包含流感嗜血桿菌蛋白e和菌毛蛋白a的融合蛋白和組合疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含流感嗜血桿菌蛋白E和菌毛蛋白A的組合物。更具體地，本申請(qǐng)涉及包含蛋白E和PilA的融合蛋白和免疫原性組合物、包含所述免疫原性組合物的疫苗和其治療用途。
【專利說(shuō)明】包含流感嗜血桿菌蛋白E和菌毛蛋白A的融合蛋白和組合
疫苗
[0001]本申請(qǐng)主張2011年4月13日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?1/474779和2011年9月13日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?1/534012的優(yōu)先權(quán)。
發(fā)明領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及包含流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae, H.1nfluenzae)蛋白E和菌毛蛋白A的組合物。更具體地，本申請(qǐng)涉及包含蛋白E和菌毛蛋白A的融合蛋白和免疫原性組合物、包含所述免疫原性組合物的疫苗和其治療用途。
[0003]發(fā)明背景
蛋白E(PE)是具有粘附特性的外膜脂蛋白。其在無(wú)法分型的流感嗜血桿菌(NTHi)粘附至/侵襲上皮細(xì)胞中發(fā)揮作用。(J.1mmunology 183: 2593-2601 (2009) ; The Journalof Infectious Diseases 199:522-531 (2009), Microbes and Infection 10:87-96
(2008))。其在有莢膜的流感嗜血桿菌和無(wú)法分型的流感嗜血桿菌二者中高度保守，且具有保守的上皮結(jié)合結(jié)構(gòu)域。(The Journal of Infectious Diseases 201:414-419 (2010))。當(dāng)與作為參考菌株的流感嗜血桿菌Rd比較時(shí)，已在不同嗜血桿菌物種中描述了 13種不同點(diǎn)突變。在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和靜止期細(xì)菌中都觀察到其表達(dá)。(W02007/084053)。
[0004]蛋白E也經(jīng)由結(jié)合玻連蛋白而參與人補(bǔ)體抗性。(Immunology 183: 2593-2601 (2009))。PE通過(guò)結(jié)合結(jié)構(gòu)域 PKRYARSVRQ YKILNCANYH LTQVR (SEQ ID N0.1，對(duì)應(yīng)于 SEQID N0.4的氨基酸84-108)結(jié)合玻連蛋白，所述玻連蛋白是末端補(bǔ)體途徑的重要抑制劑。(J.1mmunology 183:2593-2601 (2009))。
[0005]菌毛蛋白A(PilA)可能是參與蹭行運(yùn)動(dòng)(twitching motility)的IV型流感嗜血桿菌菌毛(Tfp)的主要菌毛蛋白亞單位(Infection and Immunity, 73: 1635-1643(2005))。NTHi PilA是在體內(nèi)表達(dá)的保守粘附素。已顯示其參與NTHi粘附、定殖和生物膜形成。(MolecularMicrobiology 65: 1288-1299 (2007))。
[0006]無(wú)法分型的流感嗜血桿菌是引起嬰兒和兒童中耳炎的重要且常見(jiàn)的呼吸病原體。NTHi僅次于肺炎鏈球菌{Streptococcus,是兒童急性中耳炎的最常見(jiàn)原因(J.1mmunology 183: 2593-2601 (2009)， Pediatrics 113:1451-1465 (2004))。其是兒童和成人鼻竇炎的重要原因。(Current Infectious Disease Reports 11:177-182(2009))。其與成人慢性阻塞性肺病(COPD)的惡化風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。(Journal of ChronicObstructive Pulmonary Disease 3:109-115 (2006))。此外，無(wú)法分型的流感嗜血桿菌引起成人社區(qū)獲得性肺炎，且可在發(fā)展中國(guó)家中引起兒童肺炎。(Current InfectiousDisease Reports 11:177-182 (2009))。
