Dna疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于治療或減輕生活方式相關(guān)疾病的試劑，所述試劑包含編碼嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，在所述嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽中已經(jīng)插入了包含生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位的氨基酸序列，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
【專利說明】DNA疫苗
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及DNA疫苗，其對于生活方式相關(guān)疾病例如高血壓等的治療或預(yù)防有效。
【背景技術(shù)】
[0002]已有報道稱，在美國，只有35%的高血壓患者能夠適當?shù)乜刂蒲獕?。高血壓治療的成果如此之差的主要原因之一是患者不服?即，不依從)醫(yī)生的指示。作為能夠解決不依從問題的療法，用于高血壓的疫苗引起了關(guān)注(非專利文獻I)。
[0003]用于高血壓的疫苗是用于高血壓的治療方法，其包括給高血壓患者施用高血壓的惡化因子、包含在所述惡化因子中的表位、或編碼它們的表達載體，以在所述高血壓患者體內(nèi)誘導針對所述惡化因子的抗體，從而中和所述惡化因子的功能并減輕高血壓的癥狀。建議以包括腎素、血管緊張素II和AT-1受體在內(nèi)的各種因子作為疫苗的目標(非專利文獻I)。
[0004]然而，通常已經(jīng)建立了對于因子例如腎素、血管緊張素II和AT-1受體等的免疫耐受，因為這些因子是患者自身的成分。因此，甚至在將這些因子或其部分肽向患者直接施用時，也難以在所述患者體內(nèi)誘導針對所述因子的抗體。因而，需要一些技術(shù)構(gòu)思以使患者的免疫系統(tǒng)識別這些自體抗原，從而誘導產(chǎn)生針對這些自體抗原的抗體。
`[0005]乙型肝炎病毒核心(HBc)抗原蛋白通過自組裝構(gòu)成球形核心顆粒。所述核心顆粒具有非常高的免疫原性。在使用通過將期望的表位插入到HBc抗原蛋白的具體位點，或?qū)⑵谕谋砦贿B接到HBc抗原蛋白的末端而獲得的融合多肽時，所述表位遞呈在通過自組裝形成的顆粒的表面上。使用融合多肽，所插入的表位容易被免疫系統(tǒng)識別，并且能夠有效地誘導產(chǎn)生識別所述表位的抗體。因此，使用HBc抗原蛋白作為疫苗的平臺，已嘗試誘導產(chǎn)生抗體，即便抗原難以被免疫系統(tǒng)識別(非專利文獻2、非專利文獻3)。
[0006]專利文獻I公開了由嵌合HBc抗原蛋白構(gòu)成的顆粒,所述嵌合HBc抗原蛋白包含具有表位的外來氨基酸序列，其中所述外來氨基酸序列插入在HBc抗原的氨基酸殘基80-81之間。
[0007]專利文獻2和非專利文獻4公開了包含血管緊張素II的部分肽、間隔區(qū)和病毒樣顆粒(VLP)的復合物，其中所述血管緊張素II的部分肽通過所述間隔區(qū)連接到VLP。描述了所述復合物作為用于高血壓的疫苗是有效的。
[0008]專利文獻3公開了通過將膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)免疫原插入到乙型肝炎核心蛋白的具體區(qū)域而獲得的免疫原性多肽。
[0009]非專利文獻5公開了使用DNA疫苗的肌內(nèi)免疫在兔動脈硬化模型中抑制動脈硬化，其中所述DNA疫苗編碼通過乙型肝炎病毒核心(HBc)抗原蛋白展示的，由26個氨基酸組成的膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)的表位，并且包含CpG DNA。此DNA疫苗經(jīng)設(shè)計以允許將CETP表位插入在HBc抗原蛋白的氨基酸殘基80-81之間。
[0010]非專利文獻6公開了插入在乙型肝炎病毒核心(HBc)抗原蛋白中的異源表位的位置決定了其免疫原性。該文獻公開了在乙型肝炎病毒核心(HBc)抗原蛋白的氨基酸殘基75-81之間插入表位，導致對插入表位的抗體滴度增加，且對HBc的抗體滴度下降。
[0011]非專利文獻7公開了經(jīng)設(shè)計允許將瘧疾CS蛋白重復表位插入在乙型肝炎病毒核心(HBc)抗原蛋白的氨基酸殘基75-81之間的雜合HBcAb-CS顆粒，在小鼠中防止瘧疾感染。
[0012]為了加強免疫作用，已提出向疫苗添加作為佐劑的免疫刺激序列(ISS)，或?qū)SS插入到活性成分的表達載體中(非專利文獻8)。
[0013]然而，用于生活方式相關(guān)疾病例如高血壓等的疫苗的功效不足以令人滿意。
[0014][文獻列表]
[專利文獻]
專利文獻 I JP-B-3228737 專利文獻 2:W02003/031466 專利文獻3:W099/15655 [非專利文獻]
非專利文獻 1:T.H.Do 等，Expert Opin.Biol.Ther., vol.10, n0.7,pp.1077-1087, 2010
非專利文獻 2:D.C.Whitacre 等，Expert Rev.Vaccines, vol.8, n0.11,pp.1565-1573, 2009
非專利文獻 3:B.E.Clarke 等·，Nature, vol.330, pp.381-384，1987非專利文獻 4:P.M.Ambuhl 等，Journal of Hypertension, vol.25, n0.1,pp.63-72, 2007
非專利文獻 5:D.Mao 等，Vaccine, vol.24，pp.4942-4950，2006
非專利文獻 6:F.Schodel 等，Journal of Virology, vol.66, n0.1, pp.106-114，
1992
