含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明揭示了穩(wěn)定性高的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。其中，2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下，且包含含有碘的還原劑。并且，所述還原劑為金屬碘化化合物類。并且，所述透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽的濃度為5～15mg/mL。
【專利說明】含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及含透明質(zhì)酸(hyaluronic acid)或透明質(zhì)酸鹽的水溶液,所述透明質(zhì)酸的2價溶解性鐵的含有率低，且具有含有碘的還原劑。
【背景技術(shù)】
[0002]已知透明質(zhì)酸是指N-乙酰葡糖胺和葡萄糖醛酸的二糖單元結(jié)合而構(gòu)成的多糖。透明質(zhì)酸通?？捎米麽t(yī)藥品、化妝品、食品等的原材料。作為透明質(zhì)酸的生產(chǎn)方法，有利用來自雞的雞冠等的提取物來進(jìn)行制造的方法，或者，利用使用微生物的發(fā)酵法來進(jìn)行生產(chǎn)的方法。
[0003]例如，專利文獻(xiàn)I中記載了使用獸疫鏈球菌(Streptococcus zooepidemicus),利用發(fā)酵法來生產(chǎn)透明質(zhì)酸。該專利文獻(xiàn)I中記載到到，在培養(yǎng)中添加硫酸亞鐵以使?jié)舛茸優(yōu)槠?倍的濃度時(實施例3)，相較于不添加時(實施例1)的透明質(zhì)酸的收率以及分子量會增加。
[0004]另外，專利文獻(xiàn)2中記載到，使用馬鏈球菌(Streptococcus equi) (ATCC9527)利用發(fā)酵法來生產(chǎn)透明質(zhì)酸粉末。專利文獻(xiàn)3中記載有實驗數(shù)據(jù)，其顯示了在基于專利文獻(xiàn)2的方法生產(chǎn)的透明質(zhì)酸鈉結(jié)晶中大量含有鈣、鎂以及鐵。另外，專利文獻(xiàn)3中記載到，通過使基于專利文獻(xiàn)2的方法而得到的透明質(zhì)酸含有液進(jìn)一步與螯合樹脂接觸，從而得到鈣、鎂以及鐵的含有率減少為低于IOppm的透明質(zhì)酸鈉結(jié)晶。
先行技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)
.[0005]專利文獻(xiàn)I日本專利申請?zhí)亻_平9-56394 專利文獻(xiàn)2日本專利公告特公平7-2117
專利文獻(xiàn)3日本專利申請?zhí)亻_2008-280430

【發(fā)明內(nèi)容】

發(fā)明所要解決的問題
[0006]然而，上述文獻(xiàn)記載的現(xiàn)有技術(shù)在以下方面具有改善的余地。
第一:專利文獻(xiàn)I的生產(chǎn)方法中，由于在培養(yǎng)基中大量添加硫酸亞鐵(硫酸鐵(II)，F(xiàn)eS04)，所以認(rèn)為在精制后的含有透明質(zhì)酸的溶液中易于混入鐵。另外，為了從大量含有硫酸亞鐵的培養(yǎng)基中除去鐵,需要比以往更多的成本。
[0007]第二:專利文獻(xiàn)2的生產(chǎn)方法中，在透明質(zhì)酸粉末中大量含有鈣、鎂以及鐵，透明質(zhì)酸鈉的純度低。
[0008]第三:專利文獻(xiàn)3的生產(chǎn)方法中記載到，使透明質(zhì)酸鈉結(jié)晶中的鈣、鎂以及鐵的含有率減少至低于lOppm，但是，具體含有率是多少并不明確。另外，其分析結(jié)果為ppm程度，精密性欠缺。此外，通過減少鈣、鎂以及鐵的含有率來具體得到怎樣的效果也并沒有記載。
[0009]本發(fā)明鑒于上述情況而完成，其目的在于提供含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，在所述透明質(zhì)酸中，2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下，且具有含有碘的還原劑，因此，其穩(wěn)定性高。
解決問題的技術(shù)手段
[0010]本發(fā)明人等對含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液所含的雜質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)在透明質(zhì)酸鹽水溶液中混入的2價溶解性鐵的含有率越高透明質(zhì)酸分子的穩(wěn)定性越降低。另外，本發(fā)明人等還驚奇的發(fā)現(xiàn)即使3價的溶解性鐵的含有率大，透明質(zhì)酸分子的穩(wěn)定性也不會降低，只有2價的溶解性鐵的含有率大的情況下引起透明質(zhì)酸分子的穩(wěn)定性降低的現(xiàn)象。
[0011]因此，本發(fā)明人等在減少含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液中混入的2價的溶解性鐵的含有率的同時，探尋可抑制由2價的溶解性鐵引起的透明質(zhì)酸分子的穩(wěn)定性降低的添加物，結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)通過添加含有碘的還原劑，從而能夠抑制因2價的溶解性鐵引起的透明質(zhì)酸分子的穩(wěn)定性降低的現(xiàn)象。另外，本發(fā)明人等還驚奇的發(fā)現(xiàn)即使是還原性的化合物也當(dāng)添加溴化鈉、亞硫酸氫鈉、硫化鈉、巰基乙酸鈉、葡萄糖以及抗壞血酸時，也無法抑制因2價的溶解性鐵引起的透明質(zhì)酸分子的穩(wěn)定性的降低，反而，因添加而降低穩(wěn)定性的情況更多，從而完成本發(fā)明。
