抗α4β7抗體的制劑的制作方法【專利摘要】本發(fā)明描述包含抗α4β7抗體、抗氧化劑或螯合劑和至少一種游離氨基酸的混合物的抗體制劑。公開的制劑可具有提高的穩(wěn)定性、減少的聚集體形成或其兩者。本發(fā)明進一步提供這些抗體制劑的一種易于遵循且在體內(nèi)產(chǎn)生治療有效量的所述抗α4β7抗體的安全給藥方案?！緦＠f明】抗Ct4β7抗體的制劑[0001]相關(guān)申請[0002]本申請要求2011年10月6日提交的美國臨時申請61/544，054和2011年5月2日提交的美國臨時申請61/481，522的優(yōu)先權(quán)。前述申請的全部內(nèi)容以引用的方式并入本文。[0003]序列表[0004]本申請含有已通過EFS網(wǎng)以ASCII格式提交且據(jù)此以全文引用的方式并入本文的序列表。2012年4月30日創(chuàng)建的所述ASCII拷貝名為92596603.txt且大小為16，986字節(jié)。[0005]發(fā)明背景[0006]生物技術(shù)的進步使得有可能使用重組DNA技術(shù)產(chǎn)生多種蛋白質(zhì)用于藥物應(yīng)用。因為蛋白質(zhì)比傳統(tǒng)有機和無機藥物更大且更復(fù)雜(即除復(fù)雜三維結(jié)構(gòu)外還具有多個官能團)，所以配制所述蛋白質(zhì)會造成特殊問題。為了使蛋白質(zhì)保持生物活性，制劑必須保持蛋白質(zhì)氨基酸的至少一個核心序列的構(gòu)象完整性，同時保護蛋白質(zhì)的多個官能團免遭降解。蛋白質(zhì)可遭受缺乏穩(wěn)定性，并且單克隆和多克隆抗體特別可相對不穩(wěn)定(參見例如Wang等，上PharmSc1.96:1_26(2007))。許多配制選項是可用的，但沒有一種方法或系統(tǒng)適于所有蛋白質(zhì)。已報道待考慮的若干因素(參見例如Wang等)。[0007]許多特征可影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。實際上，即使在純化抗體的情況下，抗體結(jié)構(gòu)也可能是異質(zhì)的，這進一步使配制所述系統(tǒng)復(fù)雜化。此外，包括于抗體制劑中的賦形劑優(yōu)選使任何潛在免疫反應(yīng)減至最小。[0008]在抗體的情況下，保持構(gòu)象完整性甚至更加重要。蛋白質(zhì)的降解[0009]路徑可涉及化學(xué)不穩(wěn)定性(即涉及通過鍵形成或裂解來修飾蛋白質(zhì)，[0010]從而產(chǎn)生新化學(xué)實體的任何過程)或物理不穩(wěn)定性(即蛋白質(zhì)的更高級結(jié)構(gòu)變化)?；瘜W(xué)不穩(wěn)定性以例如脫酰胺、異構(gòu)化、水解、氧化、片[0011]段化、聚糖β消除或雙硫鍵互換(disulfideexchange)形式表現(xiàn)。物理不穩(wěn)定性可由例如變性、聚集、沉淀或吸附造成。四種最常見蛋白質(zhì)降解路徑是蛋白質(zhì)片段化、聚集、脫酰胺和氧化。治療性蛋白質(zhì)的化學(xué)或物理不穩(wěn)定性的后果包括有效施用劑量減少、療法的安全性歸因于例如刺激或免疫反應(yīng)性而降低以及歸因于存放期較短而使制造更頻繁。[0012]數(shù)項公布已大體上公開治療炎性腸病的各種方法，并且提供用于施用旨在治療炎性腸病的藥劑的給藥方案。舉例而言，W096/24673公開粘膜血管地址素(addressin)及對與因白細(xì)胞結(jié)合于表達MAdCAM的細(xì)胞所致的白細(xì)胞募集至胃腸道相關(guān)的疾病的治療。U.S.2005/0095238描述治療與白細(xì)胞浸潤粘膜組織相關(guān)的疾病的方法及向人施用有效量的對α4β7整合素(integrin)具有結(jié)合特異性的人或人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段。U.S.2005/0095238進一步描述各種劑量(例如每千克體重0.15mg、約0.5mg、約1.0mg、約1.5mg或約2.0mg免疫球蛋白或片段)和劑量之間的各種間隔(7天、14天、21天、28天或30天)。然而，以上提及的專利和公布并未公開本文中描述且要求的抗α4β7抗體的特定制劑或特定劑量和給藥方案。重要的是，以上提及的專利并未公開為本文中描述且要求的治療方法(由臨床試驗數(shù)據(jù)支持)提供的制劑、劑量和給藥方案。[0013]本發(fā)明的抗體制劑可適用于抑制白細(xì)胞結(jié)合于表達MAdCAM的細(xì)胞且因此幫助治療患者的炎性腸病。因此，急需發(fā)現(xiàn)這些化合物的適合劑量和給藥時程，并且急需開發(fā)在長時間段內(nèi)以穩(wěn)定及適宜形式產(chǎn)生穩(wěn)態(tài)治療有效血液含量的抗體制劑的制劑，優(yōu)選為皮下制劑。[0014]發(fā)明概述[0015]本發(fā)明涉及鑒定作為適用于配制抗α4β7抗體制劑的賦形劑的抗氧化劑或螯合劑和至少一種氨基酸，所述制劑的不穩(wěn)定性使其易經(jīng)受脫酰胺、氧化、異構(gòu)化和/或聚集。制劑會提高穩(wěn)定性，減少聚集體形成且延遲其中抗體的降解。[0016]因此，在第一方面，本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定液體藥物制劑，所述制劑包含抗α4β7抗體、抗氧化劑或螯合劑和至少一種游離氨基酸的混合物。[0017]在一些實施方案中，穩(wěn)定液體藥物制劑在室溫下12個月之后具有小于約1.0%的聚集體形成。穩(wěn)定液體藥物制劑在室溫下12個月之后可具有小于約0.2%的聚集體形成。[0018]在一些實施方案中，抗氧化劑或螯合劑是檸檬酸鹽。在一些實施方案中，螯合劑是EDTA。[0019]在一些實施方案中，制劑的游離氨基酸為組氨酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸或其任何組合。制劑可包含約50mM至約175mM之間的游離氨基酸。制劑可包含約IOOmM與約175mM之間的游離氨基酸。游離氨基酸與抗體的摩爾比可為至少250:1。[0020]制劑也可含有表面活性劑。表面活性劑可為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆(poloxamer)或其任何組合。[0021]在一些實施方案中，抗氧化劑與表面活性劑的摩爾比是約3:1至約156:1。`[0022]制劑可具有介于約6.3與約7.0之間的pH。制劑的pH可在約6.5與約6.8之間。制劑可具有介于約6.1與約7.0之間或介于約6.2與6.8之間的pH。[0023]在一些實施方案中,穩(wěn)定液體藥物制劑含有至少約60mg/ml至約160mg/ml抗α4β7抗體。制劑可含有至少約160mg/ml抗α4β7抗體。制劑可含有約150mg/ml至約180mg/ml抗體或約165mg/ml抗體。[0024]在另一方面,本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定液體藥物制劑,所述制劑包含至少約60mg/ml至約160mg/ml抗α4β7抗體、緩沖劑和至少約IOmM檸檬酸鹽。緩沖劑可為組氨酸緩沖劑。[0025]在另一方面，本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定液體藥物制劑，所述制劑包含至少約60mg/ml至約180mg/ml抗α4β7抗體、緩沖劑和至少約5mM檸檬酸鹽。緩沖劑可為組氨酸緩沖劑。[0026]在另一方面,本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定液體藥物制劑,所述制劑包含至少約160mg/ml抗α4β7抗體和至少約IOmM檸檬酸鹽。制劑可進一步含有聚山梨醇酯80。[0027]在另一方面,本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定液體藥物制劑,所述制劑包含約160mg/ml抗α4β7抗體和至少約5mM檸檬酸鹽。制劑可進一步含有聚山梨醇酯80。[0028]在另一方面,本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定液體藥物制劑,所述制劑包含抗α4β7抗體、檸檬酸鹽、組氨酸、精氨酸和聚山梨醇酯80的混合物。制劑可存在于容器(如小瓶、藥筒、注射器或自動注射器)中。[0029]本發(fā)明的穩(wěn)定液體藥物制劑中的抗α4β7抗體可為維多珠單抗(vedolizumab)。本發(fā)明的制劑可用于皮下、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)施用。[0030]在一些方面，制劑可使抗α4β7抗體的免疫原性減至最小。[0031]在另一方面，本發(fā)明涉及一種治療炎性腸病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的穩(wěn)定液體藥物制劑。施用可為皮下施用施用可為自身施用。[0032]在另一方面，本發(fā)明涉及一種制品，所述制品包括容器、本文所述的穩(wěn)定液體藥物制劑及其使用說明書。[0033]在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療罹患炎性腸病的人患者的方法，其中所述方法包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中根據(jù)以下給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)例如在誘導(dǎo)期治療方案中，每隔一天以皮下注射液形式施用165mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的初始劑量持續(xù)六劑；(b)隨后例如在維持期治療方案中，在第6周時，視需要每兩周或每四周以皮下注射液形式施用165mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第七劑量和后續(xù)劑量；其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和⑶R3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3):輕鏈:⑶RlSEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDRlSEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:14。[0034]在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療罹患炎性腸病的人患者的方法，其中所述方法包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)包括靜脈內(nèi)劑量的誘導(dǎo)期和皮下劑量的維持期的以下給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)以靜脈內(nèi)輸液形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的初始靜脈內(nèi)劑量；(b)隨后在初始劑量之后約兩周時，以靜脈內(nèi)輸液形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第二靜脈內(nèi)后續(xù)劑量；(c)隨后從第六周開始，視需要每周、每兩周、每三周或每四周以皮下注射液形式施用165mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第三劑量和后續(xù)劑量；其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3):輕鏈:CDRlSEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11；重鏈:CDRlSEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:14。[0035]在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療性治療炎性腸病的給藥方案，其中所述給藥方案包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)皮下或肌內(nèi)給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，所述給藥方案維持免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的平均穩(wěn)態(tài)谷底血清濃度為約9yg/mL至約13yg/mL;其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3):輕鏈:CDR1SEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDR1SEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:14。[0036]在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療性治療炎性腸病的給藥方案，其中所述給藥方案包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)皮下或肌內(nèi)給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，所述給藥方案維持人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的平均穩(wěn)態(tài)谷底血清濃度為約35μg/mL至約/mL;其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3):輕鏈:CDR1SEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDR1SEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:140[0037]在另一方面，本發(fā)明涉及一種治療罹患炎性腸病的人患者的方法，其中所述方法包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)以下給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)施用通過約六周的初始給藥，足以實現(xiàn)人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的平均谷底血清濃度為約20μg/mL至約30μg/mL的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的多個誘導(dǎo)期劑量；(b)隨后視需要施用維持免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的平均穩(wěn)態(tài)谷底血清濃度為約9μg/mL至約13μg/mL或約35μg/mL至40μg/mL的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的多個維持期劑量；其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、⑶R2和⑶R3):輕鏈:CDR1SEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDR1SEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:140[0038]在一些方面，制劑、治療方法、劑量和/或給藥方案確?；颊邔a(chǎn)生對抗α4β7抗體有反應(yīng)性的抗體的可能性最小。[0039]患者可已對用免疫調(diào)節(jié)劑、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)拮抗劑中的至少一個或其組合進行的治療缺乏足夠反應(yīng)、喪失反應(yīng)或不耐受。[0040]炎性腸病可為克羅恩氏病(Crohn'sdisease)或潰瘍性結(jié)腸炎。炎性腸病可為中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎。[0041]給藥方案可使得罹患中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎的患者的粘膜愈合。[0042]患者可能先前已接受用至少一種用于炎性腸病的皮質(zhì)類固醇治療?；颊呖赏瑫r接受用至少一種用于炎性腸病的皮質(zhì)類固醇治療。給藥方案可使得患者的皮質(zhì)類固醇使用減少、消除或減少以及消除。[0043]在一些方面，以約1.0mg/m至約1.4mg/ml之間的濃度以某一最終劑型施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段。可以約1.2mg/ml的某一最終劑型施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段。[0044]在一些方面，以抗α4β7抗體的量在約70mg至約250mg之間、在約90mg至約200mg之間、在約150mg至約180mg之間或為至少160mg的某一最終劑型施用人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段。[0045]在一些方面，給藥方案不改變接受所述治療的患者的腦脊髓液中的CD4與CD8的比率。[0046]患者可為65歲或65歲以上人士且不需要對給藥方案進行任何調(diào)整。[0047]在一些方面，用抗α4β7抗體制劑的治療方法、劑量或給藥方案可使抗α4β7抗體的免疫原性減至最小。[0048]附圖簡述[0049]圖1是對編碼人源化抗α4β7免疫球蛋白的重鏈的核苷酸序列(SEQIDNO:I)和重鏈的推導(dǎo)氨基酸序列(SEQIDΝ0:2)的說明。核苷酸序列在重鏈的5'端處含有克隆位點(小寫)、Kozak序列(大寫，SEQIDNO:1的核苷酸18-23)和前導(dǎo)序列(小寫，SEQIDNO:1的核苷酸24-86)。核苷酸序列的開放閱讀框架是SEQIDNO:1的核甘酸24-1433。[0050]圖2是對編碼在本文中稱為維多珠單抗的人源化免疫球蛋白的輕鏈的核苷酸序列(SEQIDNO:3)和輕鏈的推導(dǎo)氨基酸序`列(SEQIDNO:4)的說明。核苷酸序列在重鏈的5'端處含有克隆位點(小寫)、Kozak序列(大寫，SEQIDNO:3的核苷酸18-23)和前導(dǎo)序列(小寫，SEQIDNO:3的核苷酸24-80)。核苷酸序列的開放閱讀框架是SEQIDNO:3的核苷酸24-737。[0051]圖3是(A)在本文中稱為維多珠單抗的人源化免疫球蛋白的成熟人源化輕鏈(SEQIDNO:4的氨基酸20-238)與(B)在本文中稱為LDP-02的人源化免疫球蛋白的成熟人源化輕鏈(SEQIDNO:5)的氨基酸序列比對。(關(guān)于LDP-02，參見W098/06248和Feagan等，N.Eng.J.Med.352=2499-2507(2005)。Feagan等描述LDP-02的臨床研究，但在所述文章中，其將LDP-02稱為MLN02。)