瘧疾的治療和預防的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供抗原、編碼所述抗原的載體、和針對所述抗原的抗體及其他結合化合物及其在預防或治療瘧疾中的應用。具體地，提供這樣的組合物，所述組合物包含與SEQ?ID?NO：1具有至少90％同一性的網(wǎng)織紅細胞-結合蛋白同源物5(PfRH5)抗原或其片段；或者所述組合物包含表達與SEQ?ID?NO：2具有至少90％同一性的PfRH5抗原或其片段的病毒載體。
【專利說明】瘧疾的治療和預防
[0001]本發(fā)明涉及用于治療或預防瘧疾的抗原、抗體和疫苗。
[0002]血液階段形式的瘧原蟲屬(Plasmodium)寄生蟲對紅血細胞(RBCs)的感染是造成瘧疾臨床表現(xiàn)的原因。瘧原蟲屬寄生蟲的實例包括下述物種:惡性瘧原蟲(P.falciparum)，間日痕原蟲(P.vivax),卵形痕原蟲(P.0vale)和三日痕原蟲(P.malariae)。特別感興趣的寄生蟲是惡性瘧原蟲，原因在于，由于其可以感染所有齡的RBCs并不局限于未成熟的RBCs，故正是這種寄生蟲引起大部分的致死性感染。每年僅惡性瘧原蟲就引起大約一百萬例死亡，主要是在兒童中引起死亡。
[0003]因此，開發(fā)疫苗是高度合乎需要的。
[0004]基于通過阻斷惡性瘧原蟲在肝臟中的感染起作用的RTS，S蛋白的當前疫苗候選物僅取得了部分功效。因此，存在對于可以通過防護引起疾病的血液階段的瘧原蟲屬寄生蟲而仿效天然免疫性的疫苗的需求。
[0005]之前的研究已經使用標準生長抑制活性(growth inhibitory activity, GIA)測定在體外研究了抗原誘導有效抵抗血液階段瘧疾寄生蟲的抗體的能力。一種這樣的抗原是頂膜抗原 I (apical membrane antigenl, PfAMAl) ?
[0006]關于參與血液階段瘧原蟲屬寄生蟲侵入RBCs的其他蛋白家族的GIA測定研究已經發(fā)現(xiàn)其是無效的或不如PfAMAl有效。
[0007]因此，PfAMAl已經成為關于對抗血液階段瘧疾寄生蟲的研究的主要焦點。然而，針對PfAMAl的抗體似乎僅在極高的濃度才有效。另外，PfAMAl誘導品系特異性的抗體，該品系特異性的抗體對瘧原蟲屬寄生蟲的遺傳多樣性品系沒有效果(A.L.Goodman，
S.J.Draper, Ann.Trop .Med.Parasi to 1.104,189 (2010))。另外，除了在人受試者中誘導充分的抗體應答的抗原之外，疫苗開發(fā)還已經受到對可能的反應原性化學佐劑的需求的阻礙。
[0008]對于能夠誘導甚至在較低的免疫球蛋白濃度下有效的抗體的抗原存在需求。對于能夠誘導有效抗瘧原蟲屬寄生蟲的遺傳多樣性品系的抗體的抗原存在需求。對于在不需要可能的反應原性化學佐劑的條件下有效的抗原存在需求。
[0009]本發(fā)明通過提供抗原、編碼所述抗原的載體、和特異性結合所述抗原的抗體(以及抗體樣分子，包括適配體和肽)、及其(單獨的或組合)在預防或治療瘧疾中的應用解決了上述需求中的一種或多種。
[0010]一方面，本發(fā)明提供網(wǎng)織紅細胞-結合蛋白同源物5(PfRH5)抗原或其片段。在一個實施方案中，PfRH5抗原或其片段以疫苗制劑的形式存在。
[0011]術語抗原或其片段意指可以被免疫系統(tǒng)識別和/或刺激細胞介導的免疫應答和/或刺激抗體產生的任意基于肽的序列。
[0012]在另一方面，本發(fā)明提供表達PfRH5抗原或其片段的載體。在一個實施方案中,所述載體以疫苗制劑的形式存在。
[0013]網(wǎng)織紅細胞結合同源物(PfRH)家族包括六個成員(PfRHl、PfRH2a、PfRH2b、PfRH3、PfRH4和PfRH5)，其每種成員參與瘧原蟲屬寄生蟲與RBCs的結合，可能的例外是PfRH3，其可能是不表達的假基因。PfRH家族已被鑒定為在裂殖子形式的瘧原蟲屬寄生蟲表面上的黏附素，其結合在紅細胞表面上的受體并且因此允許處于其血液階段的寄生蟲侵入RBCs。PfRH5抗原具有大約63KDa的分子量。已經報道了大約45KDa和28KDa的體外切割的片段。
