用于治療和診斷與五羥色胺-、腎上腺素-、去甲腎上腺素-、谷氨酸-和促腎上腺皮質(zhì)素釋 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于治療和診斷與五羥色胺-、腎上腺素-、去甲腎上腺素-、谷氨酸-和促腎上腺皮質(zhì)素-釋放激素相關(guān)的病癥的微RNA以及包含微RNA的組合物。
【專利說明】用于治療和診斷與五羥色胺-、腎上腺素-、去甲腎上腺素-、谷氨酸-和促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素相關(guān)的病癥的微RNA和包含微RNA的組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明在其一些實施方式中涉及微RNA(microRNA),并且更具體地但不排他地,涉及使用微RNA用于疾病診斷、治療和監(jiān)測治療。
【背景技術(shù)】
[0002]情緒失調(diào)如重性抑郁癥(major depress1n)是世界范圍內(nèi)最常見和激增的健康問題中的一些問題，其影響約10%的人口。盡管幾十年的研究，但抑郁發(fā)作、易感性和可用治療背后的機(jī)制僅部分了解。目前僅約三分之一的患者響應(yīng)于現(xiàn)有的治療方法，因此，非常需要更好了解病理學(xué)。目前的關(guān)于抑郁的病因?qū)W的學(xué)說是在環(huán)境因素和遺傳易感性之間的復(fù)雜的相互作用，提示表觀遺傳過程的作用機(jī)理。
[0003]五羥色胺(5HT)是在腦中由中縫核(RN)產(chǎn)生的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，中縫核在整個腦部廣泛突出以調(diào)節(jié)多種認(rèn)知、情感和生理功能。在失調(diào)的血清素能活性和抑郁之間的關(guān)聯(lián)是公認(rèn)的[Michelsen KA.et al.，Brain ResRev (2007) 55 (2):329-42]。在抑郁中，5HT 的水平、以及負(fù)責(zé)它的生產(chǎn)、分泌、再攝取和失活的遺傳環(huán)是失調(diào)的。此外，目前大多數(shù)可用的抗抑郁藥物靶向與5HT系統(tǒng)相關(guān)蛋白的功能，使得在突觸中提高的5HT水平[Krishnan V andNestler EJ, Nature (2008) 455:894-902]?？捎玫寞煼ㄐ枰谟^測到癥狀的緩解以前長期給予。
[0004]微RNA (miR) 是轉(zhuǎn)錄后抑制基因表達(dá)的內(nèi)源性小(約22個核苷酸)RNA分子的子集。MiR被轉(zhuǎn)錄為初級miR分子，它們在細(xì)胞核中被加工成具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miR，其被輸出到細(xì)胞質(zhì)，此處它們被進(jìn)一步加工成活性的成熟miR。成熟miR隨后被并入RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體并主要通過結(jié)合于特異性mRNA分子的3’非翻譯區(qū)(3’ UTR)來發(fā)揮作用。借助于種子序列產(chǎn)生結(jié)合，種子序列在miR的5'端的6 - 8個核苷酸序列，其堿基配對于在靶mRNA3’ UTR上的互補(bǔ)性種子匹配序列。miR的結(jié)合導(dǎo)致直接的mRNA失穩(wěn)或翻譯抑制，最終導(dǎo)致降低的靶基因蛋白水平。
[0005]MiR在神經(jīng)系統(tǒng)中是豐富的，并且最初的研究已主要致力于在發(fā)育、癌癥和神經(jīng)變性疾病以及正常過程如可塑性的情況下的神經(jīng)元[Kosik KS.Nat RevNeurosci (2006)7:911-20] ο另外，已經(jīng)表明，在人和小鼠模型中，miR在精神障礙如精神分裂癥、自閉癥以及抑郁和焦慮中發(fā)揮作用[MillerBH and Wahlestedt C，BrainRes (2010) 1338:89-99]。幾項研究最近已表明，miR參與調(diào)節(jié)與5HT相關(guān)的基因[MillanMJ.Curr Opin Pharmacol (2011) 11 (1): 11-22]，其揭示了 miR在 5HT 系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中的新出現(xiàn)的作用以及它們的與抑郁相關(guān)障礙的潛在關(guān)系。
[0006]美國專利申請?zhí)朥S20100222413(授權(quán)給Stoffel M.et al.)公開了用于調(diào)節(jié)微RNA的表達(dá)的化學(xué)修飾寡核苷酸。US20100222413進(jìn)一步公開了用于沉默微RNA(例如miR-122、miR-16、miR-192和miR-194)用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病的方法。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了用于治療其中在需要其的受試者中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸給予受試者，或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸，從而治療病癥，其中微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26和miR-182組成的組。
[0008]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸在制造確定用于治療其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用，其中微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26和miR-182組成的組。
[0009]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了用于在需要其的受試者的突觸間隙中提高五羥色胺水平的方法，該方法包括將編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在五羥色胺能神經(jīng)元中表達(dá)編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸，從而提高在突觸間隙中五羥色胺水平，其中微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26和miR-182組成的組。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)至少一種微RNA或其前體的核酸構(gòu)建體的分離的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，其中微RNA選自由 miR-135、miR-335、miR-26 和 miR-182 組成的組。
[0011]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼至少一種微RNA或其前體的分離的多核苷酸，用于治療其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥，其中微RNA選自由 miR-135、miR-335、miR-26 和 miR-182 組成的組。 [0012]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在需要其的受試者中治療其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼miR-19或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼miR-19或其前體的外源性多核苷酸，從而治療病癥。
[0013]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼miR-19或其前體的外源性多核苷酸在制造確定用于治療其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用。
[0014]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含核酸構(gòu)建體的分離的細(xì)胞，該核酸構(gòu)建體在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)miR-19或其前體。
[0015]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼miR-19或其前體的分離的多核苷酸，用于治療其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥。
[0016]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在需要其的受試者中治療其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼miR-15或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼miR-15或其前體的外源性多核苷酸，從而治療病癥。
[0017]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼miR-15或其前體的外源性多核苷酸在制造確定用于治療其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用。[0018]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含核酸構(gòu)建體的分離的細(xì)胞，該核酸構(gòu)建體在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)miR-15或其前體。
[0019]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼miR-15或其前體的分離的多核苷酸，用于治療其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥。
[0020]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在需要其的受試者中治療其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼miR-181或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼miR-181或其前體的外源性多核苷酸，從而治療病癥。
[0021]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼miR-181或其前體的外源性多核苷酸在制造確定用于治療其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含核酸構(gòu)建體的分離的細(xì)胞，該核酸構(gòu)建體在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)miR-181或其前體。
[0023]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了編碼miR-181或其前體的分離的多核苷酸，用于治療其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥。
[0024]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含編碼微RNA或其前體的核酸序列的核酸構(gòu)建體，其中微RNA或其前體選自由miR-135、miR-335、miR-26、miR-27、miR-181、miR-182、miR-19和miR-15組成的組,上述核酸序列是在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下。
[0025]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含本發(fā)明的核酸構(gòu)建體和藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
[0026]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了用于在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)色氨酸羥化酶2 (Tph2)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整微RNA或其前體的活性或表達(dá)從而調(diào)節(jié)Tph2基因的表達(dá)，其中微RNA選自由miR-181和miR27組成的組。
