Fc受體結(jié)合蛋白的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及結(jié)合FcRn的抗體和使用這些抗體的方法。
【專利說明】Fe受體結(jié)合蛋白
[0001]相關(guān)申請(qǐng)
[0002]本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C.§ 119要求2011年6月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)N0.61/492，617和2011年6月17日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)N0.61/498，266的優(yōu)先權(quán)。兩篇臨時(shí)申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容以引用的方式整體并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明的領(lǐng)域涉及結(jié)合Fe受體的蛋白。
[0004]發(fā)明背景
[0005]血清中最豐富的抗體同種型是IgG，并且它在介導(dǎo)對(duì)病原體的保護(hù)以及介導(dǎo)加速免疫系統(tǒng)組分向組織、粘膜和真皮表面的募集的過敏和炎癥反應(yīng)中具有關(guān)鍵作用(Junghans, Immunologic Researchl6 (I): 29 (1997))。此外，它也是多種自身免疫性疾病的關(guān)鍵組分。在正常條件下，IgG在血清中的半衰期范圍為小鼠內(nèi)5至7天和人體內(nèi)22至23天，這相對(duì)于其它血漿蛋白的血清半衰期而言是較長(zhǎng)的時(shí)間。在某種程度上，這發(fā)生是因?yàn)樾律鷥篎cRn受體(FcRn)從降解的溶酶體中援救出被胞飲的IgG并且將其再循環(huán)回到細(xì)胞外室(Junghans 和 Anderson, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA93:5512 (1996), Roopenian 等，J.1mmunologyl70:3528(2003))。
[0006]FcRn結(jié)合IgG的Fe部分。IgG的Fe區(qū)域和FcRn之間的相互作用是pH依賴性的。通過液相內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞后，IgG被封存到胞內(nèi)體中，并在酸性pH (6~6.5)下以高親和力結(jié)合FcRn ;當(dāng)IgG-FcRn復(fù)合物循環(huán)到質(zhì)膜上,在微堿性pH (~7.4)下在血流中IgG與FcRn迅速解離。通過這種受體介導(dǎo)的再循環(huán)機(jī)制，F(xiàn)cRn從降解的溶酶體中有效援救出IgG，從而延長(zhǎng)了循環(huán)IgG的半衰期。
[0007]FcRn是非共價(jià)的異源二聚體，其通常位于內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞的胞內(nèi)體中。它是單跨膜的膜結(jié)合受體，具有三個(gè)重鏈a結(jié)構(gòu)域(a 1、a 2和a 3)和一個(gè)單一的可溶性輕鏈^ 2-微球蛋白(P 2M)結(jié)構(gòu)域。在結(jié)構(gòu)上，它屬于具有P 2M作為共同輕鏈的主要組織相容性復(fù)合物I類分子家族。FcRna鏈?zhǔn)怯砂琣 1、a 2和a 3重鏈結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜區(qū)域和相對(duì)短的胞質(zhì)尾區(qū)組成的46kD蛋白(Burmeister等，Nature372:366 (1994))。
[0008]FcRn首次在新生大鼠腸道中鑒定出，F(xiàn)cRn在其中起作用以介導(dǎo)從母乳中對(duì)IgG抗體的吸收，并且促進(jìn)其運(yùn)輸?shù)窖h(huán)系統(tǒng)(Leach等，J Immunol 157:3317 (1996))。FcRn也已從人胎盤中分離，其中FcRn也介導(dǎo)母體IgG吸收和運(yùn)輸?shù)教パh(huán)。在成人中，F(xiàn)cRn在包括肺上皮組 織、小腸、腎，以及鼻、陰道和膽道發(fā)辮表面(biliarytress surfaces)的許多組織中表達(dá)(美國(guó)專利第6，030, 613號(hào)和第6，086, 875號(hào)；Israel 等，Immunology92: 69 (1997) ; Kobayashi 等，Am J Physiol (2002) ; RenalPhysiol282:F358(2002))o
[0009]為了研究FcRn對(duì)IgG動(dòng)態(tài)平衡的貢獻(xiàn)，已將小鼠工程改造為使得編碼P 2M和FcRn重鏈的基因的至少部分已被“敲除”，以便不表達(dá)這些蛋白(W002/43658; Junghans和Anderson, Proc NatlAcad Sci US93:5512 (1996))。在這些小鼠中，IgG 的血清半衰期和濃度急劇降低，這表明IgG動(dòng)態(tài)平衡的FcRn依賴性機(jī)制。
[0010]還表明，抗-人FcRn抗體可以在這些FcRn敲除小鼠中產(chǎn)生，并且這些抗體可以阻止IgG與FcRn結(jié)合。然而，這樣的抗體還未產(chǎn)生或未經(jīng)測(cè)試(W002/43658)。
[0011]對(duì)IgG與FcRn結(jié)合的抑制通過阻止IgG再循環(huán)而負(fù)面地改變了 IgG的血清半衰期。已證實(shí)此原理在自身免疫性皮膚大皰疾病的小鼠模型中治療上有效(Li等，J ClinInvestl 15:3440-3450 (2005))。因此，阻斷或拮抗IgG與FcRn結(jié)合的試劑可以用于治療或阻止以存在不當(dāng)調(diào)節(jié)的IgG抗體為特征的自身免疫和炎性疾病或病癥。在大鼠被動(dòng)模型中，在30mg/kg劑量下,拮抗性抗-大鼠FcRn單克隆抗體(mAb) 1G3以成功阻止了實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力(EAMG);該劑量比用于治療MG、SLE和ITP的靜脈內(nèi)IgG(IVIG)低約 100倍。另外，發(fā)生如紅斑狼瘡或關(guān)節(jié)炎的自身免疫病癥有遺傳性傾向的FcRn-缺陷性小鼠在疾病的嚴(yán)重性上顯著降低。
[0012]發(fā)明概述
[0013]本公開提供了結(jié)合人Fe受體的分離的抗體、編碼這些抗體的核酸以及使用這些抗體以檢測(cè)FcRn的存在、調(diào)節(jié)Fe受體活性和治療自身免疫病癥的方法。