[0014]本發(fā)明的PfRH5抗原誘導在GIA測定中高度有效抗血液階段的瘧原蟲屬寄生蟲的抗體。這是非常令人驚訝的，因為之前的研究僅表明PfRH5抗原誘導在GIA測定中無效或僅是有效性差(即，基本上不如用PfAMAl-誘導的抗體通常所觀察到的那樣有效)的抗體，除此之外，沒有證明任何作用。
[0015]本發(fā)明的抗原令人驚訝地誘導比PfAMAl更有效地中和寄生蟲并且在較低的免疫球蛋白濃度保持有效的抗體。另外，所述抗原誘導這樣的抗體，已經令人驚訝地發(fā)現(xiàn)所述抗體有效抗瘧原蟲屬寄生蟲的遺傳多樣性品系，這在實現(xiàn)針對天然環(huán)境中傳播的多種品系的疫苗功效方面可能是至關重要的。
[0016]這代表首個使用單一抗原抗瘧原蟲屬寄生蟲的高度有效的交叉-品系GIA的實例，并且因此代表在瘧疾治療和預防方面的主要突破。
[0017]因此，在一個實施方案中，PfRH5抗原或其片段提供針對由瘧原蟲屬寄生蟲引起的疾病的防護(諸如長期的防護)。
[0018]在一個實施方案中，PfRH5抗原或其片段提供針對瘧原蟲寄生蟲感染的抗體應答(例如，中和抗體應答)。
[0019]本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)通過將PfHR5抗原與一種或多種其他惡性瘧原蟲抗原組合可以獲得甚至更高的功效。涉及這些組合的GIA測定已經證明高于單種抗體的抑制總和的作用，即，協(xié)同作用。由于PfRH家族的其他成員在GIA測定中似乎不是特別有效的，因此這是令人驚訝的。
`[0020]因此，在另一方面，本發(fā)明提供網(wǎng)織紅細胞-結合蛋白同源物5(PfRH5)抗原或其片段，以及選自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組的一個或多個抗原或其片段。特別優(yōu)選的實施方案包括PfRH5抗原或其片段，連同PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一種或多種。在一個實施方案中，所述抗原或其片段以疫苗制劑的形式存在。
[0021]在一個相關方面，本發(fā)明提供表達PfRH5抗原或其片段、以及選自由PfAMAl、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PFrH2b或PfRH4組成的組的一個或多個抗原或其片段的載體。在另一方面，本發(fā)明提供表達PfRH5抗原或其片段的載體，連同表達選自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PFrH2b或PfRH4組成的組的一個或多個抗原或其片段的另一種載體。特別優(yōu)選的實施方案包括表達PfRH5抗原或其片段、連同PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一種或多種的一種載體或多種載體。在一個實施方案中，所述一種載體或多種載體以疫苗制劑的形式存在。
[0022]在本發(fā)明的一個實施方案中，所述載體是病毒載體。所述病毒載體可以是腺病毒(人血清型如AdHu5，猿血清型如AdCh63，或其他形式)或痘病毒載體(諸如改良型痘苗安卡拉株(modified vaccinia Ankara, MVA))。
[0023]病毒載體通常是不復制的或復制減弱的載體，這意指所述病毒載體不能在正常細胞(例如，正常的人細胞)中復制到任意顯著的程度，如通過常規(guī)方式測量的-例如，通過測量DNA合成和/或病毒滴度測量。不復制或復制減弱的載體可以通過天然(即，其已經按原樣從自然中分離)或是人工(例如，通過在體外培育或通過遺傳操作)而變成這樣的。通常存在至少一種細胞類型，其中所述復制減弱的病毒載體可以生長-例如，改良型痘苗安卡拉株(MVA)可以在CEF細胞中生長。
[0024]典型地,所述病毒載體不能在動物受試者中、典型地在哺乳動物受試者如人或其他靈長類動物中引起顯著的感染。
[0025]在一個實施方案中,所述載體選自人或猿腺病毒載體或痘病毒載體。
