人類髓源抑制性細(xì)胞癌癥標(biāo)記的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了通過(guò)檢測(cè)用于轉(zhuǎn)錄因子激活的CD33+HLA-DRlow、CD14+HLA-DRlow、CD66b+HLA-DRlow或CD1lb+HLA-DRlowMDSC，從而確定癌癥存在（惡性與良性），監(jiān)控癌癥進(jìn)程，監(jiān)控癌癥復(fù)發(fā)，監(jiān)控主體對(duì)于癌癥治療的反應(yīng)或確定癌癥分期的方法。轉(zhuǎn)錄因子包括但不限于STAT3、pSTAT3、HIF1α、STAT3或C/EBPβ。MDSC的表型可以是CD33+HLA-RlowHIFlα+/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+,CD66b+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+,CD33+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+,CD11b+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+或CD11b+HLA-DRlowC/EBPβ+。通過(guò)使PBMC和人類實(shí)體瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，隨后檢測(cè)它們的抑制能力，本發(fā)明還提供了從健康供體的外周血單核細(xì)胞（PBMC）誘導(dǎo)人類MDSC的方法。
【專利說(shuō)明】人類髓源抑制性細(xì)胞癌癥標(biāo)記
[0001]相關(guān)專利的交叉引用
[0002]根據(jù)美國(guó)法典第35章第119(e)條的規(guī)定，本申請(qǐng)要求于2011年4月28日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)61/480，311和2011年12月5日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)61/567，042的優(yōu)先權(quán)，所述專利的全部?jī)?nèi)容在此以引用的方式并入本文。
【背景技術(shù)】
[0003]癌癥的早期檢測(cè)或復(fù)發(fā)檢測(cè)對(duì)于保持良好的健康狀態(tài)非常重要。確定癌癥早期表面標(biāo)記物能夠使腫瘤醫(yī)師治療癌癥病人的成功率提高。免疫抑制細(xì)胞，例如髓源抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells (MDSC))引起腫瘤免疫耐受以及癌癥病人免疫療法和實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型(experimental tumor models) (I)的失敗。據(jù)報(bào)道,MDSC通過(guò)多種機(jī)制抑制T細(xì)胞的功能，包括:調(diào)節(jié)L-精氨酸降解的精氨酸酶-1 (ARG-1)⑵；調(diào)節(jié)可產(chǎn)生活性氮和活性氧類的誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)和NADPH氧化酶(N0X2) (3,4);血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子過(guò)表達(dá)(5);半胱氨酸降解(6);以及增加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T-regulatory, Treg)的細(xì)胞數(shù)量(7,8)。MDSC聚集在創(chuàng)傷位點(diǎn)、嚴(yán)重感染或敗血位點(diǎn)以及癌癥(9)位點(diǎn)，而在健康受試者體內(nèi)很少或沒(méi)有，可能是由于缺氧環(huán)境和低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1a表達(dá)(10)引起的。在結(jié)腸癌(11)、黑色素瘤(11)、肝細(xì)胞癌(12)、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(4)、非小細(xì)胞肺癌(13)、腎細(xì)胞癌(14)、胰腺癌(15)和乳腺癌(16)主體中均報(bào)道過(guò)MDSC。針對(duì)癌癥主體，Diaz等人(16)認(rèn)為MDSC的聚集與進(jìn)一步的疾病和不良預(yù)后相關(guān)。在癌癥主體中檢測(cè)典型MDSC的能力能夠使得腫瘤學(xué)家確定治療的有效性，以及治療后腫瘤是否復(fù)發(fā)。此外，外周血中的MDSC特性可以用來(lái)區(qū)分良性和惡性病變，以及難以通過(guò)常規(guī)成像、細(xì)針穿刺抽吸活檢或現(xiàn)有血清化驗(yàn)辨別的腫塊。因此，在本【技術(shù)領(lǐng)域】中，有必要發(fā)展檢測(cè)MDSC數(shù)量的方法，以制定出合適的治療方案。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了這種需求，且提供了相關(guān)的有利條件。