[0014]因此，本公開的一個(gè)方面的特征是與人FcRn結(jié)合的分離的抗體。這種抗-FcRn抗體包含輕鏈可變區(qū)(Vl)，該區(qū)包含Vl⑶R1、Vl⑶R2和Vl⑶R3區(qū)，其中Vl⑶R3區(qū)與SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或 ASYAGSGIYV (SEQ ID NO: 13)的 Vl CDR3 區(qū)具有至少 85% (例如90%或95%)的同源性。任選地，抗-FcRn抗體的\ CDRl和\ CDR2分別與\ CDRl區(qū)TGTGSDVGSYNLVS (SEQ IDNO: 14)和'CDR2 區(qū)⑶SQRPS (SEQ ID NO: 15)具有至少 85%(例如90%或95%)的同源性?？?FcRn抗體在至少一個(gè)⑶R3區(qū)，例如\CDR3區(qū)中至少一個(gè)的第一位上不具有半胱氨酸。
[0015]在一些實(shí)施方案中，上述抗-FcRn抗體包含與TGTGSDVGSYNLVS (SEQ ID N0:14)具有至少90%同源性的VlCDRU與⑶SQRPS(SEQ ID NO: 15)具有至少90%同源性的VLCDR2,和 / 或與 SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或 ASYAGSGIYV (SEQ IDNO: 13)具有至少 90% 同源性的' CDR3。在一個(gè)實(shí)施例中，抗-FcRn抗體包含Vl CDRl區(qū)TGTGSDVGSYNLVS (SEQ IDN0:14)、VLCDR2gGDSQRPS(SEQ ID NO: 15)，和 / 或 Vl CDR3 區(qū) SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或ASYAGSGIYV(SEQ ID NO:13)。
[0016]在其它實(shí)施方案中，本文公開的分離的抗-FcRn抗體包含八，該八包含與SEQ IDNO: 10或SEQ ID N0:11具有至少85%(例如至少90%、95%或98%)同源性的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施例中，分離的抗體的\包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的氨基酸序列。
[0017]本公開的另一個(gè)方面的特征是分離的抗-FcRn抗體，這種抗體包含輕鏈可變區(qū)(V)，該區(qū)包含八CDRUVl CDR2和Vl CDR3區(qū)，其中Vl CDR3區(qū)與下列序列SSYAGSGIYV(SEQID NO: 12)或ASYAGSGIYV (SEQ ID NO: 13)相比具有多達(dá)3個(gè)氨基酸替換，并且其中分離的抗體在至少一個(gè)⑶R3區(qū)，例如VfDR3區(qū)中至少一個(gè)的第一位上不具有半胱氨酸。任選地，與下列序列相比，抗-FcRn抗體的Vl⑶Rl和Vl⑶R2和Vl⑶R3總共包含多達(dá)10個(gè)氨基酸替換
[0018](a)CDRl:TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:14)
[0019](b)CDR2:ffl)SQRPS(SEQ ID NO: 15)
[0020](c)CDR3:SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:12)或ASYAGSGIYV(SEQ ID NO:13)。[0021]上述抗-FcRn抗體中的任一個(gè)可進(jìn)一步包含重鏈可變區(qū)(Vh)，該區(qū)包含Vh⑶R1、Vh 0?2和￥11 CDR3 區(qū)，其中 Vh CDR3 與 LAIGDSY (SEQ ID NO: 24)具有至少 85% (例如 90% 或95%)的同源性。任選地，抗-FcRn抗體的Vh CDR0PVh CDR2分別與EYAMG(SEQ ID NO: 22)和 SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO: 23)具有至少 85% (例如 90% 或 95%)的同源性。
[0022]在一些實(shí)施方案中，抗-FcRn抗體包含與EYAMG(SEQ ID NO: 22)具有至少90%同源性的 Vh CDRl、與 SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO: 23)具有至少 90% 同源性的 VHCDR2，和 /或與LAI⑶SY(SEQ ID NO:24)具有至少90%同源性的VHCDR3。在一個(gè)實(shí)施例中，抗-FcRn抗體包含 Vh CDRl 區(qū) EYAMG (SEQ ID NO: 22) ,Vh CDR2 區(qū) SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO: 23)，和 / 或 Vh CDR3 區(qū) LAI⑶SY(SEQ ID NO: 24)。 [0023]在其它實(shí)施方案中，本文公開的抗-FcRn抗體包含Vh，該Vh與SEQ ID NO: 9具有至少85%(例如至少90%、95%或98%)的序列同一性。在一個(gè)實(shí)施例中，分離的抗體的Vh包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
[0024]在另一個(gè)方面，本公開提供了包含重鏈的分離的抗-FcRn抗體，該重鏈包含重鏈可變區(qū)(Vh)和重鏈恒定區(qū)，其中Vh包含與LAI⑶SY(SEQ ID NO: 24)具有至少85%(例如至少90%或95%)的同源性的⑶R3區(qū)，且恒定區(qū)在與SEQ ID NO: 17的C-末端賴氨酸殘基對(duì)應(yīng)的位置上具有缺失。在一些實(shí)施例中，這種抗-FcRn抗體的重鏈可變區(qū)進(jìn)一步包含Vh⑶Rl和 Vh CDR2，二者分別與 EYAMG (SEQ ID NO: 22)和 SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO: 23)具有至少85%(例如至少90%或95%)的同源性。在其它實(shí)施例中，抗-FcRn抗體重鏈恒定區(qū)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。
[0025]上述抗-FcRn抗體可進(jìn)一步包含輕鏈可變區(qū)(\)，該區(qū)包含與DX-2504(CSYAGSGIYV; SEQ ID NO: 25)具有至少 85%(例如至少 90% 或 95%)同一性的 Vl CDR3,并且任選地，Vl CDRl與TGTGSDVGSYNLVS (SEQ ID NO: 14)具有至少85%(例如至少90%或95%)的同一性，且Vl CDR2與⑶SQRPS (SEQ ID NO: 15)具有至少85%(例如至少90%或95%)的同一性。在一個(gè)實(shí)施例中，抗-FcRn抗體包含Vl CDRl區(qū)TGTGSDVGSYNLVS (SEQ IDN0:14)、VLCDR2gffl)SQRPS(SEQ ID NO: 15)，和 / 或 Vl CDR3 區(qū) CSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 25)、SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或 ASYAGSGIYV (SEQ ID NO: 13) ? 在另一個(gè)實(shí)施例中，抗-FcRn抗體的 ' 包含SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的氨基酸序列。