[0026]在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述載體是DNA載體，諸如基于質粒的DNA疫苗。在一個實施方案中，所述DNA載體能夠在哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中表達。
[0027]在一個實施方案中，所述PfRH5抗原由SEQ ID NO:1定義。備選地，所述抗原可以是該抗原的成熟形式，其中N端信號肽已被去除。例如，所述成熟形式可以包含SEQ ID NO:I的氨基酸殘基26-526或由SEQ ID NO:1的氨基酸殘基26-526組成。本發(fā)明包括其片段，其包含長度為170個或更多個連續(xù)的氨基酸殘基或由長度為170個或更多個連續(xù)的氨基酸殘基組成(例如，長度至少為 170，180，190，200，210，220，230，240，250，260，270，280，290，300，310，320，330，340，350，360，370，380，390，400，410，420，430，440，450，460，470，480，490，500，510或520個連續(xù)的氨基酸殘基)。本發(fā)明的片段具有與PfRH5抗原共同抗原交叉反應性。在一個實施方案中，本發(fā)明的片段不包含來自N端信號肽的氨基酸。在一個實施方案中，本發(fā)明的片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸殘基191-359。在一個實施方案中，本發(fā)明的片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸殘基31-174。在一個實施方案中，本發(fā)明的片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸殘基304-430。
[0028]所述抗原或其片段可以具有在SEQ ID NO:1的氨基酸殘基38處和/或氨基酸殘基214處的置換，其中氨基酸N被除N之外的氨基酸替換。在一個實施方案中，氨基酸殘基38和氨基酸殘基214均被Q替換。
[0029]上述抗原或其片段 包括表現(xiàn)出與SEQ ID NO:1有至少90 %、91 %、92 %、93 %、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 的同一性的變體。
[0030]SEQ ID NO:1由526個氨基酸殘基組成。SEQ ID NO:1的變體包括如上文列出的那些，并且可以另外或備選地包括具有一個或多個氨基酸置換、缺失或插入的氨基酸序列。可以特別考慮置換，也可以特別考慮N-和C-端缺失。置換包括保守置換。
[0031]因此，在一個實施方案中，SEQ ID NO:1的變體包括長度為至少一個連續(xù)氨基酸殘基(例如，至少30、35、40、45或50個連續(xù)氨基酸殘基)的N端缺失。
[0032]因此，在一個實施方案中，SEQ ID NO:1的變體包括長度為至少一個連續(xù)氨基酸殘基(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個連續(xù)氨基酸殘基)的C端缺失。
[0033]在一個實施方案中，所述載體表達由SEQ ID NO:2定義的PfRH5，包含來自牛組織纖維酶原激活物的分泌信號，或者可以包含指導抗原的亞細胞運輸?shù)牧硪环N信號。備選地，所述抗原可以是該抗原的成熟形式，其中已經去除了 N端信號肽。例如，所述成熟形式可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸殘基34-534或由SEQ ID NO:2的氨基酸殘基34-534組成。本發(fā)明包括其片段，所述片段包含下述或由下述組成:長度為170個或更多個連續(xù)氨基酸殘基(例如，長度為至少 170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500,510或520個連續(xù)氨基酸殘基)。本發(fā)明的片段具有與PfRH5抗原共同抗原交叉反應性。在一個實施方案中，本發(fā)明的片段不包含來自N端信號肽的氨基酸。