所述比對說明維多珠單抗與LDP-02的輕鏈氨基酸序列在成熟輕鏈的位置114和115處不同。[0052]圖4是(A)同屬人K輕鏈恒定區(qū)(SEQIDNO:6)與⑶同屬鼠類κ輕鏈恒定區(qū)(SEQIDNO:7)的氨基酸序列比對。氨基酸殘基Thr和Val(其存在于成熟維多珠單抗輕鏈的位置114和115處(SEQIDNO:4的氨基酸133和134))存在于人κ輕鏈的恒定區(qū)中，而氨基酸殘基Ala和Asp(其存在于成熟LDP-02輕鏈(SEQIDNO:5)的位置114和115處)存在于小鼠κ輕鏈的恒定區(qū)中。[0053]圖5是載體pLKT0K38D(也稱為pT0K38MLN02_TV)的圖譜，所述載體編碼MLN02的人源化重鏈和人源化輕鏈，并且適于在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生維多珠單抗。(參見公開PLKT0K38的美國專利申請公布號2004/0033561A1。pLKT0K38D是pLKT0K38的變體，其中在圖譜上指示的限制位點側(cè)接編碼輕鏈可變區(qū)的序列。)[0054]圖6顯示由于蛋白質(zhì)濃度、pH和表面活性劑:蛋白質(zhì)摩爾比變化所致的SEC聚集體形成斜度(每日百分比)。在6.0至6.5的pH范圍下，制劑的聚集體形成類似于聚山梨醇酯80:蛋白質(zhì)摩爾比在0.7至1.5范圍內(nèi)的聚集體形成。[0055]圖7是顯示在聚山梨醇酯80:蛋白質(zhì)摩爾比大于1.5下，聚集體形成率隨pH增加而增加的圖。[0056]圖8是顯示賦形劑對聚集體形成的影響的圖。將25mM檸檬酸鹽、5mM檸檬酸鹽、5mMEDTA、25mM半胱氨酸或5mM半胱氨酸添加至制劑中。所有三種賦形劑都減少聚集體形成。[0057]圖9是一組顯示在制劑中存在25mM檸檬酸鹽下聚集體形成減少以及蛋白質(zhì)濃度增加與聚集體形成率增加之間的關(guān)系的圖。[0058]圖10是顯示40°C下CEX物質(zhì)降解結(jié)果的圖。數(shù)據(jù)顯示pH變化對CEX降解的影響。[0059]圖11是顯示溫度對制劑pH的影響的圖。含有組氨酸的制劑的pH隨溫度而降低，而檸檬酸鹽制劑的PH不受溫度影響。[0060]圖12是顯示CEX主要亞型在十二個月時間內(nèi)的百分比的圖。pH是6.0-6.2的制劑顯示主要亞型比pH是6.3-6.4的制劑少約1%-2%0[0061]圖13顯示一組表明粘度主要受蛋白質(zhì)濃度和pH影響的圖。顯示蔗糖、組氨酸和精氨酸添加物對制劑粘度具有輕微影響。[0062]圖14顯示(A)成熟人GM607'CL抗體κ輕鏈可變區(qū)和⑶人21/28'CL重鏈可變區(qū)的氨基酸序列。[0063]圖15顯示預(yù)填充注射器中的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的組分。[0064]圖16Α-16Β顯示㈧蛋白質(zhì)濃度和⑶粘度對測試的各種注射器的注射力的影響。[0065]圖17(A)顯示初始滑動力隨蛋白質(zhì)濃度和針尺寸的變化。圖17(B)顯示各注射器制造商和針尺寸的初始滑動力。[0066]圖18顯示維多珠單抗的吸收曲線。所述圖顯示肌內(nèi)和皮下給藥的濃度大體上重疊。這些施用途徑的吸收曲線不存在明顯總體差異。[0067]發(fā)明詳述[0068]本發(fā)明涉及一種包含抗α4β7抗體的藥物制劑。藥物制劑可為包含抗氧化劑或螯合劑(例如檸檬酸鹽)、抗α4β7抗體和游離氨基酸的混合物。藥物制劑可呈固體或液體形式。[0069]定義[0070]術(shù)語“藥物制劑”是指一種含有呈使抗體的生物活性有效形式的抗α4β7抗體，并且不含有對將施用制劑的受試者具有不可接受毒性的其它組分的制劑。[0071]“穩(wěn)定”制劑為當(dāng)儲存時其中的抗體實質(zhì)上保持其物理穩(wěn)定性和/或其化學(xué)穩(wěn)定性和/或其生物活性的制劑。在一個方面，制劑在儲存時實質(zhì)上保持其物理和化學(xué)穩(wěn)定性以及其生物活性。一般基于制劑的預(yù)期存放期選擇儲存期。用于測量蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的各種分析技術(shù)在本領(lǐng)域中可用且例如綜述于PeptideandProteinDrugDelivery,247-301,VincentLee編，MarcelDekker,Inc.,NewYork,N.Y.,Pubs.(1991)和Jones,A.Adv.DrugDeliveryRev.10:29-90(1993)中。穩(wěn)定性可在選定溫度下持續(xù)選定時段進行測量。舉例而言，液體制劑在約40°C下穩(wěn)定持續(xù)至少約3天、5天、I周、2周、3周、4周、5周或6周。在另一方面，凍干制劑在約40°C下穩(wěn)定持續(xù)至少約2-4周、至少約3個月、至少約6個月、至少約9個月、至少約12個月或至少約18個月。在另一方面，液體和/或凍干制劑在約5°C和/或25°C下穩(wěn)定持續(xù)至少約I個月、至少約3個月、至少約6個月、至少約9個月、至少約12個月、至少約18個月、至少約24個月、至少約30個月或至少約36個月；和/或在約_20°C和/或_70°C下穩(wěn)定持續(xù)至少約I個月、至少約3個月、至少約6個月、至少約9個月、至少約12個月、至少約18個月、至少約24個月、至少約30個月、至少約36個月、至少約42個月或至少約48個月。此外，在一些實施方案中，液體制劑可在冷凍(至例如_80°C)和解凍之后(例如在1、2或3個冷凍和解凍循環(huán)之后)穩(wěn)定。[0072]可以多種不同方法定性和/或定量評估液體制劑的穩(wěn)定性，包括評估二聚體、多聚體和/或聚集體形成(例如使用尺寸排阻色譜法(SEC)、基質(zhì)輔助激光脫附離子化飛行時間質(zhì)譜法(MALD1-TOFMS)、分析性超速離心、光散射(光子相關(guān)光譜法、動態(tài)光散射(DLS)、靜態(tài)光散射、多角激光光散射(MALLS))、基于流動的顯微鏡成像、電子阻抗(庫爾特(coulter))計數(shù)、光遮蔽或其它液體顆粒計數(shù)系統(tǒng)、通過測量混濁度和/或通過目視檢查)；通過使用陽離子交換色譜(CEX)、等電聚焦(IEF)(例如毛細(xì)管技術(shù)(cIEF))或毛細(xì)管帶電泳評估電荷非均勻性；氨基端或羧基端序列分析；質(zhì)譜分析；SDS-PAGE或SEC分析以比較片段化、完整和多聚(即二聚、三聚等)抗體；肽圖(例如胰蛋白酶或LYS-C)分析；評估抗體的生物活性或抗原結(jié)合功能等。也可以多種不同方法定性和/或定量評估固態(tài)制劑的穩(wěn)定性，所述方法包括直接測試，如通過X射線粉末衍射(XRPD)鑒定晶體結(jié)構(gòu)；使用傅立葉轉(zhuǎn)換紅外光譜法(FourierTransformInfraredSpectroscopy,FTIR)評估固態(tài)下的抗體結(jié)構(gòu)；以及使用差示掃描熱量測定(DSC)測量凍干固體(熔融、玻璃轉(zhuǎn)移等)中的熱轉(zhuǎn)移；及間接測試，如通過卡爾費休(KarlFisher)試測量水分含量例如以外推通過水解所致的化學(xué)不穩(wěn)定性的可能性。不穩(wěn)定性可包括以下任何一個或多個:聚集(例如非共價可溶性聚集、共價可溶性聚集(例如二硫鍵重排/混雜)、不溶性聚集)、脫酰胺(例如Asn脫酰胺)、氧化(例如Met氧化)、異構(gòu)化(例如Asp異構(gòu)化)、截斷/水解/片段化(例如鉸鏈區(qū)片段化)、丁二酰亞胺形成、N端延長、C端加工、糖基化差異等。[0073]“脫酰胺”單克隆抗體是其一個或多個天冬酰胺或谷氨酰胺殘基已經(jīng)衍生化為例如天冬氨酸或異天冬氨酸的單克隆抗體。[0074]“易經(jīng)受脫酰胺”的抗體是包含一個或多個已發(fā)現(xiàn)有脫酰胺傾向的殘基的抗體。[0075]“易經(jīng)受氧化”的抗體是包含一個或多個已發(fā)現(xiàn)有氧化傾向的殘基的抗體。[0076]“易經(jīng)受聚集”的抗體是已發(fā)現(xiàn)其與其它抗體分子聚集(尤其在冷凍、加熱、干燥、復(fù)原和/或攪拌時)的抗體。[0077]“易經(jīng)受片段化”的抗體是已發(fā)現(xiàn)例如在其鉸鏈區(qū)處裂解成兩個或更多個片段的抗體。[0078]就“減少脫酰胺、氧化、聚集或片段化”而言，其旨在指相對于在不同pH下或在不同緩沖劑中配制的單克隆抗體，防止脫酰胺、聚集或片段化或減少脫酰胺、聚集或片段化的量(例如至80%、60%、50%、40%、30%、20%或10%)。[0079]“聚集體”、“SEC聚集體”或“可溶性聚集體”大于一個且小于或等于十個通過共價、離子或疏水性相互作用締合在一起以形成更大蛋白質(zhì)體的抗體蛋白質(zhì)和/或片段。[0080]“不溶性聚集體”或“顆粒”大于十個通過共價、離子或疏水性相互作用締合在一起以形成更大蛋白質(zhì)體的抗體蛋白質(zhì)和/或片段。[0081]如本文所用，單克隆抗體的“生物活性”是指抗體能夠結(jié)合于抗原且產(chǎn)生可在體外或在體內(nèi)測量的可測量生物反應(yīng)。所述活性可為拮抗性或促效性。[0082]細(xì)胞表面分子“α4β7整合素”或“α4β7”是α4鏈(CD49D,ITGA4)與β7鏈(ITGB7)的雜二聚體。各鏈可與替代性整合素鏈形成雜二聚體以形成例如Ci4P1*αΕβ7。人α4及β7基因(分別為GenBank(NationalCenterforBiotechnologyInformation,Bethesda,MD)RefSeq寄存編號NM_000885和NM_000889)由B和T淋巴細(xì)胞、特別是記憶⑶4+淋巴細(xì)胞表達。作為許多整合素的典型，α4β7可以靜止或活化狀態(tài)存在。α4β7的配體包括血管細(xì)胞粘著分子(VCAM)、纖維結(jié)合蛋白(fibronectin)和粘膜地址素(MAdCAM，例如MAdCAM-Ι)。[0083]如本文所用，“對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性”的人免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段結(jié)合于α4β7,但不結(jié)合于α4β1或αΕΒ7。[0084]如本文所用，“等張”制劑具有與人血液實質(zhì)上相同的滲透壓。等張制劑將通常具有約250m0sm至350m0sm的滲透壓?？墒褂美缯魵鈮夯虮鶅鲂蜐B壓計來測量等張性。[0085]如本文所用，“緩沖劑”是指通過其酸堿共軛組分的作用抵抗pH變化的緩沖劑。緩沖劑可存在于本發(fā)明的液體或固體制劑中。在一些實施方案中，本發(fā)明的緩沖劑將制劑的pH調(diào)節(jié)至約5.0至約7.5、約ρΗ5.5至約7.5、約ρΗ6.0至約7.0或pH約6.3至約6.5。在一個方面，將控制pH在5.0至7.5范圍內(nèi)的呈單獨或組合形式的緩沖劑的實例包括乙酸鹽、丁二酸鹽、葡糖酸鹽、組氨酸、檸檬酸鹽、磷酸鹽、順丁烯二酸鹽、二甲基胂酸鹽、2-[N-嗎啉基]乙烷磺酸(MES)、雙(2-羥乙基)亞氨基三[羥甲基]甲烷(Bis-Tris)、N-[2-乙酰胺基]-2-亞氨基二乙酸(ADA)、甘氨酰甘氨酸和其它有機酸緩沖劑。在另一方面，本文中的緩沖劑是組氨酸或檸檬酸鹽。[0086]“組氨酸緩沖液”是包含組氨酸離子的緩沖劑。組氨酸緩沖劑的實例包括組氨酸氯化物、組氨酸乙酸鹽、組氨酸磷酸鹽、組氨酸硫酸鹽溶液。組氨酸緩沖液或組氨酸鹽酸鹽緩沖液的pH在約ρΗ5.5至約7.0之間、在約ρΗ6.I至約6.9之間或為約ρΗ6.5。[0087]“檸檬酸鹽緩沖液”是包含檸檬酸根離子的緩沖劑。檸檬酸鹽緩沖液的實例包括檸檬酸鈉、檸檬酸銨、檸檬酸鈣和檸檬酸鉀溶液。檸檬酸鹽緩沖液的PH為約3.0至6.2、約ρΗ5.5至6.5、約ρΗ6.I至約6.5、約ρΗ6.1、約ρΗ6.2或約ρΗ6.5。[0088]在本文中，“糖”是具有通式(CH2O)n的化合物及其衍生物，包括單糖、雙糖、三糖、多糖、糖醇、還原糖、非還原糖等。本文中的糖的實例包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、聚葡萄糖、赤藻糖醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇(sylitOl)、山梨糖醇、甘露糖醇、蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳酮糖、麥芽酮糖、葡萄糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、異麥芽酮糖等。糖可為凍干保護劑。在一個方面，本文中的糖是非還原雙糖，如蔗糖。[0089]在本文中，“表面活性劑”是指降低液體表面張力的試劑。在一個方面，表面活性劑是非離子表面活性劑。本文中的表面活性劑的實例包括聚山梨醇酯(聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯，例如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80);TRIT0N(叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，非離子清潔劑，DowChemicalC0.,MidlandMI的UnionCarbide子公司);十二燒基硫酸納(SDS);月桂硫酸納；羊基糖昔納；月桂基橫基甜菜喊、肉?蓮基橫基甜菜喊、亞油烯基(Iinoleyl)磺基甜菜堿或硬脂?；腔鸩藟A；月桂基肌氨酸、肉豆蘧基肌氨酸、亞油烯基肌氨酸或硬脂?；“彼?；亞油烯基甜菜堿、肉豆蘧基甜菜堿或鯨蠟基甜菜堿；月桂酰胺丙基甜菜堿、椰油酰胺丙基甜菜堿、亞油酰胺丙基甜菜堿、肉豆蘧酰胺丙基甜菜堿、棕櫚酰胺丙基(palmidopropyl)甜菜堿或異硬脂酰胺丙基甜菜堿(例如月桂酰胺丙基甜菜堿)；肉豆蘧酰胺丙基二甲胺、棕櫚酰胺丙基二甲胺或異硬脂酰胺丙基二甲胺；甲基椰油?；；撬徕c或甲基油烯基牛磺酸二鈉；脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯；以及M0NAQUAT系列(MonaIndustries,Inc.,Paterson,N.J.);聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)和聚氧乙烯與聚氧丙烯二醇的共聚物(例如泊洛尼克(Pluronic)/泊洛沙姆、PF68等)；等。在另一方面，本文中的表面活性劑是聚山梨醇酯80。[0090]術(shù)語“螯合劑”是指通過一個以上鍵與原子結(jié)合的試劑。在一個方面，本文中的螯合劑的實例包括檸檬酸鹽、乙二胺四乙酸、乙二醇四乙酸(EGTA)、二巰基丙醇、二乙三胺五乙酸和N，N-雙(羧甲基)甘氨酸。在另一方面，螯合劑是檸檬酸鹽或EDTA。[0091]術(shù)語“抗氧化劑”是指抑制其它分子氧化的試劑。本文中的抗氧化劑的實例包括檸檬酸鹽、硫辛酸、尿酸、谷胱甘肽、生育酚、胡蘿卜素、西紅柿紅素、半胱氨酸、膦酸酯化合物(例如依替膦酸(etidronicacid))、去鐵胺和蘋果酸鹽。[0092]本文中的術(shù)語“抗體”以最廣泛意義使用且明確涵蓋全長單克隆抗體、免疫球蛋白、多克隆抗體、由至少兩種例如各自針對不同抗原或表位的全長抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)以及個別抗原結(jié)合片段(包括dAb、scFv、Fab、F(ab)/2、Fab')，包括人、人源化和來自非人物種及重組抗原結(jié)合形式的抗體，如微型單功能抗體(monobody)和微型雙功能抗體。[0093]根據(jù)設(shè)想抗體的近似分子量為約150，000道爾頓(dalton)來計算本文所述的抗α4β7抗體與其它賦形劑的摩爾量和摩爾比。實際抗體分子量可不為150，000道爾頓，視氨基酸組成或翻譯后修飾(例如如取決于用于表達抗體的細(xì)胞系)而定。實際抗體分子量可為150，000道爾頓的+/-5%。[0094]術(shù)語“人抗體”包括具有源于人生殖系免疫球蛋白序列的序列的抗體，如源于具有人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠(例如XEN0M0USE基因工程改造小鼠(Abgenix，F(xiàn)remont，CA)>HUMAB-MOUSE?、KIRINTCM0USETM轉(zhuǎn)染色體小鼠、KMMOUSE?(MEDAREX，Princeton,NJ))、人噬菌體顯示庫、人骨髓瘤細(xì)胞或人B細(xì)胞的抗體。[0095]本文所用的術(shù)語“單克隆抗體”是指由實質(zhì)上均質(zhì)抗體的群體獲得的抗體，即除可在產(chǎn)生單克隆抗體期間出現(xiàn)的可能變體(所述變體一般以少量存在)之外，構(gòu)成所述群體的個別抗體相同和/或結(jié)合相同表位。與通常包括針對不同決定子(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑不同，各單克隆抗體針對抗原上的單一決定子。修飾語“單克隆”指示抗體是從實質(zhì)上均質(zhì)的抗體群體獲得的特生，并且不應(yīng)解釋為需要通過任何特定方法來產(chǎn)生所述抗體。舉例而言，將要根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過最初由Kohler等，Nature,256=495(1975)描述的雜交瘤方法制備，或可通過重組DNA方法(參見例如美國專利號4,816,567)制備?！皢慰寺】贵w”也可使用例如Clackson等，Nature,352:624-628(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.，222:581-597(1991)中描述的技術(shù)從噬菌體抗體庫分離。[0096]本文中的單克隆抗體明確包括“嵌合”抗體，其中一部分重鏈和/或輕鏈與源于特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或子類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而所述鏈的剩余部分與源于另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或子類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源；以及所述抗體的片段，只要其展現(xiàn)所需生物活性即可(美國專利號4，816，567;和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,81:6851-6855(1984))。本文中的相關(guān)嵌合抗體包括包含源于非人靈長類動物(例如舊世界猴(OldWorldMonkey)、猿(Ape)等)的可變域抗原結(jié)合序列和人恒定區(qū)序列的“靈長類化”抗體。[0097]在本發(fā)明的制劑中的所制備人源化免疫球蛋白的“抗原結(jié)合片段”至少包含抗α4β7抗體的重鏈和/或輕鏈的可變區(qū)。舉例而言，維多珠單抗的抗原結(jié)合片段包含人源化輕鏈序列SEQIDNO:4的氨基酸殘基20至131。所述抗原結(jié)合片段的實例包括在本領(lǐng)域中已知的人源化免疫球蛋白的Fab片段、Fab'片段、scFv和F(ab')2片段。本發(fā)明的人源化免疫球蛋白的抗原結(jié)合片段可通過酶促裂解或通過重組技術(shù)來產(chǎn)生。舉例而言，木瓜蛋白酶或胃蛋白酶裂解可分別用于產(chǎn)生Fab或F(ab')2片段?？贵w也可使用已將一個或多個終止密碼子引入天然終止位點上游的抗體基因以多種截短形式產(chǎn)生。