[0026]上述抗-FcRn抗體中的任一個(gè)可結(jié)合人FcRn，解離常數(shù)(Kd)小于10nM。本公開提供的抗-FcRn抗體可以是人或人源化抗體，或在人體內(nèi)具有非免疫原性。例如，它們可以包含人抗體框架區(qū)?？蛇x地，抗-FcRn抗體可以是鼠抗體。在其它實(shí)施例中，它們可以是嵌合抗體。
[0027]在一些實(shí)施方案中，本文提供的抗-FcRn抗體是全長(zhǎng)抗體(包含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域)?？蛇x地，它們可以是抗原結(jié)合片段例如Fab、F(ab)’ 2、Fv或ScFv。需要時(shí)，抗-FcRn抗體是單克隆抗體。
[0028]本文還公開了:(i)藥物組合物，其包含本文描述的任何抗體和藥學(xué)上可接受的載體，(ii)分離的核酸，其包含編碼本文提供的任何抗體的序列，(iii)載體，其包含任何核酸，所述核酸包含編碼本文提供的任何抗體的序列，和Qv)宿主細(xì)胞,其包含載體,所述載體包含任何核酸，所述核酸包含編碼本文提供的任何抗體的序列。
[0029]本文描述的任何抗-FcRn抗體可以用來在體內(nèi)或體外檢測(cè)FcRn的存在或者調(diào)節(jié)FcRn的活性。
[0030]一方面，本文提供的是檢測(cè)樣品中FcRn的方法，該方法包括:使抗體與本文提供的任何抗體接觸，且如果存在,則檢測(cè)抗體和FcRn之間的相互作用。
[0031]另一方面，本公開提供了檢測(cè)受試者中FcRn的方法，該方法包括:向受試者施用本文提供的任何抗體，所述抗體可與可檢測(cè)的分子例如成像標(biāo)記物(熒光或放射性)共軛，且如果存在,則檢測(cè)抗體和FcRn之間的相互作用。
[0032]另一方面，本公開提供了調(diào)節(jié)FcRn活性的方法，該方法包括:使FcRn與本文提供的任何抗體接觸從而調(diào)節(jié)FcRn活性。
[0033]一方面，本發(fā)明提供了治療自身免疫病癥或調(diào)節(jié)受試者中循環(huán)IgG的半衰期/水平的方法。該方法包括:向受試者施用可有效治療自身免疫病癥或調(diào)節(jié)受試者中循環(huán)IgG的半衰期/水平的量的本文提供的任何抗體。
[0034]本公開的范圍內(nèi)還包括(a)藥物組合物，其用以調(diào)節(jié)FcRn活性、調(diào)節(jié)循環(huán)IgG的半衰期/水平，和/或治療有此需要的受試者的自身免疫病癥，其中所述藥物組合物各包含一種或多種本文描述的抗-FcRn抗體和藥學(xué)上可接受的載體，(b)本文描述的任何抗-FcRn抗體針對(duì)任何剛提到的目的的用途，和(c)所述任何抗-FcRn抗體在制備用于調(diào)節(jié)受試者(例如人患者)中FcRn活性、調(diào)節(jié)循環(huán)IgG的半衰期/水平，和/或治療自身免疫病癥的藥劑中的用途。
[0035]在下文更詳細(xì)地描述本發(fā)明的這些和其它方面以及實(shí)施方案。
[0036]本發(fā)明的每個(gè)限制可涵蓋本發(fā)明的各種實(shí)施方案。因此，預(yù)期本發(fā)明的每個(gè)方面可包括涉及任何一個(gè)元素或元素組合的本發(fā)明的每個(gè)限制。本發(fā)明沒有限制其應(yīng)用于在下面描述中提出的或在下圖中闡述的組分的構(gòu)造和安排的細(xì)節(jié)。本發(fā)明能夠具有其它實(shí)施方案，并且可以各種方式進(jìn)行實(shí)踐和實(shí)施。另外，本文使用的措辭和術(shù)語用于描述目的，而不應(yīng)該被視為限制。本文使用的“包括”、“包含”，或“具有”、“含有”、“涉及”和其變化，意在涵蓋后面所列的項(xiàng)目和其等同物以及另外的項(xiàng)目。
[0037]附圖簡(jiǎn)述
[0038]圖僅是闡述性的，且對(duì)本公開的發(fā)明的實(shí)施不是所必需的。
[0039]圖1 顯示 DX-2504、532A-X53-C02 和 532A-X54-B03 的尺寸排阻色譜(SEC)分析；
[0040]圖 2 顯示 DX-2504、532A-X53-C02 和 532A-X54-B03 的 SDS-PAGE 分析；
[0041]圖3 顯示 DX-2504、532A-X53-C02 和 532A-X54-B03 的溫度穩(wěn)定性；
[0042]圖4 顯示 DX-2504、532A-X53-C02 和 532A-X54-B03 的 pH 穩(wěn)定性；
[0043]圖5 顯示 DX-2504、532A-X53-C02 和 532A-X54-B03 在 pH8.3 時(shí)的穩(wěn)定性；[0044]圖6顯示DX-2504、532A-X53-C02和532A-X54-B03的對(duì)化學(xué)變性的穩(wěn)定性；
[0045]圖1 顯示 pH6 時(shí) hFcRn 與固定的 DX-2504、532A-X53_C02 和 532A-X54-B03 之間的相互作用的動(dòng)力學(xué)分析；
[0046]圖 8 顯示 pH7.5 時(shí) hFcRn 與固定的 DX-2504、532A-X53_C02 和 532A-X54-B03 之間的相互作用的動(dòng)力學(xué)分析；
[0047]圖 9 顯示 DX2504 (SEQ ID NO: 8)、532A-X53-C02 (SEQ ID NO: 10)和532A-X54-B03 (SEQ ID NO: 11)的序列。
[0048]圖10顯示抗-hFcRn H-CDR3對(duì)Fab-310的長(zhǎng)度分布。[0049]圖11顯示表征所選抗-FcRn結(jié)合蛋白的一些特性的兩個(gè)圖表。
[0050]圖12顯示TG32B小鼠中抗-FcRn抗體對(duì)hlgG分解代謝的影響。
[0051]圖13顯示施用于獼猴的DX-2504和DX-2507的血清濃度。
[0052]圖14顯示施用DX-2504和DX-2507后獼猴中IgG的水平。
[0053]發(fā)明詳述 [0054]本文公開的是能結(jié)合人FcRn的分離的抗體和其在檢測(cè)FcRn存在、調(diào)節(jié)FcRn活性、調(diào)節(jié)循環(huán)IgGs的半衰期/水平，和/或治療與IgG異常有關(guān)的病癥，例如自身免疫病癥(例如多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、免疫性血小板減少癥、強(qiáng)直性脊柱炎和天皰瘡)和炎性病癥例如炎癥性腸病中的用途。優(yōu)選地，這些抗-FcRn抗體可以(a)阻斷非特異性人IgG/Fc部分與FcRn-Fc相互作用位點(diǎn)的結(jié)合；(b)結(jié)合人和大鼠FcRn (可溶性和細(xì)胞);