[0012]S卩，根據(jù)本發(fā)明，提供2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下，并具有含有碘的還原劑的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。該含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，保存后的特性粘度(limiting viscosity)殘留率良好,這在后述的實施例中進(jìn)行證實。因此,適于醫(yī)藥品、化妝品、食品等的原材料。
[0013]另外，根據(jù)本發(fā)明，提供包含含有上述透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的醫(yī)藥組合物。該醫(yī)藥組合物包含保存后的特性粘度殘留率良好的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。因此，不易發(fā)生隨著時間流逝而產(chǎn)生的粘度降低或者品質(zhì)降低。
[0014]另外，根據(jù)本發(fā)明，提供包含含有上述透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的關(guān)節(jié)病治療用注射劑。該關(guān)節(jié)病治療用注射劑包含保存后的特性粘度殘留率良好的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。因此，在關(guān)節(jié)內(nèi)或者其周邊投給藥劑的情況下，得到良好的滯留性。
[0015]另外，根據(jù)本發(fā)明，提供一種包含含有上述透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的化妝品組合物。該化妝品組合物包含保存后的特性粘度殘留率良好的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。因此，不易發(fā)生隨著時間流逝而產(chǎn)生的粘度降低或者品質(zhì)降低。
[0016]另外，根據(jù)本發(fā)明，提供一種含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的生產(chǎn)方法，該生產(chǎn)方法包括:將含有透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽以及2價的溶解性鐵的組合物和含有碘的還原劑溶解在水溶液中的工序，以透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的濃度成為10mg/mL的方式溶解于水溶液時，上述組合物的水溶液中的2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下。根據(jù)該生產(chǎn)方法，能夠生產(chǎn)保存后的特性粘度殘留率良好的透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽。
[0017]另外，根據(jù)本發(fā)明，提供一種含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的穩(wěn)定化促進(jìn)方法，所述方法包括:將含有透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽以及2價的溶解性鐵的組合物和含有碘的還原劑溶解在水溶液中的工序，上述組合物以透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的濃度成為IOmg/mL的方式溶解在水溶液時的、水溶液中的2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下。如果2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液中含有上述還原齊U，則保存后的特性粘度殘留率顯著提高，這在后述的實施例中得到證實。因此，根據(jù)該穩(wěn)定化促進(jìn)方法，能夠顯著促進(jìn)含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的穩(wěn)定。
[0018]另外，根據(jù)本發(fā)明，提供一種穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑用于將2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液穩(wěn)定，所述水溶液包含含有碘的還原劑。如果2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液中含有上述還原劑，則保存后的特性粘度殘留率顯著提高，這在后述的實施例中得到證實。因此，在2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液中含有該穩(wěn)定劑時，貝1J能夠顯著穩(wěn)定。
發(fā)明效果
[0019]根據(jù)本發(fā)明，2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下，且包含含有碘的還原劑，所以能夠得到穩(wěn)定性高的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1是表示在含有2價的溶解性鐵以及碘化鈉的水溶液中添加透明質(zhì)酸鈉粉末時的特性粘度殘留率的變化的圖。
【具體實施方式】