舉例而言，編碼F(ab')2片段的重鏈的重組構(gòu)建體可經(jīng)設(shè)計以包括編碼重鏈的CH1結(jié)構(gòu)域和鉸鏈區(qū)的DNA序列。在一個方面，抗原結(jié)合片段抑制α4β7整合素結(jié)合于其一個或多個配體(例如粘膜地址素MAdCAM(例如MAdCAM-Ι)、纖維結(jié)合蛋白)。[0098]木瓜蛋白酶消化抗體會產(chǎn)生兩個稱為“Fab”片段的相同抗原結(jié)合片段，各自具有單一抗原結(jié)合位點；以及一個剩余“Fe”片段，其名稱反映其能夠易于結(jié)晶。胃蛋白酶處理產(chǎn)生F(ab')2片段，其具有兩個抗原結(jié)合位點且仍能夠交聯(lián)抗原。[0099]“Fv”是由一個重鏈可變域和一個輕鏈可變域呈非共價締合形式的二聚體組成的抗體片段。[0100]Fab片段也含有輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域(CHl)。Fab'片段因在重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基端添加少量殘基(包括一個或多個來自抗體鉸鏈區(qū)的半胱氨酸)而不同于Fab片段。Fab'-SH在本文中表示恒定域的半胱氨酸殘基攜帶至少一個游離硫醇基的Fab'。F(ab')2抗體片段最初以之間具有鉸鏈半胱氨酸的Fab'片段對形式產(chǎn)生。也已知抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。`[0101]“單鏈Fv”或“scFv”抗體片段包含抗體的Vh和\結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域存在于單一多肽鏈中。在一個方面，F(xiàn)v多肽進一步在Vh結(jié)構(gòu)域與'結(jié)構(gòu)域之間包含使得scFv能夠形成為抗原結(jié)合所需的結(jié)構(gòu)的多肽連接子。關(guān)于scFv的綜述,參見Pluckthun,ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,第113卷，Rosenburg和Moore編，Springer-Vedag,NewYork,第269頁至第315頁(1994)。[0102]術(shù)語“微型雙功能抗體”是指具有兩個抗原結(jié)合位點的小抗體片段，所述片段包含與同一多肽鏈(Vh-')中的可變輕域(')連接的可變重域(Vh)。通過使用過短而無法使同一鏈上兩個結(jié)構(gòu)域之間配對的連接子，迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一鏈的互補結(jié)構(gòu)域配對且產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點。微型雙功能抗體更充分描述于例如EP404，097;W093/11161;和Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,90:6444-6448(1993)中。[0103]“全長抗體”是包含抗原結(jié)合可變區(qū)以及輕鏈恒定域(CJ和重鏈恒定域Cm、Ch2及Ch3的抗體。恒定域可為天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列變體。在一個方面，全長抗體具有一種或多種效應(yīng)功能。[0104]本文中的“氨基酸序列變異”抗體是具有不同于主要種類抗體的氨基酸序列的抗體。通常，氨基酸序列變體將與主要種類抗體具有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%同源性。氨基酸序列變體在主要種類抗體的氨基酸序列內(nèi)或鄰近于主要種類抗體的氨基酸序列的某些位置處具有取代、缺失和/或添加，但仍保留抗原結(jié)合活性?？贵w的恒定區(qū)序列的變異對抗原結(jié)合活性的影響將比可變區(qū)的變異小。在可變區(qū)中，氨基酸序列變體將與主要種類抗體至少約90%同源、至少約95%同源、至少約97%同源、至少約98%同源或至少約99%同源。[0105]“同源性”定義為在對準(zhǔn)序列且必要時引入間隙以實現(xiàn)最大同源性百分比之后，在氨基酸序列變體中的相同殘基的百分比。用于比對的方法和計算機程序在本領(lǐng)域中是眾所周知的。[0106]““治療性單克隆抗體”是用于人受試者療法的抗體。本文中公開的治療性單克隆抗體包括抗α4β7抗體。[0107]本文中的“糖基化變異”抗體是附接有一個或多個不同于一個或多個附接于主要種類抗體的碳水化合物部分的碳水化合物部分的抗體。本文中的糖基化變體的實例包括有Gl或G2寡糖結(jié)構(gòu)而非GO寡糖結(jié)構(gòu)附接于其Fe區(qū)的抗體，有一或兩種碳水化合物部分附接于其一個或兩個輕鏈的抗體；無碳水化合物附接于抗體的一個或兩個重鏈的抗體等；及糖基化變化的組合。[0108]抗體“效應(yīng)功能”是指可歸因于抗體Fe區(qū)(天然序列Fe區(qū)或氨基酸序列變異Fe區(qū))的那些生物活性?？贵w效應(yīng)功能的實例包括:Clq結(jié)合；補體依賴性細(xì)胞毒性；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC);吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體；BCR)的下調(diào)等。[0109]視全長抗體的重鏈的恒定域的氨基酸序列而定，可將全長抗體指定為不同“類別”。存在五種主要類別的全長抗體:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且這些類別中的若干種可進一步細(xì)分為“子類”(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。對應(yīng)于抗體的不同類別的重鏈恒定域分別稱為α、6、ε、Y和μ。不同類別的免疫球蛋白的亞單位結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是眾所周知的。[0110]來自任何脊椎動物物種的抗體的“輕鏈”可基于其恒定域的氨基酸序列指定為兩種明顯不同類型(稱為K及λ)中的一個。[0111]“抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性”和“ADCC”是指細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中表達Fe受體(FcR)的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如天然殺手(NaturalKiller,NK)細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)識別目標(biāo)細(xì)胞上的結(jié)合抗體且隨后導(dǎo)致目標(biāo)細(xì)胞溶解。用于介導(dǎo)ADCC的原代細(xì)胞(NK細(xì)胞)僅表達Fe^1?111，而單核細(xì)胞表達？(^1?1、FcyRII和FcyRIII。FcR在造血細(xì)胞上的表達概述于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Tmmunol9:457_92(1991)的第464頁上的表3中。為了評估相關(guān)分子的ADCC活性，可進行體外ADCC測定，如美國專利號5，500，362或5，821，337中所述的測定。適用于所述測定的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血液單核細(xì)胞(PBMC)和天然殺手(NK)細(xì)胞?；蛘呋蛄硗?，可例如在如Clynes等，PNAS(USA)95:652-656(1998)中公開的動物模型中體內(nèi)評估相關(guān)分子的ADCC活性。[0112]術(shù)語“Fe受體”或“FcR”用于描述結(jié)合于抗體Fe區(qū)的受體。在一個方面，F(xiàn)cR是天然序列人FcR。在另一方面,FcR為結(jié)合IgG抗體的受體(Y受體)且包括FeyR1、FcYRII及FeYRIII子類的受體，包括這些受體的對偶基因變體和可變剪接形式。FcyRII受體包括FeyRIIA(“活化受體”)和FeYRIIB(抑制受體”)，所述受體具有主要在其細(xì)胞質(zhì)域方面不同的類似氨基酸序列?；罨荏wFeYRIIA在其細(xì)胞質(zhì)域中含有免疫受體酪氨酸基活化基元(ITAM)。抑制受體FeYRIIB在其細(xì)胞質(zhì)域中含有免疫受體酪氨酸基抑制基元(ITIM)。(參見M.Daeron,Annu.Rev.1mmunol.15:203-234(1997)中的綜述)。FcR綜述于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Tmmunol9:457-92(1991)；Capel等，Immunomethods4:25_34(1994)；以及deHaas等，J.Lab.Clin.Med.126:33-41(1995)中。本文中的術(shù)語“FcR”涵蓋其它FcR，包括將來待鑒定的FcR。所述術(shù)語也包括新生兒受體FcRn，其負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移至胎兒(Guyer等，J.1mmunol.117:587(1976)及Kim等，J.1mmunol.24:249(1994))。[0113]術(shù)語“高變區(qū)”當(dāng)在本文中使用時是指抗體的負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的氨基酸殘基。高變區(qū)通常包含來自“互補決定區(qū)”或“⑶R”的氨基酸殘基(例如輕鏈可變域中的殘基24-34(LI)、50-56(L2)和89-97(L3)以及重鏈可變域中的31-35(HI)、50_65(H2)和95-102(H3)；Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1991))和/或來自“高變環(huán)”的那些殘基(例如輕鏈可變域中的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重鏈可變域中的26-32(HI)、53-55(H2)和96-101(H3);Chothia和LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。“框架區(qū)”或“FR”殘基是除如本文定義的高變區(qū)殘基外的那些可變域殘基?？蓪⒏咦儏^(qū)或其CDR從一個抗體鏈轉(zhuǎn)移至另一抗體鏈或至另一蛋白質(zhì)以賦予所得(復(fù)合)抗體或結(jié)合蛋白以抗原結(jié)合特異性。[0114]“人源化”形式的非人(例如嚙齒動物)抗體是含有源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。人源化抗體大部分是人免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來自接受者的高變區(qū)的殘基經(jīng)來自如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類動物的非人物種(供體抗體)的高變區(qū)的具有所需特異性、親和力和能力的殘基置換。在一些情況下，人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基由相應(yīng)非人殘基置換。此外，人源化抗體可包含未見于接受者抗體或供體抗體中的殘基。進行這些修飾以進一步提高抗體效能。一般而言，人源化抗體將包含實質(zhì)上所有至少一個且通常兩個可變域，其中所有或?qū)嵸|(zhì)上所有高變環(huán)都對應(yīng)于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，并且所有或?qū)嵸|(zhì)上所有FR都是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還將包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)的至少一部分。更多細(xì)節(jié)參見Jones等，Nature321:522-525(1986);Riechmann等，Nature332:323-329(1988);以及Presta,Curr.0p.Struct.Biol.2:593-596(1992)。[0115]“親和力成熟”抗體是相較于不具有變化的親本抗體，在其一個或多個高變區(qū)中具有一個或多個導(dǎo)致抗體對抗原的親和力提高的變化的抗體。在一個方面，親和力成熟抗體將對目標(biāo)抗原具有納摩爾或甚至皮摩爾親和力。親和力成熟抗體是通過本領(lǐng)域中已知的程序制備。Marks等，Bio/TechnologylO:779-783(1992)描述通過VH和VL結(jié)構(gòu)域改組實現(xiàn)親和力成熟。對CDR和/或框架殘基的隨機突變誘發(fā)由以下文獻描述=Barbas等，ProcNat.Acad.Sci,USA91:3809-3813(1994);Schier等，Genel69:147-155(1995);Yelton等，J.1mmunol.155:1994-2004(1995)Jackson等，J.1mmunol.154(7):3310-9(1995)；以及Hawkins等，J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。[0116]“分離的”抗體是已經(jīng)鑒定且與其天然環(huán)境的組分分離和/或自其天然環(huán)境的組分回收的抗體。在某些實施方案中，抗體將:(1)被純化至如通過勞立法(Lowrymethod)所測定大于95重量％蛋白質(zhì)且或者大于99重量(2)被純化至足以通過使用旋杯式測序儀獲得N端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個殘基的程度；或(3)通過使用考馬斯藍(Coomassieblue)或銀染色法，在還原或非還原條件下進行SDS-PAGE被純化至均質(zhì)。分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體，因為抗體的天然環(huán)境的至少一種組分將不存在。然而，通常將通過至少一個純化步驟來制備分離的抗體。[0117]“治療”是指治療性治療與防治性或預(yù)防性措施兩者。需要治療者包括已患有疾病者以及要預(yù)防疾病或其復(fù)發(fā)者。因此，本文中待治療的患者可已診斷為患有疾病或可能易患或易感疾病。術(shù)語“患者”和“受試者”在本文中可互換使用。[0118]配制的抗體是實質(zhì)上純凈的且宜為實質(zhì)上均質(zhì)的(即不合污染性蛋白質(zhì)等)?！皩嵸|(zhì)上純凈”抗體意謂以蛋白質(zhì)的總重量計，包含至少約90重量％、或者至少約95重量％或97重量％抗體的組合物。“實質(zhì)上均質(zhì)”抗體意謂包含蛋白質(zhì)的組合物，其中以蛋白質(zhì)的總重量計，至少約99重量％蛋白質(zhì)是特定抗體,例如抗α4β7抗體。[0119]如本文關(guān)于潰瘍性結(jié)腸炎受試者所用的“臨床緩解”是指完全Mayo計分為2分或小于2分且無個別子計分大于I點?？肆_恩氏病“臨床緩解”是指CDAI計分為150分或小于150分。[0120]如本文關(guān)于潰瘍性結(jié)腸炎受試者所用的“臨床反應(yīng)”是指完全Mayo計分降低3分或3分以上及從基線降低30%(或如果在隨訪時未進行完全Mayo計分，則部分Mayo計分降低2分或2分以上及從基線降低25%或25%以上)，伴有直腸出血子計分降低I分或I分以上或絕對直腸出血計分降低I分或I分以下。如本文關(guān)于克羅恩氏病受試者所用的“臨床反應(yīng)”是指CDAI計分從基線(第O周)降低70分或70分以上。[0121]如本文關(guān)于潰瘍性結(jié)腸炎受試者所用的“粘膜愈合”是指內(nèi)窺鏡子計分為I分或I分以下。[0122]如本文所用，“治療失敗”是指疾病惡化、需要急救藥物或手術(shù)介入來治療潰瘍性結(jié)腸炎或克羅恩氏病。急救藥物是為治療新型或未分型潰瘍性結(jié)腸炎或克羅恩氏病癥狀所需的任何新穎藥物或基線藥物劑量的任何增加(除用于控制慢性腹瀉的止瀉藥以外)。[0123]制劑[0124]如本文所述，已發(fā)現(xiàn)抗α4β7抗體在與抗氧化劑或螯合劑一起配制時更穩(wěn)定。此外，如本文所述，可配制抗α4β7抗體以減少聚集體形成(例如可減少制劑中的聚山梨醇酯80的量)。舉例而言，包含檸檬酸鹽或EDTA和抗α4β7抗體的制劑在儲存期間降低抗體聚集體形成率。也可在無氧氣情況下儲存制劑以減少聚集體形成。在一個實施方案中，制劑在25°C下12個月之后具有小于約2.5%的抗體聚集體形成。在一個實施方案中，制劑在25°C下12個月之后具有小于約2.0%的抗體聚集體形成。在一個實施方案中，制劑在25°C下12個月之后具有小于約1.6%的抗體聚集體形成。在一個實施方案中，制劑在25°C下12個月之后具有小于約1.3%的抗體聚集體形成。在一個實施方案中，制劑在25°C下12個月之后具有小于約1.0%的抗體聚集體形成。在另一個實施方案中，制劑在5°C下12個月之后具有小于約0.5%的抗體聚集體形成。在另一個實施方案中，制劑在5°C下12個月之后具有小于約0.3%的抗體聚集體形成。[0125]在第一方面，本發(fā)明提供一種穩(wěn)定抗α4β7抗體制劑。制劑包含抗α4β7抗體和抗氧化劑或螯合劑。制劑也包含可為一種或多種游離氨基酸的緩沖劑。制劑可任選進一步包含表面活性劑。制劑中的抗體可為全長抗體或其抗原結(jié)合片段，如Fab、Fv、scFv、Fab'或F(ab')2片段。[0126]可通過從制劑移除氧氣來減少聚集體形成?；蛘撸苿┛珊锌寡趸瘎┗蝌蟿?。在一個方面，可包括于制劑中的示例性抗氧化劑和螯合劑包括硫辛酸、尿酸、谷胱甘肽、生育酚、胡蘿卜素、西紅柿紅素、半胱氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇四乙酸(EGTA)、二巰基丙醇、二乙三胺五乙酸和N，N-雙(羧甲基)甘氨酸、膦酸酯化合物(例如依替膦酸)、去鐵胺、蘋果酸鹽以及檸檬酸鹽。一些抗氧化劑和螯合劑可在制劑儲存期間降低聚集體形成率。在另一方面，螯合劑和/或抗氧化劑是檸檬酸鹽或EDTA。液體制劑的示例性螯合劑濃度在約大于OmM至約60mM、約5mM至約50mM、約5mM至約15mM、約IOmM至約25mM及約20mM至約30mM范圍內(nèi)。在另一方面，螯合劑濃度是約OmM至約30mM。在一個實施方案中，螯合劑和/或抗氧化劑是檸檬酸鹽，并且檸檬酸鹽濃度是約OmM至約15mM、約OmM至約IOmM或約OmM至約5mM。[0127]制劑可含有任何一種所需游離氨基酸，其可呈L型、D型或這些形式的任何所需混合物。在一個方面，可包括于制劑中的游離氨基酸包括例如組氨酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸、絲氨酸、賴氨酸、色氨酸、纈氨酸、半胱氨酸以及其組合。一些氨基酸可例如通過氫鍵、鹽橋、抗氧化性質(zhì)或疏水性相互作用或通過從蛋白質(zhì)表面排除而在制造、干燥、凍干和/或儲存期間穩(wěn)定化蛋白質(zhì)免遭降解。