非專利文獻 7:F.Schodel 等，The Journal of Experimental Medicine, vol.180,pp.1037-1046， 1994
非專利文獻 8:J D Marshall 等，Journal of Leukocyte Biology, vol.82,pp.497-508， 2007。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]本發(fā)明解決的問題
本發(fā)明的目的是提供用于生活方式相關(guān)疾病，例如高血壓、高脂血癥等的優(yōu)異的疫苗。
[0016]解決所述問題的方式
本發(fā)明人已進行了深入的研究，并且發(fā)現(xiàn)編碼插入在乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間的血管緊張素II特異性表位的表達載體能夠良好地治療高血壓。本發(fā)明人已詳細研究了所述表達載體的施用模式，并且通過使用無針注射器等的皮下施用成功地獲得了預(yù)想不到地良好治療結(jié)果。此外，本發(fā)明人已監(jiān)測了由疫苗施用誘導的針對血管緊張素II的抗體滴度，從而發(fā)現(xiàn)通過僅3次施用而獲得的極高抗體滴度?；谶@些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人已進一步研究并完成了本發(fā)明。[0017]也即，本發(fā)明涉及以下內(nèi)容。
[0018][I]用于生活方式相關(guān)疾病的治療或改善劑，其包含編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0019][2]根據(jù)[I]的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病是選自高血壓和高脂血癥組成的組中的一種。 [0020][3]根據(jù)[I]或[2]的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是血管緊張素II (AngII)或膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)。
[0021][4]根據(jù)[3]的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是血管緊張素II (AngII)，并且所述包含特異性表位的氨基酸序列是SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列。
[0022][5]用于高血壓的治療或改善劑，其包含編碼插入了 SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0023][6]根據(jù)[3]的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)，并且所述包含特異性表位的氨基酸序列是SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列。
[0024][7]用于高脂血癥的治療或改善劑，其包含編碼插入了 SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0025][8]根據(jù)[I] - [7]的任一項的治療或改善劑，進一步包含并入到所述表達載體中的免疫刺激序列(ISS)。
[0026][9]根據(jù)[8]的治療或改善劑，其中所述免疫刺激序列(ISS)由SEQ ID NO: 22所示的核苷酸序列組成。
[0027][10]根據(jù)[I] - [9]的任一項的治療或改善劑，其使用無針注射器皮下施用。
[0028][11]根據(jù)[10]的治療或改善劑，其中所述無針注射器是壓力注射器。
[0029][12]根據(jù)[I] - [11]中任一項的治療或改善劑，其多次施用。
[0030][13]根據(jù)[12]的治療或改善劑，其中施用次數(shù)是2次或3次。
[0031][14]根據(jù)[13]的治療或改善劑，其中施用次數(shù)是3次。
[0032][15]根據(jù)[I] - [14]中任一項的治療或改善劑，其以2周的間隔施用3次。
[0033][16]用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病的注射制劑，其包含:
編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，和無針注射器，
其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間，并且其中所述表達載體包封在所述無針注射器之中。
[0034][17]用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病的表達載體，其編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多妝的氣基酸殘基80和81之間。
[0035][18]用于治療或改善高血壓的表達載體，其編碼插入了 SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0036][19]用于治療或改善高脂血癥的表達載體，其編碼插入了 SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0037][20]注射制劑，其包含:
編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，和無針注射器，
所述注射制劑用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間，并且其中所述表達載體包封在所述無針注射器之中。