[0021]以下，對本發(fā)明的實施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)予說明，為了避免重復(fù)相同內(nèi)容，適當(dāng)省略說明。
[0022]<含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液>
本發(fā)明的一個實施方式涉及的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下，包含含有碘的還原劑。對于由這樣的組成構(gòu)成的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，如后述的實施例.中證實的那樣，保存后的特性粘度殘留率高，物理穩(wěn)定性優(yōu)異。另外，長期保存后或者經(jīng)過長期時間后粘度和品質(zhì)的降低也不易產(chǎn)生，例如，可適于醫(yī)藥品、化妝品、食品等的原材料。
[0023]作為上述含有碘的還原劑，例如，可以為金屬碘化化合物類。作為金屬碘化化合物，例如，可例舉碘化鈉、碘化鉀、碘化鈣、或碘化鎂。
[0024]上述5ppb以下，例如，可以是0.001、0.01、0.1、0.5、1、2、4或者5ppb。并且，該含有率是此處例示的值以下，或者是任意2個值的范圍內(nèi)。對于該含有率而言，從提高含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的穩(wěn)定性的這一觀點出發(fā)，含有率越少越好。
[0025]本實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液所含的上述還原劑的含有率，例如，可以是 5、10、30、50、100、150、300、500、800、1000、1500、2000、5000 或者 IOOOOii g/mL。另外，該含有率也可以是此處例示的任意2個值的范圍內(nèi)。另外，從進(jìn)一步提高含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的穩(wěn)定性的這一觀點出發(fā)，該含有率優(yōu)選為IOy g/mL以上，更優(yōu)選為IOOy g/mL以上。另外，從生產(chǎn)成本降低或者操作性提高的觀點出發(fā)，該含有率優(yōu)選為2000 u g/mL以下，更優(yōu)選為1500 u g/mL以下。
[0026]本實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液所含的透明質(zhì)酸鈉或者透明質(zhì)酸鹽的平均分子量，例如，可以是50萬、80萬、100萬、150萬、180萬、200萬、250萬、300萬、500萬或者800萬。該平均分子量也可以是此處例示的任意2個值的范圍內(nèi)。從進(jìn)一步提高含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的粘性的這一觀點出發(fā)，優(yōu)選為100萬以上，更優(yōu)選為150萬以上。粘性高的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液作為關(guān)節(jié)病治療用的注射劑使用時，在患部的滯留性優(yōu)異。含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液所含的透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽的平均分子量是在測定特性粘度后，可采用Laurent公式(LAURENT et al., BiochimBiophys Acta.1960Aug26;42:476-485.)進(jìn)行計算。
[0027]本實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液所含的透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽的含量，例如，可以是0.1、1、5、8、9、10、11、12、15或者20mg/mL。該含有率也可以是此處例示的任意2個值的范圍內(nèi)。從治療效果或者用于注射劑等時的操作性的觀點出發(fā)，優(yōu)選在5與15mg/mL的值的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在8與12mg/mL的值的范圍內(nèi)。
[0028]本實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的pH，例如，可以是5.5、6、6.5、
6.8、7、7.8、8、8.5或者9。該pH也可以是此處例示的任意2個值的范圍內(nèi)。另外，從穩(wěn)定性的觀點出發(fā)，該PH優(yōu)選在6.5與8的值的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在6.8與7.8的值的范圍內(nèi)。
[0029]本實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液可通過例如含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的生產(chǎn)方法獲得，所述生產(chǎn)方法包括將含有透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽以及2價的溶解性鐵的組合物和，含有碘的還原劑溶解在水溶液中的工序，上述組合物以透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽的濃度成為10mg/mL的方式溶解于水溶液中時的水溶液中的2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下。該生產(chǎn)方法不需要復(fù)雜的工序，在生產(chǎn)性或者成本方面優(yōu)異。