氨基酸可充當(dāng)張力調(diào)節(jié)劑或可用于降低制劑粘度。在另一方面，游離氨基酸(如組氨酸和精氨酸)可充當(dāng)凍干保護劑，并且當(dāng)凍干為制劑的組分時不結(jié)晶。單獨或呈組合形式的游離氨基酸(如谷氨酸和組氨酸)可無當(dāng)pH在5至7.5范圍內(nèi)的水溶液中的緩沖劑。在另一方面，制劑含有組氨酸、精氨酸或組氨酸與精氨酸的組合。在另一方面，液體制劑的游離氨基酸濃度在約9mM至約0.5M范圍內(nèi)，例如為約IOmM至約90mM、約IOmM至約75mM、約IOmM至約40mM、約25mM至約50mM、約15mM至約300mM、約20mM至約200mM、約25mM至約150mM、約50mM至約75mM、約50mM至約120mM、約50mM至約150mM或約50mM或約125mM。[0128]制劑可任選進一步含有至少一種表面活性劑例如以控制可溶性和不溶性聚集體形成。在一個方面，表面活性劑是非離子表面活性劑。在另一方面，表面活性劑是離子型表面活性劑。可包括于制劑中的示例性表面活性劑包括例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆(泊洛尼克?)以及其組合。當(dāng)存在時，表面活性劑通常以減少在聚硅氧、填充小瓶、預(yù)填充注射器和/或藥筒存在下例如在裝瓶、冷凍、干燥、凍干和/或復(fù)原期間不溶性抗體聚集體形成的量包括在內(nèi)。表面活性劑濃度通常是約0.0001%至約1.0%、約0.01%至約0.5%，例如是約0.05%、0.1%,0.15%、0.20%、0.3%、0.4%或0.5%(w/V)。較高濃度的表面活性劑(例如聚山梨醇酯80)可導(dǎo)致更多SEC聚集體形成。降低聚山梨醇酯80的濃度可減少在儲存時SEC聚集體的形成。在一個方面，表面活性劑:抗體摩爾比是約0.7:I至約2.0:1。在另一方面，表面活性劑:抗體摩爾比是1.5:1。[0129]抗α4β7抗體制劑的一個實施方案含有高濃度抗α4β7抗體。舉例而言，在一個實施方案中，液體制劑可包含至少約60mg/ml、至少約70mg/ml、至少約80mg/ml、至少約90mg/ml、至少約IOOmg/ml、至少約IlOmg/ml、至少約120mg/ml、至少約130mg/ml、至少約140mg/ml、至少約150mg/ml、至少約160mg/ml、至少約170mg/ml、至少約180mg/ml、至少約190mg/ml、至少約200mg/ml、至少約250mg/ml、至少約300mg/ml、約60mg/ml至約190mg/ml、約60mg/ml至約170mg/ml抗a4β7抗體、約150mg/ml至約180mg/ml或約160mg/ml或約165mg/ml抗a4β7抗體?；蛘?，在另一方面，液體制劑可包含至少約154mg/ml、至少約176mg/ml。[0130]制劑可為液體或固體。液體制劑是在適合水性溶劑(如水)或水性/有機混合物(如水醇混合物)中制備的水溶液或懸浮液。液體制劑的pH介于約5.5與約7.5之間、約6.0與7.3之間、約6.0與約7.0之間、約6.0與6.5之間、約6.0與6.3之間、約6.3與7.1之間或約6.4與7.0之間或6.3與6.8之間，如為約6.0,6.1,6.2,6.3,6.4,6.5,6.6、6.7,6.8或6.9。液體制劑可保持于室溫下、冷藏(例如2°C至8V)或冷凍(例如_20°C或-70°C)以實現(xiàn)儲存。[0131]固體制劑可例如在添加凍干保護劑的情況下以任何適合方法制備且可呈例如餅或粉末形式。在一個方面，通過干燥如本文所述的液體制劑(例如通過凍干或噴霧干燥)來制備固體制劑。當(dāng)制劑為固體制劑時，制劑的水分含量可不超過約5%、不超過約4.5%、不超過約4%、不超過約3.5%、不超過約3%、不超過約2.5%、不超過約2%、不超過約1.5%、不超過約1%，或為實質(zhì)上無水的?？蓪⒐腆w制劑溶解(即復(fù)原)于適合介質(zhì)或溶劑中以變?yōu)檫m于施用的液體。適用于復(fù)原固體制劑的溶劑包括水、等張生理食鹽水、緩沖液(例如磷酸鹽緩沖生理食鹽水)、林格氏(Ringeds)(乳酸鹽或右旋糖)溶液、最低必需培養(yǎng)基、醇/水溶液、右旋糖溶液等。溶劑的量可導(dǎo)致治療性蛋白質(zhì)濃度與干燥前濃度相比更高、相同或更低。在另一方面，復(fù)原的抗α4β7抗體濃度與干燥前液體制劑中的濃度相同。[0132]制劑可為無菌的，并且這可在制備制劑之前或之后根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知用于產(chǎn)生適于向人受試者施用的無菌藥物制劑的程序來實現(xiàn)。制劑可例如在干燥之前和/或復(fù)原之后，通過經(jīng)小孔隙過濾、通過無菌處理或通過暴露于紫外輻射以液體形式來滅菌。過濾器孔隙尺寸可為0.1μm或0.2μπι以過濾微生物或為IOnm至20nm以過濾病毒顆粒?；蛘呋蛄硗?，干燥制劑可例如通過暴露于Y福射來滅菌。在一個方面，抗α4β7抗體液體制劑是通過在干燥之前過濾來滅菌。[0133]在一個方面，制劑在儲存時是`穩(wěn)定的。各種穩(wěn)定性測定可為熟練從業(yè)者用于證實制劑的穩(wěn)定性。舉例而言，液體制劑中的抗體當(dāng)儲存于約25°C下時可穩(wěn)定至少約4周、至少約2個月、至少約3個月或至少約6個月或至少約9個月或至少約12個月；在約2°C至8°C下穩(wěn)定至少約3個月、至少約I年、至少約2年、至少約3年或3年以上?；蛘呋虼送?，制劑中的抗體當(dāng)儲存于約15°C下時可穩(wěn)定至少約4周、至少約3個月、至少約6個月、至少約9個月、至少約I年或I年以上?；蛘呋虼送猓苿┲械目贵w當(dāng)儲存于約_20°C或_70°C下時可穩(wěn)定至少約4周、至少約3個月、至少約6個月、至少約9個月、至少約I年、至少約2年、至少約3年、至少約4年或4年以上。[0134]可通過評估制劑中的抗體在配制時以及在指示溫度下儲存之后的物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性和/或生物活性來測試穩(wěn)定性。可以多種不同方法定性和/或定量評估液體制劑或復(fù)原干燥粉末的物理和/或化學(xué)穩(wěn)定性(參見例如AnalyticalTechniquesforBiopharmaceuticalDevelopment,Rodriguez-Diaz等編，InformaHealthcare(2005)),包括評估可溶性和不溶性聚集體形成(例如使用尺寸排阻色譜法、分析性超速離心、MALD1-TOFMS、光散射(動態(tài)(DLS)或MALLS)、基于流動的顯微鏡成像或其它液體顆粒計數(shù)系統(tǒng)、通過測量混濁度、通過密度梯度離心和/或通過目視檢查)；通過使用陽離子交換色譜(也參見Vlasak和1nescu,Curr.Pharm.Biotechnol.9:468-481(2008)以及Harris等，J.Chromatogr.BBiomed.Sc1.Appl.752:233-245(2001))、等電驟焦或毛細(xì)管帶電泳評估電荷非均勻性；氨基端或羧基端序列分析；質(zhì)譜分析；SDS-PAGE分析以比較片段化、完整和多聚(即二聚、三聚等)抗體；肽圖(例如胰蛋白酶或LYS-等)。不穩(wěn)定性可導(dǎo)致聚集、脫酰胺(例如Asn脫酰胺)、氧化(例如Met氧化)、異構(gòu)化(例如Asp異構(gòu)化)、變性、剪短/水解/片段化(例如鉸鏈區(qū)片段化)、丁二酰亞胺形成、不成對半胱氨酸、N端延長、C端加工、糖基化差異等。可使用熟練從業(yè)者可用的多種技術(shù)來評估生物活性或抗原結(jié)合功能(例如抗α4β7抗體與MAdCAM(例如MAdCAM-1)的結(jié)合或抑制表達α4β7整合素的細(xì)胞與MAdCAM(例如MAdCAM-1)(例如固定MAdCAM(例如MAdCAM-1))的結(jié)合)(參見例如SoIer等，J.Pharmacol.Exper.Ther.330:864-875(2009))。測量干燥制劑的水分含量可指示制劑將經(jīng)受化學(xué)或物理降解的可能性，水分含量越高，降解越多。[0135]穩(wěn)定制劑可促成抗α4β7抗體的低免疫原性。免疫原性抗α4β7抗體可導(dǎo)致人受試者或患者的人抗人抗體(HAHA)反應(yīng)。對抗α4β7抗體顯現(xiàn)HAHA反應(yīng)的患者在治療時可具有不利事件(例如部位輸注反應(yīng))或可快速消除抗α4β7抗體，從而導(dǎo)致劑量低于治療所計劃的劑量。對抗α4β7抗體治療的早期研究的報道(Feagen等(2005)N.Engl.J.Med.352=2499-2507)指示截至第8周在44%治療患者中產(chǎn)生人抗人抗體。此研究中的抗體是以液體形式儲存且不合有任何聚山梨醇酯。[0136]在一些實施方案中，相較于穩(wěn)定性較小的制劑的HAHA結(jié)果，制劑可使HAHA陰性患者的比例增加至患者的至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。[0137]在一些實施方案中，抗α4β7抗體制劑具有≥50%主要帶電荷亞型、≥55%主要帶電荷亞型或65%至70%主要帶電荷亞型。在其它方面，穩(wěn)定抗α4β7抗體制劑具有(45%酸性帶電荷亞型、<40%酸性帶電荷亞型、<30%酸性帶電荷亞型或22%至28%酸性亞型。在其它方面，穩(wěn)定抗α4β7抗體制劑具有<25%堿性亞型、<20%堿性亞型、≤15%堿性亞型、約5%堿性亞型或約10%堿性亞型。在一個方面，例如如通過CEX所測定，穩(wěn)定抗α4β7抗體制劑具有≥55%主要亞型、≤30%酸性亞型和/或≤20%堿性亞型。在另一方面，例如如通過ClEF所測定，穩(wěn)定抗α4β7抗體制劑具有>50%主要亞型、(45%酸性亞型和/或<10%堿性亞型。[0138]在一些方面，抗α4β7抗體干燥固體制劑具有<10%水分含量、<5%水分含量或<2.5%水分含量。復(fù)原所需時間<60分鐘、<50分鐘或<40分鐘或<30分鐘或<20分鐘。[0139]可通過SEC、分析性超速離心、光散射(DLS或MALLS)、MALD1-TOFMS或納米尺寸測量(如納米粒子徑跡分析NTA,NanoSightLtd,Wiltshire,UK)來測量即液體制劑或復(fù)原制劑中的單體含量和/或聚集體含量(例如呈二聚體、三聚體、四聚體、五聚體、寡聚物和更高級聚集體形式)。可以許多方法實現(xiàn)聚集體的解析、表征和定量，所述方法包括例如通過較長管柱或通過連續(xù)附接第二或更多SEC管柱與初始分析SEC管柱串聯(lián)來增加SEC管柱分離的長度；用光散射補充SEC對單體的定量；或通過使用NTA。[0140]在一個實施方案中，抗α4β7抗體制劑具有>90%單體抗體、>95%單體抗體或97%至99%單體抗體。在另一個實施方案中，抗α4β7抗體制劑中的大部分物質(zhì)的平均半徑≤20nm、≤15nm≤IOnm,或為約5nm至約7nm。在一個方面，根據(jù)蛋白質(zhì)分析，抗α4β7抗體制劑具有>80%量的重鏈加輕鏈。在一個方面，存在>90%重鏈加輕鏈。在另一方面，抗α4β7抗體制劑具有≥10%聚集體、≥5%聚集體、≥2.5%聚集體、≥1.5%聚集體、<1.0%聚集體或<0.5%聚集體。在另一方面，穩(wěn)定抗α4β7抗體制劑具有>96%單體和/或<2.5%聚集體。在另一方面，穩(wěn)定抗α4β7抗體制劑具有約99%單體和/或約<I%聚集體。[0141]可通過光遮蔽(例如HachUltraAnalytics(GrantsPass,OR)的液體顆粒計數(shù)系統(tǒng)(HIAC))、顯微法、庫爾特計數(shù)器或基于數(shù)字(例如基于流動)顯微鏡成像的系統(tǒng)(如Brightwell(Ottawa,CA)的微流體(microfIuidics)成像(MFI)或FluidImagingTechnologies(Yarmouth,ME)的FLOWCAM?Image顆粒分析儀)來測量即液體制劑或復(fù)原制劑中的聚集體或未溶解賦形劑的例如大于1-2微米的粒度。在一個方面，抗α4β7抗體制劑中的粒度是約30μm、約25μm、約10μm、約5μm、約2μm或Iμm或Iμm以下。應(yīng)將抗體制劑中的顆粒的量減至最少。在一個方面，在一個劑量中，抗α4β7抗體制劑中的顆粒的量是≥IOym直徑<6000個顆粒和/或≥25μm直徑<600個顆粒(美國藥典(U.S.Pharmacopoeia)第788章，光遮蔽計數(shù)法；一半那些量是通過顯微鏡定量法測定)。在另一方面，在一個劑量的抗α4β7抗體制劑中，顆粒的量是>ΙΟμπι約1000個顆粒和>25μπι約0-100個顆粒(MFI方法)。在另一方面，例如通過MFI測量，在一個劑量的抗α4β7抗體制劑中，每毫升的顆粒量是每毫升約500個至約2000個2_10μm顆粒、每毫升約50個至約350個≥IOum顆粒和每毫升約O個至約50個≥25μm顆粒。在另一方面,在一個劑量的抗α4β7抗體制劑中，顆粒量是每毫升約500個至約100，000個、約1000個至約5000個或約1500個至約3000個2_10μm顆粒。[0142]可控制抗α4β7抗體制劑的粘度以實現(xiàn)皮下或肌內(nèi)施用。粘度可受蛋白質(zhì)濃度和pH影響。舉例而言，隨著蛋白質(zhì)濃度升高,粘度可增加。pH升高可使抗α4β7抗體制劑的粘度降低。在一些蛋白質(zhì)制劑中，添加氯化鈉以降低制劑粘度?？捎绊懣功?β7抗體制劑粘度的其它組分是氨基酸，如組氨酸和精氨酸。[0143]抗α4β7抗體制劑可為等張的(例如250-350m0sm)或高張的(例如大于350m0sm、大于450m0sm、大于550m0sm或大于650m0sm),例如以供皮下或肌內(nèi)施用。在一個方面，抗α4β7抗體制劑不為低張的，例如小于250m0sm。在另一方面，抗α4β7抗體制劑是約350m0sm至約400m0sm、約400m0sm至約450m0sm或約350m0sm至約450m0sm。[0144]導(dǎo)致變性的不穩(wěn)定性可通過差示掃描熱量測定(DSC)來評估。在DSC中，抗體具有兩個熔融溫度(Tm)，例如Tml和Tm2。某些賦形劑可影響天然抗α4β7抗體的穩(wěn)定性。當(dāng)通過DSC比較制劑時,熔融溫度較高的研究結(jié)果可指示Tm較高的抗α4β7抗體制劑更穩(wěn)定。舉例而言，在βΗ5.7下，相較于在ρΗ6.5下，抗α4β7抗體制劑的Tm更低，并且因此穩(wěn)定性較小。在一個方面，抗α4β7抗體制劑的Tml>60°C。在另一方面，抗α4β7抗體制劑的Tml是約65°C至約70°C或約69°C。在一個方面，抗α4β7抗體制劑的Tm2>80°C。在另一方面，抗α4β7抗體制劑的Tm2是約82°C至約88°C或約86°C。[0145]在一個實施方案中，抗α4β7抗體制劑的結(jié)合親和力或EC50值是參考標(biāo)準(zhǔn)抗α4β7抗體的約60%至約140%。在一個方面，本文所述的制劑中的抗α4β7抗體以參考標(biāo)準(zhǔn)的約80%至約120%的值結(jié)合于例如于細(xì)胞上的a4P7(W098/06248或美國專利號7，147，851)。在另一個實施方案中，抗α4β7抗體制劑能夠抑制表達α4β7整合素的細(xì)胞與MAdCAM(例如MAdCAM-1)(例如MAdCAM-1g嵌合體)的結(jié)合至少50%或至少60%(參見美國專利申請公布號20070122404，也參考標(biāo)準(zhǔn)實施例)。[0146]如上所指示，在本文中明確涵蓋將制劑冷凍。因此，可測試制劑在冷凍和解凍時的穩(wěn)定性。因此，液體制劑中的抗體在冷凍和解凍制劑時可為穩(wěn)定的，例如抗體在一個、兩個、三個、四個、五個或五個以上冷凍/解凍循環(huán)之后可為穩(wěn)定的。[0147]在一些實施方案中，藥物制劑是包含至少約60mg/ml至約170mg/ml抗α4β7抗體、緩沖劑(例如組氨酸)和至少約5mM檸檬酸鹽的液體制劑。在其它實施方案中，制劑是包含至少約60mg/ml至約170mg/ml抗α4β7抗體、緩沖劑(例如檸檬酸鹽)、氨基酸(例如精氨酸)和表面活性劑(例如聚山梨醇酯80)的液體制劑。[0148]在另一個實施方案中，制劑包含至少約140mg/ml或約150mg/ml至約170mg/ml(例如約160mg/ml)抗α4β7抗體、緩沖劑(例如組氨酸)、至少約5mM檸檬酸鹽和游離氨基酸(例如精氨酸)。[0149]在另一個實施方案中，制劑包含至少約160mg/ml抗α4β7抗體、緩沖劑(例如組氨酸)、至少約5mM檸檬酸鹽、0.2%聚山梨醇酯80和游離氨基酸(例如精氨酸)。在一個實施方案中，制劑中的緩沖劑濃度是約15mM至約75mM、約25mM至約65mM或是約50mM。制劑中的游離氨基酸濃度是約50mM至約250mM、約75mM至約200mM、約IOOmM至約150mM或是約125mM;制劑中的聚山梨醇酯80濃度是約0.05%至0.4%、約0.1%至0.4%、約0.1%至0.3%、約0.1%至0.25%、約0.1%至0.2%或是約0.2%。[0150]在一些實施方案中，制劑是固體制劑(例如凍干制劑)，其包含抗α4β7抗體、檸檬酸鹽、組氨酸、精氨酸、聚山梨醇酯80和凍干保護劑或糖(如非還原糖)的混合物。糖可以達到0%至20%或約6%至約10%的濃度包括于液體制劑中。[0151]在一個實施方案中，將制劑凍干且以單次劑量形式儲存于一個容器(例如小瓶、注射器、藥筒和/或自動注射器)中。容器可儲存于約2-8°C或25°C下直至將其向有需要的受試者施用。小瓶可例如是5cc、10`cc或20cc小瓶(例如用于160mg/ml劑量)。小瓶可含有至少約20mg、至少約50mg、至少約70mg、至少約80mg、至少約lOOmg、至少約120mg、至少約155mg、至少約180mg、至少約200mg、至少約240mg、至少約300mg、至少約360mg、至少約400mg、至少約540mg或至少約900mg抗α4β7抗體。在一個方面，容器含有約165mg抗α4β7抗體。[0152]在另一個實施方案中，制劑是液體且以單次劑量形式儲存于一個或兩個小瓶、藥筒、注射器或自動注射器中。小瓶、藥筒、注射器或自動注射器可儲存于約2-8°C下直至向有需要的受試者施用其內(nèi)含物，例如抗α4β7抗體。小瓶可例如是5cc、10cc或20cc小瓶(例如用于160mg/ml劑量)。小瓶可含有至少約20mg、至少約50mg、至少約70mg、至少約80mg、至少約lOOmg、至少約120mg、至少約155mg、至少約180mg、至少約200mg、至少約240mg、至少約300mg、至少約360mg、至少約400mg、至少約540mg或至少約900mg抗α4β7抗體。在一個方面，小瓶含有約165mg抗α4β7抗體。注射器或藥筒可為ImL或2mL容器(例如用于160mg/mL劑量)或大于2ml,例如用于較高劑量(至少320mg或400mg或400mg以上)。注射器或藥筒可含有至少約20mg、至少約50mg、至少約70mg、至少約80mg、至少約lOOmg、至少約120mg、至少約155mg、至少約180mg、至少約200mg、至少約240mg、至少約300mg、至少約360mg、至少約400mg或至少約500mg抗α4β7抗體。[0153]一種或多種其它藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑(如Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,第21版，Hendrickson,R.編(2005)中所述者)可包括于制劑中，只要其不會不利影響制劑的所需特征即可?？