[0038][21]用于治療或改善哺乳動物中的生活方式相關(guān)疾病的方法，其包括給所述哺乳動物施用有效量的編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0039][22]用于治療或改善哺乳動物中的高血壓的方法，其包括給所述哺乳動物施用有效量的編碼插入了 SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0040][23]用于治療或改善哺乳動物中的高脂血癥的方法，其包括給所述哺乳動物施用有效量的編碼插入了 SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0041][24]用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病的方法，其包括使用無針注射器向哺乳動物注射有效量的編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0042][25]表達載體用于生產(chǎn)生活方式相關(guān)疾病的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。 [0043][26]表達載體用于生產(chǎn)高血壓的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了 SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。[0044][27]表達載體用于生產(chǎn)高脂血癥的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了 SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0045][28]表達載體和無菌注射器用于生產(chǎn)生活方式相關(guān)疾病的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
[0046]發(fā)明的效果
本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防生活方式相關(guān)疾病，例如高血壓和高脂血癥等的更好的疫苗。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0047]圖1顯示了 HBc-AngII ISS(+)施用對高血壓的效果，其中縱軸顯示了大鼠血壓(mmHg)，且橫軸顯示了在施用開始后的時間(周)。
[0048]圖2顯示了由HBc-AngII ISS (+)施用誘導的針對AngII的抗體滴度的時間進程變化，其中縱軸顯示吸光度，且橫軸顯示血清的稀釋比例。
[0049]圖3顯示了在第8周由HBc-AngII ISS(+)施用誘導的針對AngI和AngII的抗體滴度，其中縱軸顯示吸光度，且橫軸顯示血清的稀釋比例。
[0050]圖4顯示了 HBc-AngII ISS(+)施用對高血壓的效果，其中縱軸顯示了大鼠血壓(mmHg)，且橫軸顯示了在施用開始后的時間(周)。
[0051]圖5顯示了由HBc-·AngII ISS (+)施用誘導的針對AngII的抗體滴度的時間進程變化，其中縱軸顯示吸光度，且橫軸顯示在施用開始后的時間(周)。
【具體實施方式】
[0052]本發(fā)明提供了用于生活方式相關(guān)疾病的治療或改善劑，其包含編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含表位的氨基酸序列插入在乙型肝炎病毒核心抗原多妝的氣基酸殘基80和81之間。
[0053]在本說明書中，所述生活方式相關(guān)疾病是由生活方式例如飲食習慣、運動習慣、休息、吸煙、飲酒等導致的疾病的通稱。所述生活方式相關(guān)疾病的實例包括高血壓、高脂血癥、糖尿病、動脈硬化、缺血疾病(心肌梗死、腦卒中等)、肥胖等。所述生活方式相關(guān)疾病優(yōu)選為聞血壓或聞脂血癥，特別優(yōu)選聞血壓。
[0054]在本說明書中，所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是指致使生活方式相關(guān)疾病惡化的多肽。本發(fā)明的治療或改善劑通過誘導產(chǎn)生針對生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的抗體，并通過所述抗體中和所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子，而治療或改善所述生活方式相關(guān)疾病。因此，考慮到這種機制，所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子優(yōu)選是細胞外分泌的因子，或表達在細胞表面上的因子，從而使得其將由在患者體內(nèi)誘導的抗體識別。
[0055]高血壓相關(guān)因子的實例包括致使血壓升高的多肽，例如血管緊張素I1、血管緊張素1、ACE、腎素、AT-1受體等。高血壓相關(guān)因子優(yōu)選為血管緊張素II。[0056]高脂血癥相關(guān)因子的實例包括致使血液中脂質(zhì)(特別是膽固醇或甘油三酯)濃度升高的多肽，例如膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)等。