[0027]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了用于在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)谷氨酸受體基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-181或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)谷氨酸受體基因的表達(dá)。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含核酸序列的分離的多核苷酸，用于下調(diào)miR-181、miR-27或其前體的表達(dá)。
[0029]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了包含用于下調(diào)微RNA或其前體的表達(dá)的核酸序列的核酸構(gòu)建體，其中微RNA或其前體選自由miR-181和miR-27組成的組，核酸序列是在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下。
[0030]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)五羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白(Slc6a4)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整微RNA或其前體的活性或表達(dá)，其中微RNA選自由miR-135和miR-335組成的組，從而調(diào)節(jié)Slc6a4基因的表達(dá)。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)五羥色胺抑制性受體la (Htrla)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整微RNA或其前體的活性或表達(dá)，其中微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-181、miR-182和miR-26組成的組，從而調(diào)節(jié)Htrla基因的表達(dá)。
[0032]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)唐氏綜合癥細(xì)胞粘附分子(Dscam)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-182或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Dscam基因的表達(dá)。
[0033]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附分子LI (Llcam)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-182或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Llcam基因的表達(dá)。
[0034]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)Translin相關(guān)蛋白X (Tsnax)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-182或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Tsnax基因的表達(dá)。
[0035]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)單胺羥化酶(MaoA)基因的表達(dá)的方法，該方法包括調(diào)整miR-27的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)MaoA基因的表達(dá)。
[0036]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞中調(diào)節(jié)β腎上腺素能受體I (Adrbl)基因的表達(dá)的方法，該方法包括調(diào)整miR-19的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Adrbl基因的表達(dá)。
[0037]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)大麻素受體I (CBl)基因的表達(dá)的方法，該方 法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-19或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)CBl基因的表達(dá)。
[0038]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)CRHl型受體基因的表達(dá)的方法，該方法包括調(diào)整miR-15的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)CRHl型受體基因的表達(dá)。
[0039]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)FK506結(jié)合蛋白5 (FKBP5)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體節(jié)的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)FKBP5基因的表達(dá)。
[0040]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)突觸趨化素la (Syntaxinla) (Stxla)基因的表達(dá)的方法,該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Stxla基因的表達(dá)。
[0041]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶(Sgkl)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Sgkl基因的表達(dá)。
[0042]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)β 2腎上腺素能受體(Adrb2)基因的表達(dá)的方法，該方法包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Adrb2基因的表達(dá)。
[0043]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了監(jiān)測抗抑郁藥的治療的方法，該方法包括:(a)用抗抑郁藥治療需要其的受試者；以及(b)在治療之前和在治療后，測量受試者的血液中miR-135的表達(dá)水平，其中，與在用抗抑郁藥進(jìn)行治療之前miR-135的表達(dá)水平相比，在用抗抑郁藥進(jìn)行治療后miR-135的較低表達(dá)水平表示有效治療。
[0044]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式的一個方面，提供了在需要其的受試者中診斷五羥色胺相關(guān)病癥的方法，該方法包括在受試者的血液中測量miR-135的表達(dá)水平，其中，與在健康受試者的血液樣品中的miR-135的表達(dá)水平相比，miR-135的高表達(dá)水平表示五羥色胺相關(guān)病癥。
[0045]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
[0046]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是五羥色胺能神經(jīng)元。
[0047]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-135如在SEQ ID NO:58至SEQ IDNO:62所闡述的。
[0048]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-335是如在SEQ ID NO:63至SEQID NO:64中所闡述的。
[0049]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-26是如在SEQ ID NO:65至SEQID NO:69中所闡述的。
[0050]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-182是如在SEQ ID NO: 70至SEQID NO: 71中所闡述的。
[0051]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，病癥選自由抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥、睡眠障礙、食物相關(guān)障礙、生長障礙以及生殖障礙組成的組。
[0052]根據(jù)本發(fā)明的一些 實施方式，當(dāng)微RNA是miR-135時，病癥是抑郁或焦慮。
[0053]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞。
[0054]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-19是如在SEQ ID NO:72至SEQID NO:76中所闡述的。
[0055]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，病癥選自由應(yīng)激、焦慮、記憶缺陷和心臟病組成的組。
[0056]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-15是如在SEQ ID NO:77至SEQID NO:80中所闡述的。
[0057]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，病癥選自由抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥、睡眠障礙、食物相關(guān)障礙、生長障礙和生殖障礙組成的組。
[0058]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中并在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下多核苷酸是活性的。
[0059]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，在心肌細(xì)胞中并在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下多核苷酸是活性的。
[0060]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-181是如在SEQ ID NO:85至SEQID NO:94中所闡述的。
[0061]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，病癥選自由癲癇發(fā)作、亨廷頓病、精神分裂癥、脆性X綜合征、廣泛性焦慮障礙和癌癥組成的組。
[0062]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞中，順式作用調(diào)控元件是活性的。
[0063]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，受試者是人受試者。
[0064]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括上調(diào)Tph2基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中下調(diào)miR-181和/或miR-27。
[0065]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中并在miR-181和/或the miR-27下調(diào)后測量Tph2基因的表達(dá)。
[0066]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，谷氨酸受體基因選自由代謝型谷氨酸受體l(Grml)、谷氨酸受體離子型紅藻氨酸3 (Grik3)、代謝型谷氨酸受體5 (Grm5)、谷氨酸受體離子型紅藻氨酸2 (Grik2)和代謝型谷氨酸受體7 (Grm7)組成的組。
[0067]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括下調(diào)Slc6a4基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)miR-135和/或miR-335。
[0068]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，上述方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在上調(diào)miR-135和/或miR-335后測量Slc6a4基因的表達(dá)。
[0069]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括下調(diào)Htrla基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào) miR-135, miR-335, miR-181, miR-182 和 / 或 miR-26。