山邮艿妮d體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所用劑量和濃度下對接受者無毒且包括其它緩沖劑；共溶劑；抗氧化劑，包括檸檬酸鹽和半胱氨酸；螯合劑，如EDTA;金屬復(fù)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)；生物可降解聚合物，如聚酯；防腐劑；出于注射便利的容器壁潤滑劑，例如聚硅氧、礦物油、甘油或TRIBOGLIDE?(TriboFilmResearch,Inc.)全氟聚醚衍生物；和/或成鹽相對離子，如鈉。[0154]α4β7杭體[0155]適用于制劑中的抗α4β7抗體包括來自任何所需來源的抗體，如完全人抗體、鼠類抗體、兔抗體等；及任何所需工程改造抗體，如嵌合抗體、人源化抗體等。這些類型抗體的任一個的抗原結(jié)合片段(如Fab、Fv、scFv、Fab'和F(ab')2片段)也適用于制劑中。[0156]抗α4β7抗體可結(jié)合于α4鏈(例如人源化MAb21.6(Bendig等，美國專利號5，840，299))、β7鏈(例如FIB504或人源化衍生物(例如Fong等，美國專利號7，528，236))上的表位，或結(jié)合于由α4鏈與β7鏈締合所形成的組合表位。在一個方面，抗體結(jié)合α4β7復(fù)合物上的組合表位,但不結(jié)合α4鏈或β7鏈上的表位，除非所述鏈彼此締合。α4整合素與β7整合素的締合可例如通過引入存在于一起構(gòu)成表位的兩個鏈上的鄰近殘基或通過構(gòu)象暴露一個鏈(例如α4整合素鏈或β7整合素鏈)上的在不存在適當(dāng)整合素搭配物或不存在整合素活化下不可實現(xiàn)抗體結(jié)合的表位結(jié)合位點來產(chǎn)生組合表位。在另一方面，抗α4β7抗體結(jié)合α4整合素鏈與β7整合素鏈兩者，并且因此對于α4β7整合素復(fù)合物具有特異性。所述抗體可例如結(jié)合α4β7但不結(jié)合α4βI且/或不結(jié)合αΕβ7。在另一方面，抗α4β7抗體與Act-1抗體結(jié)合于相同或?qū)嵸|(zhì)上相同表位(Lazarovits,A.1.等，J.Tmmunol.,133(4):1857-1862(1984);Schweighoffer等，J.1mmunol.,151(2):717-729,1993；Bednarczyk等，J.Biol.Chem.,269(11):8348-8354,1994)。產(chǎn)生鼠類Act-1單克隆抗體的鼠類ACT-1雜交瘤細(xì)胞系是根據(jù)2001年8月22日的布達佩斯條約(BudapestTreaty)的規(guī)定，以MillenniumPharmaceuticals,Inc.，40LandsdowneStreet,Cambridge,Mass.02139,U.S.A.名義以寄存編號PTA-3663存放于美國菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection),10801UniversityBoulevard,Manassas，Va.20110-2209，U.S.A.。在另一方面，抗α4β7抗體是使用美國專利申請公布號2010/0254975中提供的⑶R的人抗體或α4β7結(jié)合蛋白。[0157]在一個方面，抗α4β7抗體抑制α4β7與其一個或多個配體(例如粘膜地址素(例如MAdCAM(例如MAdCAM-1))、纖維結(jié)合蛋白和/或血管地址素(VCAM))結(jié)合。靈長類動物MAdCAM(例如MAdCAM-1)描述于PCT公布W096/24673中，所述公布的全部教義以引用的方式并入本文。在另一方面，抗α4β7抗體抑制α4β7與MAdCAM(例如MAdCAM-1)和/或纖維結(jié)合蛋白結(jié)合而不抑制結(jié)合VCAM。[0158]在一個方面，適用于制劑中的抗α4β7抗體是小鼠AcM抗體的人源化形式。適于制備人源化抗體的方法在本領(lǐng)域中是眾所周知的。一般而言，人源化抗α4β7抗體將含有包含小鼠Act-1抗體的3個重鏈互補決定區(qū)(CDR，CDRl，SEQIDNO:8、CDR2，SEQIDNO:9和⑶R3，SEQIDNO:10)和適合人重鏈框架區(qū)的重鏈；且也含有包含小鼠Act-1抗體的3個輕鏈CDR(CDR1，SEQIDNO:11、CDR2,SEQIDNO:12及CDR3，SEQIDNO:13)和適合人輕鏈框架區(qū)的輕鏈。人源化Act-1抗體可含有具有或不具有氨基酸取代的任何適合人框架區(qū)，包括共有框架區(qū)。舉例而言，一個或多個框架氨基酸可經(jīng)另一氨基酸(如小鼠Act-1抗體中相應(yīng)位置處的氨基酸)置換。如果存在，則人恒定區(qū)或其部分可源于人抗體(包括對偶基因變體)的K或λ輕鏈和/或Y(例如Y1、Y2>Y3>Y4)、、α(例如α1、α2)、δ或ε重鏈?？蛇x擇特定恒定區(qū)(例如IgGl)、其變體或部分以調(diào)整效應(yīng)功能。舉例而言，可將突變恒定區(qū)(變體)并入融合蛋白中以使與Fe受體的結(jié)合和/或固定補體的能力減至最小(參見例如Winter等，GB2,209，757Β;Morrison等，W089/07142;Morgan等，W094/29351，1994年12月22日)。Act-1抗體的人源化形式描述于PCT公布號W098/06248和W007/61679中，其各自的全部教義以引用的方式并入本文。[0159]在另一方面，適用于制劑中的抗α4β7人源化抗體包含包括SEQIDNO:2的氨基酸20至140的重鏈可變區(qū)；和包括SEQIDNO:4的氨基酸20至131或SEQIDNO:5的氨基酸21至132的輕鏈可變區(qū)。如果需要，則可存在適合人恒定區(qū)。舉例而言，人源化抗α4β7抗體可包含包括SEQIDNO:2的氨基酸20至470的重鏈和包括SEQIDNO:5的氨基酸21至239的輕鏈。在另一個實施例中，人源化抗α4β7抗體可包含包括SEQIDNO:2的氨基酸20至470的重鏈和包括SEQIDNO:4的氨基酸20至238的輕鏈。圖4顯示比較人抗體與鼠類抗體的同屬輕鏈比對。所述比對說明兩個小鼠殘基轉(zhuǎn)換為人殘基的維多珠單抗(例如化學(xué)文摘社(ChemicalAbstractService,CAS,美國化學(xué)學(xué)會(AmericanChemicalSociety))登記編號943609-66-3)的人源化輕鏈比LDP-02的輕鏈(圖3)更類人。此外，LDP-02具有輕微疏水性、可撓性丙氨酸114和親水性位點(天冬氨酸115)，其在維多珠單抗中置換為輕微親水性的含羥基蘇氨酸114和疏水性的可能面向內(nèi)部的纈氨酸115殘基。[0160]抗體序列的其它取代可為例如重鏈和輕鏈框架區(qū)的突變，如SEQIDN0:14的殘基2上的異亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸；SEQIDNO:14的殘基4上的甲硫氨酸突變?yōu)槔i氨酸；SEQIDNO:15的殘基24上的丙氨酸突變?yōu)楦拾彼?；SEQIDNO:15的殘基38處的精氨酸突變?yōu)橘嚢彼幔籗EQIDNO:15的殘基40處的丙氨酸突變?yōu)榫彼?；SEQIDNO:15的殘基48上的甲硫氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?；SEQIDNO:15的殘基69上的異亮氨酸突變?yōu)榱涟彼?；SEQIDNO:15的殘基71上的精氨酸突變?yōu)槔i`氨酸；SEQIDNO:15的殘基73上的蘇氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔换蚱淙魏谓M合；及用小鼠Act-1抗體的CDR(CDR1，SEQIDNO:8、CDR2，SEQIDNO:9和CDR3，SEQIDNO:10)置換重鏈CDR;以及用小鼠Act-1抗體的輕鏈CDR(CDR1，SEQIDNO:11、CDR2，SEQIDNO:12和CDR3,SEQIDNO:13)置換輕鏈CDR。[0161]在一些實施方案中，用于制劑中的抗α4β7人源化抗體包含與SEQIDNO:2的氨基酸20至140具有約95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的重鏈可變區(qū)，以及與SEQIDNO:4的氨基酸20至131或SEQIDNO:5的氨基酸21至132具有約95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的輕鏈可變區(qū)?？墒褂萌笔?shù)，使用適合序列比對算法(如Lasergene系統(tǒng)(DNASTAR,Inc.,Madison,Wis))測定氨基酸序列一致性。在一個實施方案中，用于制劑中的抗α4β7抗體是維多珠單抗(CAS，美國化學(xué)學(xué)會，登記編號943609-66-3)。[0162]其它α4β7抗體也可用于本文所述的制劑和給藥方案中。舉例而言，以全文引用的方式并入本文的US2010/0254975(Amgen,Inc.)中描述的α4β7抗體適用于治療個體的炎性腸病的制劑和方法中。[0163]抗α4β7抗體可通過在活細(xì)胞(例如培養(yǎng)的細(xì)胞)中表達編碼各鏈的核酸序列來產(chǎn)生?？衫枚喾N宿主-表達載體系統(tǒng)來表達本發(fā)明的抗體分子。所述宿主-表達系統(tǒng)表示借此相關(guān)編碼序列可產(chǎn)生且隨后純化的載體，但也表示當(dāng)用適當(dāng)核苷酸編碼序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染時可原位表達抗α4β7抗體的細(xì)胞。這些系統(tǒng)包括但不限于微生物，如用含有抗體編碼序列的重組噬菌體DNA、質(zhì)粒DNA或粘質(zhì)粒DNA表達載體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌(例如大腸桿菌(E.coli)、枯草桿菌(B.subtilis));用含有抗體編碼序列的重組酵母表達載體轉(zhuǎn)化的酵母(例如酵母(Saccharomyces)、畢赤酵母(Pichia));用含有抗體編碼序列的重組病毒表達載體(例如桿狀病毒)感染的昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)；用重組病毒表達載體(例如花椰菜嵌紋病毒CaMV、煙草嵌紋病毒TMV)感染或用含有抗體編碼序列的重組質(zhì)粒表達載體(例如Ti質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；或具有含有源自哺乳動物細(xì)胞的基因組(例如金屬硫蛋白啟動子)或哺乳動物病毒(例如腺病毒晚期啟動子、痘瘡病毒7.5K啟動子)的啟動子的重組表達構(gòu)建體的哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)(例如COS、CHO、BHK、293、3T3、NSO細(xì)胞)。舉例而言，與載體(如來自人巨大細(xì)胞病毒的主要中早期基因啟動子元件)聯(lián)合的哺乳動物細(xì)胞(如中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinesehamsterovarycell,CHO))是抗體的有效表達系統(tǒng)(Foecking等，Gene45:101(1986);Cockett等，Bio/Technology8:2(1990))。[0164]在細(xì)菌系統(tǒng)中，許多表達載體宜視所表達的抗體分子的預(yù)期用途來選擇。舉例而言，當(dāng)希望產(chǎn)生大量所述蛋白質(zhì)以產(chǎn)生抗體分子的藥物組合物時，指導(dǎo)表達高含量的易于純化的融合蛋白產(chǎn)物的載體可為合乎需要的。所述載體包括但不限于大腸桿菌表達載體pUR278(Ruther等，EMBOJ.2:1791(1983))，其中抗體編碼序列可個別地與lacZ編碼區(qū)同框連接至載體中以便產(chǎn)生融合蛋白；pIN載體(Inouye和Inouye,NucleicAcidsRes.13:3101-3109(1985)；VanHeeke和Schuster,J.Biol.Chem.24:5503-5509(1989))等。pGEX載體也可用于以與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)的融合蛋白形式表達外來多肽。一般而言，所述融合蛋白是可溶性的，并且可易于通過吸附及結(jié)合于基質(zhì)谷胱甘肽-瓊脂糖珠粒，隨后在游離谷胱甘肽存在下洗脫而從溶解細(xì)胞純化。PGEX載體經(jīng)設(shè)計以包括凝血酶或因子Xa蛋白酶裂解位點以便可從GST部分釋放克隆的目標(biāo)基因產(chǎn)物。[0165]在一昆蟲系統(tǒng)中，使用加洲苜猜夜蛾核多角體病毒(Autographacalifomicanuclearpolyhedrosisvirus,AcNPV)作為表達外來基因的載體。病毒生長于草地粘蟲(Spodopterafrugiperda)細(xì)胞中?？蓪⒖贵w編碼序列個別地克隆至病毒的非必需區(qū)域(例如多角體蛋白基因)中且置于AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)的控制下。[0166]在哺乳動物宿主細(xì)胞中，可利用許多基于病毒的表達系統(tǒng)。在使用腺病毒作為表達載體的情況下，相關(guān)抗體編碼序列可連接至腺病毒轉(zhuǎn)錄/翻譯控制復(fù)合物(例如晚期啟動子和三聯(lián)前導(dǎo)序列)。隨后可通過體外或體內(nèi)重組將這個嵌合基因插入腺病毒基因組中。插入病毒基因組的非必需區(qū)域(例如區(qū)域El或E3)中將產(chǎn)生活的且能夠在受感染宿主中表達抗體分子的重組病毒(例如參見Logan和Shenk,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81:355-359(1984))。也可需要特定起始信號來有效翻譯插入的抗體編碼序列。這些信號包括ATG起始密碼子和鄰近序列。此外，起始密碼子必須與所需編碼序列的閱讀框架同相以確保翻譯全部插入物。這些外源翻譯控制信號和起始密碼子可具有多種來源，天然與合成兩者均可?？赏ㄟ^包括適當(dāng)轉(zhuǎn)錄增強子元件、轉(zhuǎn)錄終止子等來增強表達效率(參見Bittner等，MethodsinEnzymol.153:51-544(1987))。[0167]此外，可選擇調(diào)節(jié)插入序列的表達或以所需特定方式修飾并加工基因產(chǎn)物的宿主細(xì)胞株。對蛋白質(zhì)廣物的所述修飾(例如糖基化)和加工(例如裂解)就蛋白質(zhì)功能而目可為重要的。不同宿主細(xì)胞具有翻譯后加工和修飾蛋白質(zhì)和基因產(chǎn)物的特征性及特定機制?？蛇x擇適當(dāng)細(xì)胞系或宿主系統(tǒng)以確保對表達的外來蛋白質(zhì)進行適當(dāng)修飾和加工。為此目的，可使用具有用于適當(dāng)加工初級轉(zhuǎn)錄物、糖基化及磷酸化基因產(chǎn)物的細(xì)胞機制的真核宿主細(xì)胞。所述哺乳動物宿主細(xì)胞包括但不限于中國倉鼠卵巢(CHO)、NSO、HeLa、VERY、幼小倉鼠腎(BHK)、猴，腎(COS)、MDCK、293、3T3、WI38、人肝細(xì)胞癌細(xì)胞(例如H印G2)、乳癌細(xì)胞系(例如像BT483、Hs578T、HTB2、BT20和T47D)以及正常乳腺細(xì)胞系(例如像CRL7030和Hs578Bst)。[0168]不同細(xì)胞類型的糖基化機制可產(chǎn)生糖基化組成不同于另一細(xì)胞類型或無糖基化(如在細(xì)菌細(xì)胞的情況下)的抗體。在一個方面，用于產(chǎn)生抗α4β7抗體的細(xì)胞類型是哺乳動物細(xì)胞，如NSO或CHO細(xì)胞。在一個方面，哺乳動物細(xì)胞可包含缺失細(xì)胞代謝中涉及的酶，并且相關(guān)外源基因可例如在用于例如通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染引入細(xì)胞中的構(gòu)建體或載體中可操作地連接于置換酶。具有外源基因的構(gòu)建體或載體賦予宿有構(gòu)建體或載體的細(xì)胞以選擇優(yōu)勢，從而促進產(chǎn)生由外源基因編碼的多肽。在一個實施方案中，CHO細(xì)胞是DG44細(xì)胞(Chasin和Urlaub(1980)PNASUSA77:4216)，其包含缺失或不活化二氫葉酸還原酶基因。在另一個實施方案中，CHO細(xì)胞是CHOKl細(xì)胞，其包含缺失或不活化谷氨酰胺合成酶基因(參見例如美國專利號5，122，464或5，827，739)。[0169]固體制劑[0170]本發(fā)明的固體制劑通常通過干燥液體制劑來制備?？墒褂萌魏芜m合干燥方法，如凍干或噴霧干燥。在一個方面，在凍干之前添加凍干保護劑至制劑中。凍干涉及通常在將用于儲存、運送和分配制劑的容器(例如小瓶、注射器(例如單室或雙室注射器)或藥筒(例如單室或雙室藥筒))中冷凍液體制劑(參見例如Gatlin和Nail，ProteinPurificationProcessEngineering.RogerG.Harrison編，MarcelDekkerInc.,317-367(1994))。一旦冷凍制劑，即降低大氣壓且調(diào)節(jié)溫度以允許例如通過升華移除冷凍溶劑。凍干過程的這個步驟有時稱為初級干燥。如果需要，則隨后可升高溫度以通過蒸發(fā)移除仍結(jié)合于干燥制劑的任何溶劑。凍干過程的這個步驟有時稱為二級干燥。當(dāng)制劑已達到所需干燥程度時，結(jié)束干燥過程且密封容器。最終固體制劑有時稱為“凍干制劑”或“餅”。凍干過程可使用任何適合設(shè)備來進行。適合凍干設(shè)備可從許多商業(yè)來源(例如SPScientific,StoneRidge,NY)獲得。[0171]可使用多種適合裝置干燥液體制劑以產(chǎn)生固體(例如凍干)制劑。一般而言，本領(lǐng)域技術(shù)人員使用含有架子的密封室制備凍干制劑，在所述架子上置放含待干燥液體制劑的小瓶?？煽刂萍茏拥臏囟纫约袄鋮s和加熱速率，也可控制腔室內(nèi)壓力。應(yīng)了解，本文所論述的各種過程參數(shù)是指使用這種類型裝置進行的過程。如果需要，則普通技術(shù)人員可輕易使本文所述的參數(shù)適于其它類型的干燥裝置。[0172]普通技術(shù)人員可輕易測定適用于初級和二級干燥的溫度和真空量。一般而言，制劑于約-30°C或小于-30°C的溫度(如-40°C或-50°C)下冷凍。冷卻速率可影響基質(zhì)中冰晶的量和尺寸。初級干燥通常在比冷凍溫度高約10°C、約20°C、約300C、約400C或約500C的溫度下進行。在一個方面，可設(shè)定初級干燥條件以維持抗α4β7抗體低于制劑的玻璃轉(zhuǎn)移溫度或塌陷溫度。高于塌陷溫度時，非晶冷凍基質(zhì)可流動(塌陷)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子可能不被剛性固體基質(zhì)所包圍，并且蛋白質(zhì)分子可在塌陷基質(zhì)中不穩(wěn)定。此外，如果發(fā)生塌陷，則制劑可難以充分干燥。制劑中產(chǎn)生的較高水分量可導(dǎo)致蛋白質(zhì)降解率較高及在凍干產(chǎn)物的質(zhì)量削弱至不可接受水平之前其可儲存的時間量減少。在一個方面，選擇架子溫度和腔室壓力以在初級干燥期間維持產(chǎn)物溫度低于塌陷溫度。冷凍制劑的玻璃轉(zhuǎn)移溫度可通過本領(lǐng)域中已知的方法(例如通過差示掃描熱量測定(DSC))來測量。塌陷溫度可通過本領(lǐng)域中已知的方法(例如冷凍干燥顯微法、光學(xué)相干斷層攝影法)來測量。