫瘤靶向治療的納米遞藥系統(tǒng)上市，如阿霉素脂質(zhì)體、順鉬脂質(zhì)體和紫杉醇白蛋白納米粒，來實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤組織的主動(dòng)靶向遞藥。與被動(dòng)靶向相比，主動(dòng)靶向納米遞藥系統(tǒng)顯示出對(duì)腫瘤組織更好的靶向性和生長(zhǎng)抑制作用，但是，由于主動(dòng)靶向制劑復(fù)雜的處方和制備工藝、質(zhì)量控制較難、 未知的生物安全性等問題，至今仍只有少量產(chǎn)品進(jìn)入I期或II期臨床。
Neuropilin-I (NRP-1)是細(xì)胞表面的一種I型跨膜糖蛋白，通常表達(dá)在一些腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165 (VEGF165)的受體，在腫瘤轉(zhuǎn)移、血管新生、調(diào)節(jié)血管通透性等方面發(fā)揮重要功能。專利CN 102516361 A中對(duì)NRP-I配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物、其介導(dǎo)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)做了研究，證明其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。
量子點(diǎn)是一種有著優(yōu)良的熒光性能的半導(dǎo)體納米晶，它具有窄的并且波長(zhǎng)隨粒子大小可調(diào)的熒光發(fā)射峰、連續(xù)的吸收光譜以及穩(wěn)定且高亮度的熒光發(fā)射等優(yōu)點(diǎn)，在生物標(biāo)記中發(fā)揮著越來越重要的作用。發(fā)明專利CN 101327189 A對(duì)具有標(biāo)記和治療雙功能的納米乙醇脂質(zhì)體材料的制備進(jìn)行了研究，為癲痕和皮膚病的治療提供了材料。發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體的制備方法。該方法制備的靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體，具有診斷和治療的雙重功能。
一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，包括如下步驟a.單一量子點(diǎn)脂質(zhì)體的制備分別稱取磷脂、膽固醇、甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物和NRP-I配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物溶于氯仿中制備得到均勻脂質(zhì)膜，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干氯仿；再溶于量子點(diǎn)的硫酸銨溶液，其中硫酸銨的濃度為O. 32 M，在20 70°C水浴中震蕩得到脂質(zhì)體混懸液；再于20 70°C水浴中依次擠壓過400、200和100 nm核孔膜，以生理鹽水洗脫通過S^hadex G-50凝膠柱除去未包封的量子點(diǎn)，即得含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體；b.將含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體，加入阿霉素生理鹽水溶液，60°C水浴20min;以生理鹽水洗脫通過S^hadex G-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。
所述磷脂的濃度為2. 5-3. 5mg/ml，所述膽固醇的濃度為O. 5-0. 9mg/ml，所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物的濃度為O. 5-1. 2mg/ml，所述NRP-I配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物的濃度為O. 05-0. 5mg/ml。
所述的磷脂為蛋磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化蛋磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、I-肉豆寇酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、I-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、I-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、I-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、I-硬脂酰-2-亞油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、 氫化二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酸、二肉豆寇酰磷脂酸、 二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蓮酰磷脂酰乙二醇胺、二棕櫚酰磷脂耽乙二醇胺、腦磷脂酰絲氨酸、二肉豆寇酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、 蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆寇酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、腦鞘磷脂、二棕櫚酰鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂中的一種。
所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中聚乙二醇重均分子量為2000。
所述NRP-I配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物中聚乙二醇重均分子量為3500。
所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中的磷脂為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂酰乙醇胺、氫化蛋黃磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺、蛋磷脂酰乙醇胺中的一種。
所述量子點(diǎn)為水溶性的量子點(diǎn)，具體為直接水相合成的水溶性量子點(diǎn)，或通過相轉(zhuǎn)移方法得到的水溶性量子點(diǎn)，所述水溶性的量子點(diǎn)為 CdSe，InCaP, InP, InAs, HgS, HgSe, CdTe, CdTe/CdS, CdTe/CdSe, CdTe/CdSe/ZnS,CdSe/ZnS,CdTe/CdS/ZnS,CdS/ZnS,ZnO,ZnTe,ZnSe,ZnSe/ZnS,InCaP/ZnS, CdTe/HgTe, CdSe/HgSe。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(1)包封率高；(2)靶向類型為主動(dòng)靶向，靶向性好。
本發(fā)明將水溶性的量子點(diǎn)和藥物共同包裹在具有主動(dòng)靶向功能的脂質(zhì)體中，形成高包封率的雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體，可用于腫瘤的診斷與治療。


圖I為本發(fā)明實(shí)施例I中的雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體的動(dòng)態(tài)光散射譜圖。