[0030]在本說明書中，所謂的“透明質(zhì)酸鹽”是指，例如，可以為透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鋅、透明質(zhì)酸鈣、透明質(zhì)酸鎂、或者透明質(zhì)酸銨。其中，從所希望的粘性或者期待對關(guān)節(jié)病的治療效果的觀點出發(fā)，優(yōu)選透明質(zhì)酸鈉。透明質(zhì)酸鈉的化學(xué)名例如可用[—3)-2-acetamido-2_deoxy-3-D-glucopyranosyl- (I — 4) -3-D-sodiumglucopyranosy luronate- (I —]n (IUPAC)表不。
[0031]本說明書中，“2 價的溶解性鐵”是處于溶解性狀態(tài)且為2價的鐵。也可用Fe2+或2價鐵表記。
[0032]<醫(yī)藥組合物等>
本實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液可用作醫(yī)藥組合物的原材料。此時，由于上述醫(yī)藥組合物含有穩(wěn)定性優(yōu)異的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，所以也不易發(fā)生長期保存后的粘度和品質(zhì)下降。另外，例如，向關(guān)節(jié)內(nèi)或者其周邊投給藥劑的情況下，能夠在患部滯留很長時間或者所希望的時間。該醫(yī)藥組合物的劑形沒有特別限定，從能夠向關(guān)節(jié)等的患部直接投給藥劑的觀點出發(fā)，優(yōu)選注射劑。作為注射劑的容器，例如，可使用針筒、西林瓶或者安瓶。投給藥劑時，可單獨投給藥劑，但是，優(yōu)選與藥理學(xué)可允許的一個或一個以上的擔(dān)體或者與賦形劑一同混合，得到利用制劑學(xué)的【技術(shù)領(lǐng)域】中熟知的任意方法制造的醫(yī)藥制劑而提供。該醫(yī)藥組合物可以與投給藥劑形態(tài)相匹配地和緩沖劑(例如，磷酸鹽緩沖液、乙酸鈉緩沖液)、舒緩劑(例如，鹽酸利多卡因、鹽酸普魯卡因等)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白、聚乙二醇等)、保存劑(例如，苯甲醇、苯酚等)、抗氧化劑等配合。另外，該醫(yī)藥組合物可以含有作為添加劑的磷酸氫鈉、結(jié)晶磷酸二氫鈉、氯化鈉。制備而成的醫(yī)藥組合物，例如，可以對人或哺乳動物(例如大鼠、小鼠、兔子、狗、猴、羊、豬、牛、貓等)投給藥劑。此外，醫(yī)藥組合物包含以預(yù)防為目的而使用的組合物。
[0033]該醫(yī)藥組合物的投給藥劑方法可以根據(jù)受檢者的年齡、癥狀、患部等適當(dāng)?shù)剡x擇。用于變形性膝關(guān)節(jié)病的治療時，例如，成人可以每周I次，一次2.5mL，連續(xù)5次對膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)投給藥劑。或者，以癥狀的維持為目的時，可以以2?4周間隔投給藥劑。另外，用于肩周炎的治療時，例如，成人可以每周I次，一次2.5mL，連續(xù)5次對肩關(guān)節(jié)(肩關(guān)節(jié)腔，肩峰下滑囊或者上臂肱二頭肌腱長頭肌腱鞘)內(nèi)投給藥劑。另外，用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的膝關(guān)節(jié)痛的治療時，例如，成人可以每周I次，一次2.5mL，連續(xù)5次對膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)投給藥劑。另外，可以與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)療法藥物并用來投給藥劑。
[0034]作為該醫(yī)藥組合物的藥理作用，例如可舉出如下作用，S卩，a)因透明質(zhì)酸鹽與軟骨組織結(jié)合而覆蓋表面引起的粘彈性或潤滑作用，b)因軟骨基質(zhì)的穩(wěn)定而引起的關(guān)節(jié)軟骨保護作用(變性抑制作用、修復(fù)作用等)，c)因覆蓋炎性細(xì)胞以及滑膜細(xì)胞的表面，或因致痛增強物質(zhì)的產(chǎn)生抑制等引起的鎮(zhèn)痛作用，或者d)對與伴隨滑膜以及軟骨變性而引起的關(guān)節(jié)炎具有緊密關(guān)系的滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞或中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞帶來影響而被發(fā)現(xiàn)的炎性的作用。通過這些作用，可期待對例如疼痛的減輕、或者日常生活活動、關(guān)節(jié)可動區(qū)域改善。
[0035]本實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液可用作化妝品組合物的原材料。此時，上述化妝品組合物包含穩(wěn)定性優(yōu)異的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，所以在長期保存后粘度和品質(zhì)也不易下降。另外，用作保濕用的化妝品組合物時，保濕效果易于持續(xù)。
[0036]〈穩(wěn)定化方法等〉