干燥步驟可移除至少50%、至少60%、至少70%或70%以上的溶劑。在一個方面，初級干燥步驟從抗α4β7抗體制劑移除大于80%的溶劑。[0173]可基于在凍干期間暴露于架子和真空的表面積來選擇小瓶尺寸。干燥時間與餅高度戍正比，因此可基于測定為合理的餅高度來選擇小瓶尺寸。直徑相對于體積較大的小瓶可提供與架子的大量接觸以在凍干循環(huán)期間實現(xiàn)有效熱傳遞。在大體積液體中的稀釋抗體溶液將需要更多干燥時間。小瓶尺寸與制劑體積需要達到平衡，因為較大小瓶儲存和運送起來更為昂貴且具有較大頂空與制劑比率，并且在長期儲存期間可使高比例的制劑暴露于水分的降解效應(yīng)。對于165mg劑量，抗α4β7抗體制劑的小瓶尺寸可為3mL、5ml或10ml。在一個方面，對于160mg/ml溶液,小瓶尺寸是5ml。[0174]選擇用于凍干的藥筒或注射器尺寸的原則類似于選擇小瓶的原則。餅高度的深度也將隨著高度增加而使干燥時間增加。必須使注射器或藥筒的直徑和尺寸與最終制劑體積平衡。較大直徑可增加凍干餅中的水分吸收速率，因此增加在儲存期間的水分降解效應(yīng)。對于165mg劑量,抗α4β7抗體制劑體積可為Iml或2mL。在一個方面,對于160mg/mL溶液，注射器或藥筒尺寸大于lmL。[0175]在凍干之后，小瓶、注射器或藥筒可在真空下密封，例如塞住?；蛘?，可在密封之前使氣體(例如干燥空氣或氮氣)進入容器。在涉及氧化的情況下，允許進入凍干腔室的氣體可包含延遲或防止凍干產(chǎn)物氧化的氣體。在一個方面，氣體是非含氧氣體，例如氮氣或惰性氣體，例如氦氣、氖氣、IS氣、氪氣或氣氣。在另一方面，氣體是氮氣或IS氣。[0176]用抗體制劑的治療`[0177]在一個方面，本發(fā)明提供一種治療受試者的疾病或病癥的方法，所述方法包括以有效治療例如人的疾病或病癥的量向受試者施用本文所述的抗α4β7抗體制劑。人受試者可為成人(例如18歲或18歲以上)、青少年或兒童。人受試者可為65歲或65歲以上人士。與替代性治療給藥方案不同，65歲或65歲以上的人受試者不需要對本文所述的給藥方案進行任何修改，并且可施用本文所述的常規(guī)抗α4β7抗體制劑。[0178]受試者可已對用免疫調(diào)節(jié)劑、TNF-α拮抗劑或其組合進行的治療缺乏足夠反應(yīng)、喪失反應(yīng)或不耐受?；颊呖赡芟惹耙呀邮苡弥辽僖环N用于炎性腸病的皮質(zhì)類固醇(例如潑尼松(prednisone))治療。對皮質(zhì)類固醇的反應(yīng)不足是指盡管經(jīng)歷至少一個包括等于每日30mg潑尼松的劑量口服2周或靜脈內(nèi)I周的4周誘導(dǎo)方案，仍有持續(xù)活動性疾病的征象和癥狀。對皮質(zhì)類固醇的反應(yīng)喪失是指逐漸減少皮質(zhì)類固醇至低于等于每日口服IOmg潑尼松的劑量的兩次嘗試失敗。皮質(zhì)類固醇的不耐性包括庫欣氏(Cushing's)綜合征、骨質(zhì)減少/骨質(zhì)疏松癥、高血糖癥、失眠癥和/或感染的病史。[0179]免疫調(diào)節(jié)劑可為例如口服硫唑嘌呤(azathioprine)、6_巰基嘌呤或甲氨蝶呤(methotrexate)。對免疫調(diào)節(jié)劑的反應(yīng)不足是指盡管經(jīng)歷至少一個8周方案或口服硫唑嘌呤(≥1.5mg/kg)、6-巰基嘌呤(≥0.75mg/kg)或甲氨蝶呤(≥12.5毫克/周)，仍有持續(xù)活動性疾病的征象和癥狀。免疫調(diào)節(jié)劑的不耐性包括但不限于惡心/嘔吐、腹痛、胰腺炎、LFT異常、淋巴球減少癥、TPMT遺傳突變和/或感染。[0180]TNF-α拮抗劑是例如抑制TNF-α的生物活性且優(yōu)選結(jié)合TNF-α的藥劑，如單克隆抗體，例如REMICADE(英利昔單抗(infliximab))>HUMIRA(阿達木單抗(adalimumab))、CIMZIA(賽妥珠單抗(certolizumabpegol))、SIMP0NI(戈利木單抗(golimumab));或循環(huán)受體融合蛋白，如ENBREL(依那西普(etanerc印t))。對TNF-α拮抗劑的反應(yīng)不足是指盡管經(jīng)歷5mg/kgIV(2個劑量相隔至少2周)英利昔單抗；一個80mg皮下劑量的阿達木單抗、隨后一個40mg劑量(相隔至少兩周)；或400mg皮下賽妥珠單抗(2個劑量相隔至少2周)的至少一個4周誘導(dǎo)方案，仍有持續(xù)活動性疾病的征象和癥狀。對TNF-α拮抗劑的反應(yīng)喪失是指在先前臨床益處之后的維持給藥期間癥狀復(fù)發(fā)。TNF-α拮抗劑的不耐性包括但不限于輸注相關(guān)反應(yīng)、脫髓鞘、充血性心臟衰竭和/或感染。[0181]如本文所用，潰瘍性結(jié)腸炎受試者的緩解維持喪失是指Mayo計分增加至少3分且修正Baron計分(ModifiedBaronScore)增加至少2。[0182]在另一方面，本發(fā)明提供抗α4β7抗體制劑，所述制劑(I)可體外和/或體內(nèi)結(jié)合α4β7整合素；以及(2)可調(diào)節(jié)α4β7整合素的活性或功能，如(a)拮合功能(例如α4β7整合素結(jié)合于MAdCAM(例如MAdCAM-1)、纖維結(jié)合蛋白和/或VCAM-1的能力)和/或(b)白細(xì)胞浸潤功能，包括白細(xì)胞在組織中的募集和/或積聚(例如抑制淋巴細(xì)胞遷移至腸粘膜組織的能力)。在一個實施方案中，制劑中的抗體可結(jié)合α4β7整合素，開且可抑制α4β7整合素結(jié)合于其一個或多個配體(例如MAdCAM(例如MAdCAM-1)、VCAM-1、纖維結(jié)合蛋白)，從而抑制白細(xì)胞浸潤組織(包括白細(xì)胞在組織中的募集和/或積聚)。在另一個實施方案中，制劑中的抗體可結(jié)合α4β7整合素，并且可選擇性抑制α4β7整合素結(jié)合于其一個或多個配體(例如MAdCAM(例如MAdCAM-1)、VCAM-1、纖維結(jié)合蛋白)，從而抑制白細(xì)胞浸潤組織(包括白細(xì)胞在組織中的募集和/或積聚)。所述抗α4β7抗體制劑可體外和/或體內(nèi)抑制攜帶α4β7整合素的細(xì)胞細(xì)胞性粘著至粘膜組織(包括腸管相關(guān)組織、淋巴器官或白細(xì)胞(尤其是淋巴細(xì)胞，如Y細(xì)胞或B細(xì)胞))中的血管內(nèi)皮細(xì)胞。在另一個實施方案中，本發(fā)明的抗α4β7抗體制劑可抑制α4β7與MAdCAM(例如MAdCAM-1)和/或纖維結(jié)合蛋白相互作用。在另一個實施方案中，本發(fā)明的抗α4β7抗體制劑可選擇性抑制α4β7與MAdCAM(例如MAdCAM-1)和/或纖維結(jié)合蛋白相互作用，例如而不抑制α4β7與VCAM相互作用。[0183]本發(fā)明的抗α4β7抗體制劑可用于調(diào)節(jié)(例如抑制(降低或阻止))α4β7整合素的結(jié)合功能和/或白細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞)浸潤功能。舉例而言，抑制α4β7整合素結(jié)合于配體(即一個或多個配體)的人源化免疫球蛋白可根據(jù)治療與白細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞)浸潤組織(特別是表達分子MAdCAM(例如MAdCAM-1)的組織)(包括白細(xì)胞在組織中的募集和/或積聚)相關(guān)的疾病的方法加以施用。[0184]向個體(例如哺乳動物，如人或其它靈長類動物)施用有效量的本發(fā)明的抗α4β7抗體制劑(即一種或多種制劑)來治療所述疾病。舉例而言，可根據(jù)本發(fā)明方法治療發(fā)炎疾病，包括與白細(xì)胞浸潤胃腸道(包括腸管相關(guān)內(nèi)皮)、其它粘膜組織或表達分子MAdCAM(例如MAdCAM-1)的組織(例如腸管相關(guān)組織,如小腸和大腸的固有層的微靜脈；以及乳腺(例如泌乳性乳腺))相關(guān)的疾病。類似地，可根據(jù)本發(fā)明治療患有與由于白細(xì)胞結(jié)合于表達MAdCAM(例如MAdCAM-1)的細(xì)胞(例如內(nèi)皮細(xì)胞)所致的白細(xì)胞浸潤組織相關(guān)的疾病的個體。[0185]在一個實施方案中，可治療的疾病因此包括炎性腸病(IBD)，如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、回腸炎、乳糜?寫(Celiacdisease)、非熱帶口炎性腹灣(nontropicalSprue)、與血清陰性關(guān)節(jié)病相關(guān)的腸病、顯微性或膠原性結(jié)腸炎、嗜酸性胃腸炎、或直腸結(jié)腸切除術(shù)和回腸肛門(ileoanal)吻合術(shù)后所致的囊炎(pouchitis)。在一些實施方案中，炎性腸病是克羅恩氏病或潰瘍性結(jié)腸炎。潰瘍性結(jié)腸炎可為中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎。治療可使罹患中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎的患者的粘膜愈合。治療也可使患者的皮質(zhì)類固醇使用減少、消除或減少以及消除。[0186]胰腺炎和胰島素依賴型糖尿病是可使用本發(fā)明的制劑治療的其它疾病。已報道MAdCAM(例如MAdCAM-1)是由來自NOD(非肥胖性糖尿病)小鼠以及BALB/c和SJL小鼠的外分泌胰臟中的一些血管表達。MAdCAM(MAdCAM-1)的表達據(jù)報道誘導(dǎo)于NOD小鼠的胰臟的發(fā)炎胰島中的內(nèi)皮上，并且MAdCAM(MAdCAM-1)是在胰島炎早期由NOD胰島內(nèi)皮表達的主要地址素(Hanninen’A.等，J.Clin.1nvest.，92:2509-2515(1993))。用抗MAdCAM或抗β7抗體治療NOD小鼠預(yù)防了糖尿病的發(fā)展(Yang等，Diabetes,46:1542-1547(1997))。此外，觀察到表達α4β7的淋巴細(xì)胞在胰島內(nèi)積聚，并且MAdCAM-1牽涉于淋巴瘤細(xì)胞通過α4β7與來自發(fā)炎胰島的血管(Hanninen,A.等，J.Clin.1nvest.,92:2509-2515(1993))或與套細(xì)胞淋巴瘤中的胃腸道(Geissmann等，Am.J.Pathol.,15β:1701-1705(1998))的結(jié)合中。[0187]可使用本發(fā)明的制劑治療的與粘膜組織相關(guān)的發(fā)炎疾病的實例包括膽囊炎、膽管炎(Adams和Eksteen,NatureReviews6:244-251(2006)；Grant等，Hepatology33:1065-1072(2001))(例如原發(fā)性硬化性膽管炎)、例如腸的白塞氏病(Behcet'sdisease)或膽管周圍炎(膽管和肝臟的周圍組織)以及移植物抗宿主疾病(例如在胃腸道中(例如在骨髓移植之后)(Petrovic等，Bloodl03:1542-1547(2004))。如克羅恩氏病中所見，發(fā)炎常延伸超出粘膜表面，因此慢性發(fā)炎疾病(如類肉瘤病、慢性胃炎(例如自體免疫胃炎(Katakai等，Int.1mmunol.,14:167-175(2002)))和其它特發(fā)性病狀)可經(jīng)受治療。[0188]本發(fā)明也涉及一種抑制白細(xì)胞浸潤粘膜組織的方法。本發(fā)明也涉及一種治療癌癥(例如α4β7陽性腫瘤，如淋巴瘤)的方法?？墒褂帽景l(fā)明的制劑治療的與粘膜組織相關(guān)的發(fā)炎疾病的其它實例包括乳腺炎(乳腺)和大腸急躁癥(irritablebowelsyndrome)。[0189]其病因利用MAdCAM(例如MAdCAM-1)與α4β7的相互作用的疾病或病原體可用本文所述的制劑中的抗α4β7抗體來治療。所述疾病的實例包括如由人免疫缺乏病毒引起的免疫缺乏病癥(參見例如W02008140602)。[0190]本發(fā)明的制劑是以抑制α4β7整合素結(jié)合于其配體的有效量施用。對于療法，有效量將足以實現(xiàn)所需治療(包括防治)作用(如足以降低或防止α4β7整合素介導(dǎo)的結(jié)合和/或信號傳導(dǎo)，從而抑制白細(xì)胞粘著和浸潤和/或相關(guān)細(xì)胞反應(yīng)的量)。有效量的抗α4β7抗體(例如足以維持α4β7整合素的飽和(例如中和)的有效效價)可誘導(dǎo)炎性腸病的臨床反應(yīng)或緩解。有效量的抗α4β7抗體可導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎或克羅恩氏病中的粘膜愈合。本發(fā)明的制劑可以單位劑量或多個劑量施用。劑量可通過本領(lǐng)域中已知的方法確定且可視例如個體的年齡、敏感性、耐受性和總體健康而定。施用模式的實例包括局部途徑，如經(jīng)鼻或吸入或經(jīng)皮施用；腸內(nèi)途徑，如通過飼管或栓劑；以及腸胃外途徑，如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或玻璃體內(nèi)施用?？贵w的適合劑量可為每次治療約0.1mg/kg體重至約10.0mg/kg體重,例如約2mg/kg至約7mg/kg、約3mg/kg至約6mg/kg或約3.5mg/kg至約5mmg/kg。在特定實施方案中，施用的劑量是約0.3mg/kg、約0.5mg/kg、約Img/kg、約2mg/kg、約3mg/kg、約4mg/kg、約5mg/kg、約6mg/kg、約7mg/kg、約8mg/kg、約9mg/kg或約IOmg/kg。總劑量可為約22mg、約50mg、約72mg、約125mg、約165mg或約432mg?？倓┝靠蔀橹辽?7mg、至少125mg或至少356mg。在一個實施方案中，總劑量是165mg。在另一個實施方案中，總劑量是108mg。在另一個實施方案中，總劑量是216mg。[0191]使用抗α4β7抗體在施用之后隨時間的可用性研究的藥物動力學(xué)(PK)數(shù)據(jù)的建模和模擬(BERKELEYMADONNA?軟件，UniversityofCalifornia)可評估皮下或肌內(nèi)施用的可能給藥方案?？稍u估誘導(dǎo)和維持方案的PK數(shù)據(jù)。另一建模方法是群體藥物動力學(xué)/藥效學(xué)分析(NONMEM?非線性混合效應(yīng)建模工具,ICONpic,Dublin,Ireland)?？煞治霰┞读颗c谷底量兩者。[0192]通常，在實現(xiàn)目標(biāo)(例如04@7整合素)飽和之后，血液中的抗體濃度與施用劑量具有線性關(guān)系。通過皮下或肌內(nèi)途徑施用的抗α4β7抗體的生物可用性是通過靜脈內(nèi)途徑施用的抗α4β7抗體的生物可用性的約60%至約90%。在這種關(guān)系的一個實施例中，如果假定靜脈內(nèi)劑量具有100%生物可用性且發(fā)現(xiàn)皮下劑量具有69.5%生物可用性，則300mg靜脈內(nèi)劑量可與通過皮下施用的432mg劑量匹配。因此，在69.5%相對生物可用性下，150mg靜脈內(nèi)劑量可與216mg皮下劑量匹配。類似地，如果發(fā)現(xiàn)皮下劑量具有75%可用性且發(fā)現(xiàn)肌內(nèi)劑量具有80%生物可用性，則為了匹配300mg靜脈內(nèi)劑量，皮下劑量可為400mg且肌內(nèi)劑量可為375mg。實施例`中的表40-43說明這些關(guān)系且提供抗α4β7抗體的適用劑量和給藥方案。[0193]在一些方面，給藥方案具有兩個時期，即誘導(dǎo)期和維持期。在誘導(dǎo)期中，以快速提供適于某些目的(如誘導(dǎo)對抗體或其抗原結(jié)合片段的免疫耐受性或誘導(dǎo)臨床反應(yīng)及改善炎性腸病癥狀)的有效量的抗體或其抗原結(jié)合片段的方式施用抗體或其抗原結(jié)合片段。當(dāng)首次用抗α4β7抗體治療時；當(dāng)從抗α4β7抗體療法以來長期缺乏治療之后(例如超過三個月、超過四個月、超過六個月、超過九個月、超過一年、超過十八個月或超過兩年)又進行治療時；或在抗α4β7抗體療法的維持期期間，如果炎性腸病癥狀已重現(xiàn)(例如從疾病緩解復(fù)發(fā)開始)；則可對患者施用誘導(dǎo)期治療。在一些實施方案中，誘導(dǎo)期方案產(chǎn)生高于在維持方案期間維持的平均穩(wěn)態(tài)谷底血清濃度的平均谷底血清濃度，例如在下一劑量之前即刻的濃度。[0194]在維持期中，用穩(wěn)定含量的抗體或其抗原結(jié)合片段以使由誘導(dǎo)療法實現(xiàn)的反應(yīng)延續(xù)的方式施用抗體或其抗原結(jié)合片段。維持方案可防止炎性腸病的癥狀重現(xiàn)或復(fù)發(fā)。維持方案可向患者提供便利，例如作為簡單給藥方案或無需頻繁治療就診。在一些實施方案中，維持方案可包括通過選自由以下組成的組的策略，例如以本文所述的制劑形式施用抗α4β7抗體或其抗原結(jié)合片段:小劑量、不頻繁施用、自身施用及前述任一個的組合。[0195]在一個實施方案中，例如在療法的誘導(dǎo)期期間，給藥方案提供有效量的于本文所述的制劑中的抗α4β7抗體或抗原結(jié)合片段用于誘導(dǎo)人患者的炎性腸病的緩解。在一些實施方案中，有效量的抗α4β7抗體足以在誘導(dǎo)期結(jié)束時實現(xiàn)抗α4β7抗體的平均谷底血清濃度約5μg/ml至約60μg/ml、約15μg/ml至約45μg/ml、約20μg/ml至約30yg/rml或約25μg/ml至約35yg/ml。誘導(dǎo)期的持續(xù)時間可為治療約四周、約五周、約六周、約七周或約八周。在一些實施方案中，誘導(dǎo)方案可利用選自由以下組成的組的策略:例如于本文所述的制劑中的抗α4β7抗體或其抗原結(jié)合片段的大劑量、頻繁施用以及大劑量與頻繁施用的組合。誘導(dǎo)給藥可為一次或復(fù)數(shù)次一個以上劑量，例如至少兩個劑量。在誘導(dǎo)期期間，劑量可以每日一次、每隔一天一次、每周兩次、每周一次、每十天一次、每兩周一次或每三周一次施用。在一些實施方案中，誘導(dǎo)劑量是在抗α4β7抗體療法的前兩周內(nèi)施用。在一個實施方案中，誘導(dǎo)給藥可為在治療開始(第O天)時一次和在治療開始之后約兩周時一次。在另一個實施方案中，誘導(dǎo)期持續(xù)時間是六周。在另一個實施方案中，誘導(dǎo)期持續(xù)時間是六周且在前兩周期間施用多個誘導(dǎo)劑量。[0196]在一些實施方案中，例如當(dāng)開始治療患有重度炎性腸病的患者(例如抗TNFa療法失敗的患者)時，誘導(dǎo)期需要具有比患有輕度或中度疾病的患者更長期間。在一些實施方案中，患有重度疾病的患者的誘導(dǎo)期可具有至少6周、至少8周、至少10周、至少12周或至少14周的持續(xù)時間。在一個實施方案中，患有重度疾病的患者的誘導(dǎo)給藥方案可包括第O周(開始治療)一劑量、第2周一劑量和第6周一劑量。在另一個實施方案中，患有重度疾病的患者的誘導(dǎo)給藥方案可包括第O周(開始治療)一劑量、第2周一劑量、第6周一劑量和第10周一劑量。[0197]在一個實施方案中，例如在療法的維持期期間，給藥方案維持抗α4β7抗體的平均穩(wěn)態(tài)谷底血清濃度(例如下一劑量之前的平臺濃度)約5μg/mL至約25μg/mL、約7μg/mL至約20μg/mL、約5μg/mL至約10μg/mL、約10μg/mL至約20μg/mL、約15μg/mL至約25yg/mL、或約9yg/mL至約13yg/mL。在另一個實施方案中，例如在療法的維持期期間，給藥方案維持抗α4β7抗體的平均穩(wěn)態(tài)谷底血清濃度約20μg/mL至約30μg/mL、約20μg/mL至約55μg/mL、約30μg/mL至約45μg/mL、約45μg/mL至約55μg/mL、或約35μg/mL至約40μg/mL。