[0007]當(dāng)前需要NTHi疫苗。
[0008]發(fā)明概述
作為第一方面，本發(fā)明提供式(I)的融合蛋白
(X》m — (R1)1, — A — (Y) ο — 8 — (Z),) (1}其中:
X 是信號(hào)肽或 MHHHHHH (SEQ ID N0.2)； m是O或I ;
R1是一個(gè)氨基酸； η 是 0、1、2、3、4、5 或 6 ；
A是來(lái)自流感嗜血桿菌的蛋白E或其免疫原性片段、或來(lái)自流感嗜血桿菌的PilA或其免疫原性片段；
Y 選自 GG、SG、SS、GGG 和(G)h，其中 h 是 4、5、6、7、8、9、或 10 ； ο是O或I ;
B是來(lái)自流感嗜血桿菌的PilA或其免疫原性片段、或來(lái)自流感嗜血桿菌的蛋白E或其免疫原性片段；
Z 是 GGHHHHHH (SEQ ID N0.3);且 P是O或I。
[0009]作為第二方面，本發(fā)明提供包含式(I)的融合蛋白的免疫原性組合物。該組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的佐劑。該組合物可包含賦形劑。
[0010]在第三方面，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防完全或部分由流感嗜血桿菌引起的狀況或疾病的方法。該方法包括將治療有效量的式(I)的融合蛋白施用于需要其的受試者。
[0011]在第四方面，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防中耳炎的方法。該方法包括將治療有效量的式(I)的融合蛋白施用于需要其的受試者。
[0012]在第五方面，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防慢性阻塞性肺病惡化的方法。該方法包括將治療有效量的式(I)的融合蛋白施用于需要其的受試者。
[0013]在第六方面，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防肺炎的方法。該方法包括將治療有效量的式(I)的融合蛋白施用于需要其的受試者。
[0014]在第七方面，本發(fā)明提供包含式(I)的融合蛋白的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防完全或部分由流感嗜血桿菌引起的狀況或疾病。藥物組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的佐劑。
[0015]在第八方面，本發(fā)明提供編碼本發(fā)明蛋白的核酸。
[0016]在第九方面，本發(fā)明提供產(chǎn)生本發(fā)明核酸的方法。
[0017]本發(fā)明的其他方面在下文的特定實(shí)施方案、實(shí)施例和權(quán)利要求的詳細(xì)說(shuō)明中予以描述。
[0018]附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明
圖1.融合蛋白構(gòu)建體LVL291、LVL268和LVL269的誘導(dǎo)的細(xì)菌提取物的SDS-PAGE。對(duì)于LVL291、LVL268和LVL269，在誘導(dǎo)(ind)之前和之后上樣不可溶級(jí)分(I)、可溶級(jí)分(S)和培養(yǎng)基級(jí)分(M)。
[0019]圖2.融合蛋白構(gòu)建體LVL291、LVL268和LVL269的純化提取物相關(guān)的SDS-PAGE和Western印跡。對(duì)于LVL291、LVL268和LVL269的純化，上樣流通物級(jí)分(Ft)、洗滌級(jí)分(W)和洗脫級(jí)分(E)。使用抗his標(biāo)簽來(lái)探測(cè)提取物。
[0020]圖3.融合蛋白構(gòu)建體LVL291和LVL315的誘導(dǎo)的細(xì)菌和純化提取物的SDS-PAGE。對(duì)于LVL291和LVL315，上樣培養(yǎng)基級(jí)分(M)、可溶級(jí)分(Sol)、不可溶級(jí)分(Ins)、流通物級(jí)分(Ft)、洗滌級(jí)分#1 (Wl)、洗滌級(jí)分#2 (W2)和洗脫級(jí)分(E)。