[0070]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在上調(diào)miR-135、miR-335、miR-181、miR-182 和 / 或 miR-26 后測量 Htrla 基因的表達(dá)。
[0071]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括下調(diào)MaoA基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)miR-27。
[0072]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在上調(diào)miR-27后測量MaoA基因的表達(dá) 。
[0073]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括下調(diào)Adrbl基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞中上調(diào)miR-19。
[0074]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞中在上調(diào)miR-19后測量Adrbl基因的表達(dá)。
[0075]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括下調(diào)CBl基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)miR-19。
[0076]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在上調(diào)CBl后測量CBl基因的表達(dá)。
[0077]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括下調(diào)CRHl型受體基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)miR-15。
[0078]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在上調(diào)miR-15后測量CRHl型受體基因的表達(dá)。
[0079]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，當(dāng)調(diào)節(jié)包括下調(diào)FKBP5基因的表達(dá)時，調(diào)節(jié)包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)miR-15。
[0080]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在上調(diào)miR-15后測量FKBP5基因的表達(dá)。
[0081]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，方法進(jìn)一步包括在治療之前從受試者獲得血液樣品O
[0082]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，抗抑郁藥選自由選擇性五羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)、三環(huán)類抗抑郁藥和去甲腎上腺素再攝取抑制劑(NRI)組成的組。
[0083]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，五羥色胺相關(guān)病癥是精神病癥。[0084]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，精神病癥選自由抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥、睡眠障礙和食物相關(guān)障礙組成的組。
[0085]根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，miR-135包括miR_135a或miR_135b。
[0086]除非另有定義，本文中所使用的所有技術(shù)和/或科學(xué)術(shù)語具有如與本發(fā)明相關(guān)的領(lǐng)域中的技術(shù)人員通常理解的相同含義。盡管類似于或等同于本文描述的那些方法和材料的方法和材料可以用于本發(fā)明的實施方式的實施或測試，但以下描述示例性的方法和/或材料。在沖突的情況下，以本專利說明書(包括定義)為準(zhǔn)。另外，材料、方法和實施例僅是說明性的而不是限制性的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0087]本文僅通過舉例的方式并參照附圖來描述本發(fā)明的一些實施方式?，F(xiàn)在詳細(xì)地具體參照附圖，需要強(qiáng)調(diào)的是，示出的細(xì)節(jié)是通過舉例的方式和為便于本發(fā)明的實施方式的說明性討論。在這方面，連同附圖一起的描述使得本領(lǐng)域技術(shù)人員明了可以如何實施本發(fā)明的實施方式。
[0088]在附圖中:
[0089]圖1A-圖1I示出微RNA在五羥色胺(5HT)神經(jīng)元中的表達(dá)。圖1A是在5HT神經(jīng)元中差異表達(dá)的miRNA的圖示說明。Lowess歸一化值被描述為斑點強(qiáng)度相對于平均對數(shù)強(qiáng)度的1η2倍數(shù)變化(MA圖)；圖1B是miR實時PCR的陣列結(jié)果的確認(rèn)，表明與對照相比，在5HT神經(jīng)元中，miR-375的提高的水平。n=5個5HT細(xì)胞，n=4個非5HT。條表示平均值土 s.e.m。林P=0.0071 ;圖1C是miR實時PCR的陣列結(jié)果的確認(rèn)，表明與對照相比在5HT神經(jīng)元中miR-135a的降低 水平。N=5個5HT細(xì)胞，n=4個非5HT。林P=0.0075 ;圖1D是代表針對Slc6a4的交叉生物信息學(xué)預(yù)測的維恩圖(van圖，van diagram),其中具有5HT微陣列結(jié)果并且列出選擇用于體外測試的miR ;圖1E是代表針對Htrla的交叉生物信息學(xué)預(yù)測的維恩圖，其中具有5HT微陣列結(jié)果以及并且列出選擇用于體外測試的miR ;圖1F是代表針對Tph2的交叉生物信息學(xué)預(yù)測的維恩圖，其中具有5HT微陣列結(jié)果并且列出選擇用于體外測試的miR ;圖1G是代表針對MaoA的交叉生物信息學(xué)預(yù)測的維恩圖，其中具有5HT微陣列結(jié)果并且列出選擇用于體外測試的miR;圖1H是說明熒光素酶報告基因分析結(jié)果的圖形，表明miR-181c和miR-27b可以靶向Tph23’UTR ;以及圖1I是說明熒光素酶報告基因分析結(jié)果的圖形，表明miR_27b可以祀向Htrla MaoA。
[0090]圖 2k-圖 2H 示出靶向 Slc6a43’UTR(SEQ ID NO:25)和 Htrla3’UTR(SEQ ID NO:27)的微RNA。圖 2A示出靶向 Slc6a43’ UTR 的miR_135a和miR_135b(分別為 SEQ ID NO: 24和 26);圖 2B 示出靶向 Htr la3’ UTR 的 miR_135a 和 miR_135b(分別為 SEQ ID NO: 24 和 26 );圖 2C 是說明熒光素酶報告基因分析結(jié)果的圖形，表明miR-135a和miR_135b可以靶向Slc6a43’ UTR0熒光素酶分析數(shù)據(jù)示出海腎熒光素酶活性，其歸一化到在用所描述的基因的3’ UTR和空白載體或過表達(dá)特定miR的載體轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染的螢火蟲熒光素酶報告基因的活性。條表示平均值土 s.e.m。*Ρ=0.014，***Ρ=0.0002，對于 miR-16#，p〈0.0535，對于miR-27#，P=0.0967 ;圖2D是說明熒光素酶報告基因分析結(jié)果的圖形，表明miR_135a、miR-135b、miR-335、miR-181C和miR-26a可以靶向 Htrla3’ UTR。_Ρ〈0.0001，**Ρ=0.0029 ；圖 2Ε 示出對于 miR-135 (SEQ ID N0:27-SEQ ID N0:41)的種子匹配的 slc6a43’UTR 保守區(qū)；圖 2F 示出用于 miR-135 (SEQ ID N0:42_SEQ ID NO:54)的 Htrla3’UTR 種子匹配，表明種子I僅出現(xiàn)在于小鼠3’ UTR中，并且種子2是高度保守的；圖2G是說明在slc6a43’UTR中miR-135種子匹配的突變阻斷miR-135a和miR-135b的阻遏效應(yīng)的圖形。*#Ρ〈(λ 0001，**Ρ=0.0032 ;以及圖2Η是說明單獨和兩者一起地在Htrla3’UTR中miR-135種子匹配的突變的圖形，表明miR_135b通過兩個種子匹配祀向Htrla,而miR_135a僅由種子2革巴向Htrla。***P〈0.0001。
[0091]圖3A-圖3J示出在不同條件下miR-135a和miR-135b的水平。圖3A是說明在急性應(yīng)激后在RN中miR-135a水平的下降調(diào)節(jié)的圖形。條表示平均值土 s.e.m。(在第O組中n=8，在第90組中n=10,以及在第24組中η=9)***Ρ〈0.0001。*Ρ=0.0357 ;圖3Β是說明在急性應(yīng)激后在RN中miR-135b水平的下降調(diào)節(jié)的圖形。*#P〈0.0001，#P=0.0055 ;圖3C是說明在急性和慢性丙咪嗪給予(其獨立自小鼠是否暴露于社交失敗(socialdefeat))后在RN中miR-135a水平的上升調(diào)節(jié)的圖形。(對照慢性鹽水和對照慢性丙咪嗪，n=8 ;急性丙咪嗪，n=7 ;社交失敗慢性鹽水，n=ll ;社交失敗慢性丙咪嗪，n=9) **P=0.003 ;圖3D是說明在急性和慢性丙咪嗪給予(其獨立自小鼠是否暴露于社交失敗)后在RN中miR-135b水平的上升調(diào)節(jié)的圖形。**P=0.0093 ;圖3E是說明在急性或慢性給予SSR1、以及不是NRI或鹽水后在RN中miR-135a水平的升高的圖形。(在每個組中n=8，除了急性鹽水n=7)#*P〈0.0001 ;圖3F是說明在急性或慢性給予SSRI或NRI后在RN中未改變的miR_135b水平的圖形；圖3G是表明當(dāng)與對照相比時，在接受慢性或急性SSRI的小鼠的血漿中miR-135a水平的降低的圖形。(在每個組中n=8，除了慢性SSRI和NRI n=7) **P=0.0004，對于急性SSRI，與急性鹽水相比，并且**P=0.0006，對于慢性SSRI，與慢性鹽水相比；圖3H是表明當(dāng)與對照相比時，在接受慢性或急性SSRI的小鼠的血漿中未改變的miR-135b水平的圖形；圖31是顯示與血漿相比，在RN中的單個小鼠miR-135a水平的散點圖形，表明在接受SSRI或鹽水治療的小鼠中的反向相關(guān)性；以及圖3J是顯示與對照相比，在接受SSRI治療的小鼠中在RN和血漿中的miR-135b水平之間沒有相關(guān)性的散點圖形。
[0092] 圖4A-圖4H示出miR-135b的體內(nèi)過表達(dá)。圖4A是用于過表達(dá)miR-135b的慢病毒的示意圖；圖48是說明實時PCR結(jié)果的圖形，表明在成年小鼠的中縫背核(DRN)中體內(nèi)過表達(dá)miR-135b。條表示平均值土s.e.m。(GFP注射，n=5，以及miR_1350E，η=3)Ρ=0.0032 ;圖3C-D示出DRN注射部位，其中通過在注射部位處展示GFP染色。(斷面圖采用自Paxinos);圖4E是表明與對照小鼠相比，在過表達(dá)miR-135b的小鼠中，在強(qiáng)迫游泳測試中在RN中降低的固定狀態(tài)時間的圖形。(對照，n=9, miR-135, n=9) P=0.0088，在3分鐘中，以及P=0.00330，4分鐘；圖4F是表明與對照小鼠相比，在懸尾實驗中，在過表達(dá)miR-135b的小鼠中，在RN中減少的固定狀態(tài)時間的圖形。P=0.07351 ;圖4G-圖4H是表明與對照相比，在飼養(yǎng)籠運動中，在過表達(dá)miR-135b的小鼠中，在RN中沒有差異的圖形。
[0093]圖5示出根據(jù)熒光素酶基因克隆的ADRbl3’ UTR。圖解:完整ADRbl3’ UTR (頂部)，包含4個miR-19結(jié)合位點，以及ADRbl3’ UTR的突變形式(底部)，缺少所有4個miR-19結(jié)合位點，克隆至在Psicheck2質(zhì)粒中的突光素酶基因的下游。
[0094]圖6A-圖6E示出miR_19b通過在它的3’ UTR上的種子匹配靶向ADRbl3’ UTR ;圖6A-圖6B是說明在HT22細(xì)胞中測得的歸一化熒光素酶水平的圖形，其中上述細(xì)胞在用GFP質(zhì)粒(圖6A)或pre-miR-19b過表達(dá)(OE)質(zhì)粒(圖6B)轉(zhuǎn)染后表達(dá)低內(nèi)源性miR-19水平；圖6C-圖6E是說明在表達(dá)高內(nèi)源性miR-19水平的HEK293T細(xì)胞中測得的歸一化熒光素酶水平的圖形。用對照質(zhì)粒(圖6C), miR-19b敲除(KD)探針(圖6D)或雜亂探針(scrambledprobe)作為對照轉(zhuǎn)染，以及miR_19b miArrest質(zhì)粒(圖6E)或?qū)φ誱iArrest質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。***P〈0.005。通過螢火蟲熒光素酶表達(dá)水平來歸一化海腎熒光素酶活性并表示為在有對照處理存在的條件下通過Adrbl-3’UTR的突變形式(Adrbl_mut)實現(xiàn)的活性的比率。
