專利名稱：一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種皮膚用槲皮素柔性脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前，隨著空氣污染的日益嚴(yán)重，過強(qiáng)紫外線照射對地球表面生物體的威脅日趨加劇，紫外線引起的皮膚損傷也日益嚴(yán)重。當(dāng)臭氧層減少10%時，到達(dá)地面的紫外線輻射就增加2%，而皮膚病的發(fā)病率將增加25% 32%。根據(jù)“World Cancer r印ort”報(bào)道，世界上每年新診斷的癌癥中有30%是皮膚癌，其中90%的皮膚癌是由日光中的紫外輻射引起的。紫外線引起的皮膚損傷主要與UVA及UVB有關(guān)，其中UVB是造成皮膚損傷的主要原因。紫外線等多種污染物通過直接福射、產(chǎn)生活性氧簇(reactive oxygenspecies, R0S)導(dǎo)致氧化應(yīng)激。ROS所致的氧化損傷在多種皮膚病的發(fā)病中起著重要的作用。過量的ROS等氧化物引起的氧化損傷主要有以下幾點(diǎn):①致細(xì)胞前氧化狀態(tài)形成，抗氧化防御系統(tǒng)受損。②破壞皮膚的酶及非酶性抗氧化防御系統(tǒng)，使機(jī)體易受損而處于各種病理狀態(tài)，發(fā)生皮膚老化、免疫抑制、皮膚腫瘤等皮膚相關(guān)性疾病。③引起細(xì)胞外基質(zhì)成分的降解及炎癥反應(yīng)。④氧化構(gòu)成細(xì)胞組織的各種物質(zhì)破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能和代謝。⑤ROS在UVR引起的腫瘤發(fā)生和免疫抑制中都起著促進(jìn)作用。懈皮素(4H-l-Benzopyran-4_one，2_(3，4-dihydroxyphenyl)-3,5, 7-trihydroxy-Flavone),異名櫟精,槲皮黃素。來源為殼斗科植物伊比利亞櫟(Quercus iberica)皮和葉，小檗科植物紅八角蓮(Dysosma veitchii (Hems1.et ffils.) ) Fu,金絲桃科植物紅旱蓮(湖南連翅)(Hypericum ascyron L.)全草,夾竹桃科植物紅麻(Apocynum IancifoliumRus.)葉。廣泛分布于自然界各種植物的花、果實(shí)、種子中。近年來，研究人員發(fā)現(xiàn)蠶豆、甘藍(lán)型油菜、Malus domestica蘋果等植物在接受強(qiáng)紫外線照射情況下,植物體內(nèi)的槲皮素的生物合成量相應(yīng)增加，從而開展了基于槲皮素防護(hù)紫外損傷方面的研究。研究發(fā)現(xiàn)槲皮素對超氧陰離子、羥基自由基和單線態(tài)氧均有良好的清除作用，且量效關(guān)系明顯。與其它黃酮類物質(zhì)相比，槲皮素表現(xiàn)出了較高的對抗輻射的能力。目前，研究者正致力于將槲皮素作為一種ROS清除劑來對抗皮膚的氧化損傷。槲皮素對ROS的清除作用主要表現(xiàn)在兩個方面:槲皮素能夠直接清除R0S，另外，槲皮素也能作用于與自由基產(chǎn)生有關(guān)的酶，間接清除R0S。不僅如此，槲皮素還能鰲合金屬離子，即槲皮素分子中的鄰苯二酚結(jié)構(gòu)能夠鰲合Fe2+和Cu2+，從而發(fā)揮其抗氧化作用。本發(fā)明中所涉及的槲皮素的功效即為預(yù)防和修復(fù)紫外線對皮膚的輻射所造成的損傷，近而防治由紫外輻射引起的皮膚癌癥。限制槲皮素應(yīng)用的主要因素是槲皮素的溶解性，槲皮素幾乎不溶于水，在水中的溶解度為0.166 μ g *ml-l-7.7 μ g.ηι1-1。因此，目前對槲皮素制劑的研制多集中于提高藥物溶解性，延長靜脈給藥體內(nèi)循環(huán)時間等特性，治療功效主要為降血脂，擴(kuò)張冠狀動脈、抗腫瘤等藥理作用。CN101904820A公開了一種 槲皮素納米混懸劑凍干組合物及其制備方法和應(yīng)用，此發(fā)明將槲皮素在磷脂和表面活性劑的存在下利用機(jī)械力制備成納米混懸液用于改善槲皮素的溶解性。CN102058536A公開了槲皮素羥丙基β -環(huán)糊精包和物脂質(zhì)體及其制備方法和用途，用于靜脈給藥顯著延長了槲皮素在小鼠的體內(nèi)循環(huán)時間。CN100370968授權(quán)了一種槲皮素長效脂質(zhì)體粉針劑及其制備方法，利用聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)制備槲皮素長循環(huán)脂質(zhì)體粉針劑用于靜脈給藥，長效脂質(zhì)體與普通脂質(zhì)體相比可以顯著延長槲皮素在小鼠體內(nèi)的循環(huán)時間，增加AUC。