[0021]圖4.融合蛋白構(gòu)建體LVL312的誘導(dǎo)的細(xì)菌和純化提取物的SDS-PAGE。對(duì)于LVL312，上樣培養(yǎng)基級(jí)分(M)、可溶級(jí)分(Sol)、不可溶級(jí)分(Ins)、流通物級(jí)分(Ft)、洗滌級(jí)分#1 (Wl)、洗滌級(jí)分#2 (W2)和洗脫級(jí)分(E)。
[0022]圖5.融合蛋白構(gòu)建體LVL317的誘導(dǎo)(I mM和10 μ M IPTG)細(xì)菌提取物的SDS-PAGE。誘導(dǎo)之前(NI)和誘導(dǎo)之后(In)的提取物、可溶級(jí)分(S)、不可溶級(jí)分(I)。
[0023]圖6.融合蛋白構(gòu)建體LVL318的誘導(dǎo)(I mM和10 μ M IPTG)細(xì)菌提取物的SDS-PAGE。誘導(dǎo)之前(NI)和誘導(dǎo)之后(In)的提取物、培養(yǎng)基級(jí)分(M)、可溶級(jí)分(S)、不可溶級(jí)分(I)。
[0024]圖7.PE、PilA 和 PE-PilA 融合蛋白的 CD 譜。
[0025]圖8.PE與PilA CD譜的組合。
[0026]圖9.PilA熱變性曲線。
[0027]圖10.PE變性曲線。
[0028]圖11.PE-PilA融合蛋白熱變性曲線。
[0029]圖12.典型SP Sepharose?快速流動(dòng)層析圖。
[0030]圖13.典型Q Sepharose?快速流動(dòng)層析圖。
[0031]圖14.來(lái)自PE-PilA融合蛋白的純化過(guò)程的過(guò)程中樣品的SDS-PAGE。
[0032]圖15.來(lái)自PE-PilA融合蛋白的純化過(guò)程的過(guò)程中樣品的Western印跡。使用兔多克隆抗PE實(shí)施印跡。
[0033]圖16.來(lái)自PE-PilA融合蛋白的純化過(guò)程的過(guò)程中樣品的Western印跡。使用兔多克隆抗大腸桿菌(BLR)實(shí)施印跡。
[0034]圖17.PE-PilA融合蛋白和PE和PilA蛋白的熱轉(zhuǎn)化。曲線=PilA (1)，蛋白E(ProtE，PE) (2)，PE-PilA純化的容積物未稀釋，737μδ/πι1 (3)，和PE-PilA純化的容積物，稀釋至最終容器濃度60Pg/ml (4) ο
[0035]圖18.Balb/c小鼠模型中針對(duì)LVL291 PE-PilA融合蛋白和針對(duì)單價(jià)PE和PilA的抗體應(yīng)答。
[0036]圖19.PE-PilA融合蛋白接種對(duì)小鼠鼻咽中NTHi菌株86-028NP細(xì)菌清除的影響。
[0037]圖20.PE-PilA融合蛋白接種對(duì)小鼠鼻咽中NTHi菌株3224A細(xì)菌清除的影響。
[0038]圖21.PilA接種對(duì)小鼠鼻咽中細(xì)菌清除的影響。
[0039]圖22.PE接種對(duì)小鼠鼻咽中細(xì)菌清除的影響。
[0040]圖23.(a)結(jié)合至玻連蛋白的LVL317 PE-PilA融合蛋白；和(b)結(jié)合至玻連蛋白的 LVL317 和 LVL735 PE-PilA 融合蛋白。
[0041]圖24.針對(duì)PE-PilA融合蛋白的多克隆抗體對(duì)玻連蛋白結(jié)合的抑制。
[0042]圖 25.融合蛋白構(gòu)建體LVL291、LVL702、LVL736、LVL737、LVL738、LVL739、LVL740和pET26b載體(陰性對(duì)照)的誘導(dǎo)的細(xì)菌提取物的可溶級(jí)分的SDS-PAGE。(a)實(shí)驗(yàn)I (b)實(shí)驗(yàn)2 (c)實(shí)驗(yàn)3。PE-PilA融合蛋白由箭頭指示。
[0043]圖26.來(lái)自實(shí)驗(yàn)1、2和3的可溶級(jí)分中融合蛋白的平均條帶百分比。
[0044]圖27.針對(duì)LVL317和LVL735的PE和PilA抗體應(yīng)答。
[0045]圖28.LVL735和LVL317接種對(duì)無(wú)法分型的流感嗜血桿菌鼻咽定殖的小鼠模型中的細(xì)菌清除的影響。
[0046]發(fā)明詳述