[0095]圖7A-圖7D示出在杏仁核(amygdale)中miRNA的差異表達(dá)。圖7A-圖7B是表明在杏仁核中在急性應(yīng)激后90分鐘miRNA的差異表達(dá)的圖形。圖7A示出安捷倫(agilent)陣列結(jié)果。圖7b示出affymetrix陣列結(jié)果。歸一化值被描述為斑點強(qiáng)度相對于跨越條件(N=2，2)的平均強(qiáng)度的log2比率(應(yīng)激vs.對照)。每種miRNA的強(qiáng)度被計算為跨越生物學(xué)重復(fù)的平均歸一化強(qiáng)度。miR-15a和miR-15b顯示為紅色。miR_124(其是并不受到應(yīng)激方案影響的已確認(rèn)的神經(jīng)元標(biāo)記)顯示為白色；圖7C示出，miR-15a和miR_15b具有對促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素I型受體3’UTR[CRHR1,改變(adapt)自targetscan (dot) org]的半保守種子匹配；以及圖7D是說明在用miR-15b-EGFP過表達(dá)質(zhì)?；騁FP表達(dá)質(zhì)粒和熒光素酶報告基因質(zhì)粒(由CRFR1-3’ UTR對照(控制，controlled))共轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞中測得的熒光素酶活性。通過螢火蟲熒光素酶表達(dá)水平來歸一化海腎熒光素酶活性。
[0096]圖8是說明熒光素酶報告基因分析結(jié)果的圖形，表明miR-182可能靶向Htrla3’UTR。熒光素酶分析數(shù)據(jù)示出海腎熒光素酶活性，其歸一化到在用所描述的基因的3’ UTR和空白載體或過表達(dá)特定miR的載體轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染螢火蟲熒光素酶報告基因的活性。
[0097]圖9是說明在成年小鼠DRN中miR-182表達(dá)水平的實時PCR結(jié)果的圖形，表明在慢性社交失敗后降低的表達(dá)的趨勢。數(shù)據(jù)表示平均值土SEM，對照n=7而在社交失敗組中18 只小鼠，#=p= 0.1。
[0098]圖10是代表對miR-182祀的計算機(jī)模擬(在娃上，in silico)生物信息學(xué)預(yù)測(兩種算法)的維恩圖，以及與在此預(yù)測中出現(xiàn)的正常和病理性神經(jīng)元功能高度相關(guān)的潛在靶基因的列表。
[0099]圖1lA-圖1lC示出miR-182的過表達(dá)或敲除。圖1lA是用于過表達(dá)miR-182的慢病毒的示意圖；圖1lB是說明實時PCR結(jié)果的圖形，表明在N2A細(xì)胞系中體外過表達(dá)miR-182 ;并且圖1lC是用于敲除miR-182的慢病毒的不意圖。
[0100]圖12A-圖12D示出在給予NRI后在PFC中的miR-19水平。急性(一次)或慢性(18天)給予NRI瑞波西汀。值得注意的，在急性給予NRI后，在PFC中，miR-19a和miR-19b水平降低(分別地圖12A和圖12B)，但在慢性給予NRI后則升高(分別地圖12C和圖12D)。
[0101]圖13A-圖13D示出，在經(jīng)受社交失敗的小鼠的PFC和杏仁核中miR-19的水平。在來自獲自小鼠(其經(jīng)受社交失敗范例)的杏仁核的樣品中測量miR-19a和miR_19b水平。值得注意的是，相對于對照小鼠，在歸類為對社交失敗“易感”的小鼠中，在PFC中，miR-19a和miR-19b水平升高(分別為圖13A和圖13B)。相對于對照小鼠，在歸類為對社交失敗“易感”的小鼠的杏仁核中miR-19水平也升高(分別為圖13C和圖13D)。
[0102]圖14 示出靶向 CB13’UTR 的 miRNA-19b。用 CB13'UTR 和過表達(dá) miR_19b 或 GFP對照的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HT-22細(xì)胞導(dǎo)致歸一化熒光素酶水平降低50%。
[0103]圖15A-圖15B是小鼠腦的冠狀斷面的示意圖。圖15A示出在腦中的若干核，包括BLA (由Paxinos和Franklin改編自(適應(yīng)自，adapted from)小鼠腦)；圖15B顯示在腦中的 CBl 分布(適應(yīng)自 Allen Brain Atlaswww.mouse, bra in-map.0rg/)。值得注意的是，根據(jù)這種分布，顯而易見的是，在BLA中CBl是豐富的。
[0104]圖16是在杏仁核(BLA)的基底外側(cè)核中記憶鞏固的提出的機(jī)制的示意圖。皮質(zhì)酮(CORT)結(jié)合于尚未表征的膜結(jié)合糖皮質(zhì)激素受體(mbGR)，其激活Gs - cAMP/PKA途徑以誘導(dǎo)內(nèi)源性大麻素(eCB)合成。內(nèi)源性大麻素被釋放到突觸，在那里它們結(jié)合于抑制GABA釋放的GABA能末端上的CBl受體。GABA釋放的這種抑制會去抑制去甲腎上腺素(NE)釋放并增加突觸后β -腎上腺素受體的NE激活，從而增加厭惡情緒記憶的固結(jié)。
[0105]圖17Α-圖17Β示出在RISC復(fù)合體中的Ago2。圖17A是在RISC復(fù)合體中Ago2的示意圖，其介導(dǎo)在miRNA和mRNA之間的相互作用；圖17B示出用抗Ago2抗體進(jìn)行的蛋白印跡分析。如當(dāng)將用Ago2抗體沉淀一次和用IgGl對照沉淀一次的全腦樣品相比較時可以看到的，該IP對于Ago2蛋白具有特異性。值得注意的是，對于用IgGl對照沉淀的樣品，沒有檢測到Ago2蛋白。 [0106]圖18A-圖18D示出社交回避試驗。單獨將小鼠放置在迷宮中3分鐘以便于適應(yīng)(圖18A和圖18B)，然后記錄并將它們的運動作圖。在3分鐘后，將新的ICR小鼠放置在緊鄰經(jīng)檢查小鼠的室中(圖18C和圖18D)，然后再次記錄并將檢查小鼠的運動作圖。
[0107]圖19A示出在陣列中上調(diào)的所選的miRNA的熱點圖(heatmap)圖解。
[0108]圖19B示出在陣列中下調(diào)的所選miRNA的熱點圖圖解。
[0109]圖20A-圖20B示出來自微陣列結(jié)果的miR-15a (圖20A)和FKBP5 (圖20B)的log2表達(dá)。每個紅點表示陣列的一次重復(fù)。對照組(CNT)具有4次重復(fù)，“易感”組(SUSC)具有3次重復(fù)以及“回彈”(恢復(fù)，Resilient)組(RESIL)具有3次重復(fù)。黑線表示在每組中重復(fù)的平均值。
[0110]圖20C 示出小鼠 FKBP5 的 3'UTR 序列(獲自 targetscan.0rg)。
[0111]圖2IA-圖21B示出，相對于對照小鼠，在社交失敗后，在“易感”小鼠中，杏仁核miR-15a (圖21A)和FKBP5 (圖21B)的水平。值得注意的是，在經(jīng)受社交失敗和表征為“易感”小鼠的杏仁核中miR-15a水平升高(圖21A)。在經(jīng)受社交失敗和表征為“易感”小鼠的杏仁核中FKBP5水平降低(圖21B)。
[0112]圖22是Stxla、Sgkl和Adrb2的3’UTR的示意圖，各自包含單miRNA-15結(jié)合位點。
[0113]圖23示出，相對于對照小鼠，在經(jīng)受社交失敗的小鼠中，杏仁核miR-181的水平。值得注意的是，在經(jīng)受社交失敗的小鼠的杏仁核中miR-181水平升高。
[0114]圖24示出代表miR-181和谷氨酸受體的交叉生物信息學(xué)預(yù)測的維恩圖。
[0115]圖25是miR-181的6種潛在靶標(biāo)的完整3’UTR的示意圖。
[0116]圖26示出在應(yīng)激后在中縫核中miR182的表達(dá)水平。值得注意的是，當(dāng)在應(yīng)激后測試24小時時，如通過實時PCR測得的，急性30分鐘固定應(yīng)激導(dǎo)致在RN中miR182的降低的表達(dá)水平。**=P〈0.01 ;在每組中，n=8。
[0117]圖27A-圖27C示出熒光素酶報告基因分析的結(jié)果，表明miR182靶向DSCAM、L1CAM和TSNAX3’ UTR0圖27A說明熒光素酶分析的數(shù)據(jù)，它們示出海腎熒光素酶活性，其歸一化到在用所描的基因的3’ UTR和空白載體或過表達(dá)特定miR的載體轉(zhuǎn)染的N2a細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染螢火蟲熒光素酶報告基因的活性。在Llcam (圖27B)和Tsnax (圖27C) 3’UTR中miR182種子匹配的突變阻斷miR182的抑制效應(yīng)。條表示平均值土s.e.m。*P〈0.05，**P〈0.01，林*Ρ〈0.001。
[0118]圖28Α-圖28D示出在杏仁核(AMY)和前額皮質(zhì)(PFC)中miR135的表達(dá)。圖28A說明，急性SSRI和NRI提高在AMY中的miR135a水平；圖28B說明，與鹽水相比，通過急性SSRI或NRI給予，在AMY中的miR135b水平被上調(diào)；圖28C說明，慢性SSRI降低在PFC中的miR135a水平；以及圖28D說明，通過急性SSRI或NRI，在PFC中的miR135b水平被上調(diào)以及通過慢性SSRI治療而降低。在每組中，n=7-8，*=P〈0.05 ;**=P〈0.01 ;***=P〈0.0001。
[0119]圖29A-圖29B示出在社交失敗后在小鼠循環(huán)系統(tǒng)中的提高的miR135水平。與對照小鼠相比，在社交失敗后兩周，在小鼠的血漿中，miR135a (圖29A)和miR135b (圖29B)水平顯著提高(#=P〈0.01，n=7-16，在每組中)。
[0120]圖30A-圖30E示出體外和體內(nèi)miR135KD的確認(rèn)。圖30A-B示出熒光素酶報告基因分析的結(jié)果，表明miR135b KD構(gòu)建體阻斷miR135靶向Htrla (圖30A)和slc6a4 (圖30B);圖30C是miR135bKD和對照病毒載體的示意圖；圖30D-圖30E示出DRN注射部位(圖30D，采用自Paxinos)，以及圖30E是用miR135KD慢病毒感染的DRN的GFP染色。
[0121]圖3IA-圖3IG示出，在miR135KD小鼠中，增加的焦慮樣行為和對SSRI的減弱的響應(yīng)。圖31A示出，在曠場實驗(open field test)中，miR135KD小鼠的行為類似于對照小鼠；圖31B示出，與對照小鼠相比，在升高脈沖迷宮中，miR135KD小鼠的增加的焦慮樣行為；圖31C示出，在基礎(chǔ)應(yīng)激條件下，但并不在急性應(yīng)激后，與對照小鼠相比，在光暗轉(zhuǎn)換測試中，miR135KD小鼠在明室中花費更多時間；圖31D示出，在基礎(chǔ)應(yīng)激條件下，但并不在急性應(yīng)激后，與對照小鼠相比，miR135KD小鼠更多次探訪明室；圖31E示出，在基礎(chǔ)應(yīng)激條件下，但并不在急性應(yīng)激后，與對 照小鼠相比，miR135KD小鼠在明室中移動較少距離；圖31F示出，在基礎(chǔ)條件下和在SSRI給予后，在懸尾實驗(tail suspens1n test)中，在miR135KD小鼠和對照小鼠之間沒有差異，然而，在兩組中，與基礎(chǔ)條件相比，在SSRI治療后，觀測到固定狀態(tài)時間的減少。(圖31F-圖31G)。在兩組中，通過SSRI來減少固定狀態(tài)時間，然而，與對照相比，在測試的最后2分鐘，在miR135KD小鼠中的減少被減弱。~=ρ〈0.1*=ρ〈0.05 ；**=ρ〈0.01 ;***=ρ〈0.001。在每組中 η=10_11。
[0122]圖32是miR135小鼠可誘導(dǎo)過表達(dá)系統(tǒng)的不意圖。轉(zhuǎn)基因小鼠在miR135a序列和GFP報告基因之前表達(dá)兩側(cè)裝接交互停止(floxedtransact1nal stop)。突變轉(zhuǎn)基因小鼠僅在5-HT ePet陽性細(xì)胞中表達(dá)miR135a。
[0123]圖33A-圖33C示出在5-HT神經(jīng)元中過表達(dá)miR135的小鼠品系的確認(rèn)。圖33A示出，與對照小鼠相比，在miR1350E小鼠的RN中過表達(dá)miR135。圖33B-圖33C示出，在miR1350E 小鼠 RN 中，miR135 革巴基因 mRNA 被下調(diào)，Slc6a4 (圖 33B)和 Htrla (圖 33C)二者均是。#=ρ〈0.1*=ρ〈0.05 ;在每組中,η=4。
[0124]圖34Α-圖34Ε示出，在miR1350E小鼠中，在社交失敗后，減少的焦慮和抑郁樣行為。圖34A示出，在曠場實驗中，miR1350E小鼠具有減少的焦慮樣行為；圖34B示出，在光暗轉(zhuǎn)換測試中，與miR1350E小鼠的對照相比，較少的焦慮樣行為；圖34(:示出，在升高脈沖迷宮中，與miR1350E小鼠的對照相比，減少的焦慮樣行為；圖34D示出，在懸尾實驗中，與對照相比，miR1350E小鼠的減少的固定狀態(tài)時間的傾向；以及圖34E示出，在強(qiáng)迫游泳試驗中，與對照相比，在miR1350E小鼠中減少的固定狀態(tài)時間。#=ρ<0.1*=ρ〈0.05 ；**=ρ〈0.01η=7_11,在每組中。
【具體實施方式】
[0125]本發(fā)明，在其一些實施方式中，涉及微RNA，并且更具體地但不排外地涉及微RNA應(yīng)用于疾病診斷、監(jiān)測和治療。