[0034]上述抗原或其片段包括表現(xiàn)出與SEQ ID NO:2具有至少90%、91 %、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 的同一性的變體。
[0035]SEQ ID NO:2由534個氨基酸殘基組成。SEQ ID NO:2的變體包括如上文列出的那些，并且可以另外或備選地包括具有一個或多個氨基酸置換、缺失或插入的氨基酸序列?？梢蕴貏e考慮置換，也可以特別考慮N-和C-端缺失。置換包括保守置換。
[0036]因此，在一個實施方案中，SEQ ID NO:2的變體包括長度為至少一個連續(xù)氨基酸殘基(例如，至少35、40、45或50個連續(xù)氨基酸殘基)的N端缺失。
[0037]因此，在一個實施方案中，SEQ ID NO:2的變體包括長度為至少一個連續(xù)氨基酸殘基(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個連續(xù)氨基酸殘基)的C端缺失。
[0038]用于確定氨基酸序列同一性的常規(guī)方法在本說明書下文中更詳細地討論。
[0039]如上文所述，PfRH5是瘧原蟲屬寄生蟲侵入RBCs機構的成分。與PfRH5特異性結合的化合物抑制這一過程并且防止侵入RBCs。
[0040]因此，本發(fā)明還提供針對網(wǎng)織紅細胞-結合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其片段的結合化合物。
[0041 ] 本發(fā)明還提供針對Pf RH5抗原或其片段的結合化合物，其與針對PFAMA1、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4的任一種或其片段的結合化合物組合。特別優(yōu)選的實施方案包括針對PfRH5抗原或其片段的結合化合物，其與針對PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一種或多種的結合化合物組合。
[0042]所述結合化合物可以是抗體，諸如單克隆抗體或多克隆抗體。所述結合化合物可以是單克隆或多克隆抗體的抗原結合片段、或特異性結合PrRH5的肽。所述抗體可以是Fab> F (ab，) 2、Fv、scFv、Fd 或 dAb。
[0043]在另一個實施方案中，所述結合化合物可以是寡核苷酸適配體。所述適配體可以結合PfRH5或其片段。所述適配體可以特異性結合PfRH5或其片段。
[0044]已經發(fā)現(xiàn)在GIA測定中，針對PfRH5的適配體抑制瘧原蟲屬寄生蟲生長。所述適配體可以通過已知的方法找至Ij (例如，在D.H.J.Bunka, P.G.Stockley, Nature ReviewsMicrobiology (自然微生物學綜述)4, 588 (2006)中所述的方法)。所述適配體可以進行優(yōu)化以使其適于治療應用，例如，其可以綴合到單克隆抗體上以改變其藥物代謝動力學(例如，半衰期和生物分布)和/或獲得Fe-依賴性免疫功能。
[0045]本發(fā)明還提供在受試者中刺激或誘導免疫應答的方法，所述方法包括向所述受試者施用本發(fā)明的PfRH5抗原或其片段、或本發(fā)明的載體、或本發(fā)明的結合化合物(如上文所述)。
[0046]因此,在一個實施方案中，在受試者中刺激或誘導免疫應答的方法包括向受試者施用本發(fā)明的PfRH5抗原或其片段、或本發(fā)明的載體、或本發(fā)明的結合化合物(如上文所述)。
[0047]在治療應用和方法的情形中，‘受試者’是將從針對瘧原蟲屬寄生蟲的免疫應答的刺激或誘導中受益的任何動物受試者。典型的動物受試者是哺乳動物，諸如靈長類動物，例如，人。[0048]在一個實施方案中，本發(fā)明提供用于治療或預防瘧疾的方法。
[0049]在一個實施方案中，本發(fā)明提供PfRH5抗原或其片段，其用于預防或治療瘧疾。
[0050]在相關方面中，本發(fā)明提供PfRH5抗原或其片段，和選自由PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組的一種或多種其他抗原或其片段；其用于預防或治療瘧疾。