除非另有解釋或本文定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有本公開(kāi)所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。例如，分子生物學(xué)的常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)的定義可參見(jiàn)BenjaminLewin, Genes V, Oxford University Press 出版，1994 (ISBN 0-19-854287-9);Kendrew等人(編)，The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd出版，1994 (ISBN 0-632-02182-9);以及 Robert A.Meyers (編)，Molecular Biologyand Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc.出版，1995 (ISBN 1-56081-569-8)。
[0047]單數(shù)詞語(yǔ)“一(a)”、“一(an)”和“該(the) ”包括復(fù)數(shù)的對(duì)象，除非上下文明確另有說(shuō)明。類似地，單詞“或”意味著包括“和”，除非上下文明確另有說(shuō)明。還要進(jìn)一步理解的是，對(duì)于核酸或多肽給出的所有堿基大小或氨基酸大小和所有分子量或分子質(zhì)量值是近似的，且提供用于說(shuō)明。另外，給出的有關(guān)物質(zhì)(諸如抗原)的濃度或水平的數(shù)值限制可以是近似的。因此，如果指明濃度為(例如)近似200 pg，則是指此濃度包括稍大于或稍小于(“約”或“~”)200 pg的值。
[0048]雖然類似于或等同于本文所述方法和材料的方法和材料可用于實(shí)施或檢驗(yàn)本公開(kāi)，但下面描述了合適的方法和材料。
[0049]術(shù)語(yǔ)“包含(comprises)”是指“包括(includes)”。因此，除非上下文另有要求，否則詞語(yǔ)“包含(comprises) ”和各種變化諸如“包含(comprise) ”和“包含(comprising) ”應(yīng)理解為表示含有規(guī)定的化合物或組合物(例如核酸、多肽、抗原)或步驟，或一組化合物或一組步驟，但非排除任何其他 的化合物、組合物、步驟或其組?？s寫(xiě)詞“a & ”源于拉丁文exempli gratia，本文用來(lái)表示非限制性實(shí)例。因此，縮寫(xiě)詞“a貧.”是術(shù)語(yǔ)“例如”的同義
ο
[0050]為了協(xié)助對(duì)本公開(kāi)各種實(shí)施方案的概述，提供以下術(shù)語(yǔ)解釋。在本公開(kāi)的上下文中提供其他術(shù)語(yǔ)和解釋。
[0051]如本文使用，“受試者”是哺乳動(dòng)物，包括人、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物和非靈長(zhǎng)類哺乳動(dòng)物，諸如嚙齒類動(dòng)物成員(包括但不限于小鼠和大鼠)和兔形目(Lagomorpha)成員(包括但不限于兔)。
[0052]如本文使用，“蛋白E (Protein E) ”、“蛋白 E (protein E)”、“Prot E” 和 “PE” 意
指來(lái)自流感嗜血桿菌的蛋白E。蛋白E可由以下氨基酸序列組成或包含以下氨基酸序列:
YGERFSVDKK)以及在整個(gè)長(zhǎng)度上與SEQ ID N0.4至少或確切地75%、77%、80%、85%、
90%、95%、97%、99%或100%相同的序列。來(lái)自流感嗜血桿菌的53個(gè)蛋白E序列(表1，SEQID N0.5-SEQ ID N0.57)的比較顯示與如SEQ ID N0.4中所述的蛋白E具有約77%至約100%同一性。例如，在蛋白E的氨基酸序列中，氨基酸#20可以是異亮氨酸(I)或蘇氨酸⑴；氨基酸#23可以是丙氨酸(A)或纈氨酸(V);氨基酸#24可以是賴氨酸⑷或谷氨酸(E);氨基酸#31可以是丙氨酸(A)或蘇氨酸⑴；氨基酸#32可以是脯氨酸⑵或丙氨酸(A);氨基酸#34可以是蘇氨酸⑴或丙氨酸(A);氨基酸#37可以是精氨酸(R)或谷氨酰胺(Q);氨基酸#47可以是纈氨酸(V)或丙氨酸㈧；氨基酸#57可以是色氨酸(W)或可不存在㈠；氨基酸#70可以是丙氨酸(A)或蘇氨酸⑴；氨基酸#93可以是谷氨酰胺(Q)或不存在(_);氨基酸#109可以是蘇氨酸(T)或異亮氨酸(I);氨基酸#119可以是甘氨酸(G)或絲氨酸(S);氨基酸#153可以是谷氨酸(E)或賴氨酸(K);氨基酸#156可以是絲氨酸⑶或亮氨酸(L);氨基酸#160可以是賴氨酸⑷或天冬酰胺(N);氨基酸#161可以是賴氨酸(K)、異亮氨酸(I)或不存在(_);氨基酸#162 - #195可不存在，或如SEQ ID N0.15中所述(其中(_)指示氨基酸#166不存在)或如SEQ ID N0.16中所述；或其任何組合。
