用于神經(jīng)保護(hù)的方法和組合物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本文公開(kāi)了用于為內(nèi)耳中的神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的方法和試劑盒及治療內(nèi)耳疾病和病癥，包括耳鳴和美尼爾氏癥的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于神經(jīng)保護(hù)的方法和組合物
[0001]相關(guān)申請(qǐng)
[0002]本申 請(qǐng)要求2011年11月3日提交的標(biāo)題為“Compositions and Methods ForTreatingMeniereJ sDisease”的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列 N0.61/554，982 和 2012 年 6 月 25 日提交的標(biāo)題為“Compositions and Methods For TreatingM6ni6re’sDisease”的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列N0.61/663，627的權(quán)益，其通過(guò)引用整體并入本文并用于所有目的。
[0003]序列表
[0004]本申請(qǐng)通過(guò)引用并入命名為“240_PCT1_ST25.txt”，大小為33kb并于2012年11月I日以IBM-PCT機(jī)器格式創(chuàng)建，具有與MS-Windows的操作系統(tǒng)兼容性的文件中存在的核
苷酸和/或氨基酸序列。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005]本文提供了靶向CASP2、N0X3、CAPNS1或RHOA的雙鏈RNA化合物，用于受試者耳內(nèi)神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)和喪失的耳蝸和/或前庭功能的恢復(fù)和/或伴隨癥狀的緩解的用途。進(jìn)一步提供了用于治療處于美尼爾氏癥(Μ?η--re’ sdisease)或類(lèi)似疾病和病癥的風(fēng)險(xiǎn)或患有美尼爾氏癥或類(lèi)似疾病和病癥的受試者的方法和試劑盒。
[0006]發(fā)明背景
[0007]人耳由3個(gè)主要結(jié)構(gòu)組件組成:外耳、中耳和內(nèi)耳，一起起到將聲波轉(zhuǎn)換為神經(jīng)沖動(dòng)的作用，神經(jīng)沖動(dòng)傳送到大腦，在大腦內(nèi)將神經(jīng)沖動(dòng)感知為聲音。內(nèi)耳也幫助維持平衡。
[0008]中耳和內(nèi)耳的解剖對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言眾所周知(見(jiàn)，例如，Atlasof Sensory Organs:Functional and Clinical Analysis,Andrs CsiIlag，HumanaPress (2005)，第1_82頁(yè)，通過(guò)引用并入本文)。簡(jiǎn)言之，中耳由鼓膜和含有3個(gè)稱(chēng)為聽(tīng)小骨的小骨頭的小充氣室組成，聽(tīng)小骨連接鼓膜與內(nèi)耳。
[0009]內(nèi)耳(迷路)是由聽(tīng)覺(jué)器官耳蝸和平衡器官前庭系統(tǒng)組成的復(fù)雜結(jié)構(gòu)。前庭系統(tǒng)由決定位置感覺(jué)的球囊和橢圓囊及幫助維持平衡的半規(guī)管組成。
[0010]耳蝸收容部分由約20，000個(gè)稱(chēng)為“內(nèi)耳毛細(xì)胞”或“毛細(xì)胞”的特化感覺(jué)細(xì)胞組成的Corti器官。這些細(xì)胞具有延伸到耳蝸流體中的小發(fā)際突出部分(纖毛)。從中耳內(nèi)的聽(tīng)小骨發(fā)射到內(nèi)耳中的卵圓窗的聲振動(dòng)引起流體和纖毛振動(dòng)。耳蝸不同部分的毛細(xì)胞響應(yīng)于不同聲頻振動(dòng)并且將振動(dòng)轉(zhuǎn)換為神經(jīng)沖動(dòng)，神經(jīng)沖動(dòng)發(fā)送到大腦進(jìn)行處理和解釋。內(nèi)耳毛細(xì)胞被內(nèi)耳支持細(xì)胞包圍。支持細(xì)胞位于內(nèi)耳中的感覺(jué)毛細(xì)胞之下，至少部分包圍并物理上支持感覺(jué)毛細(xì)胞。支持細(xì)胞的代表性實(shí)例包括內(nèi)桿(柱細(xì)胞)、外桿(柱細(xì)胞)、內(nèi)指細(xì)胞、外指細(xì)胞(Deiters)、Held細(xì)胞、Hensen細(xì)胞、Claudius細(xì)胞、Boettcher細(xì)胞、齒間細(xì)胞和聽(tīng)齒(Huschke)。