(c)pH6時(shí)結(jié)合FcRn和/或(d)不僅僅結(jié)合P 2M。
[0055]在正常情況下，F(xiàn)cRn可延長(zhǎng)循環(huán)IgG的半衰期。結(jié)合FcRn的抗體可用于調(diào)節(jié)FcRn功能，例如通過阻止其和IgG的相互作用。具體而言，阻斷FcRn和IgG相互作用的抗體可用于減少IgG分子的半衰期。
[0056]一方面，本公開尤其提供了可用于治療自身免疫病癥并減少循環(huán)IgG水平的人拮抗性抗-人FcRn抗體。還公開了高親和力的可溶性Fabs (sFab),其可通過抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域進(jìn)行結(jié)合并阻斷IgG-Fc和人FcRn或大鼠FcRn之間的相互作用。
[0057]定義
[0058]術(shù)語“結(jié)合蛋白”是指可與靶分子相互作用的蛋白。該術(shù)語和“配體”可互換使用?！癋cRn-結(jié)合蛋白”或“FcRn-結(jié)合配體”是指可與FcRn相互作用的蛋白，具體而言包括優(yōu)先和FcRn例如IgG相互作用的蛋白。
[0059]如本文所用，術(shù)語“抗體”是指包括至少一個(gè)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的蛋白。例如，抗體可包括重(H)鏈可變區(qū)(本文縮寫成Vh)和輕(L)鏈可變區(qū)(本文縮寫成')。在另一個(gè)實(shí)施例中，抗體包括兩個(gè)重(H)鏈可變區(qū)和兩個(gè)輕(L)鏈可變區(qū)。術(shù)語“抗體”涵蓋抗體的抗原-結(jié)合片段(例如單一的鏈抗體Fab和sFab片段、F (ab’)2、Fd片段、Fv片段、scFv和dAb片段)以及完全抗體(全長(zhǎng)抗體)。
[0060]Vh和'區(qū)能進(jìn)一步被細(xì)分成高度可變區(qū)，稱為“互補(bǔ)性決定區(qū)”(〃⑶R")，穿插有更保守的區(qū)域，稱為“骨架區(qū)”("FR")。已經(jīng)精確定義了框架區(qū)和CDR的范圍(參見Kabat, E.A.,等，(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication N0.91-3242和Chothia, C.等，(1987) J.Mol.Biol.196:901-917，也參見 http://www.hgmp.mrc.ac.uk)。本文米用Kabat定義。每個(gè)VH和VL通常由三個(gè)⑶R和四個(gè)FR組成，從氨基端至羧基端以下列順序 FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4 排列。
[0061]如本文所用，術(shù)語全長(zhǎng)抗體的“抗原-結(jié)合片段”(或者簡(jiǎn)單講〃抗體部分〃，或〃片段")是指保留了特異性結(jié)合目標(biāo)靶的能力的全長(zhǎng)抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。涵蓋在術(shù)語全長(zhǎng)抗體的〃抗原-結(jié)合片段〃之內(nèi)的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，由'、VH、(^和ChI結(jié)構(gòu)域組成的一價(jià)片段；(ii)F(ab’)2片段，包括在鉸鏈區(qū)通過二硫鍵連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由Vi^PChI結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的'和Vh結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(V)由Vh結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段(Ward等,(1989)Nature341:544-546);和(Vi)分離的保留功能性的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域'和Vh由單獨(dú)基因編碼，但是可以用重組方法通過合成的接頭連接它們，該接頭能夠使它們成為單一蛋白鏈，其中\(zhòng)和Vh區(qū)配對(duì)形成稱為單鏈Fv的單價(jià)分子(scFv)。參見Bird等，(1988)Science242:423-426 ;和 Huston 等，(1988) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883。
[0062]可用包括本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的傳統(tǒng)技術(shù)的任何適當(dāng)?shù)募夹g(shù)來獲得抗體片段。術(shù)語“單特異性抗體”是指對(duì)特定靶例如表位顯示單一的結(jié)合特異性和親和力的抗體。本術(shù)語包括“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”，如本文所用，該術(shù)語是指制備單分子組合物的抗體或其片段。如本文所用，“同種型”是指由重鏈恒定區(qū)基因編碼的抗體類別(例如IgM 或 IgGl)。
[0063]如本文所用，“結(jié)合親和力”是指表觀締合常數(shù)或Ka。Ka是解離常數(shù)(Kd)的倒數(shù)。例如結(jié)合蛋白對(duì)特定靶分子可具有至少lO'lO'lO'lO'lO'lO,和10_nM的結(jié)合親和力。相對(duì)于第二靶標(biāo)，結(jié)合配體與第一靶標(biāo)的更高的親和結(jié)合可通過比結(jié)合第二靶標(biāo)的Ka(或更小數(shù)值的Kd)更高的結(jié)合第一靶標(biāo)的Ka (或Kd的數(shù)值)來顯示。在這些情況下，相對(duì)于第二靶標(biāo)(例如第二構(gòu)象或其類似物的相同蛋白；或第二蛋白)，結(jié)合蛋白對(duì)第一靶標(biāo)有特異性(例如第一構(gòu)象或其類似物的蛋白)。結(jié)合親和力的差異(例如對(duì)特異性或其它比較)至少是 1.5、2、3、4、5、10、15、20、50、70、80、100、500、1000 或 IO5 倍。
[0064]可以通過各種方法，包括平衡透析、平衡結(jié)合、凝膠過濾、ELISA、表面等離子體共振或光譜學(xué)(例如使用熒光測(cè)定)確定結(jié)合親和力。測(cè)定結(jié)合親和力的示例性條件是在PH7.2的30°C的PBS (磷酸鹽緩沖的生理鹽水)中。這些技術(shù)可以用來測(cè)量起結(jié)合蛋白(或靶標(biāo))濃度功能的結(jié)合 的和游離的結(jié)合蛋白的濃度。通過下列等式，結(jié)合的結(jié)合蛋白的濃度([結(jié)合])與游離的結(jié)合蛋白的濃度([游離])和靶標(biāo)上用于結(jié)合蛋白的結(jié)合位點(diǎn)的濃度有關(guān)，其中(N)是每個(gè)靶向分子的結(jié)合位點(diǎn)數(shù):