[0053]蛋白E可由選自下列的任一或多個(gè)氨基酸處與SEQ ID N0.4不同的氨基酸序列組成或包含該氨基酸序列:氨基酸#20、氨基酸#23、氨基酸#24、氨基酸#31、氨基酸#32、氨基酸#34、氨基酸#37、氨基酸#47、氨基酸#57、氨基酸#70、氨基酸#93、氨基酸#109、氨基酸#119、氨基酸#153、氨基酸#156、氨基酸#160、氨基酸#161和氨基酸#162_#195，其中氨基酸#20是蘇氨酸⑴；氨基酸#23是纈氨酸(V);氨基酸#24是賴氨酸⑷；氨基酸#31是蘇氨酸⑴；氨基酸#32是丙氨酸(A);氨基酸#34是丙氨酸(A);氨基酸#37是谷氨酰胺(Q)；氨基酸#47是丙氨酸(A);氨基酸#57不存在(-);氨基酸#70是蘇氨酸(T);氨基酸#93不存在(_);氨基酸#109是異亮氨酸(I);氨基酸#119是絲氨酸(S);氨基酸#153是賴氨酸(K);氨基酸#156是亮氨酸(L);氨基酸#160是天冬酰胺(N);氨基酸#161是賴氨酸(K)或異亮氨酸⑴；或氨基酸#162 - #195是如SEQ ID N0.15中所述(其中㈠指示氨基酸#166不存在)或如SEQ ID N0.16中所述。
[0054]表1:來(lái)自53株流感嗜血桿菌的蛋白E氨基酸序列(SEQ ID N0.5 - SEQ ID N0.57)。-指示氨基酸不存在。
【權(quán)利要求】
1.式I的融合蛋白:(X) m — — A - {Y) r B - (Z)1, {式 I) 其中: X 是信號(hào)肽或 MHHHHHH (SEQ ID N0.2)； m是O或I ; R1是一個(gè)氨基酸； η 是 0、1、2、3、4、5 或 6 ； A是來(lái)自流感嗜血桿菌的蛋白E或其免疫原性片段、或來(lái)自流感嗜血桿菌的PilA或其免疫原性片段； Y 選自 GG、SG、SS、GGG 和(G)h，其中 h 是 4、5、6、7、8、9、或 10 ； ο是O或I ; B是來(lái)自流感嗜血桿菌的PilA或其免疫原性片段、或來(lái)自流感嗜血桿菌的蛋白E或其免疫原性片段；
Z 是 GGHHHHHH (SEQ ID N0.3);且
P是O或I。
2.權(quán)利要求1的融合蛋白，其中X選自Flg1、NadA和pelB。
3.權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)的融合蛋白，其中m是O。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的融合蛋白，其中η是O。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的融合蛋白，其中A是蛋白E的免疫原性片段，其中蛋白E選自 SEQ ID N0.4 - SEQ ID N0.57 中任一個(gè)。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的融合蛋白，其中A是如SEQID NO: 124中所述的來(lái)自流感嗜血桿菌的蛋白E的免疫原性片段。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的融合蛋白，其中Y是GG。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的融合蛋白，其中B是PilA的免疫原性片段，其中PilA選自SEQ ID N0.58 - SEQ ID N0.121 中的任一個(gè)。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的融合蛋白，其中B是如SEQID N0.127中所述的來(lái)自流感嗜血桿菌的PilA的免疫原性片段。
10.融合蛋白，其選自SEQ !D N0.136, SEQ !D N0.138, SEQ ID NO, 140, SEQ ID NO, 142, SEQ ID NO' 144, SEQ !D N0.146, SEQ IO NO- 148, SEQ ID N0.150? SEQ ID Ν0.182.SEQ ID NO, 184.SEQ ID N0.186, SEQ ID NO, 188, SEQ ID N0.190, SEQ ID N0..192, SEQ 丨D NO-194, SEQ ID N0.196.SEQ ID NO—198, SEQ ID Ν0..200, SEQ ID NO—?2 顧 SEQ ID Ν0.204。