上述專利發(fā)明內(nèi)容都是針對靜脈注射給藥途徑的，針對槲皮素皮膚外用制劑的研究和發(fā)明卻沒有。本發(fā)明針對槲皮素抵抗紫外輻射損傷、防治皮膚癌這一功效，將槲皮素制備成皮膚給藥柔性脂質(zhì)體，同時解決槲皮素溶解性差，難以應(yīng)用的問題，進(jìn)而提高槲皮素對角質(zhì)層的滲透量和滲透速度，并增強(qiáng)藥物在表皮和真皮中的滯留量，更好地發(fā)揮藥效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的是提供一種新型的以天然植物提取物槲皮素為有效成分，與現(xiàn)有同類產(chǎn)品相比具有安全、高效等特點(diǎn)的，并且具有較好溶解性的外用制劑。為達(dá)到上述目的，發(fā)明人進(jìn)行深入研究，發(fā)明提供一種槲皮素皮膚外用柔性脂質(zhì)體及其凍干粉，該制劑大大增加了槲皮素在水性介質(zhì)中的分散濃度，解決了槲皮素應(yīng)用上的不便。本發(fā)明提供的一種新型的以天然植物為提取物槲皮素外用制劑是每IOOmL的脂質(zhì)體溶液是由下列物質(zhì)制備而成:槲皮素0.0lg-0.lg，兩親性脂質(zhì)0.lg-1.2g，膽固醇0.025g-0.6g，表面活性劑
0.05g-3g，抗氧劑0.0Olg-0.5g，其余為水性介質(zhì)。進(jìn)一步的，所述的兩親性脂質(zhì)混合物是指蛋磷脂、豆磷脂、腦磷脂、氫化卵磷脂、1，2- 二油酰氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、鞘磷脂一種或一種以上。進(jìn)一步的，所述的表面活性劑包括膽酸、膽酸鈉、Tween20、Tween60、Tween80、Span20、Span60、Span65、泊洛沙姆中的一種或一種以上。進(jìn)一步的，所述的抗氧劑亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、依地酸二鈉、維生素E —種或一種以上。進(jìn)一步的，所述的水性介質(zhì)是由純水和水溶性物質(zhì)組成的。更進(jìn)一步的，所述的水溶性物質(zhì)包括有機(jī)酸、有機(jī)鹽、無機(jī)酸、無機(jī)鹽、單糖、二糖及其組合物。有機(jī)酸包括有諸如羧酸，磺酸，亞磺酸，硫羧酸，比如甲酸，乙酸，檸檬酸，酒石酸。有機(jī)鹽包括有諸如羧酸鹽，磺酸鹽，亞磺酸鹽，硫羧酸鹽，烷基鹽等，比如膽酸鈉，醋酸鈉，甲基鈉，乙醇鈉。單糖包括有諸如糖，戊糖，己糖，麥芽糖、乳糖，乳糖等。本發(fā)明的第二個目的為提供一種制備上述外用制劑的方法，通過優(yōu)選所用原料及用量，優(yōu)化制備參數(shù)、提供一種操作簡便、適于大規(guī)模生產(chǎn)的制備工藝:(I)將槲皮素和兩親性脂質(zhì)溶解于一種或多種有機(jī)溶劑中作為有機(jī)相， 用超聲波使之充分溶解，然后將抗氧劑加入有機(jī)相溶液中。(2)使表面活性劑充分溶于水性介質(zhì)中作為水相；
(3)將有機(jī)相與水相混合之前或之后除去有機(jī)溶劑，形成分散均一的脂質(zhì)體溶液，然后加入凍干保護(hù)劑。(4)對步驟(3)所得的脂質(zhì)體溶液用0.22 μ m的濾膜過濾3_5次，加入適量的凍干保護(hù)劑充分溶解，-80°C預(yù)凍24h，放入減壓冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥48h后即得脂質(zhì)體凍干粉。進(jìn)一步的，所述的抗氧劑可以步驟(I)后加入有機(jī)相中，也可以在步驟(2 )后加入水相中。進(jìn)一步的，所述的凍干保護(hù)劑的加入方法可以步驟(2)后加入到水相中，也可以在步驟(3)后加入到制備好的脂質(zhì)體溶液中，優(yōu)選前者。進(jìn)一步的，所述的步驟(3)所述的除去有機(jī)溶劑，即可以在有機(jī)相和水相混合之前，也可以在機(jī)相和水相混合之后。進(jìn)一步的，所述的步驟(3)所述的除去有機(jī)溶劑方法有蒸發(fā)、冷凍干燥、超聲波等。蒸發(fā)是指將有機(jī)相與水相混合之前或之后，將有機(jī)相或有機(jī)相與水相混合液置于水浴鍋中加熱，攪拌，除去有機(jī)溶劑。冷凍干燥又稱升華干燥，是指將含水物料冷凍到冰點(diǎn)以下，使水轉(zhuǎn)變?yōu)楸?，然后在較高真空下將冰轉(zhuǎn)變?yōu)檎魵舛サ母稍锓椒?。進(jìn)一步的，所述的凍干使 用的方法包括冷凍干燥法和噴霧干燥法。冷凍干燥法又稱升華干燥。將含水物料冷凍到冰點(diǎn)以下，使水轉(zhuǎn)變?yōu)楸?，然后在較高真空下將冰轉(zhuǎn)變?yōu)檎魵舛サ母稍锓椒ā婌F干燥法即通過機(jī)械作用，將需干燥的物料，分散成很細(xì)的像霧一樣的微粒，與熱空氣接觸，在瞬間將大部分水分除去，使物料中的固體物質(zhì)干燥成粉末。