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      一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:921627閱讀:365來源:國知局
      專利名稱:一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及一種生物粘附滴眼劑,具體涉及一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
      背景技術(shù)
      羊膜是胎膜的最內(nèi)層,由無血管和淋巴管的基質(zhì)、基底膜及單層立方上皮細胞組成。羊膜內(nèi)含有大量生物活性成分,主要包括各種膠原及層粘連蛋白。此外,還在羊膜中發(fā)現(xiàn)多種生長因子及大量的酶類,如表皮生長因子,堿性成纖維生長因子,神經(jīng)營養(yǎng)因子,基質(zhì)金屬蛋白酶及其他生物活性酶。因此,羊膜具有促進角膜上皮化,抑制炎癥和新生血管,減輕纖維化,減少瘢痕形成的作用。羊膜移植術(shù)在臨床中被廣泛應(yīng)用于急性化學傷和熱燒傷,角膜潰瘍,翼狀胬肉,結(jié)膜缺損及瘢痕形成等疾病的眼表重建的治療中。
      羊膜移植手術(shù)需要用9 10-0縫線將羊膜緊密縫合貼附于眼表,該手術(shù)是一種有創(chuàng)操作,由于縫針的破壞作用及縫線的刺激作用,存在一定的手術(shù)風險及并發(fā)癥手術(shù)可造成健康部位的組織創(chuàng)傷,縫線刺激引起瘢痕形成,羊膜溶解生化作用效果無法持久,重癥化學傷植床受限無法進行移植手術(shù),手術(shù)后感染,半透膜遮蓋視區(qū)影響視力,外觀發(fā)烏不美觀,縫線刺激引起流淚,無法睜眼等。而且商品化羊膜費用昂貴,患者的手術(shù)依從性較差。因此,羊膜治療需要尋找一種無創(chuàng)長效的治療手段。劉祖國等發(fā)明了一種羊膜提取液(200410027760. 8):取剖腹產(chǎn)胎盤,清洗后分離羊膜,液氮研磨后,按重量體積比1:5_10加入醫(yī)用生理鹽水,勻漿,得勻漿液;勻漿液在0_4°C放置1-7天,在100-120°C加熱30-60分鐘,過濾,取濾液;調(diào)節(jié)濾液pH值到3,靜置,過濾,取濾液;調(diào)節(jié)濾液PH值至7. 2,無菌條件下O. 20-0. 22um濾膜過濾,取濾液,即為羊膜提取液,0-4°C保存。于永斌等發(fā)明了一種治療角膜堿燒傷的羊膜滴眼液(200910178422. 7)處方為每IOOml注射用水中,包括海藻糖l_2g,玻璃酸或其鹽O. 5-1. 5g,肝素或其鹽4000-6000單位,氯化鈉O. 3-0. 9g,苯扎溴銨O. 001-0. 003g,維生素E0. 05-0. 15g,羊膜勻漿上清液l_3ul。這些眼用制劑在一定程度上避免了羊膜移植的弊端,但這些藥物劑型有些不足1.較低的眼部生物利用度。2.局部給藥后一過性藥物峰濃度,藥效維持時間短。3.由于眼球運動和鼻淚管系統(tǒng)的體循環(huán)吸收作用,可引起全身不良反應(yīng)而且使大量的藥物損失。4局部眼組織藥物傳遞效率較低。5羊膜活性成分被結(jié)膜囊內(nèi)酶降解。給藥后起始階段淚液中藥物濃度較高而后便迅速下降的現(xiàn)象不但容易造成潛在的毒性風險,還必須頻繁給藥。為了克服上述不足,開發(fā)新型羊膜眼部藥物傳遞系統(tǒng)顯得非常必要。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的是提供一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用,本發(fā)明的制備方法簡便合理,且制備得到的羊膜脂質(zhì)體療效顯著,緩釋長效,眼部刺激性小適于臨床推廣應(yīng)用。