[0126]參照附圖和隨附說明，可以更好地理解本發(fā)明的原理和操作。
[0127]在詳細(xì)解釋本發(fā)明的至少一種實施方式以前，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不一定限于在以下描述中陳述的或通過實施例舉例說明的詳情。能夠以各種方式來實施或?qū)嵺`或進(jìn)行本發(fā)明。另外，應(yīng)當(dāng)理解的是，本文中采用的短語和術(shù)語是為了說明的目的，而不應(yīng)該被視為限制性的。
[0128]先前已經(jīng)確立在失調(diào)的血清素能活性和精神障礙如焦慮和抑郁之間的關(guān)聯(lián)，然而尚未完全了解構(gòu)成這些疾病的基礎(chǔ)的分子機(jī)制。微RNA (miR)是小RNA分子的子集，其調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)并且在腦中是豐富的。
[0129]當(dāng)實施本發(fā)明時，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，特定微RNA (miR)參與五羥色胺(5HT)神經(jīng)膠質(zhì)相關(guān)基因的調(diào)節(jié)，并因此涉及調(diào)節(jié)與異常五羥色胺水平相關(guān)的病癥如精神障礙。
[0130]如在下文中以及在接著的實施例部分中所說明的，本發(fā)明的發(fā)明人確定了在5HT神經(jīng)元中的miR表達(dá)模式，其獲自5HT報告小鼠(ePET-YFP )的中縫核(RN)，其中利用miR微陣列(參見在接著的實施例部分中的表2A-表2B)。生物信息分析獲自陣列的五羥色胺能神經(jīng)元的獨特的miR表達(dá)分布以確定miR，其假定靶向關(guān)鍵的血清素能相關(guān)基因，如五羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白(Slc6a4，圖1D)、五羥色胺自身受體(Htrla，圖1E)、色氨酸羥化酶2(Tph2，圖1F)以及單胺羥化酶(MaoA，圖1G)。進(jìn)一步體外測試用于這些基因的3’UTR的miRNA靶向，這說明特定miR (例如，miR-135)，其特異性地靶向和調(diào)節(jié)5HT神經(jīng)元基因(參見圖1H-圖1I和圖2C-圖2D)。本發(fā)明的發(fā)明人已進(jìn)一步說明了，在急性應(yīng)激后(圖3A-圖3D)以及在用抗抑郁劑治療后(圖3E-圖3J)，在RN和血漿中的miR-135表達(dá)水平被改變。在社交失敗后，在成年小鼠的RN中，體內(nèi)miR-135過表達(dá)減少了抑郁樣行為(圖4A-圖4H)。此外，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)說明了，miR-182作為神經(jīng)元活性(通過直接抑制Htrla，圖8)和精神病理行為(圖9)的活性的調(diào)節(jié)子的活性以及miR-15作為應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)子的活性[通過直接抑制 CRHlR (圖 7A-圖 7B)、FK506 結(jié)合蛋白 5 (FKBP5)(圖 2IA-圖 21B)以及 Stxla,Sgkl 和Adrb2 (圖22)]。本發(fā)明的發(fā)明人還已說明，通過miR-19，β腎上腺素能受體(Adrbl)和大麻素受體I (CBl)的特定靶向。miR-19過表達(dá)抑制Adrbl (圖6A-圖6C)而miR-19的敲除則增強(qiáng)Adrbl表達(dá)(圖6D-圖6E)。miR-19過表達(dá)還抑制CBl (圖14)。本發(fā)明的發(fā)明人還已發(fā)現(xiàn)用于miR-181的靶。具體地說，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)說明，miR-181特異性地調(diào)節(jié)谷氨酸受體(圖24和圖25)。綜上，這些結(jié)果證實了，將miRNA或調(diào)節(jié)其的序列如miR-135、miR-335、miR-181、miR-182、miR-26、miR-27、miR-15 和 miR-19 用作治療模式。
[0131] 因此，依據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了在需要其的受試者中治療其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸。
[0132]根據(jù)一種【具體實施方式】，用于治療其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥，上述微 RNA 包括 miR-135、miR-335、miR-26 和 miR-182。
[0133]根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了在需要其的受試者中治療其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼微RNA或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼微RNA或其前體的外源性多核苷酸。
[0134]根據(jù)一種【具體實施方式】，用于治療其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥，上述微RNA包括miR-19。
[0135]根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了在需要其的受試者中治療其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼微RNA或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼微RNA或其前體的外源性多核苷酸。
[0136]根據(jù)一種【具體實施方式】，用于治療其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥，上述微RNA包括miR-15。
[0137]根 據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了在需要其的受試者中治療其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥的方法，該方法包括將編碼微RNA或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼微RNA或其前體的外源性多核苷酸。
[0138]根據(jù)一種【具體實施方式】，用于治療其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥，上述微RNA包括miR-181。
[0139]術(shù)語“治療”是指抑制或阻止疾病、障礙或病癥的發(fā)展和/或引起疾病、障礙或病癥的減弱、緩解或消退，或防止在受試者中出現(xiàn)疾病、障礙或病癥，其中上述受試者可以具有疾病、障礙或病癥的風(fēng)險，但尚未被診斷為患有疾病、障礙或病癥。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，各種方法和測定可以用來評估疾病、障礙或病癥的發(fā)展，以及類似地，各種方法和測定可以用來評估疾病、障礙或病癥的減弱、緩解或消退。
[0140]如在本文中所使用的，術(shù)語“受試者”包括哺乳動物，優(yōu)選在任何年齡下患有病變的人類。優(yōu)選地，此術(shù)語涵蓋具有發(fā)展病變的危險的個體。
[0141]如在本文中所使用的，短語"其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥"是指這樣的疾病或障礙:其中提高五羥色胺的水平可以防止疾病或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀的發(fā)生，或停止疾病進(jìn)展或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀(如在下文中進(jìn)一步詳細(xì)說明的)。
[0142]如在本文中所使用的，術(shù)語〃五羥色胺〃是指單胺類神經(jīng)遞質(zhì)[還被稱為5-羥色胺(5-HT)]。五羥色胺被闡述于例如CAS號50-67-9。
[0143]根據(jù)一種實施方式，提供了用于在突觸間隙中提高五羥色胺水平的方法，該方法包括將編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞例如五羥色胺能神經(jīng)元中表達(dá)編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸。
[0144]如在本文中所使用的，術(shù)語〃突觸間隙〃是指在兩個神經(jīng)元之間的區(qū)域，電子或化學(xué)信號通過其而通過。
[0145]“神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞”是指神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(例如，少突膠質(zhì)細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞)。
[0146]如在本文中所使用的，術(shù)語〃五羥色胺能神經(jīng)元〃是指這樣的神經(jīng)元:其分泌五羥色胺或能夠五羥色胺再攝取(即，通過表達(dá)在它們的細(xì)胞表面上的五羥色胺轉(zhuǎn)運體)。
[0147]其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥可以包括，例如，任何情緒失調(diào)，包括抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥；睡眠障礙、食物相關(guān)障礙、生長障礙和生殖障礙。
[0148]根據(jù)一種【具體實施方式】，其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥包括抑郁。
[0149]根據(jù)一種實施方式，當(dāng)病癥是抑郁或焦慮時，微RNA是miR-135。
[0150]可以理解的是，抑郁或焦慮可能不一定與五羥色胺相關(guān)。
[0151]如在本文中所使用的，短語"其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥"是指這樣的疾病或障礙:其中降低腎上腺素或去甲腎上腺素的表達(dá)或活性可以防止疾病或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀的發(fā)生或停止疾病進(jìn)展或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀(如在下文中進(jìn)一步詳細(xì)說明的)。
[0152]如在本文中所使用的，術(shù)語〃腎上腺素〃是指激素和神經(jīng)遞質(zhì)(還被稱為腎上腺素)。腎上腺素被闡述于例如CAS號51-43-4。
[0153]如在本文中所使用的，術(shù)語〃去甲腎上腺素(noradrenaline)"是指作為激素和神經(jīng)遞質(zhì)的兒茶酚胺(還被稱為去甲腎上腺素(nor印in印hrine))。去甲腎上腺素被闡述于例如 CAS 號(I)51-41-2 (I)和 138-65-8 (dl))。 去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥可以包括，例如，應(yīng)激相關(guān)障礙、焦慮、記憶缺陷、心臟病(例如心悸、心動過速、心律失常)、頭痛、震顫、高血壓、以及急性肺水腫。
[0155]如在本文中所使用的，短語〃其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥〃是指這樣的疾病或障礙:其中降低CRH的表達(dá)或活性可以防止疾病或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀的發(fā)生或停止疾病進(jìn)展或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀(如在下文中進(jìn)一步詳細(xì)說明的)。
[0156]如在本文中所使用的，術(shù)語"促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)"是指多肽激素和神經(jīng)遞質(zhì)(還被稱為促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子(CRF)或促腎上腺皮質(zhì)素釋放素)。CRH被闡述于例如 NP_000747.1。
[0157]其中低CRH水平中治療上有益的病癥可以包括，例如，應(yīng)激、抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥、睡眠障礙、食物相關(guān)障礙、生長障礙、生殖障礙和肥胖癥。
[0158]如在本文中所使用的，短語"其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥"是指這樣的疾病或障礙:其中降低谷氨酸受體的表達(dá)或活性可以防止疾病或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀的發(fā)生或停止疾病進(jìn)展或與其相關(guān)的醫(yī)療癥狀(如在下文中進(jìn)一步詳細(xì)說明的)。