進(jìn)一步的，所述的凍干使用凍干保護(hù)劑包括有葡聚糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、甘氨酸、海藻糖、山梨醇、甘油、果糖、木糖醇、半乳糖中的一種或幾種。更進(jìn)一步的，所述的凍干使用凍干保護(hù)劑的用量為2-10g/100m。更進(jìn)一步的，所述的凍干保護(hù)劑可以在制備脂質(zhì)體溶液時加入到水相中，也可以在凍干前加入到制備好的脂質(zhì)體溶液中，優(yōu)選前者。進(jìn)一步的，根據(jù)該工藝生產(chǎn)的脂質(zhì)體和凍干粉為皮膚外用制劑，如軟膏、乳膏、凝膠、乳液、噴霧等。進(jìn)一步的，根據(jù)該工藝生產(chǎn)的脂質(zhì)體和凍干粉適宜用于抗氧化、抗炎、抗紫外輻射損傷、抗皮膚癌，尤其是紫外線輻射弓I起的水腫、紅斑、色素沉著、炎癥、免疫抑制等癥狀。本發(fā)明所制的槲皮素脂質(zhì)體為外用型制劑，用于防護(hù)紫外線輻射、修復(fù)輻射損傷、預(yù)防皮膚癌。槲皮素柔性脂質(zhì)體的制劑學(xué)性質(zhì)評價:(I)粒徑:利用NicompTM380/ZLS動態(tài)光散射粒度分析儀對實(shí)施例(1)_ (5)的粒徑進(jìn)行測量，可得本制劑的平均粒徑為148nm。(2)包封率:使用微柱離心法分離游離槲皮素和脂質(zhì)體，使用HPLC測定槲皮素藥物含量，按照下述公式計(jì)算包封率?？傻帽局苿┑陌饴蕿?5.41 ±5.77%。E%= (CVC2) X 100%C1為過凝膠柱樣品的濃度；C2為未過凝膠柱樣品的濃度。(3)體外釋放行為:在(37 + 0.5) °C恒溫下以漿板法測定體外釋藥性能(25rpm攪拌)，HPLC法測定藥物含量，計(jì)算不同時間藥物的釋放量，計(jì)算累計(jì)釋放量，釋放曲線結(jié)果見

圖1。從圖中可以看出槲皮素柔性脂質(zhì)體可以在48h緩慢釋放藥物，釋放行為符合一級動力學(xué)。(4)皮膚滲透行為:為研究脂質(zhì)體的行為，我們做了如下實(shí)驗(yàn):鼠皮的制備:取健康雄性SD大鼠(180_220g)，拉頸處死，用電動剃毛刀剔去腹部皮膚上的毛，剝離腹部皮膚。用止血鑷小心剔除皮下脂肪組織，仔細(xì)檢查鼠皮的完整性，不得有任何破損。實(shí)驗(yàn)方法:用Parafilm將大鼠腹部皮膚固定于Frans擴(kuò)散池上，角質(zhì)層朝上，供給室加入樣品溶液，接收室為PH7.4的PBS溶液，循環(huán)水溫度為32 士 TC，攪拌轉(zhuǎn)速為600r.min'供給室封閉式給藥，分別于l，2，3，4，5，6，7h定時取樣ImL，并立即補(bǔ)充在32°C下保溫的接收液lmL，取樣液用0.22 μ m微孔濾膜過濾，取20 μ L，HPLC法測定含量。計(jì)算單位面積累計(jì)透過量Q( μ g.cm-2)，以單位面積累計(jì)滲透量Q為縱坐標(biāo)，時間t為橫坐標(biāo)作圖，可以得到累計(jì)滲透曲線圖2，同時得到藥物的穩(wěn)態(tài)滲透速率(Js，μ g.cm-2.IT1)和時滯(h)如下表。從圖中可以看出，經(jīng)脂質(zhì)體包裹后，槲皮素的皮膚透過速率顯著提高，時滯明顯減少，說明脂質(zhì)體增加了藥物與皮膚的親和性，使得藥物進(jìn)入皮膚深層的能力增加。
權(quán)利要求
1.一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，其特征在于，每IOOmL的脂質(zhì)體溶液是由下列物質(zhì)制備而成: 槲皮素0.0lg-0.1g,兩親性脂質(zhì)0.lg-1.2g，膽固醇0.025g-0.6g，表面活性劑0.05g-3g，抗氧劑0.0Olg-0.5g，其余為水性介質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，其特征在于，所述的兩親性脂質(zhì)混合物是指蛋磷脂、豆磷脂、腦磷脂、氫化卵磷脂、1，2-二油酰氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、鞘磷脂一種或一種以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，其特征在于所述的表面活性劑包括膽酸、膽酸鈉、Tween20、Tween60、Tween80、Span20、Span60、Span65、泊洛沙姆中的一種或一種以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，其特征在于述的抗氧劑亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、依地酸二鈉、維生素E —種或一種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，其特征在于所述的水性介質(zhì)是由純水和水溶性物質(zhì)組成的。