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了確定受檢樣品中MDSC數(shù)量的方法以及治療癌癥主體的方法，所述方法包括如下步驟，可選地，所述方法基本上由如下步驟組成，或所述方法還進(jìn)一步由如下步驟組成:a)在所述主體的含有細(xì)胞的樣品中檢測(cè)髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)，其中所述MDSC具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD66b+HLA-DR1(WHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DRl0WHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlow HIFl a +/STAT3VpSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDl lb+HLA-DR^C/EBP β + ;以及 b)如果所述 MDSC 被檢測(cè)到，實(shí)施癌癥治療；如果上述表型沒(méi)有被檢測(cè)到，則不需要實(shí)施治療。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療已確定對(duì)所提供的治療方法有反應(yīng)的癌癥主體的方法，所述方法包括，可選地，所述方法基本上由如下步驟組成，或所述方法還進(jìn)一步由如下步驟組成:給癌癥主體有效量的癌癥治療，其中通過(guò)從主體分離的細(xì)胞或組織中篩選髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)來(lái)確定所述主體是否有反應(yīng)，其中所述的MDSC的表型如下ADSS+HLA-DRltwHIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRl0WHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD66b+HLA-DRlmVSTAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD33+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DR1t5wHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β +。
[0005]另一方面涉及一種治療已確定對(duì)治療有反應(yīng)的癌癥主體的方法,包括給癌癥主體實(shí)施有效量的癌癥治療，其中通過(guò)一種方法確定所述主體對(duì)所述治療有反應(yīng)，所述方法包括在來(lái)自于主體的含有細(xì)胞的樣品中檢測(cè)髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)，所述MDSC具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DRlOTHIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DRlOT/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1<)WHIF1 a +/STAT3+/pSTAT37C/EBPb+，CDllb+HLA-DR1? HIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DR1(WC/EBP β +。
[0006]另一方面涉及一種檢測(cè)或輔助檢測(cè)主體是否有癌癥的方法，所述方法包括如下步驟，可選地，所述方法基本上由如下步驟組成，或所述方法還進(jìn)一步由如下步驟組成:在來(lái)自于主體的含有細(xì)胞的樣品中檢測(cè)髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)，其中所述的MDSC具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DR1? HIF I a +STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DR1(W HIF I a +STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1(WHIF I a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIF I a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β + ;其中所述MDSC存在則意味著有可能有癌癥，所述MSDC不存在則意味著不太可能有癌癥。
[0007]另一方面涉及一種檢測(cè)癌癥主體的癌癥治療效力的方法，所述方法包括如下步驟，可選地，所述方法基本上由如下步驟組成，或所述方法還進(jìn)一步由如下步驟組成:在來(lái)自于主體的含有細(xì)胞的樣品中檢測(cè)髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)，其中所述的MDSC具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DR1? HIF I a +STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DRlOTHIF I a +STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1<)WHIF1 a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DRlowC/ΕΒΡβ + ;其中在癌癥治療過(guò)程中沒(méi)有所述MDSC或所述MDSC減少則意味著有效的治療應(yīng)答，有所述MDSC或所述MDSC增加則意味著無(wú)效的治療應(yīng)答。