[0065][結(jié)合]=N*[游離]/((1/Ka) +[游離]).[0066]盡管并不總是有必要精確確定Ka，因?yàn)橛袝r(shí)足夠獲得親和力的定量測(cè)量，例如使用如ELISA或FACS分析的方法來確定，與Ka成比例，因此可以用于比較，比如確定是否如2倍高的更高的親和力以獲得親和力的定量測(cè)量，或者例如通過如體外或體內(nèi)測(cè)定的功能測(cè)定的活性以獲得對(duì)親和力的推斷。
[0067]術(shù)語“同源配體”是指天然存在的FcRn配體，包括其天然存在的變異體(例如剪接變體、天然存在的突變體和亞型)。
[0068]“保守性氨基酸替換”是指氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基取代。本領(lǐng)域定義了具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側(cè)鏈(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、3 -分支側(cè)鏈(例如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳族側(cè)鏈(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。很多框架和CDR氨基酸殘基可包括一個(gè)或多個(gè)保守性替換。
[0069]生物聚合物的共有序列可包括在各種氨基酸之間發(fā)生變化的位置。例如在這樣的上下文中符號(hào)"X"通常是指任何氨基酸(例如任何二十種天然氨基酸或任何十九種非-半胱氨酸氨基酸)。其它允許的氨基酸也可用例如括號(hào)和斜杠來表明。例如"(A/W/F/N/Q)"意指丙氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺在那個(gè)特別的位置也被允許。
[0070]“有效人”免疫球蛋白可變區(qū)是包括足夠數(shù)量的人框架氨基酸位置以致在正常人中免疫球蛋白可變區(qū)不產(chǎn)生免疫原性反應(yīng)的免疫球蛋白可變區(qū)。"有效人"抗體是包括足夠數(shù)量的人氨基酸位置以致在正常人中抗體不產(chǎn)生免疫原性反應(yīng)的抗體。
[0071]“表位”是指目標(biāo)化合物上被結(jié)合蛋白結(jié)合(例如抗體如Fab或全長(zhǎng)抗體)的位點(diǎn)。在目標(biāo)化合物是蛋白的情況下，該位點(diǎn)可完全由氨基酸組分組成，可完全由蛋白的氨基酸的化學(xué)修飾組成(例如糖基部分)，或由其組合組成。重疊表位包括至少一種常見的氨基酸殘基。
[0072]兩個(gè)序列之間“同源性”或“序列同一性”(本文術(shù)語可互換使用)的計(jì)算如下進(jìn)行。為了最佳的比較目的比對(duì)序列(例如為了最佳比對(duì)，可在第一和第二氨基酸或核酸序列的一個(gè)或兩個(gè)中引入空位，且非同源序列可以不考慮比較目的)。使用GCG軟件包的GAP程序的Blosum62評(píng)分矩陣將最佳比對(duì)確定為最佳分?jǐn)?shù)，空位罰12分，空位延伸罰4分且移碼空位罰5分。然后比較相應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置上的氨基酸殘基或核苷酸。當(dāng)用與第二個(gè)序列相應(yīng)的位置相同的氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)第一個(gè)序列的位置時(shí)，然后在那個(gè)位置上分子是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸"同一性"等同于氨基酸或核酸"同源性〃)。兩個(gè)序列同一性百分比是序列共有的相同位置的數(shù)目的函數(shù)。
[0073]在一個(gè)實(shí)施方案中，比對(duì)用于比較目的的參考序列的長(zhǎng)度是參考序列長(zhǎng)度的至少30%、至少 40%、至少 50%、至少 60%、至少 70%、80%、90%、92%、95%、97%、98% 或 100%。例如，參考序列可以是免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的長(zhǎng)度。
[0074]“人源化”免 疫球蛋白可變區(qū)是被修飾的以包括足夠數(shù)量的人框架氨基酸位置以致在正常人中免疫球蛋白可變區(qū)不產(chǎn)生免疫原性反應(yīng)的免疫球蛋白可變區(qū)?！叭嗽椿泵庖咔虻暗拿枋霭ɡ鏤S6，407, 213和US5，693，762。
[0075]如本文所用，術(shù)語“在低嚴(yán)格、中等嚴(yán)格、高嚴(yán)格或極高嚴(yán)格條件下雜交”描述了雜交和洗漆條件。實(shí)施雜交反應(yīng)的指南可見于Current Protocols in MolecularBiology, John ffiley&Sons, N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6，其以引用的方式并入。該參考文獻(xiàn)中水性的和非水性方法，且可使用任一方法。本文提到的特異性雜交條件如下:(I)在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中在約45°C的低嚴(yán)格雜交條件下，然后用0.2X SSC、0.1%SDS在至少50°C下洗滌兩次(低嚴(yán)格條件洗滌溫度可增加到55°C) ;(2)在6X SSC中在約45°C的中等嚴(yán)格雜交條件下，然后用0.2X SSC、0.1%SDS在60°C下洗滌一次或多次；(3)在6X SSC中在約45°C的高嚴(yán)格雜交條件下，然后用0.2X SSC、0.1%SDS在65°C下洗滌一次或多次；和(4)極高嚴(yán)格雜交條件是0.5M磷酸鈉、7%SDS在65°C下，然后用0.2X SSC、0.1%SDS在65°C下洗滌一次或多次。極高嚴(yán)格雜交條件(4)是優(yōu)選的條件且應(yīng)該使用該條件，除非另外說明。本公開包括和本文描述的核酸或其互補(bǔ)序列等在低、中等、高或極高嚴(yán)格下雜交的核酸、編碼本文描述的結(jié)合蛋白的核酸。該核酸可以和引用核酸長(zhǎng)度相同或在引用核酸長(zhǎng)度的30%、20%，或10%之內(nèi)。該核酸可對(duì)應(yīng)于編碼免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的區(qū)域。