圖2為本發(fā)明實(shí)施例I所得的雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體與神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)I小時(shí)候的激光共聚焦照片。
具體實(shí)施方式
以下通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述。以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不限于本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例I :RPARPAR修飾的脂質(zhì)體膜材料處方為氫化大豆磷脂/膽固醇/甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物/ RPARPAR-PEG-DSPE (60 40 2 :0. 5，mol/mol)。稱取上述膜材料溶于氯仿，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，得均勻脂質(zhì)膜。加入CdTe/CdS水溶液水化，60 V 水浴震蕩2小時(shí)，得脂質(zhì)體混懸液。在60 °C水浴中，使用高壓均質(zhì)機(jī)依次將脂質(zhì)體擠壓過 400,200和100核孔膜，使其粒徑減小。然后以生理鹽水為洗脫液過葡聚糖凝膠G-50層析柱分離除去未包封的量子點(diǎn)，得到含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體。加入阿霉素生理鹽水溶液，60 °C水浴20 min。以生理鹽水洗脫通過S印hadex G-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能祀向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。
脂質(zhì)體的大小采用動(dòng)態(tài)光散射進(jìn)行表征，其平均粒徑約為110 nm，如附圖I所示。 采用紫外-可見吸收光譜，測(cè)定其包封率，其中量子點(diǎn)的包封率約為90 %，阿霉素的包封率約為95 %。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有良好的靶向性，如附圖2所示。
實(shí)施例2 RPARPAR修飾的脂質(zhì)體膜材料處方為二棕櫚酰磷脂酸/膽固醇/甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物/ RPARPAR-PEG-DSPE (90 :10 2 :0. 5，mol/mol)。稱取上述膜材料溶于氯仿，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，得均勻脂質(zhì)膜。加入CdTe/CdS/ZnS水溶液水化，60 °〇水浴震蕩2小時(shí)，得脂質(zhì)體混懸液。在60 °C水浴中，使用高壓均質(zhì)機(jī)依次將脂質(zhì)體擠壓過400、200和100核孔膜，使其粒徑減小。然后以生理鹽水為洗脫液過葡聚糖凝膠G-50層析柱分離除去未包封的量子點(diǎn)，得到含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體。加入阿霉素生理鹽水溶液，60 °C水浴20 min。以生理鹽水洗脫通過S印hadex G-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能祀向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。
脂質(zhì)體的大小采用動(dòng)態(tài)光散射進(jìn)行表征，其平均粒徑約為110 nm。采用紫外-可見吸收光譜，測(cè)定其包封率，其中量子點(diǎn)的包封率約為85 %，阿霉素的包封率約為95 %。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。
實(shí)施例3 RPARPAR修飾的脂質(zhì)體膜材料處方為二月桂酰磷脂酰甘油/膽固醇/甲氧基聚乙二醇-氫化大豆磷脂酰乙醇胺/ RPARPAR-PEG-DSPE (85 :15 2 :0. 5，mol/mol)。稱取上述膜材料溶于氯仿，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，得均勻脂質(zhì)膜。加入腺苷修飾的CdSe/CdS/ZnS量子點(diǎn)水溶液水化，60 1水浴震蕩2小時(shí)，得脂質(zhì)體混懸液。在60 °C水浴中，使用高壓均質(zhì)機(jī)依次將脂質(zhì)體擠壓過400、200和100 nm核孔膜，使其粒徑減小。然后以生理鹽水為洗脫液過葡聚糖凝膠G-50層析柱分離除去未包封的量子點(diǎn)，得到含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體。加入阿霉素生理鹽水溶液,60 °C水浴20 min。以生理鹽水洗脫通過Sephadex G-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。
脂質(zhì)體的大小采用動(dòng)態(tài)光散射進(jìn)行表征，其平均粒徑約為110 nm。采用紫外-可見吸收光譜，測(cè)定其包封率，其中量子點(diǎn)的包封率約為80 %，阿霉素的包封率約為90 %。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。
實(shí)施例4 RPARPAR修飾的脂質(zhì)體膜材料處方為氫化大豆磷脂/膽固醇/甲氧基聚乙二醇-氫化大豆磷脂酰乙醇胺/ RPARPAR-PEG-DSPE (55 :45 2 :0. 5，mol/mol)。稱取上述膜材料溶于氯仿，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，得均勻脂質(zhì)膜。加入5’ -胞苷單磷酸修飾的CdSe/CdS/ZnS 量子點(diǎn)水溶液水化，60 1水浴震蕩2小時(shí)，得脂質(zhì)體混懸液。在60 °C水浴中，使用高壓均質(zhì)機(jī)依次將脂質(zhì)體擠壓過400、200和100 nm核孔膜，使其粒徑減小。然后以生理鹽水為洗脫液過葡聚糖凝膠G-50層析柱分離除去未包封的量子點(diǎn)，得到含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體。加入阿霉素生理鹽水溶液,60 °C水浴20 min。以生理鹽水洗脫通過Sephadex G-50 凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。
脂質(zhì)體的大小采用動(dòng)態(tài)光散射進(jìn)行表征，其平均粒徑約為110 nm。采用紫外-可見吸收光譜，測(cè)定其包封率，其中量子點(diǎn)的包封率約為85 %，阿霉素的包封率約為90 %。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。
實(shí)施例5 RPARPAR修飾的脂質(zhì)體膜材料處方為氫化大豆磷脂/膽固醇/甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物/ RPARPAR-PEG-DSPE (70 :30 2 :0. 5，mol/mol)。稱取上述膜材料溶于氯仿，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，得均勻脂質(zhì)膜。加入巰基丙酸修飾的CdSe/CdS/ZnS 量子點(diǎn)水溶液水化，60 1水浴震蕩2小時(shí)，得脂質(zhì)體混懸液。在60 °C水浴中，使用高壓均質(zhì)機(jī)依次將脂質(zhì)體擠壓過400、200和100核孔膜，使其粒徑減小。然后以生理鹽水為洗脫液過葡聚糖凝膠G-50層析柱分離除去未包封的量子點(diǎn)，得到含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體。 加入阿霉素生理鹽水溶液，60 °C水浴20 min。以生理鹽水洗脫通過Sephadex G-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。