[0008]另一方面涉及一種從髓系細(xì)胞源(source of myeloid lineage cells)產(chǎn)生人類MDSC的方法，所述方法包括如下步驟，可選地，所述方法基本上由如下步驟組成，或所述方法還進(jìn)一步由如下步驟組成:(a)在足以誘導(dǎo)MDSC的條件下，使腫瘤樣品與髓系細(xì)胞源接觸；以及(b)分離所述MDSC。分離的MDSC以及含有所述細(xì)胞的組合物在本文中會(huì)進(jìn)一步敘述。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1是用于體外產(chǎn)生腫瘤相關(guān)髓系抑制性細(xì)胞(tumor-associated myeloidsuppressor cells)的共培養(yǎng) 和MDSC抑制實(shí)驗(yàn)(Suppression Assays)示意圖。誘導(dǎo):正常供體的外周血單核細(xì)胞(PBMC)與人類實(shí)體瘤細(xì)胞系共培養(yǎng)一周。MDSC分離:通過(guò)CD33抗體微珠標(biāo)記(microbead labeling)和磁選柱(magnetic column separation)從 PBMC-腫瘤共培養(yǎng)物中分離出CD33+細(xì)胞。抑制試驗(yàn):在T細(xì)胞刺激因子存在的條件下，隨后使腫瘤促使分化(Tumor-educated)的⑶33+細(xì)胞與新鮮的CFSE-標(biāo)記的自體⑶8+T細(xì)胞以1:4的比例共培養(yǎng)。3天后，使用流式細(xì)胞術(shù)，以羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(CFSE)的稀釋度計(jì)算T細(xì)胞的增殖。以CD33+細(xì)胞抑制自體CD8+T細(xì)胞增殖的能力評(píng)估抑制功能。
[0010]圖2顯示由亞群MDSC-誘導(dǎo)細(xì)胞系誘導(dǎo)的CD33+MDSC產(chǎn)生上升的IL-Ιβ、IL-6(A)、TNF α (B)、VEGF (C)和 GM-CSF (D)。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(head and neck squamous cellcarcinoma) (HNSCC)細(xì)胞系產(chǎn)生的這些細(xì)胞因子的蛋白分泌是通過(guò)ELISA技術(shù)檢測(cè)上清液測(cè)定的，以確認(rèn)基因表達(dá)結(jié)果。平均蛋白水平(n=2，重復(fù)三次)以土SEM顯示。*是指統(tǒng)計(jì)顯著性，ρ〈0.05。
[0011]圖3顯示HNSCC誘導(dǎo)的MDSC抑制自體T細(xì)胞的增殖和IFNy的產(chǎn)生。HNSCC細(xì)胞系亞群誘導(dǎo)具有MDSC抑制功能特性的CD33+細(xì)胞群，包括抑制自體CD8+T細(xì)胞的增殖(a)和IFN Y的分泌(B)。腫瘤細(xì)胞系通過(guò)MDSC誘導(dǎo)強(qiáng)度分組:強(qiáng)(黑)，弱(灰色)以及不能誘導(dǎo)(白色)。這兩組圖表的平均值(n≥2個(gè)供體)以土SEM顯示。*是指統(tǒng)計(jì)顯著性，ρ〈0.05。
[0012]圖4顯示與⑶33"MDSC相比，人類乳腺癌、肺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系更優(yōu)先誘導(dǎo)⑶Ilb+MDSC,以及確定⑶Ilb+MDSC作為第二亞群(subset)。A.檢測(cè)來(lái)自于乳腺癌、肺癌或神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系-PBMC共培養(yǎng)物的CDllb+細(xì)胞對(duì)CD3/CD28刺激的自體T細(xì)胞的抑制功能。分別通過(guò)⑶33+或⑶11+與自體T細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)顯示平均(n=2) T細(xì)胞增殖土SEM或T細(xì)胞增殖(n=l)。B.通過(guò)細(xì)胞因子FLT3L和TGFP可以從正常供體PBMC誘導(dǎo)⑶II+MDSC亞群。平均值(n=3)以土SEM顯示。*是指與單獨(dú)T細(xì)胞相比，在平均T細(xì)胞增殖中的統(tǒng)計(jì)顯著性(p〈0.05)。
[0013]圖5顯示⑶33+和⑶I Ib+腫瘤細(xì)胞系誘導(dǎo)的MDSC的特性。A.通過(guò)與單獨(dú)培養(yǎng)基、非抑制性⑶33+和⑶I Ib+細(xì)胞相比較，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HNSCC細(xì)胞系誘導(dǎo)的⑶33+和乳腺癌細(xì)胞系誘導(dǎo)的⑶Ilb+MDSC的表型。平均陽(yáng)性細(xì)胞百分比(n>2)以土SD顯示。B.通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)抗原呈遞細(xì)胞(左)和抑制性細(xì)胞(右)標(biāo)記在強(qiáng)抑制(由HNSCC細(xì)胞系SCCL-MTU SCC-4、CAL-27誘導(dǎo))和非抑制(由SW2224、RPMI265誘導(dǎo)或單獨(dú)培養(yǎng)基)CD33+髓系細(xì)胞中的表達(dá)。同型對(duì)照以上的平均熒光值(數(shù)據(jù)來(lái)自3組供體，在所有三種誘導(dǎo)條件下(n=9)的平均值)土SEM顯示。為了比較抑制細(xì)胞和非抑制細(xì)胞之間的平均值，*指示統(tǒng)計(jì)顯著性，Ρ〈0.05且“ +，，指示ρ=0.59。