      為了達到以上目的,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為首先,本發(fā)明提出了一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于是由磷脂,膽固醇,乙醚以及羊膜活性液按照以下步驟制備得到將磷脂和膽固醇的混合物置于圓底燒瓶中,用乙醚溶解,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去乙醚,使在內(nèi)壁上形成一薄膜,加入羊膜活性液,加玻璃珠數(shù)枚,振搖攪拌,使貼壁脂質(zhì)膜完全溶脫,超聲處理后,過濾灌封,即得。在本發(fā)明中,優(yōu)選的,所述的羊膜活性液按照以下步驟制備得到取病原學檢測無病毒性肝炎,艾滋病,梅毒等傳染性疾病的剖宮產(chǎn)的新鮮胎盤,在整流罩無菌條件下,用含有25-75 μ g/ml青霉素鈉、25-75 μ g/ml硫酸鏈霉素、50-150 μ g/ml硫酸新霉素和1. 5-4. O μ g/ml 二性霉素B的生理鹽水溶液沖洗胎盤數(shù)次,直至除去血跡,將胎盤浸于上述溶液中用醫(yī)用鉗從絨毛膜中鈍性分離出羊膜;分離之后,用醫(yī)用刀片將羊 膜切成碎片,按重量體積比1:5_10加入PBS液(濃度O. 01mol/L,PH7. 4),無菌條件下,研磨羊膜,勻漿機勻漿處理,用超聲儀萃取多余的蛋白質(zhì);離心,取上清,加入維生素C及羥苯乙酯,混合即得。其中,優(yōu)選的,所述的生理鹽水溶液中含有50 μ g/ml青霉素鈉、50 μ g/ml硫酸鏈霉素、100 μ g/ml硫酸新霉素和2. 5 μ g/ml 二性霉素B。其中,優(yōu)選的,按重量體積比1:10加入PBS液.其中,優(yōu)選的,所述的勻漿是以8000r/min勻漿2分鐘;所述的超聲萃取是強度IOw,超聲10分鐘;所述的離心是以6500r/min離心10分鐘。其中,優(yōu)選的,加入維生素C及羥苯乙酯使其終濃度分別為O. 5_2g/L及O.15-0. 3g/L。在本發(fā)明中,優(yōu)選的,所述的磷脂是含磷脂酰膽堿不低于45%的蛋黃卵磷脂或大豆磷脂,膽固醇與磷脂的重量比為1:2-2. 5,每IOOmg的膽固醇與磷脂的混合物用2_3ml乙醚溶解,羊膜活性液的用量為乙醚體積的3-5倍。在本發(fā)明的一個具體實施例中脂質(zhì)體配方為大豆磷脂70mg ;膽固醇30mg ;乙醚2. 5ml;羊膜活性液10ml。其制備方法為分別稱取處方量的大豆磷脂70mg和膽固醇30mg,置圓底燒瓶中,用2. 5ml乙醚溶解,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上30°C減壓蒸發(fā)除去乙醚,使在內(nèi)壁上形成一薄膜,加入IOml羊膜活性液,加直徑3mm玻璃珠數(shù)枚,振搖攪拌5分鐘,使貼壁脂質(zhì)膜完全溶脫,超聲(100 )5分鐘。無菌條件下0.2 μ m聚碳酸酯微孔濾膜擠壓過濾2次。取濾液灌封,0-4 °C保存。在本發(fā)明中,優(yōu)選的,所述的超聲是強度100w,超聲5分鐘;所述的過濾是無菌條件下O. 2 μ m聚碳酸酯微孔濾膜擠壓過濾2次。其次,本發(fā)明還提出了由以上任一項所述的方法制備得到的一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體。最后,本發(fā)明還提出了所述的羊膜脂質(zhì)體在制備用于眼表重建的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述羊膜脂質(zhì)體可以應(yīng)用于眼表重建的治療中,具體包括角結(jié)膜化學傷、熱燒傷的修復,翼狀胬肉切除后鞏膜創(chuàng)面修復,結(jié)膜大面積腫物切除后創(chuàng)面的修復,瞼球粘連分離后瞼球結(jié)膜創(chuàng)面修復,角膜非感染因素引起的潰瘍,結(jié)膜缺損,干眼癥,病毒性角膜炎等。