[0076]相對(duì)于本文描述的結(jié)合蛋白(例如保守或非必需氨基酸替換)，F(xiàn)cRn結(jié)合蛋白可以有突變(例如至少1、2或4個(gè)，和/或少于15、10、5或3個(gè))，對(duì)蛋白功能沒有實(shí)質(zhì)影響。例如使用Bowie,等(1990) Science247:1306-1310的方法,無論特殊替換耐受與否，即均不會(huì)不利地影響生物性質(zhì)，例如可預(yù)測(cè)結(jié)合活性。[0077]“免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域”是指來自免疫球蛋白分子可變或恒定結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域。免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域通常包含由約七條(6-鏈形成的兩個(gè)(6-折疊和保守的二硫鍵(參見例如A.F.Williams 和 A.N.Barclayl988Ann.Rev Tmmuno1.6:381-405)。
[0078] 如本文所用，〃免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列〃是指能形成例如一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)定位于適合抗原結(jié)合位點(diǎn)的構(gòu)象的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)的氨基酸序列。例如，序列可包括全部或部分天然存在的可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。例如序列可省去一個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)N-或C-末端氨基酸、內(nèi)部氨基酸；可包括一個(gè)或多個(gè)插入或另外的末端氨基酸；或可包括其它改變。在一個(gè)實(shí)施方案中，包括免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的多肽可結(jié)合另一個(gè)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列以形成目標(biāo)結(jié)合結(jié)構(gòu)(或“抗原結(jié)合位點(diǎn)”)，例如優(yōu)先和FcRn結(jié)構(gòu)相互作用的結(jié)構(gòu)。
[0079]抗體的Vh或\鏈可進(jìn)一步包括全部或部分重或輕鏈恒定區(qū)，從而分別形成重鏈或輕鏈免疫球蛋白鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是兩條重免疫球蛋白鏈和兩條輕免疫球蛋白鏈的四聚體，其中重和輕免疫球蛋白鏈之間通過例如二硫鍵連接。重鏈恒定區(qū)包括三個(gè)結(jié)構(gòu)域(^、(^和^^。輕鏈恒定區(qū)包括CL結(jié)構(gòu)域。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)通常介導(dǎo)抗體與宿主組織或因子的結(jié)合，包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如，效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典互補(bǔ)系統(tǒng)的第一組分(Clq)。術(shù)語“抗體”包括IgA、IgG、IgE、IgD、IgM型(和其亞型)完整的免疫球蛋白。免疫球蛋白的輕鏈類型有K或入。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是糖基化的?？贵w可對(duì)抗體依賴性細(xì)胞毒性和/或補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性起作用。
[0080]抗體的一個(gè)或多個(gè)區(qū)可以是人的或有效人的。例如，一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)可以是人的或有效人的。例如，一個(gè)或多個(gè)⑶R可以是人的，如HC⑶R1、HC⑶R2、HC⑶R3、LC⑶R1、LC⑶R2和LC⑶R3。每個(gè)輕鏈⑶R可以是人的。HC⑶R3可以是人的。一個(gè)或多個(gè)框架區(qū)可以是人的，例如HC或LC的FR1、FR2、FR3和FR4。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有的框架區(qū)是人的，例如來源于人體細(xì)胞，例如，產(chǎn)生免疫球蛋白的造血細(xì)胞或非造血細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，人序列是生殖細(xì)胞序列，例如，由生殖細(xì)胞核酸編碼。一個(gè)或多個(gè)恒定區(qū)可以是人的或有效人的。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體的至少70、75、80、85、90、92、95或98%，或全部抗體可以是人的或有效人的。
[0081]抗體的全部或部分可由免疫球蛋白基因或其片段編碼。示例性人免疫球蛋白基因包括 K、入、a (IgAl 和 IgA2)、y (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、S、e 和 y 恒定區(qū)基因，以及無數(shù)的免疫球蛋白可變區(qū)基因。全長(zhǎng)免疫球蛋白“輕鏈”(約25KDa或214個(gè)氨基酸)由NH2-末端可變區(qū)基因(約110個(gè)氨基酸)和COOH-末端K或\恒定區(qū)基因編碼。同樣地，全長(zhǎng)免疫球蛋白“重鏈”(約50KDa或446個(gè)氨基酸)由可變區(qū)基因(約116個(gè)氨基酸)和前述的恒定區(qū)基因例如Y (約330個(gè)氨基酸)其中的另一個(gè)編碼。
[0082]“分離的組合物”是指從能獲得分離的組合物的天然樣品中的至少一種組分的至少90%移除的組合物。如果目標(biāo)物種或種群按重量-重量計(jì)為至少5、10、25、50、75、80、90、92、95、98或99%純的，則人工或天然產(chǎn)生的組合物可以為具有“至少一定純度的組合物”。
[0083]在FcRn或其部分的模擬構(gòu)象的語境中，術(shù)語“模擬”是指相對(duì)于天然存在的FcRn或其部分對(duì)至少一個(gè)特定構(gòu)象具有偏向的經(jīng)修飾的FcRn。