其他實施方式的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的穩(wěn)定化促進(jìn)方法，該方法包括將含有透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽以及2價的溶解性鐵的組合物和，含有碘的還原劑溶解于水溶液的工序，上述組合物以透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的濃度成為10mg/mL的方式溶解于水溶液時的水溶液中的2價溶解性鐵的含有率為5ppb以下。根據(jù)該方法，能夠得到物理穩(wěn)定性高的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。另外，該方法不需復(fù)雜的工序，便利性優(yōu)異。
[0037]另外，上述還原劑可用作含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的穩(wěn)定劑的原材料。如果使用該穩(wěn)定劑，則可提高2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的物理穩(wěn)定性。該穩(wěn)定劑可以為粉末狀或液態(tài)。另外，液態(tài)時還可以含有緩沖劑。
[0038]以上，對本發(fā)明的實施方式進(jìn)行敘述，這些是本發(fā)明的例示，也可以采用上述以外的各種構(gòu)成。另外，也可以組合上述實施方式所記載的構(gòu)成而采用。
實施例
[0039]以下，通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于這些。
[0040]<實施例1 >
按以下的順序調(diào)整透明質(zhì)酸鈉水溶液。首先，對I升由葡萄糖5%、磷酸二氫鉀(potassium primary phosphate) 0.2 %、多聚蛋白腺(Polypeptone) 1.0*%、酵母提取物0.5%構(gòu)成的培養(yǎng)基進(jìn)行加熱殺菌后，對馬鏈球菌(Sti ptococcus equi)FM-100 (微工研條寄第9027號)進(jìn)行接種。邊以Ivvm通入空氣，邊以200轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，在溫度33°C、pH8.5(自動滴加20%氫氧化鈉的方式進(jìn)行控制)下培養(yǎng)20小時。將該溶液用細(xì)菌過濾裝置過濾后，對水透析12小時來回收透析膜內(nèi)的透明質(zhì)酸溶液。為了防止鐵的混入，回收容器使用內(nèi)表面為玻璃制的容器。向其中添加氯化鈉以成為2.5%，加入透明質(zhì)酸溶液的2倍量的乙醇使透明質(zhì)酸鈉沉淀。用乙醇清洗沉淀5次，充分沖洗雜質(zhì)后在40°C下風(fēng)干10小時，得到透明質(zhì)酸鈉的粉末。
[0041]接下來，將得到的透明質(zhì)酸鈉粉末溶解于包含2mM磷酸緩沖液和0.9%氯化鈉的水溶液，得到分別包含5、8、10、12、15mg/mL的透明質(zhì)酸鈉的透明質(zhì)酸鈉水溶液。進(jìn)而，測定特性粘度，用Laurent公式求得透明質(zhì)酸鈉的分子量，結(jié)果為253萬。
[0042]<比較例I >
按實施例1記載的順序培養(yǎng)馬鏈球菌(Streptococcus equi) FM-100,以與專利文獻(xiàn)3(特開2008-280430)的實施例1中記載的順序相同的順序精制透明質(zhì)酸鈉水溶液。具體而言，首先，對I升由葡萄糖5%、磷酸二氫鉀0.2%、多聚蛋白胨1.0%、酵母提取物0.5%構(gòu)成的培養(yǎng)基進(jìn)行加熱殺菌后，對馬鏈球菌(Streptococcus equi) FM-100進(jìn)行接種。邊以Ivvm通入空氣，邊以200轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，在溫度33°C、pH8.5 (20%氫氧化鈉的自動滴加的控制)下培養(yǎng)20小時。將培養(yǎng)液用離子交換水稀釋10倍，向該2.5L水溶液添加5g活性炭(武田藥品公司制的白鷺RW50-T)、30g珍珠巖(三井金屬礦業(yè)株式會社的R0KAHELP#409)處理I小時，用布氏漏斗進(jìn)行過濾。反復(fù)進(jìn)行2次該操作除去培養(yǎng)基中的有機成分，調(diào)整透明質(zhì)酸鈉含有液。接下來，向內(nèi)徑15mm、高度300mm的色譜柱填充68ml三菱化學(xué)公司制Diaion CR11，使樹脂再生。以SV = 18 (1200ml/hr)向該色譜柱通入上述透明質(zhì)酸鈉含有液2.5L。將2g的食鹽溶解于色譜柱通過液IL中，調(diào)整至pH7后，以2-丙醇進(jìn)行析出，在40 V下真空干燥，得到透明質(zhì)酸鈉的粉末。
[0043]接下來，將得到的透明質(zhì)酸鈉粉末溶解于包含2mM磷酸緩沖液和0.9%氯化鈉的水溶液，得到分別包含5、8、10、12、15mg/mL的透明質(zhì)酸鈉的透明質(zhì)酸鈉水溶液。進(jìn)而，測定特性粘度，用Laurent公式求得透明質(zhì)酸鈉的分子量，結(jié)果為240萬。
[0044]<評價例I >
(I)溶解性鐵的分析
將實施例1和比較例I中制備的透明質(zhì)酸鈉的粉末溶解于包含2mM磷酸緩沖液以及
0.9%氯化鈉的水溶液，分別制備含有5、8、10、12或者15mg/mL透明質(zhì)酸鈉的透明質(zhì)酸鈉水溶液(N0.1?10)。接下來，對各水溶液以下述(1-1)?(1-3)的順序測定鐵量2價的溶解性鐵量、2價以及3價的溶解性鐵量以及總鐵量?？傝F量包含溶解性以及不溶解性的鐵量。鐵量2價的溶解性鐵量、2價以及3價的溶解性鐵量以及總鐵量的檢測極限為5ppb。
[0045](1-1)2價的溶解性鐵的分析方法
a)將透明質(zhì)酸鈉水溶液2.75g取出到樣品瓶中。
b)添加硫氰酸鉀溶液0.1mLU, 10-鄰菲咯啉溶液0.05mL并混合。