[0159]如在本文中所使用的，術(shù)語〃谷氨酸受體〃是指通常位于神經(jīng)元細(xì)胞的膜上的突觸受體(例如，GrmU Grik3> Grm5> Gria2> Grik2和Grm7)。谷氨酸受體被闡述于例如ΝΡ_000822.2[谷氨酸受體離子型紅藻氨酸 3 (Grik3) ] ；NP_000817.2、NP_001077088.1、NP_001077089.1 [谷氨酸受體離子型 AMPA2 (Gria2) ] ；NP_001159719.1、NP_068775.1、NP_786944.1 [谷氨酸受體離子型紅藻氨酸 2 (Grik2)] ；NP_000833.KNP_001137303.1 [代謝型谷氨酸受體5 (Grm5) ] ；NP_000835.1、NP_870989.1 [代謝型谷氨酸受體7 (Grm7)]；NP_000829.2、NP_001107801.1 [代謝型谷氨酸受體 I (Grml)]。
[0160]其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥可以包括，例如，癲癇發(fā)作(例如癲癇)、亨廷頓病、精神分裂癥、脆性X綜合征、廣泛性焦慮障礙和癌癥(例如黑素瘤)。
[0161]如在本文中所使用的，術(shù)語"微RNA或其前體"是指作為轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)子的微RNA(miRNA)分子。微RNA通常加工自前miR (前微RNA前體)。前miR是由RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄的一組前體miRNA分子，其被有效地加工成功能性miRNA，例如，在轉(zhuǎn)染進(jìn)入培養(yǎng)細(xì)胞后。在正常并不表達(dá)這種miRNA的細(xì)胞類型中，前miR可以用來誘發(fā)特定miRNA活性，因此通過在〃(miRNA)獲得功能(gain of (miRNA) funct1n) 〃實驗中下調(diào)它的祀的表達(dá)來引導(dǎo)(adress)它的祀的功能。對于列于miRNA注冊表中的所有已知的miRNA存在前miR設(shè)計并且可以易于設(shè)計用于任何研究?？梢砸员旧砘蚓幋a自連接到核酸構(gòu)建體中的的前體分子(如在下文中進(jìn)一步描述的)將微RNA給予細(xì)胞。
[0162]可以理解的是，本教導(dǎo)的微RNA可以結(jié)合、連接、調(diào)節(jié)、加工、干擾、增強(qiáng)、穩(wěn)定和/或去穩(wěn)定任何微RNA靶。這樣的靶可以是任何分子，包括但不限于DNA分子、RNA分子和多肽，如但不限于五羥色胺相關(guān)基因，如五羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白(即，SERT或Slc6a4)、五羥色胺抑制性受體la (Htrla)、色氨酸羥化酶2 (Tph2)和單胺羥化酶(MaoA);腎上腺素受體或去甲腎上腺素受體(腎上腺素能受體如Adrl);腺苷酸環(huán)化酶I型(ADCY1);CRH受體如CrhlR ;或任何其他分子，例如FK506結(jié)合蛋白5 (FKBP5)、大麻素受體I (CB1)、唐氏綜合癥細(xì)胞粘附分子(Dscam)、Translin相關(guān)X蛋白(Tsnax)和細(xì)胞粘附分子LI (Llcam)(均進(jìn)一步詳細(xì)描述在下文中)。
[0163]可以理解的是，可以通過各種數(shù)據(jù)庫，包括例如微RNA注冊表(http://wwwdotsangerdotacdotuk/Software/Rfam/mirna/indexdotshtml),來石角定本發(fā)明的微RNA。
[0164]可以通過將編碼微RNA的外源性多核苷酸給予受試者或在受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼微RNA的外源性多核苷酸來實施本發(fā)明的方法。
[0165]術(shù)語“多核苷酸”是指核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)或它們的模擬物的單鏈低聚體或雙鏈低聚體或多聚體。此術(shù)語包括多核苷酸和/或寡核苷酸，其源自天然存在的核酸分子(例如，RNA或DNA)、合成多核苷酸和/或寡核苷酸分子，其由天然存在的堿基、糖和共價核苷間鍵(例如，主鏈)構(gòu)成，以及具有非天然存在的部分(其作用類似于相應(yīng)的天然存在的部分)的合成多核苷酸和/或寡核苷酸。
[0166]本發(fā)明的多核苷酸的長度可選為100個核苷酸或更少、可選為90個核苷酸或更少、可選為80個核苷酸或更少、可選為70個核苷酸或更少、可選為60個核苷酸或更少、可選為50個核苷酸或更少、可選為40個核苷酸或更少、可選為30個核苷酸或更少，例如，29個核苷酸、28個核苷酸、27個核苷酸、26個核苷酸、25個核苷酸、24個核苷酸、23個核苷酸、22個核苷酸、21個核苷酸、20個核苷酸、19個核苷酸、18個核苷酸、17個核苷酸、16個核苷酸、15個核苷酸，可選地12至24個核苷酸，可選地5-15之間，可選地5_25之間，最優(yōu)選地，約20-25個核苷酸。
[0167]可以根據(jù)在本領(lǐng)域中已知的任何寡核苷酸合成方法，包括酶促合成或固相合成，來產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)設(shè)計的多核苷酸(包括寡核苷酸)。用于進(jìn)行固相合成的儀器和試劑可商業(yè)上獲自，例如，Applied B1systems。還可以采用用于上述合成的任何其他方式，寡核苷酸的實際合成是在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)并且可以通過成熟的方法來完成，如詳述于，例如:Sambrook, J.and Russell, D.ff.(2001), "Molecular Cloning: ALaboratoryManual^;Ausubel, R.M.et al., eds.(1994，1989)，"Current ProtocolsinMolecular B1logy, "Volumes 1-1II,John ffiley&Sons, Baltimore, Maryland;Perbal,B.(1988), "A Practical Guide to Molecular Cloning, "John ffiley&Sons, New York ;以及Gait, M.J., ed.(1984), "Oligonucleotide Synthesis";采用固相化學(xué)，例如氰乙基亞磷酰胺(cyanoethyl phosphoramidite),接著去保護(hù)、脫鹽和純化,其通過,例如，自動化三苯甲基方法(trityl-on method)或 HPLC。
[0168]可以理解的是，可以利用表達(dá)載體來產(chǎn)生包含RNA分子的多核苷酸(如在下文中進(jìn)一步描述的)。
[0169]優(yōu)選地，本發(fā)明的多核苷酸是修飾的多核苷酸?？梢岳迷诒绢I(lǐng)域中已知的各種方法來修飾多核苷酸。
[0170]例如，本發(fā)明的寡核苷酸或多核苷酸可以包括雜環(huán)核苷，其由嘌呤和嘧啶堿基組成，并以3’-至-5’磷酸二酯鍵鍵合。
[0171]優(yōu)選使用的寡核苷酸或多核苷酸是那些在主鏈、核苷間鍵或堿基中被修飾的寡核苷酸或多核苷酸(如在下文中廣泛描述的)。 [0172]根據(jù)本發(fā)明的此方面可以使用的優(yōu)選寡核苷酸或多核苷酸的具體實例包括包含修飾主鏈或非天然核苷間鍵的寡核苷酸或多核苷酸。具有修飾主鏈的寡核苷酸或多核苷酸包括那些寡核苷酸或多核苷酸，其在主鏈中保留磷原子，如公開于美國專利號US4, 469，863、US4, 476，301、US5, 023，243、US5, 177，196、US5, 188，897、US5, 264，423、US5, 276，019、US5, 278，302、US5, 286，717、US5, 321，131、US5, 399，676、US5, 405，939、US5, 453，496、US5, 455，233、US5, 466，677、US5, 476，925、US5, 519，126、US5, 536，821、US5, 541，306、US5, 550，111、US5, 563，253、US5, 571，799、US5, 587，361、以及 US5, 625，050。
[0173]優(yōu)選的修飾寡核苷酸或多核苷酸主鏈包括，例如:硫代磷酸酯；手性硫代磷酸酯；二硫代憐酸酷；憐酸二酷；氣基烷基憐酸二酷；甲基和其他烷基勝酸酷，包括3’ -亞烷基勝酸酯和手性膦酸酯；亞膦酸酯；亞磷酰胺，包括3’-氨基亞磷酰胺和氨基烷基亞磷酰胺；硫代亞磷酰胺；硫代烷基膦酸酯；硫代烷基磷酸三酯；以及具有正常3’-5’鍵的硼烷代磷酸酯(boranophosphates),它們的2’_5’鍵接類似物，以及那些具有反向極性的硼燒代磷酸酯，其中核苷單元的相鄰對以3’-5’至5’-3’或2’-5’至5’-2’的方式連接。還可以使用上述修飾的各種鹽、混合鹽和游離酸形式。
[0174]可替代地，其中并不包括磷原子的修飾寡核苷酸或多核苷酸主鏈具有這樣的主鏈，其是通過短鏈烷基或環(huán)烷基核苷間鍵、混合雜原子和烷基或環(huán)烷基核苷間鍵或一個或多個短鏈雜原子或雜環(huán)核苷間鍵所形成。這些主鏈包括那些具有嗎啉代鍵的主鏈(部分形成自核苷的糖部分)；硅氧烷主鏈；硫化物、亞砜和砜主鏈；甲?；土虼柞；麈?；亞甲基甲?；土虼柞；麈?；包含烯烴的主鏈；氨基磺酸酯主鏈；亞甲基亞氨基和亞甲基肼基主鏈；磺酸酯和氨磺酰主鏈；酰胺主鏈；以及具有混合的N、O、S和CH2組成部分的其他主鏈，如公開于美國專利號 US5, 034，506、US5, 166，315、US5, 185，444、US5, 214，134、US5, 216，141、US5, 235，033、US5, 264，562、US5, 264，564、US5, 405，938、US5, 434，257、US5, 466，677、US5, 470, 967、US5, 489，677、US5, 541，307、US5, 561，225、US5, 596，086、US5, 602，240、US5, 610，289、US5, 602，240、US5, 608，046、US5, 610，289、US5, 618，704、US5, 623，070、US5, 663，312、US5, 633，360、US5, 677，437 和 US5, 677，439。
[0175]根據(jù)本發(fā)明可以使用的其他寡核苷酸或多核苷酸是在糖和核苷間鍵中加以修飾的那些寡核苷酸或多核苷酸，即，核苷酸單元的主鏈被新基團(tuán)取代。保持基本單元以與適當(dāng)?shù)亩嗪塑账岚谢パa(bǔ)。這樣的寡核苷酸模擬物的實例包括肽核酸(PNA)。PNA寡核苷酸是指其中糖主鏈被包含酰胺的主鏈、特別地是氨基乙基甘氨酸主鏈取代的寡核苷酸。堿基被保留并直接或間接地結(jié)合于主鏈的酰胺部分的氮雜氮原子。教導(dǎo)PNA化合物的制備的美國專利包括但不限于美國專利號US5, 539，082、US5, 714，331和US5, 719，262，各自以引用方式結(jié)合于本文。在本發(fā)明中可以使用的其他主鏈修飾公開于美國專利號US6，303，374。
[0176]本發(fā)明的寡核苷酸或多核苷酸還可以包括堿基修飾或取代。如在本文中所使用的，〃未修飾的〃或〃天然〃堿基包括嘌呤堿基腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。〃修飾的〃堿基包括但不限于其他合成和天然堿基，如:5-甲基胞嘧啶(5-me-C) ;5_羥甲基胞嘧啶；黃嘌呤；次黃嘌呤；2_氨基腺嘌呤；腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基和其他烷基衍生物；腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基和其他烷基衍生物；2_硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶；5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶；5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶；6_偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶；5_尿嘧啶(假尿嘧啶)；4-硫代尿嘧啶；8-鹵基、8-氨基、8-硫羥、8-硫代烷基、8-羥基和其他8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤；5-鹵基，特別地是5-溴、5-三氟甲基和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤；8_氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤；7_脫氮鳥嘌呤和7-脫氮腺嘌呤；以及3-脫氮鳥嘌呤和3-脫氮腺嘌呤。另外的修飾堿基包括那些堿基，其公開于:美國專利號 US3, 68 7, 808; Kroschwitz, J.1., ed.(1990), "The Concise EncyclopediaOfPolymer Science And Engineering, "pages858_859, John ffiley&Sons;Englisch etal.(1991), ^Angewandte Chemie, "Internat1nal Edit1n, 30, 613 ； 以及 Sanghvi, Y.S., ^Antisense Research and Applicat1ns, 〃Chapterl5, pages289-302, S.T.Crooke andB.Lebleu, eds.，CRC Press, 1993。上述修飾堿基特別可用于提高本發(fā)明的低聚化合物的結(jié)合親和力。這些修飾堿基包括5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶、以及N-2、N-6和0-6-取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代已顯示會提高核酸雙鏈體穩(wěn)定性達(dá)0.6-1.2°C (Sanghvi, Y.S.et al.(1993)，"AntisenseResearch and Applicat1ns, 〃pages276_278, CRC Press, BocaRaton),并且是目前優(yōu)選的喊基取代，甚至更特別地當(dāng)與2’ -O-甲氧基乙基糖修飾結(jié)合時。