      本發(fā)明所述的羊膜脂質(zhì)體與以往技術(shù)相比,具有如下優(yōu)點與羊膜移植手術(shù)相比,羊膜脂質(zhì)體有效的避免了手術(shù)帶來的并發(fā)癥,如縫線刺激等;由于脂質(zhì)體粘度低,可以用滴眼劑形式給藥,并作為藥物貯庫延緩釋藥,有效解決羊膜移植手術(shù)后羊膜溶解移位脫落引起的作用短暫問題。與滴眼液及勻漿液相比脂質(zhì)體作為一種新型眼用藥物載體,具有多種優(yōu)點。脂質(zhì)體是由一層或多層類脂雙分子層所組成的封閉小囊,在其雙分子層中或?qū)娱g可包含藥物,其結(jié)構(gòu)類似細胞膜。脂質(zhì)體粒徑為O. 02-5 μ m之間時滴入眼部無異物感,不影響眼睛的正 常生理功能。脂質(zhì)體與眼表組織,結(jié)膜角膜和鞏膜具有較強的親和力,生物利用度高。滴眼后迅速分散,增強藥物對眼表組織的穿透性。且易與生物膜融合,促進藥物對生物膜的透過性,故羊膜脂質(zhì)體中羊膜活性成分的跨角膜轉(zhuǎn)運效率較高。脂質(zhì)體具有很好的生物相容性,可以保護羊膜活性物質(zhì)免受淚液及角膜上皮中代謝酶的破壞。羊膜脂質(zhì)體可以緩慢釋放藥物,從而減少眼部藥物濃度的波動,藥效維持時間長。此外,構(gòu)成脂質(zhì)體的磷脂成分無毒,無免疫原性,安全可靠,可以減少藥物不良反應(yīng)。羊膜脂質(zhì)體具有緩釋性、靶向性、細胞親和性和組織相容性,以及對所包封的羊膜有效成分的保護作用。工藝合理,制備簡便,療效顯著,眼部刺激性小,適于臨床推廣應(yīng)用。


      圖1為對照組和實驗組的角膜新生血管面積統(tǒng)計結(jié)果。
      具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明,本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的,并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是,在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換,但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。實施例1 一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體的制備1、羊膜活性液的制備取病原學檢測無病毒性肝炎,艾滋病,梅毒等傳染性疾病的剖宮產(chǎn)的新鮮胎盤,在整流罩無菌條件下,用含有50 μ g/ml青霉素鈉、50 μ g/ml硫酸鏈霉素、100 μ g/ml硫酸新霉素和2. 5 μ g/ml 二性霉素B的生理鹽水(O. 9%)溶液沖洗胎盤數(shù)次,直至除去血跡。將胎盤浸于上述溶液中用醫(yī)用鉗從絨毛膜中鈍性分離出羊膜。分離之后,用醫(yī)用刀片將羊膜切成碎片,稱重(10g),按重量體積比1:10加入PBS液(100ml)。無菌條件下,研磨羊膜,勻漿機8000r/min勻衆(zhòng)2分鐘,用超聲儀(IOw)萃取多余的蛋白質(zhì)10分鐘。離心機6500r/min離心10分鐘,取上清,加入Vc以及羥苯乙酯使其終濃度分別達到O. 5g/L Vc和O. 15g/L羥苯乙酯,混合制備成羊膜活性液。2、脂質(zhì)體配方大豆磷脂70mg ;膽固醇30mg ;乙醚2. 5ml;羊膜活性液10ml。制備方法分別稱取處方量的大豆磷脂70mg和膽固醇30mg,置圓底燒瓶中,用