c)稀釋至約IOmL后，放置約10分鐘。
d)加入氯仿5mL后，密閉。晃動5分鐘，提取。
e)靜置后，取出4mL氯仿相,移至其它樣品瓶。
f)在熱板上蒸發(fā)干燥固化 后，加入濃硝酸0.5mL進(jìn)行分解。
g)加入稀硝酸(I+ 100) 2mL，溶解殘余成分。
h)用ICP發(fā)光分析對Fe進(jìn)行定量。
[0046](1-2)2價以及3價的溶解性鐵的分析方法
a)將透明質(zhì)酸鈉水溶液2.75g取出到樣品瓶中。
b)添加鹽酸羥胺溶液0.2mL。c)添加1，10-鄰菲咯啉溶液0.2mL、硫氰酸鉀溶液0.5mL。
d)稀釋至約IOmL后，放置約10分鐘。
e)加入4-甲基-2-戊酮5mL后，密閉。晃動I分鐘，提取。
f)靜置后，取出4mL的4-甲基-2-戊酮相，移至其它的樣品瓶。
g)在熱板上蒸發(fā)干燥固化后，加入濃硝酸0.5mL進(jìn)行分解。
h)加入稀硝酸(I+ 100) 2mL，溶解殘余成分。
i)用ICP發(fā)光分析對Fe進(jìn)行定量。
[0047]( 1-3)全鐵的分析方法
a)將透明質(zhì)酸鈉水溶液2.75g取出到樣品瓶中。
b)加入HCl(I + 1)0.1mL用熱板加熱。
c)進(jìn)行上述(1-2)2價以及3價的溶解性鐵的分析方法中的b)以下的操作。
[0048]( 1-4)鐵量的分析結(jié)果
將上述(1_1)?(1_3)的分析結(jié)果不于表I。
[0049][表 I]
【權(quán)利要求】
1.一種含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，其中，2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下，且包含含有碘的還原劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，其中，所述透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽的濃度為5?15mg/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，其中，所述含有碘的還原劑為金屬碘化化合物類。
4.根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，其中，所述還原劑的含量為10?IOOOOii g/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1?4中任一項所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，其中，所述透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽的平均分子量為100萬以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1?5中任一項所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，其中，所述透明質(zhì)酸鹽為透明質(zhì)酸鈉。
7.一種醫(yī)藥組合物，其包含權(quán)利要求1?6中任一項所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。
8.一種關(guān)節(jié)病治療用注射劑，其包含權(quán)利要求1?6中任一項所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。
9.一種化妝品組合物，其包含權(quán)利要求1?6中任一項所述的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液。
10.一種含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的生產(chǎn)方法，其包括:將含有透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽以及2價的溶解性鐵的組合物和，含有碘的還原劑溶解在水溶液中的工序，所述組合物以使透明質(zhì) 酸或者透明質(zhì)酸鹽的濃度成為10mg/mL的方式溶解于水溶液時的、水溶液中的2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下。
11.一種含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液的穩(wěn)定化促進(jìn)方法，其包括:將含有透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽以及2價的溶解性鐵的組合物和，含有碘的還原劑溶解于水溶液中的工序，所述組合物以使透明質(zhì)酸或者透明質(zhì)酸鹽的濃度成為lOmg/mL的方式溶解于水溶液時的、水溶液中的2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下。
12.一種穩(wěn)定劑，其用于穩(wěn)定2價的溶解性鐵的含有率為5ppb以下的含透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽的水溶液，其中，所述穩(wěn)定劑包含含有碘的還原劑。
【文檔編號】A61K31/728GK103442719SQ201280011060
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2012年3月2日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月2日
【發(fā)明者】能見健司, 島田賢太郎, 守川忠志 申請人:電氣化學(xué)工業(yè)株式會社