[0177]根據(jù)一種【具體實施方式】，本發(fā)明的miRNA多核苷酸具有如在SEQ IDN0:58_SEQ IDNO:94中闡述的核酸序列(參見表1A)。
[0178]表1A:miRNA多核苷酸序列
[0179]
【權(quán)利要求】
1.一種用于治療其中在需要其的受試者中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥的方法，所述方法包括給予所述受試者編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸，或在所述受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸，從而治療所述病癥，其中，所述微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26和miR-182組成的組。
2.編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸在制造被確定用于治療其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用，其中，所述微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26 和 miR-182 組成的組。
3.一種在需要其的受試者的突觸間隙中提高五羥色胺水平的方法，所述方法包括給予所述受試者編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸或在所述受試者的五羥色胺能神經(jīng)元中表達(dá)編碼至少一種微RNA或其前體的外源性多核苷酸，從而提高在所述突觸間隙中的所述五羥色胺水平，其中，所述微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26和miR-182組成的組。
4.一種分離的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，包含在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)至少一種微RNA或其前體的核酸構(gòu)建體，其中，所述微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26和miR-182組成的組。
5.一種分離的多核苷酸，編碼至少一種微RNA或其前體，用于治療其中五羥色胺水平的提高是治療上有益的病癥，其中，所述微RNA選自由miR-135、miR-335、miR-26和miR-182組成的組。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是五羥色胺能神經(jīng)元。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，或根據(jù)權(quán)利要求5所述的多核苷酸，其中，所述miR-135闡述于 SEQ ID NO: 58-SEQID NO: 62。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，或根據(jù)權(quán)利要求5所述的多核苷酸，其中，所述miR-335闡述于 SEQ ID N0:63-SEQID NO:64。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，或根據(jù)權(quán)利要求5所述的多核苷酸，其中，所述miR-26闡述于 SEQ ID NO:65-SEQ IDNO: 69。
11.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，或根據(jù)權(quán)利要求5所述的多核苷酸，其中，所述miR-182闡述于 SEQ ID NO: 70-SEQID NO: 71。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求5所述的多核苷酸，其中，所述病癥選自由抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥、睡眠障礙、食物相關(guān)障礙、生長障礙和生殖障礙組成的組。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，當(dāng)所述微RNA是miR-135時，所述病癥是抑郁或焦慮。
14.一種用于治療其中在需要其的受試者中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥的方法，所述方法包括將編碼miR-19或其前體和外源性多核苷酸給予所述受試者或在所述受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼miR-19或其前體和外源性多核苷酸，從而治療所述病癥。
15.編碼miR-19或其前體的外源性多核苷酸在制造確定用于治療其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用。
16.一種分離的細(xì)胞，包含在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)miR-19或其前體的核酸構(gòu)建體。
17.—種編碼miR-19或其前體的分離的多核苷酸，用于治療其中低腎上腺素或去甲腎上腺素水平是治療上有益的病癥。
18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法或根據(jù)權(quán)利要求16所述的分離的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞。
19.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求16所述的分離的細(xì)胞或根據(jù)權(quán)利要求17所述的多核苷酸，其中，所述miR-19闡述于SEQ IDN0:72-SEQ ID NO:76。
20.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求17所述的多核苷酸，其中，所述病癥選自由應(yīng)激、焦慮、記憶缺陷和心臟病組成的組。
21.一種用于治療其中在需要其的受試者中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的的病癥的方法，所述方法包括將編碼miR-15或其前體的外源性多核苷酸給予所述受試者或在所述受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼miR-15或其前體的外源性多核苷酸，從而治療所述病癥。
22.編碼miR-15或其前體的外源性多核苷酸在制造確定用于治療其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用。
23.一種分離的細(xì)胞，包含在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)miR-15或其前體的核酸構(gòu)建體。
24.一種編碼miR-15或其前體的分離的多核苷酸，用于治療其中低促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)水平是治療上有益的病癥。
25.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法或根據(jù)權(quán)利要求23所述的分離的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
26.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求22所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求23所述的分離的細(xì)胞或根據(jù)權(quán)利要求24所述的多核苷酸，其中，所述miR-15闡述于SEQ IDNO:77-SEQ ID NO:80。
27.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求22所述的應(yīng)用或根據(jù)權(quán)利要求24所述的多核苷酸，其中，所述病癥選自由抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥、睡眠障礙、食物相關(guān)障礙、生長障礙和生殖障礙組成的組。
28.根據(jù)權(quán)利要求5、17或24所述的多核苷酸，在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下是活性的。
29.根據(jù)權(quán)利要求17所述的多核苷酸，在心肌細(xì)胞中在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下是活性的。
30.一種治療其中在需要其的受試者中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥的方法，所述方法包括將編碼miR-181或其前體的外源性多核苷酸給予所述受試者或在所述受試者的細(xì)胞中表達(dá)編碼miR-181或其前體的外源性多核苷酸，從而治療所述病癥。
31.編碼miR-181或其前體的外源性多核苷酸在制造確定用于治療其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥的藥物中的應(yīng)用。
32.—種分離的細(xì)胞，包括在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)miR-181或其前體的核酸構(gòu)建體。
33.一種編碼miR-181或其前體的分離的多核苷酸，用于治療其中低谷氨酸受體水平是治療上有益的病癥。
34.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法或根據(jù)權(quán)利要求32所述的分離的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
35.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求32所述的分離的細(xì)胞或根據(jù)權(quán)利要求33所述的多核苷酸，其中，所述miR-181闡述于SEQ IDNO:85-SEQ ID NO:94。
36.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，或根據(jù)權(quán)利要求33所述的多核苷酸，其中，所述病癥選自由癲癇發(fā)作、亨廷頓病、精神分裂癥、脆性X綜合征、廣泛性焦慮障礙和癌癥組成的組。
37.一種核酸構(gòu)建體，包含編碼微RNA或其前體的核酸序列，其中，所述微RNA或其前體選自由 miR-135、 miR-335、miR-26、miR-27、miR-181、miR-182、miR-19 和 miR-15 組成的組，所述核酸序列是在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的核酸構(gòu)建體，其中，所述順式作用調(diào)控元件在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞中是活性的。
39.一種藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求37或38所述的核酸構(gòu)建體以及藥用載體或稀釋劑。
40.根據(jù)權(quán)利要求1、3、14、21或30所述的方法，其中，所述受試者是人受試者。
41.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)色氨酸羥化酶2 (Tph2)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整微RNA或其前體的活性或表達(dá)從而調(diào)節(jié)所述Tph2基因的表達(dá)，其中所述微RNA選自由miR-181和miR27組成的組。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括上調(diào)所述Tph2基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中下調(diào)所述miR-181和/或所述miR-27。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在所述miR-181和/或所述miR-27的所述下調(diào)后測量所述Tph2基因的表達(dá)。