[0014]圖6顯示人類MDSC通過(guò)上調(diào)ARG-1、Ν0Χ2、iNOS、VEGF和TGF β調(diào)節(jié)抑制。Α.在腫瘤細(xì)胞系誘導(dǎo)的⑶33+MDSC中，公認(rèn)的抑制基因ARG-1、iNOS、N0X2-構(gòu)成的NCFl (N0X2-component NCFI) ,VEGF和TGF β的表達(dá)。*是指統(tǒng)計(jì)顯著性，ρ〈0.05，在對(duì)只有CD33+對(duì)照的培養(yǎng)基進(jìn)行兩兩比較的Dunnett測(cè)試后，利用方差分析(ANOVA)每個(gè)基因的表達(dá)。B.腫瘤細(xì)胞系誘導(dǎo)的⑶33"MDSC抑制，⑶3/⑶28刺激的自體T細(xì)胞的增殖。MDSC抑制機(jī)制ARG-1和N0X2的特異性抑制因子調(diào)節(jié)部分但并非全部抑制的逆轉(zhuǎn)。*是指平均T細(xì)胞增殖(平均值以土SEM顯示，每個(gè)抑制因子的η > 7，數(shù)據(jù)來(lái)自兩組具有相似結(jié)果的獨(dú)立實(shí)驗(yàn))中統(tǒng)計(jì)顯著性差異，Ρ〈0.05，在兩兩比較的Tukey測(cè)試后，由方差分析得出。C.在⑶33+和CDllb+人類MDSC中ARG-1、iNOS、N0X2-構(gòu)成的NCFl的基因表達(dá)比較，顯示這些基因具有相似的表達(dá)水平。相對(duì)于作為對(duì)照的培養(yǎng)基，平均倍數(shù)改變(MDSC的3個(gè)獨(dú)立的供體來(lái)自于與三個(gè)誘導(dǎo)腫瘤模型中的每一個(gè)的共培養(yǎng)物)以土SEM顯示。通過(guò)對(duì)每個(gè)被觀察基因進(jìn)行Student’s測(cè)試，發(fā)現(xiàn)這些亞群的平均表達(dá)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)顯著性差異。
[0015]圖7顯示轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)人類MDSC抑制功能。A.在單獨(dú)培養(yǎng)基作為對(duì)照的情況下，通過(guò)qRT-PCR測(cè)定HIFla和STAT3在腫瘤細(xì)胞系誘導(dǎo)的⑶33+或⑶IIb+MDSC中的表達(dá)。平均值(數(shù)據(jù)來(lái)自6組單獨(dú)的供體，兩個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn))以土SEM顯示；*指示統(tǒng)計(jì)顯著性，ρ〈0.05，“ + ” 指示 CD33+和 CDlIb+MDSC 兩兩比較中 ρ=0.06。B.p_STAT3 和 C/ΕΒΡ β 在⑶33+(上部)和⑶llb+(下部)MDSC中的免疫組化分析。顯示多個(gè)染色樣品的典型圖像(放大倍數(shù)為200倍)。C.通過(guò)toll樣受體激動(dòng)劑脂多糖激活的人類MDSC亞群發(fā)生HIFl a、C/ΕΒΡ β和STAT3的上調(diào)，與此同時(shí)，還有抑制調(diào)節(jié)因子ARG-1，iNOS和N0X2的表達(dá)上調(diào)。平均值(數(shù)據(jù)來(lái)自三組單獨(dú)供體)以土SEM顯示。D.MDSC亞群中，與抑制功能失活相關(guān)的的轉(zhuǎn)錄變化。通過(guò)ATRA，舒尼替尼(sunitinib)和CXB引起的⑶33+MDSC抑制功能逆轉(zhuǎn)與3丁八了3和!1正10表達(dá)(箭頭)下調(diào)相關(guān)。由ATRA和舒尼替尼引起的⑶Ilb+MDSC功能性抑制與C/ΕΒΡβ表達(dá)水平的下調(diào)相關(guān)(箭頭)，但是HIFl a和STAT3的mRNA表達(dá)水平?jīng)]有變化。發(fā)現(xiàn)CXB對(duì)⑶IIb+MDSC沒(méi)有抑制作用，沒(méi)有觀察到C/ΕΒΡ β表達(dá)水平的下調(diào)。平均值(數(shù)據(jù)來(lái)自三組單獨(dú)的供體)以土SEM顯示，*指示在藥物處理的MDSC和沒(méi)有處理的MDSC中，轉(zhuǎn)錄水平的統(tǒng)計(jì)顯著性下降(Ρ〈0.05)。
[0016]圖8 是 STAT3 (SEQ.1D.N0.1)的氨基酸序列。
[0017]圖9 是 HIFl a (SEQ.1D.N0.2)的氨基酸序列。
[0018]圖10 是 C/ΕΒΡ β (SEQ.1D.N0.3)的氨基酸序列。