[0011]螺旋神經(jīng)節(jié)是將一種聲音表現(xiàn)從耳蝸發(fā)送到大腦的一類(lèi)神經(jīng)細(xì)胞。在耳蝸的螺旋結(jié)構(gòu)中發(fā)現(xiàn)螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的細(xì)胞體并且是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分。其樹(shù)突產(chǎn)生與毛細(xì)胞基部的突觸性接觸，并且其軸突捆在一起形成第八腦神經(jīng)(前庭蝸神經(jīng))的聽(tīng)覺(jué)部分。前庭神經(jīng)節(jié)(也稱(chēng)為史卡巴神經(jīng)節(jié)(Scarpa’s ganglion))是前庭神經(jīng)的神經(jīng)節(jié),其含有周?chē)慌c前庭感覺(jué)末梢器官的毛細(xì)胞形成突觸性接觸的雙極初級(jí)傳入神經(jīng)元的細(xì)胞體。
[0012]美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公布N0.20090162365和20110112168涉及siRNA化合物、包含SiRNA化合物的組合物及其用于治療與促凋亡基因表達(dá)相關(guān)的疾病和病癥的使用方法。
[0013]美國(guó)專(zhuān)利N0.7，825，099涉及通過(guò)抑制促凋亡基因治療聽(tīng)力損傷的方法。
[0014]美國(guó)專(zhuān)利N0.8，088, 359和美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公布N0.20120252868涉及治療聽(tīng)力喪失和幻聽(tīng)的方法。
[0015]美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公布N0.20110142917公開(kāi)了將dsRNA分子遞送到耳內(nèi)的非侵入性方法。
[0016]美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公布N0.20110034534尤其涉及靶向CAPNSl的dsRNA分子。
[0017]美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公布N0.20110229557涉及用于治療眼病的各種基因靶標(biāo)(包括CASP2)的 dsRNA 分子。
[0018]PCT 專(zhuān)利公布 N0.W02011/163436 公開(kāi)了靶向 RHOA 的 dsRNA。
[0019]耳鳴和美尼爾氏癥在全世界影響了許多人并且當(dāng)前療法在預(yù)防神經(jīng)元變性和伴隨聽(tīng)力喪失的進(jìn)展上尚未成功。保護(hù)內(nèi)耳神經(jīng)元，包括毛細(xì)胞及螺旋和前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，免受損傷和細(xì)胞死亡(例如，凋亡)，從而減少或預(yù)防聽(tīng)力喪失(例如在美尼爾氏癥患者中)的治療性治療將非?？扇?。相應(yīng)地，一方面提供了使用先前不知道具有此類(lèi)活性的dsRNA化合物，用于受試者，包括患有耳鳴或美尼爾氏癥或有類(lèi)似癥狀的人受試者的耳內(nèi)神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)的方法。
[0020]發(fā)明概述
[0021]本發(fā)明涉及為受試者耳內(nèi)的神經(jīng)元，例如螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞提供神經(jīng)保護(hù)的方法和試劑盒。一方面，本文公開(kāi)了一種雙鏈RNA(dsRNA)化合物，其下調(diào)編碼具有 SEQ ID NO: 1-3,SEQ ID NO:4,SEQ ID N0:5_6 或 SEQ ID NO:7 中任一個(gè)列出的序列的mRNA的CASP2基因、N0X3基因、CAPNSl基因或RHOA基因的表達(dá)，用于有需要的受試者耳內(nèi)神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)。在各個(gè)方面提供了為耳內(nèi)神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的方法，所述方法包括向所述受試者的耳部施用治療有效量的下調(diào)CASP2基因、N0X3基因、CAPNSl基因或RHOA基因的表達(dá)的雙鏈RNA (dsRNA)分子化合物，從而為所述受試者耳內(nèi)的神經(jīng)細(xì)胞提供神經(jīng)保護(hù)。在一些實(shí)施方案中，所述神經(jīng)元為神經(jīng)節(jié)。