[0051]在另一方面，本發(fā)明提供上述載體，其用于預防或治療瘧疾。
[0052]在另一方面，本發(fā)明提供上述結合化合物，其用于預防或治療瘧疾。
[0053]在另一方面，本發(fā)明提供本發(fā)明的抗原或其片段、載體、或結合化合物(如上文所述)單獨或組合地用于預防或治療瘧疾的應用。
[0054]在相關方面，本發(fā)明提供本發(fā)明的抗原或其片段、載體或結合化合物(如上文所述)在制備用于預防或治療瘧疾的藥物中的應用。
[0055]在一個實施方案中，所述用于治療或預防瘧疾的方法包括向受試者施用治療有效量的本發(fā)明的PfRH5抗原或其片段、或結合化合物、或載體(如上文所述)。
[0056]當用于本文時，術語“治療(“treatment”或“treating”)”包括治療性或防止性/預防性措施，并且包括瘧疾的感染后的治療和減輕。
[0057]當用于本文時，術語“預防”包括防止瘧疾的發(fā)生和/或減輕瘧疾的嚴重性或強度。
[0058]本發(fā)明的PfRH5抗原或其片`段、或結合化合物、或載體(如上文所述)可以施用給已經具有瘧疾、與瘧疾相關的病癥或癥狀的受試者(典型地是哺乳動物受試者，諸如人或其他靈長類動物)，從而治療或預防瘧疾。在一個實施方案中，懷疑受試者已經與瘧原蟲屬寄生蟲接觸，或者已經具有與瘧原蟲屬寄生蟲的已知的接觸，但是尚未顯現(xiàn)出暴露的癥狀。
[0059]當施用給已經具有瘧疾、或正顯現(xiàn)出與瘧原蟲屬寄生蟲感染相關的癥狀的受試者時(例如，哺乳動物，如人或其他靈長類動物)，本發(fā)明的PfRH5抗原或其片段、或結合化合物、或載體(如上文所述)可以治愈、延緩、減輕嚴重性，或改善一種或多種癥狀，和/或延長受試者的存活期超過在不進行所述治療時預測的存活期。
[0060]備選地，本發(fā)明的PfRH5抗原或其片段、或結合化合物、或載體(如上文所述)可以施用給最終可能感染瘧原蟲屬寄生蟲的受試者(例如，哺乳動物，如人或其他靈長類動物)，從而預防、治愈、延緩、減輕瘧疾嚴重性或改善一種或多種瘧疾癥狀，或者從而延長受試者的存活期超過不進行所述治療時預測的存活期。
[0061]本發(fā)明的治療和預防性治療適用于多個不同年齡的不同受試者。在人的情形中，所述治療適用于兒童(例如，嬰兒、5歲以下的兒童、較大的兒童或十幾歲的青少年)和成年人。在其他動物受試者(例如哺乳動物如靈長類動物)的情形中，所述治療適用于未長成的受試者和長成的/成年的受試者。
[0062]本發(fā)明的PfRH5抗原或其片段、或載體(如上文所述)可以用作疫苗。
[0063]在一個方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的PfRH5抗原或其片段的疫苗組合物。
[0064]在相關的方面，本發(fā)明提供包含PfRH5抗原或其片段、以及選自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組一種或多種其他抗原或其片段的疫苗組合物。特別優(yōu)選的實施方案提供包含PfRH5抗原或其片段聯(lián)合PfEBA 175、PfRH2a、PfRH2b或Pf RH4抗原或其片段中的一種或多種的疫苗組合物。
[0065]在另一方面，本發(fā)明提供包含表達PfRH5抗原或其片段的載體的疫苗組合物。[0066]在另一方面，本發(fā)明提供包含表達PfRH5抗原或其片段以及選自由PfAMAl、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組一種或多種其他抗原或其片段的載體的疫苗組合物。備選地，本發(fā)明提供包含表達PfRH5抗原或其片段的載體連同表達選自由PfAMAl、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組一種或多種其他抗原或其片段的載體的疫苗組合物。特別優(yōu)選的實施方案提供包含表達PfRH5抗原或其片段聯(lián)合Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一種或多種的一種載體或多種載體。