[0019]圖11是癌癥檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的臨床試驗(yàn)。A.癌癥檢測(cè)和監(jiān)測(cè)微創(chuàng)臨床試驗(yàn)的一個(gè)實(shí)施例示意圖。對(duì)主體外周血細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析，以髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)的存在作為腫瘤存在的標(biāo)志。通過(guò)與抑制功能直接相關(guān)的3個(gè)標(biāo)記表型區(qū)分活性MDSC和正常血細(xì)胞。活性MDSC的聚集與病變分期和腫瘤負(fù)荷直接相關(guān)，通過(guò)一個(gè)簡(jiǎn)單的血液測(cè)試就能夠跟蹤病變分期，治療的腫瘤應(yīng)答以及腫瘤復(fù)發(fā)或進(jìn)展。B和C.證實(shí)癌癥主體的外周血MDSC具有⑶33+HLA-DR1? HIFl a +表型。從正常的健康志愿者⑶或HNSCC癌癥主體(C)采集20ml外周血，通過(guò)密度梯度分離法分離PBMC。通過(guò)使用熒光標(biāo)記的單克隆抗體，使PBMC被標(biāo)記上⑶33+和HLA-DR+,然后細(xì)胞被固定和透化(permeabiIized),通過(guò)第三抗體進(jìn)行HIFla的細(xì)胞內(nèi)染色。在FACS Calibur流式細(xì)胞儀上，利用CellQuestPro軟件以及收集至少50000個(gè)白細(xì)胞樣品分析染色的樣品PBMC和同型對(duì)照(陽(yáng)性細(xì)胞如中間面板所示)。發(fā)現(xiàn)HLA-DRltw HIFl α +細(xì)胞在正常供體(η=3)中占髓系細(xì)胞的0.12~1.99%，而在頭頸部癌癥主體(η=2)中占髓系細(xì)胞的16.23~15.78%，圖中顯示了典型的點(diǎn)陣圖。下面的列表數(shù)據(jù)描述了圖11中FACS分析結(jié)果。
[0020]正常健康供體A
【權(quán)利要求】
1.一種治療已確定對(duì)治療有反應(yīng)的癌癥主體的方法，包括:給主體實(shí)施有效量的癌癥治療，其中通過(guò)一種方法確定所述癌癥主體對(duì)所述治療有反應(yīng)，所述方法包括:在來(lái)自于所述主體的含有細(xì)胞的樣品中檢測(cè)髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)，所述MDSC具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DRlOTHIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DRlOT/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1? HIFl a +/STAT3+/pSTAT37C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 和 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β +。
2.一種檢測(cè)或輔助檢測(cè)主體體內(nèi)是否有癌癥的方法，包括: 在來(lái)自于所述主體的含有細(xì)胞的樣品中檢測(cè)髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)，其中所述MDSC 具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CD 6 6 b+HLA-D RlowH I F I a +/S T AT 3+/p S T AT 3+/C/EBPb+, CD33+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，和 CDllb+HLA-DR1? C/EBP β+;以及 其中所述MDSC存在則指示有癌癥，所述MSDC不存在則指示沒(méi)有癌癥。
3.一種用于在癌癥主體中確定癌癥治療效力的方法,包括: 在來(lái)自于所述主體的含有細(xì)胞的樣品中檢測(cè)髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)，其中所述MDSC 具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DR1? HIF I a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CD66b+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1?HIF I a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 和CDllb+HLA-DRl0WC/EBP β + ；以及 其中在癌癥治療過(guò)程中，所述MDSC減少或不存在所述MDSC則指示有效的治療應(yīng)答。
4.如權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的癌癥選自由HNSCC、乳腺癌、淋巴瘤、宮頸癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、腦癌、黑色素瘤、肉瘤、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、甲狀腺癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、肝癌以及胰腺癌構(gòu)成的組。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的癌癥選自由HNSCC、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌和結(jié)腸癌構(gòu)成的組。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的癌癥是淋巴癌。