11.融合蛋白，其與以下中任一個(gè)約95%相同:SEQID N0.136, SEQID N0.138.SEQ ID NO— 140, SEQ ID NO 142.SEQ !D N0.144, SEQ ID N0.146- SEQ ID N0.148, SEQ ID N0.150, SEQ ID NO 182, SEQ ID NO- 184, SEQ ID N0.186, SEQ ID N0.186, SEQID N0.188, SEQ ID NCX 190.SEQ ID N0.192, SEQ ID N0.194, SEQ ID NO, 196, SEQ IO
12.權(quán)利要求10或權(quán)利要求11的融合蛋白，其中信號(hào)肽已經(jīng)移除。
13.SEQ ID N0.148的融合蛋白，其中信號(hào)肽已經(jīng)移除，所述融合蛋白具有
14.SEQ ID N0.194的融合蛋白，其中信號(hào)肽已經(jīng)移除，所述融合蛋白具有
15.免疫原性組合物，其包含來(lái)自流感嗜金桿菌的蛋白E和來(lái)自流感嗜血桿菌的PilA。
16.權(quán)利要求15的免疫原性組合物，其中蛋白E是SEQID N0.4的多肽、包含在整個(gè)長(zhǎng)度上與 SEQ ID N0.4 具有至少 75%、77%、80%、85%、90%、95%、97%、99% 或 100% 同一性的序列的多肽，或者是包含SEQ ID N0.4的至少7個(gè)、10個(gè)、15個(gè)、20個(gè)、25個(gè)、30個(gè)或50個(gè)鄰接氨基酸的免疫原性片段的多肽。
17.權(quán)利要求16的免疫原性組合物，其中所述免疫原性片段包含SEQID NO:4的B和/或T細(xì)胞表位。
18.權(quán)利要求15-17中任一項(xiàng)的免疫原性組合物，其中蛋白E能夠引發(fā)識(shí)別SEQID N0.4的免疫應(yīng)答。
19.權(quán)利要求15-18中任一項(xiàng)的免疫原性組合物，其中PilA是SEQID N0.58的多肽、包含在整個(gè)長(zhǎng)度上與SEQ ID N0.58具有至少80%、85%、90%、95%、97%或100%同一性的序列的多肽，或者是包含SEQ ID N0.58的至少7個(gè)、10個(gè)、15個(gè)、20個(gè)、25個(gè)、30個(gè)或50個(gè)鄰接氨基酸的免疫原性片段的多肽。
20.權(quán)利要求19的免疫原性組合物，其中所述免疫原性片段包含SEQID N0:58的B和/或T細(xì)胞表位。
21.權(quán)利要求15-20中任一項(xiàng)的免疫原性組合物，其中PilA能夠引發(fā)識(shí)別SEQID N0.58的免疫應(yīng)答。
22.權(quán)利要求15-21中任一項(xiàng)的免疫原性組合物，其中包含所述來(lái)自流感嗜血桿菌的蛋白E和所述來(lái)自流感嗜血桿菌的PilA作為權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的融合蛋白。
23.免疫原性組合物，其包含SEQID N0.177的融合蛋白(QIQI^VKLA F, P T DY RSGYIRI ,VKK VNYY IDS E SI Wv1-NOK PQIV H FT..:A VYNLDK1J LVVY ^EPKK YAr;SVKvYKI LNCANYHLTQ VHTL'FYDEFW GQGLRAAFKKQKKH1:..,.3 LT P F1.11>'KAA01 ICANYGEAFS VDKKGGTKKA AVS Ξ:L LQAHA?YKA:JVELCV YoTNETTNCT GGKKGIAADl TTAKGYVKSV TTSNGAITVK
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24.免疫原性組合物，其包含SEQID N0.219的融合蛋白-
25.疫苗，其包含權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的融合蛋白或權(quán)利要求15-24中任一項(xiàng)的免疫原性組合物。