      2.5ml乙醚溶解,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上30°C減壓蒸發(fā)除去乙醚,使在內(nèi)壁上形成一薄膜,加入IOml羊膜活性液,加直徑3mm玻璃珠數(shù)枚,振搖攪拌5分鐘,使貼壁脂質(zhì)膜完全溶脫,超聲(IOOw) 5分鐘。無菌條件下O. 2μπι聚碳酸酯微孔濾膜擠壓過濾2次。取濾液灌封,0-4°C保存。實施例2 —種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體的制備1、羊膜活性液的制備取病原學檢測無病毒性肝炎,艾滋病,梅毒等傳染性疾病的剖宮產(chǎn)的新鮮胎盤,在整流罩無菌條件下,用含有25 μ g/ml青霉素鈉、75 μ g/ml硫酸鏈霉素、75 μ g/ml硫酸新霉素和4μ g/ml 二性霉素B的生理鹽水(O. 9%)溶液沖洗胎盤數(shù)次,直至除去血跡。將胎盤浸于上述溶液中用醫(yī)用鉗從絨毛膜中鈍性分離出羊膜。分離之后,用醫(yī)用刀片將羊膜切成碎片,稱重(10g),按重量體積比1:5加入PBS液(50ml)。無菌條件下,研磨羊膜,勻漿機5000r/min勻衆(zhòng)5分鐘,用超聲儀(IOw)萃取多余的蛋白質(zhì)10分鐘。離心機7000r/min離心10分鐘,取上清,加入Vc以及羥苯乙酯使其終濃度分別達到2. Og/L Vc和0.3g/L羥苯乙酯,混合制備成羊膜活性液。2、脂質(zhì)體配方蛋黃卵磷脂IOOmg ;膽固醇40mg ;乙醚4. 2ml;羊膜活性液15ml. 制備方法分別稱取處方量的蛋黃卵磷脂IOOmg和膽固醇40mg,置圓底燒瓶中,用4. 2ml乙醚溶解,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上30°C減壓蒸發(fā)除去乙醚,使在內(nèi)壁上形成一薄膜,加入15ml羊膜活性液,加直徑3mm玻璃珠數(shù)枚,振搖攪拌5分鐘,使貼壁脂質(zhì)膜完全溶脫,超聲(IOOw) 5分鐘。無菌條件下O. 2μπι聚碳酸酯微孔濾膜擠壓過濾2次。取濾液灌封,0-4°C保存。實施例3 —種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體的制備1、羊膜活性液的制備取病原學檢測無病毒性肝炎,艾滋病,梅毒等傳染性疾病的剖宮產(chǎn)的新鮮胎盤,在整流罩無菌條件下,用含有50 μ g/ml青霉素鈉、50 μ g/ml硫酸鏈霉素、100 μ g/ml硫酸新霉素和2. 5 μ g/ml 二性霉素B的生理鹽水溶液(O. 9%)沖洗胎盤數(shù)次,直至除去血跡。將胎盤浸于上述溶液中用醫(yī)用鉗從絨毛膜中鈍性分離出羊膜。分離之后,用醫(yī)用刀片將羊膜切成碎片,稱重(10g),按重量體積比1: 10加入PBS液(100ml)。無菌條件下,研磨羊膜,勻漿機8000r/min勻衆(zhòng)2分鐘,用超聲儀(IOw)萃取多余的蛋白質(zhì)10分鐘。離心機6500r/min離心10分鐘,取上清,加入Vc使其終濃度為1. Og/L,羥苯乙酯使其終濃度為O. 2g/L,制備成羊膜活性液。2、脂質(zhì)體配方蛋黃卵磷脂60mg ;膽固醇30mg ;乙醚1. 8ml;羊膜活性液9ml.制備方法分別稱取處方量的蛋黃卵磷脂60mg和膽固醇30mg,置圓底燒瓶中,用1.8ml乙醚溶解,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上30°C減壓蒸發(fā)除去乙醚,使在內(nèi)壁上形成一薄膜,加入9ml羊膜活性液,加直徑3mm玻璃珠數(shù)枚,振搖攪拌5分鐘,使貼壁脂質(zhì)膜完全溶脫,超聲(IOOw) 5分鐘。無菌條件下0.2 μ m聚碳酸酯微孔濾膜擠壓過濾2次。取濾液灌封,0_4°C保存。試驗例I本發(fā)明的羊膜脂質(zhì)體在眼表重建中的應(yīng)用將羊膜脂質(zhì)體(實施例1)應(yīng)用于大鼠角膜堿燒傷的動物模型治療中,發(fā)現(xiàn)該脂質(zhì)體滴眼劑具有促進眼表重建,加速角膜上皮愈合,抑制新生血管增生的療效及作用。而且,該羊膜脂質(zhì)體滴眼劑眼部刺激性小。具體實驗過程如下實驗一I動物及分組