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的淋巴癌選自由成熟細(xì)胞瘤、成熟T細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞瘤以及霍吉金斯淋巴瘤構(gòu)成的組。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的成熟細(xì)胞瘤選自由慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、B細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病、淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤(例如Waldenstrom巨球蛋白血癥)、脾邊緣帶淋巴瘤、漿細(xì)胞骨髓瘤、漿細(xì)胞瘤、單克隆免疫球蛋白病、重鏈病、結(jié)外邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、結(jié)內(nèi)邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(NMZL)、濾泡淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大B細(xì)胞淋巴瘤、原發(fā)積液淋巴瘤以及伯基特淋巴瘤/白血病構(gòu)成的組。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的成熟T細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞瘤選自由T細(xì)胞大顆粒淋巴細(xì)胞白血病、侵襲性NK細(xì)胞白血病、成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤、結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤(鼻型)、腸病型T細(xì)胞淋巴瘤、肝脾T細(xì)胞淋巴瘤、母細(xì)胞性NK細(xì)胞淋巴瘤、蕈樣真菌/塞扎里綜合征、原發(fā)性皮膚CD30-陽(yáng)性皮膚T細(xì)胞增生性疾病、原發(fā)性皮膚間變性大細(xì)胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細(xì)胞性淋巴瘤、外周T細(xì)胞淋巴瘤(非特定的)以及間變性大細(xì)胞淋巴瘤構(gòu)成的組。
10.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述含有細(xì)胞的樣品包括:外周血、外周血淋巴細(xì)胞、全外周血的紅細(xì)胞溶解產(chǎn)物、腫瘤、淋巴結(jié)組織、淋巴、脾細(xì)胞、腦脊液、胸腔積液或腹腔積液。
11.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述的檢測(cè)是使用抗體檢測(cè)進(jìn)行的。
12.如上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述的檢測(cè)是使用熒光激活流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行的。
13.如權(quán)利要求1以及4~12任一項(xiàng)所述的方法，其中在實(shí)施所述癌癥治療后，所述方法進(jìn)一步包括: 評(píng)估來(lái)自于所述主體的含有細(xì)胞的樣品中髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)的存在，其中所述 MDSC 具有下組表型中的一種:CD33+HLA-DRlOT HIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlOTHIFIa 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb +，CD66b+HLA_DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD33+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DR1t5wHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+ 和 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β + ；以及 其中所述MDSC下降則指示治療改善，所述MSDC水平上升或沒(méi)有變化則指示治療失敗。
14.一種用于從髓系細(xì)胞源產(chǎn)生人類MDSC的方法，包括: Ca)在足以誘導(dǎo)MDSC的條件下，使所述髓系細(xì)胞源與腫瘤樣品接觸； (b)分離被誘導(dǎo)的MDSC。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的髓系細(xì)胞源選自由血液、腫瘤、淋巴、淋巴結(jié)組織、脾細(xì)胞、腦脊液、腹腔積液和胸腔積液構(gòu)成的組。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的髓系細(xì)胞源是外周血單核細(xì)胞。
17.如權(quán)利要求14~16任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的髓系細(xì)胞源來(lái)自于健康供體。