脂質(zhì)體的大小采用動(dòng)態(tài)光散射進(jìn)行表征，其平均粒徑約為110 nm。采用紫外-可見吸收光譜，測(cè)定其包封率，其中量子點(diǎn)的包封率約為80 %，阿霉素的包封率約為90 %。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。
權(quán)利要求
1.一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，包括如下步驟 a.單一量子點(diǎn)脂質(zhì)體的制備分別稱取磷脂、膽固醇、甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物和NRP-I配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物溶于氯仿中制備得到均勻脂質(zhì)膜，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干氯仿；再溶于量子點(diǎn)的硫酸銨溶液，其中硫酸銨的濃度為O. 32 M，在20 70°C水浴中震蕩得到脂質(zhì)體混懸液；再于20 70°C水浴中依次擠壓過400、200和100 nm核孔膜，以生理鹽水洗脫通過S^hadex G-50凝膠柱除去未包封的量子點(diǎn)，即得含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體； b.將含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體，加入阿霉素生理鹽水溶液，60°C水浴20min;以生理鹽水洗脫通過S^hadex G-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，所述磷脂的濃度為2. 5-3. 5mg/ml,所述膽固醇的濃度為O. 5-0. 9mg/ml,所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物的濃度為O. 5-1. 2mg/ml，所述NRP-I配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物的濃度為O.05-0. 5mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，所述的磷脂為蛋磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化蛋磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、I-肉豆寇酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、I-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、I-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、I-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、I-硬脂酰-2-亞油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、氫化二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酸、二肉豆寇酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蓮酰磷脂酰乙二醇胺、二棕櫚酰磷脂耽乙二醇胺、腦磷脂酰絲氨酸、二肉豆寇酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆寇酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、腦鞘磷脂、二棕櫚酰鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中聚乙二醇重均分子量為2000。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，所述NRP-I配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物中聚乙二醇重均分子量為3500。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中的磷脂為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂酰乙醇胺、氫化蛋黃磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺、蛋磷脂酰乙醇胺中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，所述量子點(diǎn)為水溶性的量子點(diǎn)，具體為直接水相合成的水溶性量子點(diǎn)，或通過相轉(zhuǎn)移方法得到的水溶性量子點(diǎn)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，所述水溶性的量子點(diǎn)為 CdSe，InCaP, InP，InAs，HgS，HgSe，CdTe，CdTe/CdS，CdTe/CdSe，CdTe/CdSe/ZnS,CdSe/ZnS,CdTe/CdS/ZnS,CdS/ZnS,ZnO,ZnTe,ZnSe,ZnSe/ZnS,InCaP/ZnS,CdTe/HgTe,CdSe/HgSe。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體制備方法，包括如下步驟單一量子點(diǎn)脂質(zhì)體的制備取磷脂、膽固醇、甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物和NRP-1配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物溶于氯仿中制備得到均勻脂質(zhì)膜，蒸干氯仿；再溶于量子點(diǎn)的硫酸銨溶液，震蕩得到脂質(zhì)體混懸液；擠壓，以生理鹽水洗脫即得含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體；將含有量子點(diǎn)的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體，加入阿霉素生理鹽水溶液，60℃水浴20min；以生理鹽水洗脫通過SephadexG-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能靶向量子點(diǎn)脂質(zhì)體。該方法制備的脂質(zhì)體能夠?qū)ι窠?jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)識(shí)與治療。
文檔編號(hào)A61K47/02GK102973510SQ20121056055
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月21日
發(fā)明者劉璐, 閆志強(qiáng), 何丹農(nóng) 申請(qǐng)人:上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司