1.含有雙硫鍵的陽(yáng)離子型聚酰胺,其特征在于結(jié)構(gòu)式如式(1)所示:
(1)
其中,R1基團(tuán)選自:或中任一種;
R2基團(tuán)選自:或;
聚合度n為20-100。
2.一種如權(quán)利要求所述的含有雙硫鍵的陽(yáng)離子型聚酰胺的制備方法,其特征在于首先合成二對(duì)硝基苯基二硫代二丙(?。┧狨?,將其和含有叔胺基團(tuán)的二伯胺化合物通過(guò)逐步縮合,得到含有雙硫鍵和可質(zhì)子化胺基的聚酰胺;具體步驟如下:
(1)將二硫代二丙酸或二硫代二丁酸與氯化亞砜一起攪拌,進(jìn)行酯化反應(yīng),得到二對(duì)硝基苯基二硫代二丙(?。┧狨ィ黄渲校憾虼ǘ。┧崤c氯化亞砜的摩爾比為1:(3~ 5);
(2)將步驟(1)得到的產(chǎn)物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),去除未反應(yīng)的氯化亞砜,殘余物與對(duì)硝基苯酚在有機(jī)溶劑中反應(yīng);
(3)將步驟(2)得到的產(chǎn)物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),除去未反應(yīng)的有機(jī)溶劑,殘余物在冰水中重結(jié)晶,得到二對(duì)硝基苯基二硫代二丙(丁)酸酯:
(4)制備含有雙硫鍵的聚酰胺
將二對(duì)硝基苯基二硫代二丙(?。┧狨ヅc二伯胺化合物加入到有機(jī)溶劑中在室溫下進(jìn)行反應(yīng);二對(duì)硝基苯基二硫代二丙(丁)酸酯與二伯胺化合物的摩爾比為1:1;
(5)反應(yīng)完畢后,向步驟(4)所得產(chǎn)物中加入去離子水稀釋,每1g反應(yīng)物加入10mL ddH2O(重蒸水), 用4M 鹽酸調(diào)節(jié)pH值到5-6,然后用透析袋透析、冷凍干燥,得到含有雙硫鍵的聚酰胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(1)中所述酯化反應(yīng)時(shí)間為4小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(2)中所述有機(jī)溶劑為丙酮,殘余物與對(duì)硝基苯酚在有機(jī)溶劑中反應(yīng)時(shí)間為24小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(4)中所述有機(jī)溶劑為二甲基亞砜,室溫下反應(yīng)時(shí)間為24-36小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(4)中所述二伯胺化合物選自氨基酸、1,4-雙(3-氨基丙基)-哌嗪、N-甲基-2,2’-二氨基二乙胺、雙(2 -氨基乙基)2 -(叔丁氧羰基氨基)乙基胺或1,4-哌嗪二乙胺等中任一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(5)中所述透析袋的截留分子量為1000-3000。
8.一種如權(quán)利要求1所述的含有雙硫鍵的陽(yáng)離子型聚酰胺作為轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染細(xì)胞株和干細(xì)胞的應(yīng)用,其特征在于具體步驟如下:
(1)將培養(yǎng)至80-90%融合度的哺乳動(dòng)物細(xì)胞株或干細(xì)胞用胰蛋白酶消化、計(jì)數(shù),并以1-2×105/孔接種6孔板,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約24 h,至細(xì)胞達(dá)70%融合度,得到pCMV-GFP質(zhì)粒;
(2)按N/P比值為20、40、80的不同濃度比例的含有雙硫鍵的陽(yáng)離子型聚酰胺與pCMV-GFP質(zhì)粒進(jìn)行復(fù)合,得到復(fù)合物,室溫復(fù)合半個(gè)小時(shí);
轉(zhuǎn)染前,先用PBS緩沖液沖洗細(xì)胞,更換新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基,培養(yǎng)1h后,隨后向孔板中滴加復(fù)合物,充分混勻后,培養(yǎng)1-4 h;
(3)去除培養(yǎng)基,加入含10%胎牛血清和100U/ml雙抗(青霉素和鏈霉素)的培養(yǎng)基,培養(yǎng)24 h,后用倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞綠色熒光表達(dá)情況并拍照。