44.一種分離的多核苷酸,包含用于下調(diào)miR-181、miR-27或其前體的表達(dá)的核酸序列。
45.一種核酸構(gòu)建體，包含用于下調(diào)微RNA或其前體的表達(dá)的核酸序列，其中所述微RNA或其前體選自由miR-181和所述miR-27組成的組,所述核酸序列是在順式作用調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄控制下。
46.一種用于在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)谷氨酸受體基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-181或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)所述谷氨酸受體基因的表達(dá)。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中，所述谷氨酸受體基因選自由代謝型谷氨酸受體I (Grml)、谷氨酸受體離子型紅藻氨酸3 (Grik3)、代謝型谷氨酸受體5 (Grm5)、谷氨酸受體離子型紅藻氨酸2 (Grik2)和代謝型谷氨酸受體7 (Grm7)組成的組。
48.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)五羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白(Slc6a4)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整微RNA或其前體的活性或表達(dá)從而調(diào)節(jié)所述Slc6a4基因的表達(dá)，其中所述微RNA選自由miR-135和miR-335組成的組。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括下調(diào)所述Slc6a4基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)所述miR-135和/或miR-335。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在所述上調(diào)所述miR-135和/或miR-335后測量所述Slc6a4基因的表達(dá)。
51.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)五羥色胺抑制性受體la (Htrla)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整微RNA或其前體的活性或表達(dá)從而調(diào)節(jié)所述Htrla 基因的表達(dá)，其中所述微 RNA 選自由 miR-135、miR-335、miR-181、miR-182 和 miR-26組成的組。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括下調(diào)所述Htrla基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)所述miR-135、miR-335、miR-181、miR-182和/ 或 miR-26。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中所述上調(diào)所述miR-135、miR-335、miR -181、miR-182 和 / 或 miR-26 后測量所述 Htrla 基因的表達(dá)。
54.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)唐氏綜合癥細(xì)胞粘附分子(Dscam)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-182或其前體的活性或表達(dá),從而調(diào)節(jié)所述Dscam基因的表達(dá)。
55.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附分子LI (Llcam)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-182或其前體的活性或表達(dá),從而調(diào)節(jié)所述Llcam基因的表達(dá)。
56.—種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)Translin相關(guān)X蛋白(Tsnax)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-182或其前體的活性或表達(dá),從而調(diào)節(jié)所述Tsnax基因的表達(dá)。
57.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)單胺羥化酶(MaoA)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括調(diào)整miR-27的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)所述MaoA基因的表達(dá)。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括下調(diào)所述MaoA基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)所述miR-27。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在所述上調(diào)所述miR-27后測量所述MaoA基因的表達(dá)。
60.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或心肌細(xì)胞中調(diào)節(jié)β腎上腺素能受體I (Adrbl)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括調(diào)整miR-19的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)所述Adrbl基因的表達(dá)。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括下調(diào)所述Adrbl基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或所述心肌細(xì)胞中上調(diào)所述miR-19。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或所述心肌細(xì)胞中在所述上調(diào)所述miR-19后測量所述Adrbl基因的表達(dá)。
63.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)大麻素受體I (CBl)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-19或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)所述CBl基因的表達(dá)。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括下調(diào)所述CBl基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)所述miR-19。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在所述上調(diào)所述CBl后測量所述CBl基因的表達(dá)。
66.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)CRHl型受體基因的表達(dá)的方法，所述方法包括調(diào)整miR-15的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)所述CRHl型受體基因的表達(dá)。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括下調(diào)所述CRHl型受體基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)所述miR-15。
68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在所述上調(diào)所述miR-15后測量所述CRHl型受體基因的表達(dá)。
69.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)FK506結(jié)合蛋白5 (FKBP5)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體的活性或表達(dá),從而調(diào)節(jié)所述FKBP5基因的表達(dá)。
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中，當(dāng)所述調(diào)節(jié)包括下調(diào)所述FKBP5基因的表達(dá)時，所述調(diào)整包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中上調(diào)所述miR-15。
71.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，進(jìn)一步包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中在所述上調(diào)所述miR-15后測量所述FKBP5基因的表達(dá)。
72.—種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)突觸趨化素la (Stxla)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體的活性或表達(dá)，從而調(diào)節(jié)所述Stxla基因的表達(dá)。
73.一種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶(Sgkl)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體的活性或表達(dá),從而調(diào)節(jié)所述Sgkl基因的表達(dá)。
74.—種在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)節(jié)β 2腎上腺素能受體(Adrb2)基因的表達(dá)的方法，所述方法包括在所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中調(diào)整miR-15或其前體的活性或表達(dá),從而調(diào)節(jié)所述Adrb2基因的表達(dá)。
75.—種監(jiān)測抗抑郁藥的治療的方法，所述方法包括: (a)用抗抑郁藥治療需要其的受試者；以及 (b)在所述治療之前以及在所述治療后，測量在所述受試者的血液中miR-135的表達(dá)水平，其中，與在通過所述抗抑郁藥的所述治療之前所述miR-135的所述表達(dá)水平相比，在通過所述抗抑郁藥的所述治療后，所述miR-135的較低表達(dá)水平表示有效治療。
76.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，進(jìn)一步包括在所述治療之前從所述受試者獲得血液樣品。
77.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，所述抗抑郁藥選自由選擇性五羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)、三環(huán)類抗抑郁藥和去甲腎上腺素再攝取抑制劑(NRI)組成的組。
78.一種在需要其的受試者中診斷五羥色胺相關(guān)病癥的方法，所述方法包括在所述受試者的血液中測量miR-135的表達(dá)水平，其中，與健康受試者的血液樣品中的miR-135的表達(dá)水平相比，所述miR-135的高表達(dá)水平表示所述五羥色胺相關(guān)病癥。
79.根據(jù)權(quán)利要求78所述的方法，其中，所述五羥色胺相關(guān)病癥是精神病癥。
80.根據(jù)權(quán)利要求79所述的方法，其中，所述精神病癥選自由抑郁、焦慮、應(yīng)激、疲勞、認(rèn)知功 能受損、驚恐發(fā)作、強(qiáng)迫行為、成癮性、社交恐怖癥、睡眠障礙和食物相關(guān)障礙組成的組。
81.根據(jù)權(quán)利要求75或78所述的方法，其中，所述miR-135包括miR_135a或miR_135b0
【文檔編號】A61K31/713GK104039960SQ201280048952
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2012年8月2日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月4日
【發(fā)明者】阿隆·陳, 埃蘭·霍恩施泰因, 歐娜·艾斯勒, 沙倫·哈拉馬蒂, 納馬·福爾克 申請人:耶達(dá)研究及發(fā)展有限公司