[0057]在本發(fā)明中，預(yù)期使用源自哺乳動物的生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子，所述哺乳動物與將作為本發(fā)明的治療或改善劑的應(yīng)用目標的哺乳動物是相同的物種。本發(fā)明的治療或改善劑的應(yīng)用目標是哺乳動物。所述哺乳動物的實例包括嚙齒類，例如小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠等；兔形目，例如兔等；有蹄類，例如豬、牛、山羊、馬、綿羊等；食肉動物，例如狗、貓等；靈長類，例如人、猴、稱猴(Macaca、食蟹猴Qlacaca /kscicWaris)、狨猴、猩猩、黑猩猩等；諸如此類。所述哺乳動物優(yōu)選是嚙齒類(小鼠等)或靈長類(人等)。因此，例如，當本發(fā)明的治療或改善劑應(yīng)用于人時，預(yù)期使用源自人的生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子。當本發(fā)明的治療或改善劑應(yīng)用于小鼠時，預(yù)期使用源自小鼠的生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子。
[0058]在本說明書中，關(guān)于具體的因子X (多肽或多核苷酸)，“源自生物Y的因子X”或“生物Y因子X”是指，因子X的氨基酸序列或核酸序列具有與在生物Y中天然表達的因子X的氨基酸序列或核酸序列相同或基本相同的氨基酸序列或核酸序列。所謂“基本相同”是指，感興趣的氨基酸序列或核酸序列與在生物Y中天然表達的因子X的氨基酸序列或核酸序列具有不少于70% (優(yōu)選不少于80%，更優(yōu)選不少于90%，仍更優(yōu)選不少于95%，最優(yōu)選不少于99%)的同一性，并且保持因子X的功能。
[0059]在本說明書中，“表位”是指由各個抗體或T細胞受體識別的基本元件或最小單位，其為上述抗體或T細胞受體所結(jié)合的具體結(jié)構(gòu)域、區(qū)域或分子結(jié)構(gòu)。
[0060]生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的表位優(yōu)選對于所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是特異的。所謂“特異的”是指在衍生出所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的哺乳動物中天然表達的，除所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子之外的基因產(chǎn)物不包含所述表位。
[0061]作為所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的表位，優(yōu)先選擇在以下位置的表位:當識別所述表位的抗體結(jié)合至所述表位時，所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的活性被抑制。此表位可在功能性位點中,例如,配體結(jié)合位點、受體結(jié)合位點、底物結(jié)合位點、輔酶結(jié)合位點、二價離子結(jié)合位點、通道`部分、由特異的酶識別的位點等。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠基于所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的空間結(jié)構(gòu)等，適當?shù)剡x擇所述表位。
[0062]表位的氨基酸序列的長度通常為5-30個氨基酸，優(yōu)選6-25個氨基酸。當氨基酸序列太短時，表位的抗原性可能喪失。當氨基酸序列太長時，嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽不容易由于自組裝而形成核心顆粒，其結(jié)果導致可能無法產(chǎn)生特異性識別所述表位的抗體，并且可能無法獲得對生活方式相關(guān)疾病的優(yōu)異的治療或改善效果。
[0063]生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的優(yōu)選表位的具體實例包括以下。
[0064](血管緊張素II) (W02003/031466和 Journal of Hypertension, vol.25, n0.1,pp.63-72, 2007)
【權(quán)利要求】
1.用于生活方式相關(guān)疾病的治療或改善劑，其包含編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多妝的氣基酸殘基80和81之間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病是選自高血壓和高脂血癥組成的組中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是血管緊張素II (AngII)或膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是血管緊張素II (AngII)，并且所述包含特異性表位的氨基酸序列是SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列。
5.用于高血壓的治療或改善劑，其包含編碼插入了SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的治療或改善劑，其中所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子是膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)，并且所述包含特異性表位的氨基酸序列是SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列。