      取標準化清潔級健康成年SD大鼠20只,雌雄不限,體重200_250g,裂隙燈顯微鏡檢查無眼病,以右眼為研究對象,隨機分為2組對照組及實驗組。2大鼠角膜堿燒傷模型的建立以水合氯醛O. 3ml/100g腹腔注射麻醉SD大鼠,倍諾喜滴眼液點右眼行表面麻醉。將直徑3_的圓形濾紙片浸泡于濃度lmol/L的氫氧化鈉溶液中20s后,置于干燥濾紙上Is蘸去多余的堿液,均勻貼在右眼角膜中央表面,保持40s后,迅速用IOml生理鹽水沖洗。3 方法對照組大鼠(n=10)使用lmol/L的氫氧化鈉誘導堿燒傷,然后接受局部磷酸緩沖液(PBS)點眼,每天4次,持續(xù)7d。實驗組大鼠(n=10)使用lmol/L的氫氧化鈉誘導堿燒傷后接受局部羊膜脂質(zhì)體點眼,每天4次,持續(xù)7d。 4形態(tài)學觀察使用裂隙燈顯微鏡評估受損的角膜,觀察堿燒傷后7天實驗組及對照組大鼠眼表情況及角膜新生血管(CNV)生長情況。記錄CNV長度(以連續(xù)且彎曲度小并與角膜緣切線垂直的新生血管長度為準)并計算面積。CNV 面積計算公式A=C/12 X 3. 1416 [r2- (r_l)2]其中,C為CNV累及角膜的圓周鐘點數(shù),I為角膜緣伸入角膜的長度,r為角膜半徑3mm ο5應(yīng)用SPSS 13. O進行統(tǒng)計分析,P〈0. 05具有統(tǒng)計學意義。實驗二Draize試驗眼部刺激性通過略微修改的Draize試驗來考查。8只白兔分為2組,在右眼結(jié)膜囊內(nèi)分別滴羊膜脂質(zhì)體或磷酸緩沖液O. 05mL,輕合眼瞼3秒,使藥物在角膜表面均勻分布。在給藥后1,2,4,12,24,48和72小時用裂隙燈顯微鏡對眼部進行檢查,確定角膜、結(jié)膜和前房是否有毒性反應(yīng)。在24h及72h用2%熒光素鈉染色檢查上皮損傷。每次觀察依據(jù)角膜、結(jié)膜和虹膜的混濁充血水腫等情況記錄眼部刺激積分,判斷受試物的刺激程度。0-3. 9無刺激性,4-8. 9輕度刺激性,9-12. 9中度刺激性,13-16重度刺激性。眼刺激反應(yīng)評分標準見表I。表IDraize眼部刺激性試驗評分表
      權(quán)利要求
      1.一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于是由磷脂,膽固醇,乙醚以及羊膜活性液按照以下步驟制備得到將磷脂和膽固醇的混合物置于圓底燒瓶中,用乙醚溶解,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去乙醚,使在內(nèi)壁上形成一薄膜,加入羊膜活性液,加玻璃珠數(shù)枚,振搖攪拌,使貼壁脂質(zhì)膜完全溶脫,超聲處理后,過濾灌封,即得。
      2.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于所述的羊膜活性液按照以下步驟制備得到取病原學檢測無病毒性肝炎,艾滋病,梅毒等傳染性疾病的剖宮產(chǎn)的新鮮胎盤,在整流罩無菌條件下,用含有25-75 μ g/ml青霉素鈉、25-75 μ g/ml硫酸鏈霉素、50-150 μ g/ml硫酸新霉素和1. 5-4. O μ g/ml 二性霉素B的生理鹽水溶液沖洗胎盤數(shù)次,直至除去血跡,將胎盤浸于上述溶液中用醫(yī)用鉗從絨毛膜中鈍性分離出羊膜;分離之后,用醫(yī)用刀片將羊膜切成碎片,按重量體積比1:5-10加入濃度O. 01mol/L,PH7. 4PBS液,無菌條件下,研磨羊膜,勻漿機勻漿處理,用超聲儀萃取多余的蛋白質(zhì);離心,取上清,加入維生素C及羥苯乙酯,混合即得。