[0084]“非必需”氨基酸殘基是可以改變自結(jié)合劑例如抗體的野生型序列的殘基而未破壞或未實(shí)質(zhì)性改變生物學(xué)活性，然而"必需"氨基酸殘基會(huì)導(dǎo)致這樣的變化。[0085]如本文所用，短語“腸胃外施用”和“經(jīng)胃腸外施用”意指除腸內(nèi)和局部施用之外的施用模型，通常經(jīng)注射，且包括但不限于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜外的和胸骨內(nèi)的注射和輸注。[0086]術(shù)語“多肽”或“肽”(可互換使用)是指由肽鍵連接的三個(gè)或多個(gè)氨基酸的聚合物，例如長(zhǎng)度介于3和30個(gè)氨基酸之間、12和60個(gè)氨基酸之間，或30和300個(gè)氨基酸之間，或超過300個(gè)氨基酸。多肽可包括一種或多種非天然氨基酸。通常多肽只包括天然氨基酸?！暗鞍踪|(zhì)”可包括一條或多條多肽鏈。因此術(shù)語“蛋白質(zhì)”涵蓋多肽。蛋白質(zhì)或多肽還可包括一種或多種修飾，例如糖基化、酰胺化、磷酸化、亞硝基化，等等。術(shù)語〃小肽〃可用于描述長(zhǎng)度介于3和30個(gè)氨基酸之間的多肽，例如長(zhǎng)度介于8和24個(gè)氨基酸之間。[0087]“預(yù)防有效量”是指有效量、劑量且有必要長(zhǎng)期，以獲得期望的預(yù)防結(jié)果。通常，因?yàn)橹委焺┝坑糜诩膊≈盎蛘咴缙诘氖茉囌?，預(yù)防有效量將少于治療有效量。[0088]如本文所用，本文使用的術(shù)語“實(shí)質(zhì)上同一的”(或“實(shí)質(zhì)上同源的”)是指包含足夠數(shù)量的相同的或等效的(例如有類似側(cè)鏈，例如保守氨基酸替換)氨基酸殘基或核苷酸的第一個(gè)氨基酸或核酸序列與第二個(gè)氨基酸或核酸序列以使第一個(gè)和第二個(gè)氨基酸核酸序列具有(或編碼蛋白質(zhì)具有)相似的活性，例如結(jié)合活性、結(jié)合偏好或生物學(xué)活性。就抗體而言，第二抗體相對(duì)于相同的抗原具有相同的特異性并且具具有至少50%的親和力。[0089]與本文公開的序列相似或同源的序列(例如，至少約85%序列同一性)也是本應(yīng)用的一部分。在一些實(shí)施方案中，序列同一性可以是約85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高。此外，當(dāng)核酸片段在所選雜交條件(例如高嚴(yán)格雜交條件)下與互補(bǔ)鏈雜交時(shí)，存在實(shí)質(zhì)同一性。核酸可存在于全部細(xì)胞、細(xì)胞裂解物或在部分純化或基本上純的形式中。[0090]統(tǒng)計(jì)顯著性可由任何領(lǐng)域已知的方法來確定。示例性統(tǒng)計(jì)測(cè)驗(yàn)包括:斯氏T檢驗(yàn)、Mann Whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)和Wilcoxon非參數(shù)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。一些統(tǒng)計(jì)顯著性關(guān)系的P值小于0.05或0.02。特定結(jié)合蛋白可例如在特異性或結(jié)合方面表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異(例如P值〈0.05或0.02)。例如表示兩種狀態(tài)間可區(qū)別的定性或定量差異的術(shù)語“誘導(dǎo)”、“抑制”、“加強(qiáng)”、“提高”、“增加”、“減少”等，可以指例如統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異的兩種狀態(tài)間的差異。[0091]相對(duì)于未治療的受試者,“治療有效量”可將可測(cè)量的參數(shù),例如循環(huán)I gG抗體的水平調(diào)節(jié)到統(tǒng)計(jì)上顯著的程度或調(diào)節(jié)至少約20%、至少約40%、至少約60%、或至少約80%，。在預(yù)測(cè)人自身免疫病癥功效的動(dòng)物模型系統(tǒng)中可以評(píng)估化合物調(diào)節(jié)可測(cè)量的參數(shù)例如自身免疫性的能力?？蛇x地，通過檢測(cè)化合物調(diào)節(jié)體外參數(shù)的能力，例如通過對(duì)有經(jīng)驗(yàn)的從業(yè)者已知的測(cè)定來評(píng)估組合物的這種性質(zhì)。[0092]本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將通過下列詳細(xì)描述和權(quán)利要求而變得更加明顯。本發(fā)明的實(shí)施方案可包括本文描述的特征的任何組合。術(shù)語"實(shí)施方案"決不排除本文公開的一個(gè)或多個(gè)其它特征。[0093]FcRn 序列[0094]下列是人FcRn a鏈氨基酸序列和大鼠FcRn a鏈氨基酸序列的序列比對(duì)。示例性FcRn蛋白可包括這兩個(gè)序列之一或其片段，例如不具有信號(hào)序列的片段:
[0095]
【權(quán)利要求】
1.一種結(jié)合人FcRn的分離的抗體，所述分離的抗體包含輕鏈可變區(qū)(VJ，其包含'CDRl、Vl CDR2 和 Vl CDR3， 其中所述八CDR3與下列序列具有至少85%的同源性:SSYAGSGIYV(SEQ ID NO: 12)或ASYAGSGIYV(SEQ ID NO: 13)，并且 其中所述分離的抗體在至少一個(gè)CDR3區(qū)的第一位上不具有半胱氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述'CDRl和' CDR2分別與 TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO: 14)和⑶SQRPS(SEQ ID NO: 15)具有至少 85% 的同源性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的分離的抗體，其中: 所述 \ CDRl 與 TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO: 14)具有至少 90% 的同源性， 所述Vl CDR2與⑶SQRPS (SEQ ID NO: 15)具有至少90%的同源性，和/或
所述 Vl CDR3 與 SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或 ASYAGSGIYV (SEQ ID NO: 13)具有至少90%的同源性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的分離的抗體，其中:
(a)所述Vl CDRl 是 TGTGSDVGSYNLVS (SEQ ID NO: 14)，
(b)所述Vl CDR2 是 GDSQRPS (SEQ ID NO: 15)，和 / 或
(c)所述Vl CDR3 是 SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或 ASYAGSGIYV (SEQ ID NO: 13)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離的`抗體，其中:
所述 Vl CDRl 是 TGTGSDVGSYNLVS (SEQ ID NO: 14)，
所述 Vl CDR2 是 GDSQRPS (SEQ ID NO: 15)，和
所述 Vl CDR3 是 SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或 ASYAGSGIYV (SEQ IDNO:13) ?