在另一個實施方案中，例如在療法的維持期期間，給藥方案維持抗α4β7抗體的長期平均血清濃度，例如暴露濃度(例如濃度_時間曲線下面積)約15μg/mL至約40μg/mL、約10μg/mL至約50μg/mL、約18μg/mL至約26yg/mL、或約22yg/mL至約33μg/mL。在另一個實施方案中，例如在維持療法期間，給藥方案維持抗α4β7抗體的長期平均血清濃度，例如暴露濃度(例如濃度-時間曲線下面積)約35μg/mL至約90μg/mL、約45μg/mL至約75μg/mL、約52μg/mL至約60μg/mL、或約50μg/mL至約65μg/mL。[0198]最終劑型可在約0.5ml、約lml、約1.5ml、約2ml、約2.5rml、約3ml抗體制劑中包含全部劑量。[0199]靜脈內(nèi)施用的最終劑型可在約1.0mg/ml至約1.4mg/ml、約l.0mg/ml至約1.3mg/ml、約1.0mg/ml至約1.2mg/ml、約1.0mg/ml至約1.1mg/ml、約1.lmg/ml至約1.4mg/ml、約1.1mg/ml至約1.3mg/ml、約1.1mg/ml至約1.2mg/ml、約1.2mg/ml至約1.4mg/ml、約1.2mg/ml至約1.3mg/ml、或約1.3mg/ml至約1.4mg/ml之間的濃度下。最終劑型可在約0.6mg/ml、0.8mg/ml>1.0mg/ml、Llmg/ml、約1.2mg/ml、約1.3mg/ml、約1.4mg/ml、約1.5mg/ml、約1.6mg/ml、約1.8mg/ml或約2.0mg/ml的濃度下。[0200]劑量可每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次、每6周一次、每8周一次或每10周一次加以施用。較高或較頻繁劑量(例如每隔一天、每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次)可適用于誘導(dǎo)活動性疾病的緩解或適用于治療新患者，例如適用于誘導(dǎo)對抗α4β7抗體的耐受性。每2周一次、每3周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每8周一次或每10周一次的劑量可適用于預(yù)防性療法例如以維持患有慢性疾病的患者的緩解。在一個方面，治療方案是在第O天、約第2周、約第6周時以及此后每I或每2周時進行治療。在另一方面，誘導(dǎo)治療方案是每隔一天進行治療，持續(xù)總共6次治療。[0201]可將給藥方案優(yōu)化以誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解。在一些實施方案中，給藥方案不改變接受治療的患者的腦脊髓液中的CD4與CD8的比率。[0202]在一些方面，可用優(yōu)化給藥方案實現(xiàn)開始治療之后六個月或一年內(nèi)的持久臨床緩解，例如持續(xù)護理醫(yī)師進行至少兩次、至少三次、至少四次隨訪的臨床緩解。[0203]在一些方面，可用優(yōu)化給藥方案實現(xiàn)持久臨床反應(yīng)，例如開始治療之后持續(xù)至少6個月、至少9個月、至少一年的臨床反應(yīng)。[0204]制劑可以單次或多次注射形式皮下施用。舉例而言，單次注射的體積可在約0.5ml至約3ml范圍內(nèi)。在一個實施方案中，單次注射的體積可為約0.6ml至約1.1ml或約Iml至約3ml。在一個方面，單次注射的體積是約lml。用于皮下施用制劑的針的規(guī)格可為約25G、約26G、約27G、約28G、約29G或約30G。[0205]制劑可以單次或多次注射形式肌內(nèi)施用。舉例而言，單次注射的體積可在約0.5ml至約5ml范圍內(nèi)。在一個實施方案中，單次注射的體積可為約2ml至約5ml、約0.6ml至約1.1ml或約Iml至約3ml。在一個方面,單次注射的體積是約lml、約2ml、約3ml、約4ml或約5ml。用以肌內(nèi)施用制劑的針可為約5/8"、約7/8"、約I"、約1.25"、約1.5"、約2"或約3"。對于肌內(nèi)施用，針的規(guī)格可在20-22G之間。[0206]在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療罹患炎性腸病的人患者的方法，其中所述方法包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中根據(jù)以下給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)每隔一天以皮下注射液形式施用165mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的初始劑量持續(xù)六劑；(b)隨后視需要每兩周或每四周以皮下注射液形式施用165mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第七劑量和后續(xù)劑量；其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1、⑶R2和⑶R3):輕鏈:CDR1SEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDR1SEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:14。[0207]在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療罹患炎性腸病的人患者的方法，其中所述方法包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)以下給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)以靜脈內(nèi)輸液形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的初始靜脈內(nèi)劑量；(b)隨后在初始劑量之后約兩周時，以靜脈內(nèi)輸液形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第二靜脈內(nèi)后續(xù)劑量；(C)隨后從第六周開始，視需要每周、每兩周或每三周以皮下注射液形式施用165mg人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第三劑量和后續(xù)劑量；其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3):輕鏈:CDRlSEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10,CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDR1SEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:14o[0208]在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療性治療炎性腸病的給藥方案，其中所述給藥方案包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)皮下或肌內(nèi)給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，所述給藥方案維持抗體或其抗原結(jié)合片段的平均穩(wěn)態(tài)血清谷底濃度為約9μg/mL至約13μg/mL;其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、⑶R2和⑶R3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(⑶R1XDR2和⑶R3):輕鏈:⑶RlSEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDR1SEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:14。[0209]在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療性治療炎性腸病的給藥方案，其中所述給藥方案包括步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)皮下或肌內(nèi)給藥方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，所述給藥方案維持抗體或其抗原結(jié)合片段的穩(wěn)態(tài)血清谷底濃度為約35μg/mL至約40μg/mL;其中給藥方案誘導(dǎo)患者的炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；并且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中抗原結(jié)合區(qū)包含具有下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3)以及重鏈可變區(qū)的三個互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3):輕鏈:CDR1SEQIDNO:9、CDR2SEQIDNO:10、CDR3SEQIDNO:11;重鏈:CDRlSEQIDNO:12、CDR2SEQIDNO:13、CDR3SEQIDNO:14。[0210]在一些實施方案中，治療方法、劑量或給藥方案降低患者將對抗α4β7抗體產(chǎn)生HAHA反應(yīng)的可能性。例如由對抗α4β7抗體有反應(yīng)性的抗體所測量，HAHA的產(chǎn)生可增加抗α4β7抗體的清除率，例如降低抗α4β7抗體的血清濃度，例如降低結(jié)合于α4β7整合素的抗α4β7抗體的數(shù)目，由此使得治療的有效性較小。在一些實施方案中，為了防止ΗΑΗΑ，可依次用誘導(dǎo)方案和維持方案治療患者。在一些實施方案中，在誘導(dǎo)方案與維持方案之間不存在中止。在一些實施方案中，誘導(dǎo)方案包括向患者施用多個劑量的抗α4β7抗體。為了防止ΗΑΗΑ，當(dāng)開始抗α4β7抗體療法時，可用較高初始劑量(例如至少1.5mg/kg、至少2mg/kg、至少2.5mg/kg、至少3mg/kg、至少5mg/讓(區(qū)、至少811^/kg、至少IOmg/kg或約2mg/kg至約6mg/kg)或頻繁初始施用(例如約每周一次、約每兩周一次或約每三周一次)標(biāo)準(zhǔn)劑量來治療患者。在一些實施方案中，治療方法維持至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%患者呈HAHA陰性。在其它實施方案中，治療方法維持患者呈HAHA陰性持續(xù)至少6周、至少10周、至少15周、至少6個月、至少I年、至少2年或持續(xù)療法持續(xù)時間。在一些實施方案中，患者或至少30%、至少40%、至少50%或至少60%的產(chǎn)生HAHA的患者維持低效價(例如≤125)的抗α4β7抗體。在一個實施方案中，在開始抗α4β7抗體療法之后，治療方法維持至少70%患者呈HAHA陰性持續(xù)至少12周。[0211]制劑可單獨或與另一藥劑聯(lián)合向個體(例如人)施用。本發(fā)明的制劑可在另一藥劑施用之前、與另一藥劑一起施用或在另一藥劑施用之后施用。在一個實施方案中，施用一種以上抑制α4β7整合素結(jié)合于其配體的制劑。在所述實施方案中，可施用藥劑，例如單克隆抗體，如抗MAdCAM或抗VCAM-1單克隆抗體。在另一個實施方案中，另一藥劑抑制白細(xì)胞結(jié)合于不同于α4β7路徑的路徑中的內(nèi)皮配體。所述藥劑可抑制例如表達趨化因子(C-C基元)受體9(CCR9)的淋巴細(xì)胞結(jié)合于胸腺表達的趨化因子(TECK或CCL25)或是防止LFA-1結(jié)合于細(xì)胞間粘著分子(ICAM)的藥劑。舉例而言，除本發(fā)明的制劑的之外，也施用抗TECK或抗CCR9抗體或小分子CCR9抑制劑(如公開于PCT公布W003/099773或W004/046092中的抑制劑)或抗ICAM-1抗體或阻止ICAM表達的寡核苷酸。在另一個實施方案中，可與本發(fā)明的制劑聯(lián)合施用另一活性成分，例如消炎化合物，如含有柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、5-氨基水楊酸的消炎劑；另一非類固醇消炎化合物；類固醇消炎化合物；或通常為控制IBD而施用的抗生素(例如環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、甲硝達唑(metronidazole));或另一生物藥劑(例如TNFα拮抗劑)。[0212]在一個實施方案中，共施用藥物的劑量可在用包含抗α4β7抗體的制劑治療期間隨時間減少。舉例而言，在用抗α4β7抗體制劑治療開始時或之前用類固醇(例如潑尼松、潑尼龍)治療的患者將經(jīng)歷早在用抗α4β7抗體制劑治療6周時即開始的類固醇劑量減少方案。在用抗α4β7抗體制劑治療期間，類固醇劑量將在開始逐漸減少的4-8周內(nèi)減少約25%，在逐漸減少的約8-12周時減少50%且在逐漸減少的約12-16周時減少75%。在一個方面，通過用抗α4β7抗體制劑治療約16-24周，可消除類固醇劑量。在另一個實施例中，在用抗α4β7抗體制劑治療開始時或之前用消炎化合物(如6-巰基嘌呤)治療的患者將經(jīng)歷類似于如上所指示的類固醇給藥逐漸減少方案的消炎化合物劑量減少方案。[0213]在一個實施方案中，所述方法包括向患者皮下施用或肌內(nèi)施用有效量的本發(fā)明的制劑。在另一個實施方案中，可制備用于自身施用的制劑。[0214]如果制劑呈固體形式，例如干燥狀態(tài)，則施用方法可包含使制劑轉(zhuǎn)化為液態(tài)的步驟。在一個方面，干燥制劑可例如用如上所述的液體復(fù)原以用于注射，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射。在另一方面，固體或干燥制劑可例如以貼片、霜劑、氣溶膠或栓劑形式局部施用。[0215]本發(fā)明也關(guān)于一種治療與白細(xì)胞浸潤表達分子MAdCAM(例如MAdCAM-1)的組織相關(guān)的疾病的方法。所述方法包括向有需要的患者施用有效量的本發(fā)明的抗α4β7抗體制劑。在一個實施方案中，所述疾病是移植物抗宿主疾病。在一些實施方案中，所述疾病是與由于表達α4β7整合素的白細(xì)胞結(jié)合于表達分子MAdCAM(例如MAdCAM-1)的腸管相關(guān)內(nèi)皮所致的白細(xì)胞浸潤組織相關(guān)的疾病。在其它實施方案中，所述疾病是胃炎(例如嗜酸性胃炎或自體免疫胃炎)、胰腺炎或胰島素依賴型糖尿病。在其它實施方案中，所述疾病是膽囊炎、膽管炎或膽管周圍炎。[0216]本發(fā)明也關(guān)于一種治療患者的炎性腸病的方法。在一個實施方案中，所述方法包括向患者皮下施用有效量的本發(fā)明的抗α4β7抗體制劑。在一些實施方案中，炎性腸病是潰瘍性結(jié)腸炎或克羅恩氏病。在其它實施方案中，炎性腸病是乳糜瀉、與血清陰性關(guān)節(jié)病相關(guān)的腸病、顯微性或膠原性結(jié)腸炎、胃腸炎(例如嗜酸性胃腸炎)或囊炎。[0217]在一些實施方案中，用抗α4β7抗體治療不改變⑶4:⑶8淋巴細(xì)胞的比率?？蓽y量血液、淋巴結(jié)吸出物及腦脊髓液(CSF)中的⑶4:⑶8比率。健康個體中的CSF⑶4+:⑶8+淋巴細(xì)胞比率通常大于或等于約I。(Svenningsson等，J.Neuroimmunol.1995；63:39-46；Svenningsson等，AnnNeurol.1993；34:155-161)。免疫調(diào)節(jié)劑可使CD4:CD8比率變得小于I。[0218]制品.[0219]在另一方面，本發(fā)明是含有本發(fā)明的藥物制劑且提供其使用說明書的制品。制品包含容器。適合容器包括例如瓶、小瓶(例如雙室小瓶；液體制劑的小瓶，有針或無針；固體制劑的小瓶，有或無復(fù)原液體的小瓶，有針或無針)、注射器(如雙室注射器、預(yù)裝載注射器、自動注射器)、藥筒和試管。容器可由多種材料(如玻璃、金屬或塑料)形成。容器容納制劑且于容器上或與容器相伴的標(biāo)簽可指示使用說明。在另一個實施方案中，可制備制劑以供自身施用和/或含有針對自身施用的說明。在一個方面，容納制劑的容器可為單次使用小瓶。在另一方面，容納制劑的容器可為多次使用小瓶，其允許例如使用復(fù)原制劑的一個以上部分重復(fù)施用(例如2-6次施用)制劑。制品可進一步包括從商業(yè)和使用者立場出發(fā)所需的其它材料，包括其它緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針、注射器和具有如先前章節(jié)所述的使用說明的藥品說明書。[0220]在一個實施方案中，制品是具有針的注射器。針的規(guī)格可為25G、26G、27G、29G、30G。薄壁針(例如19G或23G或大于23G)可有助于注射高粘度制劑。在一個方面，針規(guī)格是27G或大于27G。針長度可適于皮下施用，并且可為約I/2英寸、約5/8英寸或I英寸長。在一些實施方案中，注射器是預(yù)填充注射器。[0221]預(yù)填充注射器產(chǎn)品開發(fā)[0222]在一些方面，有數(shù)種產(chǎn)品屬性是為預(yù)填充注射器(PFS)(例如用于施用制劑以實現(xiàn)皮下或肌內(nèi)傳遞)中的蛋白質(zhì)產(chǎn)品(例如抗α4β7抗體)所需的。平衡其中一些屬性有助于減輕競爭效應(yīng)。舉例而言，當(dāng)需要低注射體積時，制劑的高蛋白質(zhì)濃度可為優(yōu)選的。然而，在高蛋白質(zhì)濃度情況下，可存在較高雜質(zhì)形成率(例如從注射器浸入制劑中的聚集雜質(zhì))且需要較大手動力來操作注射器。為了患者在注射部位處的舒適性所用的小針尺寸可需要較大力來操作注射器。了解制劑與注射器參數(shù)(如蛋白質(zhì)濃度、PH和針內(nèi)徑)兩者如何影響產(chǎn)品穩(wěn)定性和性能會有助于開發(fā)蛋白質(zhì)產(chǎn)品(例如預(yù)填充注射器中的抗α4β7抗體)。[0223]在一個方面，一種開發(fā)用于預(yù)填充注射器中的蛋白質(zhì)產(chǎn)品(例如抗α4β7抗體)的方法包括例如以協(xié)調(diào)方式或同時一起改變注射器參數(shù)和制劑參數(shù)。這樣可使得比在單獨或連續(xù)改變各方面時更好地了解對預(yù)填充注射器中的蛋白質(zhì)產(chǎn)品所預(yù)期的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和產(chǎn)品性能的范圍。[0224]預(yù)填充注射器產(chǎn)品(例如抗α4β7抗體)的開發(fā)涉及了解在某一點，液體制劑與預(yù)填充注射器的若干組分有接觸(圖15)。舉例而言，制劑可接觸可由玻璃(例如I型硼硅玻璃)或塑料(例如環(huán)烯烴聚合物(COP)、環(huán)烯烴共聚物(COC)、聚丙烯或聚四氟乙烯)構(gòu)成的注射器筒。制劑可接觸注射器、柱塞和/或端帽(tipcap)，其可為彈性體(例如為相同或不同材料(例如塑料(如聚乙烯、聚苯乙烯或聚丙烯，或彈力物(如橡膠(天然、合成、丁基))或聚硅氧)的彈性體)。制劑可與添加至筒的內(nèi)表面以便于柱塞移動的潤滑劑接觸。潤滑劑可為例如聚硅氧油、礦物油或甘油。