      3.如權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于所述的生理鹽水溶液中含有50μ g/ml青霉素鈉、50 μ g/ml硫酸鏈霉素、100 μ g/ml硫酸新霉素和2. 5 μ g/ml 二性霉素B。
      4.如權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于按重量體積比1:10加入PBS液。
      5.如權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于所述的勻漿是以8000r/min勻漿2分鐘; 所述的超聲萃取是強度IOw,超聲10分鐘;所述的離心是以6500r/min離心10分鐘。
      6.如權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,加入維生素C及羥苯乙酯使其終濃度分別為 O. 5-2g/L 及 O. 15-0. 3g/L。
      7.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于所述的磷脂是含磷脂酰膽堿不低于45% 的蛋黃卵磷脂或大豆磷脂,膽固醇與磷脂的重量比為1:2-2. 5,每IOOmg的膽固醇與磷脂的混合物用2-3ml乙醚溶解,羊膜活性液的用量為乙醚體積的3-5倍。
      8.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于所述的超聲是強度100w,超聲5分鐘;所述的過濾是無菌條件下O. 2 μ m聚碳酸酯微孔濾膜擠壓過濾2次。
      9.由權(quán)利要求1-8任一項所述的方法制備得到的一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體。
      10.權(quán)利要求9所述的羊膜脂質(zhì)體在制備用于眼表重建的藥物中的應(yīng)用。
      全文摘要
      本發(fā)明涉及一種用于眼表重建的羊膜脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。該方法包括無菌分離羊膜,經(jīng)過勻漿、超聲萃取、離心、取上清等步驟制備羊膜活性液;加入磷脂和膽固醇,用乙醚溶解,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去乙醚,使在內(nèi)壁上形成一薄膜,加入羊膜活性液及玻璃珠數(shù)枚,振搖攪拌,使貼壁脂質(zhì)膜完全溶脫,超聲處理,過濾,灌封。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的生物粘附滴眼劑,可以應(yīng)用于多種眼部疾病眼表重建的治療。其工藝合理,制備簡便,療效顯著;脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)類似細胞膜,與眼表組織具有較強親和力,跨膜轉(zhuǎn)運效率高;具有很好的生物相容性,可以保護羊膜活性物質(zhì)免受代謝酶的破壞;刺激性小毒性低,不影響眼睛的正常生理功能,適于臨床推廣應(yīng)用。
      文檔編號A61P27/02GK103006706SQ20121056215
      公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月21日
      發(fā)明者楊洪濱, 張小宇, 尋延濱 申請人:哈爾濱醫(yī)科大學
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