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述'包含與SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11具有至少85%的同源性的氨基酸序列。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述'包含SEQIDN0:10或SEQ ID N0:11的氨基酸序列。
8.一種結(jié)合人FcRn的分離的抗體，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)(')，其包含' ⑶R1、'CDR2和Vl⑶R3區(qū)， 其中所述 ' CDR3 區(qū)與下列序列 SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或 ASYAGSGIYV (SEQ IDNO: 13)相比具有多達(dá)3種氨基酸替換，并且 其中所述分離的抗體在至少一個(gè)CDR3區(qū)的第一位上不具有半胱氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離的抗體，其中所述'CDR1、'CDR2和' CDR3與下列序列相比總共具有多達(dá)10種氨基酸替換:
(a)CDRl:TGTGSDVGSYNLVS(SEQID NO:14)
(b)CDR2:ffl)SQRPS(SEQID NO: 15)
(c)CDR3:SSYAGSGIYV(SEQID NO:12)或ASYAGSGIYV(SEQ ID NO:13)?
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的分離的抗體，其還包含重鏈可變區(qū)(Vh)，其包含 Vh CDRUVh 0?2和￥11 CDR3，其中所述￥11 CDR3 與 LAIGDSY (SEQ ID NO: 24)具有至少 85%的同源性。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述VhCDRl和VhCDR2 分別與 EYAMG (SEQ ID NO: 22)和 SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO:23)具有至少 85% 的同源性。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的分離的抗體，其中: (a)所述VhCDRl與EYAMG(SEQ ID NO: 22)具有至少90%的同源性，(b)所述Vh CDR2 與 SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO: 23)，具有至少 90% 的同源性，和 /或 (c)所述VhCDR3與LAIGDSY (SEQ ID NO: 24)具有至少90%的同源性。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的分離的抗體，其中:
(a)所述Vh CDRl 是 EYAMG(SEQ ID NO: 22)，
(b)所述Vh CDR2 是 SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO: 23)，和 / 或
(c)所述Vh CDR3 是 LAIGDSY (SEQ ID NO: 24)。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述￥11包含與SEQIDNO:9具有至少85%同一性的氨基酸序列。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述Vh包含SEQIDNO:9的氨基酸序 列。
16.一種包含重鏈的分離的抗體，所述重鏈包含重鏈可變區(qū)(Vh)和重鏈恒定區(qū)，其中所述Vh包含與LAI⑶SY(SEQ ID NO: 24)具有至少85%同源性的CDR3區(qū)，并且所述恒定區(qū)在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 17的C-末端賴氨酸殘基的位置具有缺失。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的分離的抗體，其中所述Vh進(jìn)一步包含Vh⑶Rl和Vh⑶R2，其分別與 EYAMG(SEQ ID NO:22)和 SIGSSGGQTKYADSVKG (SEQ ID NO:23)具有至少 85% 的同源性。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或權(quán)利要求17所述的分離的抗體，其中所述恒定區(qū)包含SEQIDNO:26的氨基酸序列。
19.根據(jù)權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的分離的抗體，其進(jìn)一步包含輕鏈可變區(qū)(Vl)，其包含與 CSYAGSGIYV(SEQ ID NO:25)具有至少 85% 同一性的 CDR3。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的分離的抗體，其中所述\進(jìn)一步包含\⑶Rl和\⑶R2，其分別與 TGTGSDVGSYNLVS (SEQ ID NO: 14)和⑶SQRPS (SEQ ID NO: 15)具有至少 85% 同一性。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的分離的抗體，其中:
(a)所述Vl CDRl 是 TGTGSDVGSYNLVS (SEQ ID NO: 14)，
(b)所述Vl CDR2 是 GDSQRPS (SEQ ID NO: 15)，和 / 或
(c)所述Vl CDR3 是 CSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 25)、SSYAGSGIYV (SEQ ID NO: 12)或ASYAGSGIYV(SEQ ID NO:13)。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的分離的抗體，其中所述Vl包含SEQIDNO:8、SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的氨基酸序列。
23.根據(jù)權(quán)利要求1至22中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體以小于IOnM的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合人FcRn。
24.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是全長(zhǎng)抗體。
25.根據(jù)權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是人或人源化抗體或在人體內(nèi)具有非免疫原性。
26.根據(jù)權(quán)利要求1至25中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體包含人抗體框架區(qū)。
27.根據(jù)權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是鼠抗體。
28.根據(jù)權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是嵌合的。
29.根據(jù)權(quán)利要求1至23和25至28中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體選自由Fab、F (ab) ’ 2、Fv和scFv組成的組。
30.根據(jù)權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。
31.一種藥物組合物,其包含權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。
32.—種分離的核酸，其包含編碼權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體的序列。
33.一種載體，其包含權(quán)利要求32所述的核酸。
34.一種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求33所述的載體。
35.一種檢測(cè)樣品中FcRn的方法，所述方法包括: 使所述樣品與權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體接觸，并且 如果存在，檢測(cè)所述 抗體和所述FcRn之間的相互作用。
36.一種檢測(cè)受試者中FcRn的方法，所述方法包括: 向受試者施用權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體，并且 如果存在，檢測(cè)所述抗體和所述FcRn之間的相互作用。
37.一種調(diào)節(jié)FcRn活性的方法，所述方法包括: 使FcRn與權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體接觸從而調(diào)節(jié)所述FcRn活性。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述方法，其中接觸步驟在體外進(jìn)行。
39.一種治療受試者的自身免疫病癥的方法，所述方法包括: 向受試者施用足以治療所述自身免疫病癥的量的權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體。
40.一種調(diào)節(jié)受試者的循環(huán)IgG的半衰期/水平的方法，所述方法包括: 向受試者施用可有效調(diào)節(jié)所述受試者的循環(huán)IgG的半衰期/水平的量的權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體。
41.一種用于治療受試者的自身免疫病癥的藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求I至30中任一項(xiàng)所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。
42.一種用于調(diào)節(jié)受試者的循環(huán)IgG的半衰期/水平的藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。
43.一種用于調(diào)節(jié)受試者的FcRn活性的藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。
44.權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體在制備用于治療自身免疫病癥的藥劑中的用途。
【文檔編號(hào)】A61K39/395GK103619353SQ201280031902
【公開日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月2日
【發(fā)明者】D·J·塞克斯頓, C·湯乎爾, M·維斯瓦納坦 申請(qǐng)人:戴?？怂褂邢薰?br>