[0067]當用在本文中時，“疫苗”是在施用給動物受試者如哺乳動物(例如，人或其他靈長類動物)時刺激針對瘧原蟲屬寄生蟲感染的保護性免疫應答的制劑。免疫應答可以是體液和/或細胞介導的免疫應答。例如，本發(fā)明的疫苗可以用于保護受試者免受惡性瘧原蟲感染(即，瘧疾)的影響。
[0068]優(yōu)選地，本發(fā)明的疫苗包含PfRH5抗原或其片段，其將導致至少30%、優(yōu)選至少50%的針對血液階段的瘧原蟲屬寄生蟲的GIA。優(yōu)選地，所述疫苗將對多個遺傳品系血液階段的瘧原蟲屬寄生蟲產生這樣的結果。
[0069]術語“疫苗”在本文中可以與術語“治療性/預防性組合物”、“制劑”或“藥物”互
換使用。
[0070]本發(fā)明的疫苗(如上文定義)，除了藥用載體外，還可以與鹽、賦形劑、稀釋劑、佐齊U、免疫調節(jié)劑和/或抗微生物化合物中的一種或多種組合。
[0071]藥用的鹽包括與無機酸形成的酸加成鹽或與有機酸形成的酸加成鹽，所述無機酸諸如例如鹽酸或磷酸，所述有機酸諸如乙酸、草酸、酒石酸、馬來酸等。與游離羧基形成的鹽也可以來源于無機堿，諸如例如，氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵，和來源于有機堿諸如異丙胺、三乙胺、2-乙基 氨基醇、組氨酸、普魯卡因等。
[0072]免疫原性組合物、治療性制劑、藥物和預防性制劑(例如疫苗)的施用通常通過常規(guī)途徑進行，例如，通過靜脈內、皮下、腹膜內或黏膜途徑進行。施用可以通過腸胃外注射進行，例如，通過皮下或肌內注射。包含中和抗體的制劑可以特別適用于靜脈內、肌內、皮內或皮下施用。
[0073]因此，本發(fā)明的免疫原性組合物、治療性制劑、藥物和預防性制劑(例如，疫苗)典型地制備成作為液體溶液或混懸液的注射劑。備選地，可以制備適于在注射前制成在液體中的溶液或混懸液的固體形式。制劑還可以被乳化，或者是包封在脂質體或微膠囊中的肽。
[0074]活性免疫原性成分通常與賦形劑混合，所述賦形劑是藥用的并且與所述活性成分相容。例如，適宜的賦形劑為水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等以及它們的組合。另外，如果需要，疫苗可以包含少量的輔助物質，如濕潤劑或乳化劑、PH緩沖劑，和/或包含增強疫苗的效用的佐劑。
[0075]通常，所述載體是藥用載體。藥用載體的非限制性實例包括水、鹽水和磷酸緩沖的鹽水。然而，在一些實施方案中，所述組合物以凍干形式存在，在這種情形中，其可以包含穩(wěn)定劑，如BSA。在一些實施方案中,用防腐劑如鄰乙萊硫基苯酸鈉(thiomersal)或疊氮化鈉配制組合物以有利于長期存儲可能是合乎需要的。
[0076]另外的可能有效的佐劑的實例包括但不限于:完全弗氏佐劑(CFA)，不完全弗氏佐劑(IVA)，皂苷，純化的皂苷提取物級分如Quil A，皂苷的衍生物如QS-21，基于皂苷的液體顆粒如ISC0M/ISC0MATIX，大腸桿菌(E.coli)不耐熱性毒素(LT)突變體如LTK63和/或LTK72，氫氧化鋁，N-乙酰-胞壁酰-L-蘇氨酰-D-異谷氨酰胺(thr_MDP)，N-乙酰-正-胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰胺(CGP11637，稱為正-MDP)，N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰-L-丙氨酸-2-(1' -2，-二棕櫚酰-sn-甘油-3-羥基磷酸基氧基)-乙醇胺(CGP19835A，稱為MTP-PE)，和RIBI，其包含在2%角鯊烯/吐溫80乳液中的三種提取于細菌的成分，即，單磷酰脂A，海藻糖二霉菌酸酯和細胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)。
[0077]緩沖劑的實例包括，但不限于，琥珀酸鈉(pH6.5)和磷酸緩沖鹽水(PBS ；pH6.5和
7.5)。