18.如權(quán)利要求14~17任一項(xiàng)所述的方法，其中所述被誘導(dǎo)的MDSC的表型選自由CD33+、CD14+、CD66b+ 和 CDllb+ 構(gòu)成的組。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述被誘導(dǎo)的MDSC的表型選自由CD33+HLA-DRl0WHIFl a +/STAT3 +，CD14+HLA-DRlowHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb +，CD66b+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+/pSTAT37C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 和 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β + 構(gòu)成的組。
20.如權(quán)利要求14~16任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的腫瘤樣品選自由HNSCC、惡性淋巴瘤、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、腦癌、黑色素瘤、肉瘤、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、甲狀腺癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、肝癌以及胰腺癌構(gòu)成的組。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述的惡性淋巴瘤選自由成熟細(xì)胞瘤、成熟T細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞瘤以及霍吉金斯淋巴瘤構(gòu)成的組。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述的成熟細(xì)胞瘤選自由慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、B細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病、淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤(例如Waldenstrom巨球蛋白血癥)、脾邊緣帶淋巴瘤、漿細(xì)胞骨髓瘤、漿細(xì)胞瘤、單克隆免疫球蛋白病、重鏈病、結(jié)外邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、結(jié)內(nèi)邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(NMZL)、濾泡淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大B細(xì)胞淋巴瘤、原發(fā)積液淋巴瘤以及伯基特淋巴瘤/白血病構(gòu)成的組。
23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述的成熟T細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞瘤選自由T細(xì)胞大顆粒淋巴細(xì)胞白血病、侵襲性NK細(xì)胞白血病、成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤、結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤(鼻型)、腸病型T細(xì)胞淋巴瘤、肝脾T細(xì)胞淋巴瘤、母細(xì)胞性NK細(xì)胞淋巴瘤、蕈樣真菌/塞扎里綜合征、原發(fā)性皮膚CD30-陽(yáng)性皮膚T細(xì)胞增生性疾病、原發(fā)性皮膚間變性大細(xì)胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細(xì)胞性淋巴瘤、外周T細(xì)胞淋巴瘤(非特定的)以及間變性大細(xì)胞淋巴瘤構(gòu)成的組。
24.一種用于鑒別候選化合物作為抑制激動(dòng)劑的方法，包括:比較所述候選化合物存在或不存在時(shí)腫瘤細(xì)胞系促使分化的⑶33+細(xì)胞、⑶14+細(xì)胞、⑶66b+細(xì)胞或⑶Ilb+人類MDSC的抑制活性功能，其中所述候選化合物存在時(shí)T細(xì)胞增殖的相對(duì)下降則指示促進(jìn)抑制活性。
25.一種用于鑒別候選化合物作為抑制拮抗劑的方法，包括:比較所述候選化合物存在或不存在時(shí)腫瘤細(xì)胞系促使分化的⑶33+細(xì)胞、⑶14+細(xì)胞、⑶66b+細(xì)胞或⑶Ilb+人類MDSC的抑制活性功能，其中所述候選化合物存在時(shí)T細(xì)胞增殖的相對(duì)增加則指示反抑制活性。`
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103608028SQ201280030591
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2012年4月27日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月28日
【發(fā)明者】艾倫L.·艾普斯坦, 梅利莎G.·萊希納 申請(qǐng)人:南加利福尼亞大學(xué)