在押針(stakedneedle)注射器的實施方案中，可存在金屬合金針(例如不銹鋼針和用于將針膠粘于適當(dāng)位置的粘著劑)。針對預(yù)填充注射器中蛋白質(zhì)產(chǎn)品的一考慮因素是在產(chǎn)品的整個存放期期間液體蛋白質(zhì)溶液與這些注射器組分的一個或多個直接接觸。制劑與注射器組分兩者均可對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有影響。[0225]可影響預(yù)填充注射器產(chǎn)品穩(wěn)定性的制劑參數(shù)包括蛋白質(zhì)濃度、pH、緩沖劑類型、緩沖劑濃度、離子強度、穩(wěn)定劑類型和穩(wěn)定劑濃度。用于蛋白質(zhì)制劑的穩(wěn)定劑的實例包括例如如先前章節(jié)中所述的離子鹽、多糖、氨基酸、抗氧化劑、螯合劑和表面活性劑。[0226]可影響預(yù)填充注射器產(chǎn)品穩(wěn)定性的注射器組分包括例如潤滑劑、柱塞和端帽的組成、以及雜質(zhì)。潤滑劑(例如注射器筒上的聚硅氧油)的量可影響產(chǎn)品穩(wěn)定性。柱塞和端帽的組成可影響這些組分的透氧性且將這些組分的可浸出物引入蛋白質(zhì)產(chǎn)品(例如抗α4β7抗體制劑)中，也可影響產(chǎn)品穩(wěn)定性?？捎绊懏a(chǎn)品穩(wěn)定性的另一注射器參數(shù)包括可滲入產(chǎn)品制劑(例如從筒(例如玻璃筒)和/或針(例如不銹鋼針))的雜質(zhì)(例如重金屬(例如鎢))的類型和/或量。(也參見Ludwig等，J.Pharm.Sc1.99:1721-1733(2010)；Nashed-Samuel等，AmericanPharmaceuticalReviewJan/Feb:74-80(2011)；Badkar等，AAPSPharmSciTechl2:564-572)[0227]預(yù)填充注射器可手動注射或與自動注射器裝置一起使用。預(yù)填充注射器的功能測試包括測量脫開力(break-looseforce)，即開始移動柱塞所需的力；和滑動力，即以恒定速率注射注射器的內(nèi)含物所需的力。預(yù)填充注射器的機械性能可視數(shù)種制劑和注射器參數(shù)(如制劑粘度和注射器中潤滑劑(例如聚硅氧油)的量)而定。[0228]預(yù)填充注射器中的蛋白質(zhì)產(chǎn)品的數(shù)種屬性和可影響那些產(chǎn)品屬性的制劑或注射器因素顯示于表1中。許多產(chǎn)品屬性可為數(shù)種制劑和注射器參數(shù)的復(fù)合函數(shù)。舉例而言，注射器滑動力是制劑粘度的函數(shù)，但粘度可視數(shù)種制劑因素(如蛋白質(zhì)濃度、穩(wěn)定劑濃度和pH)而定。[0229]表1:預(yù)填充注射器中的蛋白質(zhì)產(chǎn)品的產(chǎn)品屬性和可影響這些屬性的可能制劑和注射器參數(shù)【權(quán)利要求】1.一種穩(wěn)定液體藥物制劑,所述制劑包含抗α4β7抗體、抗氧化劑或螯合劑和至少一種游離氨基酸的混合物，其中所述制劑呈液體形式。2.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述抗α4β7抗體與所述抗氧化劑或螯合劑的摩爾比是約1:4至約1:100。3.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中在5°C下12個月之后，所述穩(wěn)定液體制劑具有小于約1.0%的聚集體形成。4.如權(quán)利要求3所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑具有小于約0.2%的聚集體形成。5.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述抗氧化劑或螯合劑是檸檬酸鹽。6.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述螯合劑是EDTA。7.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述游離氨基酸選自由以下組成的組:組氨酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸以及其組合。8.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑進一步包含表面活性劑。9.如權(quán)利要求8所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述抗氧化劑或螯合劑與所述表面活性劑的摩爾比是約3:1至約156:1。10.如權(quán)利要求8所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述表面活性劑選自由以下組成的組:聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆(poloxamer)以及其組合。11.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑具有介于約6.1與約7.0之間的pH。12.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑具有介于約6.5與約6.8之間的pH。13.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑包含至少約60mg/ml至約160mg/ml抗α4β7抗體。14.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定液體藥物制劑,其中所述制劑包含至少約160mg/ml抗α4β7抗體。15.—種穩(wěn)定液體藥物制劑，所述制劑包含至少約60mg/ml至約160mg/ml抗α4β7抗體、緩沖劑和至少約5mM檸檬酸鹽，其中所述制劑是液體制劑。16.如權(quán)利要求15所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述緩沖劑是組氨酸緩沖劑。17.—種穩(wěn)定液體藥物制劑,所述制劑包含至少約160mg/ml抗α4β7抗體和至少約5mM梓檬酸鹽。18.如權(quán)利要求17所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑進一步包含聚山梨醇酯80。19.一種穩(wěn)定液體藥物制劑，所述制劑包含抗α4β7抗體、檸檬酸鹽、組氨酸、精氨酸和聚山梨醇酯80的混合物，其中所述制劑呈液體形式。20.如權(quán)利要求19所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑存在于選自由小瓶、藥筒、注射器和自動注射器組成的組的容器中。21.—種穩(wěn)定液體制劑,所述制劑選自表2中的任一制劑。22.如權(quán)利要求1至21中任一項所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述抗體是維多珠單抗(vedoIizumab)。23.如權(quán)利要求1至21中任一項所述的穩(wěn)定液體藥物制劑，其中所述制劑用于皮下或肌內(nèi)施用。24.一種治療炎性腸病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用如權(quán)利要求1所述的藥物制劑。25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述施用是皮下施用。26.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述施用是自身施用。27.一種制品，所述制品包括容器、如權(quán)利要求1至21中任一項所述的穩(wěn)定液體藥物制劑及其使用說明書。28.如權(quán)利要求27所述的制品，其中所述物品是預(yù)填充注射器。29.一種治療罹患炎性腸病的人患者的方法，其中所述方法包括以下步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中根據(jù)以下給藥方案向所述患者施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)每隔一天以皮下注射液形式施用165mg所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的初始劑量持續(xù)六劑；(b)隨后視需要每兩周或每四周以皮下注射液形式施用165mg所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第七劑量和后續(xù)劑量；其中所述給藥方案誘導(dǎo)所述患者的所述炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；另外其中所述人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中所述人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中所述抗原結(jié)合區(qū)包含以下CDR:輕鏈:CDRlSEQIDNO;9CDR2SEQIDNO;10CDR3SEQlDNOrll重鏈:CDRISEQIDNO:12CDR2SEQIDNO:13CDR3SEQIDNO:14,30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述患者對用免疫調(diào)節(jié)劑、腫瘤壞死因子-α拮抗劑中的至少一個或其組合進行的治療缺乏足夠反應(yīng)、喪失反應(yīng)或不耐受。31.如權(quán)利要求29所述的方法,其中炎性腸病是克羅恩氏病(Crohn'sdisease)或潰瘍性結(jié)腸炎。32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述炎性腸病是潰瘍性結(jié)腸炎。33.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述炎性腸病是中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎。34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中所述給藥方案使得罹患中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎的患者的粘I吳愈合。35.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述給藥方案使得所述患者的皮質(zhì)類固醇使用減少、消除或減少以及消除。36.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述患者先前接受至少一種用于所述炎性腸病的皮質(zhì)類固醇治療。37.如權(quán)利要求29所述的方法，其中以約l.0mg/mL至約1.4mg/mL之間的濃度以某一最終劑型施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段。38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中以約1.2mg/mL以某一最終劑型施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段。39.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述給藥方案不改變接受所述治療的患者的腦脊髓液中⑶4與⑶8的比率。40.一種用于治療性治療炎性腸病的給藥方案，其中所述方法包括以下步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中所述人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中根據(jù)以下給藥方案向所述患者施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中根據(jù)以下給藥方案向所述患者施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)每隔一天以皮下注射液形式施用165mg所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的初始劑量持續(xù)六劑；(b)隨后視需要每兩周或每四周以皮下注射液形式施用165mg所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的第七劑量和后續(xù)劑量；其中所述給藥方案誘導(dǎo)所述患者的所述炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；另外其中所述人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中所述人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中所述抗原結(jié)合區(qū)包含以下CDR:41.如權(quán)利要求40所述的給藥方案，其中所述患者對用免疫調(diào)節(jié)劑、腫瘤壞死因子-α拮抗劑中的至少一個或其組合進行的治療缺乏足夠反應(yīng)、喪失反應(yīng)或不耐受。42.如權(quán)利要求40所述的給藥方案，其中炎性腸病是克羅恩氏病或潰瘍性結(jié)腸炎。43.如權(quán)利要求41所述的給藥方案，其中所述炎性腸病是潰瘍性結(jié)腸炎。44.如權(quán)利要求43所述的給藥方案，其中所述炎性腸病是中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎。45.如權(quán)利要求44所述的給藥方案，其中所述給藥方案使得罹患中度至重度活動性潰瘍性結(jié)腸炎的患者的粘膜愈合。46.如權(quán)利要求40所述的給藥方案，其中所述給藥方案使得所述患者的皮質(zhì)類固醇使用減少、消除或減少以及消除。47.如權(quán)利要求40所述的給藥方案，其中所述患者先前接受至少一種用于所述炎性腸病的皮質(zhì)類固醇治療。48.如權(quán)利要求40所述的給藥方案,其中以約l.0mg/mL至約1.4mg/mL之間的濃度以某一最終劑型施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段。49.如權(quán)利要求48所述的給藥方案，其中以約1.2mg/mL以某一最終劑型施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段。50.如權(quán)利要求40所述的給藥方案，其中所述給藥方案不改變接受所述治療的患者的腦脊髓液中⑶4與⑶8的比率。51.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述患者是65歲或65歲以上人士，并且另外其中所述患者不需要對所述給藥方案進行任何調(diào)整。52.如權(quán)利要求40所述的給藥方案，其中所述患者是65歲或65歲以上人士，并且另外其中所述患者不需要對所述給藥方案進行任何調(diào)整。53.一種治療罹患炎性腸病的人患者的方法，其中所述方法包括以下步驟:向罹患炎性腸病的患者施用對人α4β7整合素具有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中根據(jù)以下給藥方案向所述患者施用所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段:(a)施用通過約六周的初始給藥，足以實現(xiàn)所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的平均谷底血清濃度為約20μg/mL至約30μg/mL的所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的多個誘導(dǎo)期劑量；(b)隨后視需要施用維持所述免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的平均穩(wěn)態(tài)谷底血清濃度為約9μg/mL至約13μg/mL或約35μg/mL至40μg/mL的所述人源化免疫球蛋白或其抗原結(jié)合片段的多個維持期劑量；其中所述給藥方案誘導(dǎo)所述患者的所述炎性腸病的臨床反應(yīng)和臨床緩解；另外其中所述人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段包含非人來源的抗原結(jié)合區(qū)和至少一部分人來源的抗體，其中所述人源化免疫球蛋白或抗原結(jié)合片段對α4β7復(fù)合物具有結(jié)合特異性，其中所述抗原結(jié)合區(qū)包含以下CDR:54.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述劑量是通過皮下或肌內(nèi)來施用。55.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述誘導(dǎo)期劑量是通過靜脈內(nèi)來施用，并且所述維持期劑量是通過皮下或肌內(nèi)來施用。56.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述誘導(dǎo)期劑量以選自由每隔一天、約每周和約每兩周組成的組的間隔施用。57.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述維持期劑量以選自由約每周、約每兩周、約每三周、約每四周、約每六周、約每八周和約每十周組成的組的間隔施用。58.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述誘導(dǎo)期劑量在約第O周和第2周施用，并且所述維持期劑量在約第六周開始且以選自由約每周、約每兩周、約每三周、約每四周、約每六周、約每八周和約每十周組成的組的間隔施用。59.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述劑量被自身施用。60.如權(quán)利要求55所`述的方法，其中所述維持期劑量被自身施用。61.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述劑量各自包含約165mg所述人源化免疫球蛋白。62.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述維持期劑量各自包含約165mg所述人源化免疫球蛋白。63.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述患者對用免疫調(diào)節(jié)劑、腫瘤壞死因子-α拮抗劑中的至少一個或其組合進行的治療缺乏足夠反應(yīng)、喪失反應(yīng)或不耐受?！疚臋n編號】A61K47/14GK103533959SQ201280021789【公開日】2014年1月22日申請日期:2012年5月2日優(yōu)先權(quán)日:2011年5月2日【發(fā)明者】威爾洛·迪盧齊奧,方·M·源,喬納德·M·瓦爾加,維斯阿納桑·帕拉尼阿帕安,賈森·布朗,歐文·H·?？怂?凱瑟琳·肖爾茨,海倫·詹金斯,馬里亞·羅薩里奧申請人:米倫紐姆醫(yī)藥公司