7.用于高脂血癥的治療或改善劑，其包含編碼插入了SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨 基酸殘基80和81之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中的任一項的治療或改善劑，進一步包含并入到所述表達載體中的免疫刺激序列(ISS)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的治療或改善劑，其中所述免疫刺激序列(ISS)由SEQID NO: 22所示的核苷酸序列組成。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中的任一項的治療或改善劑，其使用無針注射器經(jīng)皮下施用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的治療或改善劑，其中所述無針注射器是壓力注射器。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中的任一項的治療或改善劑，其多次施用。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的治療或改善劑，其中施用次數(shù)是2或3次。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的治療或改善劑，其中施用次數(shù)是3次。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中的任一項的治療或改善劑，其以2周的間隔施用3次。
16.用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病的注射制劑，其包含: 編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，和 無針注射器， 其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間，并且其中所述表達載體包封在所述無針注射器之中。
17.用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病的表達載體，其編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
18.用于治療或改善高血壓的表達載體，其編碼插入了SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多妝的氣基酸殘基80和81之間。
19.用于治療或改善高脂血癥的表達載體，其編碼插入了SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多妝的氣基酸殘基80和81之間。
20.注射制劑，其包含: 編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，和 無針注射器， 所述注射制劑用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間，并且其中所述表達載體包封在所述無針注射器之中。
21.用于治療或改善哺乳動物中的生活方式相關(guān)疾病的方法，其包括給所述哺乳動物施用有效量的編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
22.用于治療或改善哺乳動物中的高血壓的方法，其包括給所述哺乳動物施用有效量的編碼插入了 SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
23.用于治療或改善哺乳動物中的高脂血癥的方法，其包括給所述哺乳動物施用有效量的編碼插入了 SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
24.用于治療或改善生活方式相關(guān)疾病的方法，其包括使用無針注射器向哺乳動物注射有效量的編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽的表達載體，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
25.表達載體用于生產(chǎn)生活方式相關(guān)疾病的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
26.表達載體用于生產(chǎn)高血壓的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了SEQID NO: 16所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
27.表達載體用于生產(chǎn) 高脂血癥的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了SEQID NO: 17所示的氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，其中所述氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
28.表達載體和無菌注射器用于生產(chǎn)生活方式相關(guān)疾病的治療或改善劑的用途，所述表達載體編碼插入了氨基酸序列的嵌合乙型肝炎病毒核心抗原多肽，所述氨基酸序列包含所述生活方式相關(guān)疾病的相關(guān)因子的特異性表位，其中所述包含特異性表位的氨基酸序列插入在所述乙型肝炎病毒核心`抗原多肽的氨基酸殘基80和81之間。
【文檔編號】A61K48/00GK103796673SQ201280027097
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年4月13日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月15日
【發(fā)明者】森下龍一, 中神啟德, 郡山弘, 中神太志, 吉田奈都記 申請人:國立大學法人大阪大學, 安琪士摩奇株式會社