[0078]另外適用于其他施用模式的制劑包括栓劑，并且在一些情形中，為口服制劑或適用于作為氣霧劑分布的制劑。對于栓劑，常規(guī)的結合劑和載體可以包括，例如，聚亞烷基二醇或甘油三酯；這樣的栓劑可以由包含范圍在0.5% -10%、優(yōu)選在1% -2%的活性成分的混合物形成。
[0079]口服制劑包括通常所用的賦形劑，諸如例如，藥用級別的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。這些組合物采用溶液、混懸液、片劑、藥丸、膠囊、緩釋制劑或粉劑形式。
[0080]本發(fā)明包括基本上與基于本申請中鑒定的參照SEQ ID NOs中的任一種的多肽同源的多肽(包括其片段)。術語“序列同一性”和“序列同源性”在本說明書中認為是同義的。
[0081]例如，目的多肽可以包含與參照多肽的氨基酸序列有至少70、75、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、99或100%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
[0082]存在多種已建立的可用于比對兩種氨基酸序列的算法。
.[0083]典型地，一種序列作為參照序列，可以將測試序列與其進行比較。序列比較算法基于設定的程序參數(shù)計算測試序列相對于參照序列的百分比序列同一性。例如，可以通過計算機執(zhí)行的算法(例如，GAP, BE, STFIT，F(xiàn)ASTA或TFASTA)或BLAST和BLAST2.0算法進行比較目的的氨基酸序列的比對。
[0084]下文所示的BL0SUM62表是來源于代表超過500組相關蛋白的高度保守區(qū)的蛋白序列片段的大約2，000次局部多重比對的氨基酸置換矩陣(Henikoff&Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA(美國國家科學院學報)89:10915-10919，1992 ;通過引用結合在本文
中)。氨基酸表示為標準單字母編碼。百分比同一性計算為:
[0085]

liiiE'iffd 的總數(shù)

I I I—?**** -*......1*.1
[較K序列的K度+為比對兩種序列IfIJ I入較K汴列'I>的缺I I數(shù)]
[0086]BL0SUM62 表
[0087]
【權利要求】
1.疫苗組合物，所述疫苗組合物包含與SEQID NO:1的氨基酸殘基26-526具有至少90%同一性的網(wǎng)織紅細胞-結合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其具有與所述PfRH5抗原共同抗原交叉反應性的片段。
2.權利要求1的組合物，其中所述PfRH5抗原或其片段在SEQID NO:1的殘基38和/或在氨基酸殘基214具有除N之外的氨基酸。
3.權利要求2的組合物，其中所述PfRH5抗原或其片段在SEQID NO:1的氨基酸殘基38和氨基酸殘基214具有氨基酸Q。
4.權利要求1-3中任一項的組合物，其中所述組合物還包含來自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組的一個或多個抗原或其片段。
5.病毒載體或DNA質粒，其表達與SEQID NO:2具有至少90%同一性的PfRH5抗原或其具有與所述PfRH5抗原共同抗原交叉反應性的片段。
6.權利要求5的病毒載體或DNA質粒，其表達與SEQID NO:2的氨基酸殘基34-534具有至少90%同一性的PfRH5抗原或其具有與所述PfRH5抗原共同抗原交叉反應性的片段。
7.權利要求5或權利要求6的病毒載體或DNA質粒，其中所述病毒載體或DNA質粒表達來自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組的一個或多個抗原或其片段。
8.權利要求5或權利要求6的病毒載體或DNA質粒，其還包含表達來自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4組成的組的一個或多個抗原或其片段的病毒載體或DNA質粒。
9.權利要求5-8中任一項的病毒載體,其中所述病毒載體是人或猿腺病毒或痘病毒。