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，其特征在于所述的水溶性物質(zhì)包括有機(jī)酸、有機(jī)鹽、無機(jī)酸、無機(jī)鹽、單糖、二糖及其組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，包括如下制備步驟: (1)將槲皮素和兩親性脂質(zhì)溶解于一種或多種有機(jī)溶劑中作為有機(jī)相，用超聲波使之充分溶解，然后將抗氧劑加入有機(jī)相溶液中。
(2)使表面活性劑充分溶于水性介質(zhì)中作為水相； (3)將有機(jī)相與水相混合之前或之后除去有機(jī)溶劑，形成分散均一的脂質(zhì)體溶液，然后加入凍干保護(hù)劑。
(4)對步驟(3)所得的脂質(zhì)體溶液用0.22 μ m的濾膜過濾3_5次，加入適量的凍干保護(hù)劑充分溶解，-80°C預(yù)凍24h，放入減壓冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥48h后即得脂質(zhì)體凍干粉。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，所述的抗氧劑可以步驟(I)后加入有機(jī)相中，也可以在步驟(2 )后加入水相中。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，所述的凍干保護(hù)劑的加入方法可以步驟(2)后加入到水相中，也可以在步驟(3)后加入到制備好的脂質(zhì)體溶液中。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，所述的步驟(3)中除去有機(jī)溶劑，即可以在有機(jī)相和水相混合之前，也可以在機(jī)相和水相混合之后。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的除去 有機(jī)溶劑方法有蒸發(fā)、冷凍干燥、超聲超聲波。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，所述的凍干使用的方法包括冷凍干燥法和噴霧干燥法。
13.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，所述的凍干使用的凍干保護(hù)劑包括有葡聚糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、甘氨酸、海藻糖、山梨醇、甘油、果糖、木糖醇、半乳糖中的一種或幾種，用量為2-10g/100mL。
14.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉的制備方法，其特征在于，所述的凍干保護(hù)劑可以在制備脂質(zhì)體溶液時加入到水相中，也可以在凍干前加入到制備好的脂質(zhì)體溶液中。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-15所述的槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，其特征在于，所述的脂質(zhì)體及其凍干粉為皮膚外用制劑，適宜用于抗氧化、抗炎、抗紫外輻射損傷、抗皮膚癌，對抗紫外線輻射引起的 水腫、紅斑、色素沉著、炎癥、免疫抑制。
全文摘要
一種槲皮素皮膚用脂質(zhì)體及其凍干粉，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，為解決槲皮素溶解性差，難以應(yīng)用的問題，同時提高槲皮素對角質(zhì)層的滲透量和滲透速度，并增強(qiáng)藥物在表皮和真皮中的滯留量，更好地發(fā)揮藥效。每100mL的脂質(zhì)體溶液是由下列物質(zhì)制備而成槲皮素0.01g-0.1g，兩親性脂質(zhì)0.1g-1.2g，膽固醇0.025g-0.6g，表面活性劑0.05g-3g，抗氧劑0.001g-0.5g，其余為水性介質(zhì)。該脂質(zhì)體及其凍干粉為皮膚外用制劑，適宜用于抗氧化、抗炎、抗紫外輻射損傷、抗皮膚癌，對抗紫外線輻射引起的水腫、紅斑、色素沉著、炎癥、免疫抑制。
文檔編號A61P37/04GK103070826SQ20121059010
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者史小軍, 劉丹, 朱永原 申請人:清華大學(xué)深圳研究生院