26.用于治療或預(yù)防需要其的受試者的中耳炎的方法，其包括將治療有效量的權(quán)利要求15-24中任一項(xiàng)的免疫原性組合物或權(quán)利要求25的疫苗施用于所述受試者。
27.用于治療或預(yù)防需要 其的受試者的中耳炎的方法，其包括將治療有效量的權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的免疫原性組合物施用于所述受試者。
28.用于治療或預(yù)防需要其的受試者的慢性阻塞性肺病的急性惡化(AECOPD)的方法，其包括將治療有效量的權(quán)利要求15-24中任一項(xiàng)的免疫原性組合物或權(quán)利要求25的疫苗施用于所述受試者。
29.用于治療或預(yù)防需要其的受試者的慢性阻塞性肺病的急性惡化(AECOPD)的方法，其包括將治療有效量的權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的免疫原性組合物施用于所述受試者。
30.用于治療或預(yù)防需要其的受試者的肺炎的方法，其包括將治療有效量的權(quán)利要求15-24中任一項(xiàng)的免疫原性組合物或權(quán)利要求25的疫苗施用于所述受試者。
31.用于治療或預(yù)防需要其的受試者的肺炎的方法，其包括將治療有效量的權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的免疫原性組合物施用于所述受試者。
32.用于治療或預(yù)防需要其的受試者的流感嗜血桿菌感染或疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的權(quán)利要求15-24中任一項(xiàng)的免疫原性組合物或權(quán)利要求25的疫苗施用于所述受試者。
33.用于治療需要其的受試者的流感嗜血桿菌感染或疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的免疫原性組合物施用于所述受試者。
34.權(quán)利要求32或權(quán)利要求33的方法，其中所述流感嗜血桿菌感染或疾病是NTHi感染或疾病。
35.權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的融合蛋白、或權(quán)利要求15-24中任一項(xiàng)的免疫原性組合物、或權(quán)利要求25的疫苗，其用于治療或預(yù)防中耳炎。
36.權(quán)利要求1_25、35的融合蛋白、免疫原性組合物、或疫苗，其用于治療或預(yù)防慢性阻塞性肺病的急性惡化(AECOPD)。
37.權(quán)利要求1-25、35-36的融合蛋白、免疫原性組合物、或疫苗，其用于治療或預(yù)防肺炎。
38.權(quán)利要求1-25、35-37的融合蛋白、免疫原性組合物、或疫苗，其用于治療或預(yù)防流感嗜血桿菌感染或疾病。
39.權(quán)利要求38的融合蛋白、免疫原性組合物、或疫苗，其用于治療或預(yù)防NTHi感染或疾病。
40.用于產(chǎn)生融合蛋白的周質(zhì)表達(dá)的方法，其中所述方法包括誘導(dǎo)含有信號(hào)肽的蛋白的表達(dá)。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述信號(hào)肽來(lái)自FlgI。
42.權(quán)利要求40的方法，其中所述信號(hào)肽來(lái)自pelB。
43.權(quán)利要求40-42中任一項(xiàng)的方法，其中所述融合蛋白是式(I)的融合蛋白或權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的融合蛋白。
44.制備疫苗的方法 ，其包括權(quán)利要求40-43中任一項(xiàng)的方法。
【文檔編號(hào)】A61K39/385GK103476799SQ201280018032
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2012年4月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月13日
【發(fā)明者】N.布萊斯, S.拉貝, J.普爾曼 申請(qǐng)人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司