10.權利要求9的病毒載體`，其中所述病毒載體是AdHu5、AdCh63或改良型痘苗安卡拉株(MVA)載體。
11.權利要求5-8中任一項的DNA質粒，其中所述DNA載體能夠在哺乳動物表達系統(tǒng)中表達。
12.抗體或其結合片段，所述抗體或其結合片段特異性結合與SEQID NO:1的氨基酸殘基26-526具有至少90%同一性的網(wǎng)織紅細胞-結合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其具有與所述PfRH5抗原共同抗原交叉反應性的片段。
13.權利要求12的抗體或結合片段，其中所述抗體特異性結合在SEQID NO:1的殘基38和/或氨基酸殘基214具有除N之外的氨基酸的PfRH5抗原或其片段。
14.權利要求13的抗體或結合片段，其中所述抗體特異性結合在SEQID NO:1的氨基酸殘基38和氨基酸殘基214具有氨基酸Q的PfRH5抗原或其片段。
15.權利要求12-14中任一項的抗體或結合片段，其中所述抗體是單克隆或多克隆的。
16.權利要求12-15中任一項的抗體或結合片段，其中所述抗體是Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、Fd 或 dAb。
17.寡核苷酸適配體，所述寡核苷酸適配體特異性結合與SEQID NO:1的氨基酸殘基26-526具有至少90%同一性的網(wǎng)織紅細胞-結合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其具有與所述PfRH5抗原共同抗原交叉反應性的片段。
18.權利要求17的適配體，其中所述適配體特異性結合在SEQID NO:1的殘基38和/或氨基酸殘基214具有除N之外的氨基酸的PfRH5抗原或其片段。
19.權利要求18的適配體，其中所述適配體特異性結合在SEQID NO:1的氨基酸殘基38和氨基酸殘基214具有氨基酸Q的PfRH5抗原或其片段。
20.疫苗組合物，其包含權利要求5-11中任一項的載體和/或DNA質粒。
21.權利要求1-4和/或權利要求20中任一項的疫苗組合物，和/或權利要求5-11中任一項的載體和/或DNA質粒，和/或權利要求12-16中任一項的抗體，和/或權利要求17-19中任一項的適配體，其用于治療或預防瘧疾。
22.權利要求1-4和/或權利要求20中任一項的疫苗組合物，和/或權利要求5-11中任一項的載體和/或DNA質粒，和/或權利要求12-16中任一項的抗體，和/或權利要求17-19中任一項的適配體在制備用于預防或治療瘧疾的藥物中的應用。
23.權利要求1-4和/或權利要求20中任一項的疫苗組合物，其用于預防或治療瘧疾，其中所述預防或治療包括用人或猿腺病毒，例如AdHu5或AdCh63,來致敏受試者。
24.權利要求23的疫苗組合物，其用于預防或治療瘧疾，其中所述預防或治療還包括用痘病毒，例如MVA，來加強受試者。
25.權利要求1-4和/或權利要求20中任一項的疫苗組合物，其用于免疫受試者，其中所述PfRH5抗原或其片段導致針對血液階段瘧原蟲屬(Plasmodium)寄生蟲至少50%的GIA。
26.權利要求25的應用，其中所述PfRH5抗原或其片段導致針對血液階段瘧原蟲屬寄生蟲多個遺傳品系的至少50%的GIA。
27.權利要求1-4和/或權利要求20中任一項的疫苗組合物，和/或權利要求5-11中任一項的載體和/或DNA質粒，和/或權利要求12-16中任一項的抗體，和/或權利要求17-19中任一項的適配 體，其用于賦予針對瘧原蟲屬寄生蟲的紅細胞前期保護。
28.權利要求25-27中任一項的應用，其中所述瘧原蟲屬寄生蟲是惡性瘧原蟲(P.falciparum)。
【文檔編號】A61K39/015GK103442729SQ201280010331
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2012年2月24日 優(yōu)先權日:2011年2月25日
【發(fā)明者】亞歷山大·道格拉斯, 西蒙·德雷珀, 阿德里安·希爾, 安德魯·威廉斯, 約瑟夫·伊林沃恩 申請人:伊西斯創(chuàng)新有限公司