在一些實(shí)施方案中，所述神經(jīng)元包含在神經(jīng)節(jié)內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述神經(jīng)元包含螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和/或前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，CASP2基因編碼具有SEQ ID NO: 1_3中任一個(gè)列出的序列的mRNA。在一些實(shí)施方案中，N0X3基因編碼具有SEQ ID N0:4中列出的序列的mRNA。在一些實(shí)施方案中，CAPNSl基因編碼具有SEQ ID NO:5_6中任一個(gè)列出的序列的mRNA。在一些實(shí)施方案中，RHOA基因編碼具有SEQ ID NO: 7中列出的序列的mRNA。在一些實(shí)施方案中，CASP2為優(yōu)選靶基因并且在優(yōu)選實(shí)施方案中dsRNA分子化合物包含具有SEQ ID N0:8中列出的核苷酸序列的有義鏈和具有SEQ ID N0:9中列出的核苷酸序列的反義鏈。在一些實(shí)施方案中神經(jīng)保護(hù)包括減少、預(yù)防或降低神經(jīng)元細(xì)胞死亡，優(yōu)選凋亡性細(xì)胞死亡。根據(jù)一些實(shí)施方案，神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥、局部 缺血、物理/機(jī)械創(chuàng)傷、對(duì)化學(xué)試劑或傳染物的暴露、免疫反應(yīng)或營(yíng)養(yǎng)失衡中的一項(xiàng)或多項(xiàng)相關(guān)。在一些實(shí)施方案中神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與局部缺血相關(guān)。在一些實(shí)施方案中神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病狀相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，所述疾病為遺傳性疾病或病癥。在各個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病或病狀選自與聽(tīng)覺(jué)器官病理異常相關(guān)的病癥和與前庭器官病理異常相關(guān)的病癥。在一些實(shí)施方案中，聽(tīng)覺(jué)器官為Corti器官。前庭神經(jīng)節(jié)是第八腦神經(jīng)前庭部分的感覺(jué)神經(jīng)節(jié)，位于內(nèi)耳道外側(cè)端的上部。在一些實(shí)施方案中，前庭器官選自橢圓囊、球囊、內(nèi)耳道和壺腹。
[0022]在一些實(shí)施方案中，所述受試者患有或處于發(fā)展一種或多種疾病或病狀或其選自陣發(fā)性眩暈、聽(tīng)力喪失、耳鳴和耳脹的癥狀的風(fēng)險(xiǎn)。在某些實(shí)施方案中，所述受試者患有或易于發(fā)展美尼爾氏癥。
[0023]在一些實(shí)施方案中，本文提供了一種治療患有美尼爾氏癥的受試者的方法，包括向所述受試者施用治療有效量的下調(diào)CASP2、N0X3、RHOA或CAPNSl基因的表達(dá)的dsRNA化合物，從而治療所述受試者。
[0024]在一些實(shí)施方案中，所述方法包括減弱患有美尼爾氏癥的受試者中美尼爾氏癥的癥狀，包括向所述受試者施用治療有效量的下調(diào)CASP2、N0X3、RHOA或CAPNSl基因的表達(dá)的dsRNA化合物，從而減弱美尼爾氏癥的癥狀。在一些實(shí)施方案中，所述癥狀包括耳鳴、進(jìn)行性聽(tīng)力喪失、ELH、眩暈、惡心或耳脹中的一種或多種。在一些實(shí)施方案中所述方法包括緩解美尼爾氏癥的一種或多種癥狀。在一些實(shí)施方案中所述方法提供了聽(tīng)力的部分恢復(fù)或完全恢復(fù)。
[0025]在一些實(shí)施方案中所述方法和試劑盒包括在受試者中挽救螺旋神經(jīng)節(jié)和/或前庭神經(jīng)節(jié)免于凋亡。在一些實(shí)施方案中所述方法包括促進(jìn)螺旋神經(jīng)節(jié)和/或前庭神經(jīng)節(jié)的存活。在一些實(shí)施方案中所述方法包括預(yù)防受試者中螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和或前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡性細(xì)胞死亡。在一些實(shí)施方案中所述方法包括提供受試者中螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和或前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)。在一些實(shí)施方案中所述方法包括恢復(fù)受試者中的耳蝸功能。耳蝸功能包括部分或完全恢復(fù)聽(tīng)力。在一些實(shí)施方案中所述方法包括恢復(fù)受試者中的前庭功能。前庭功能包括部分或完全恢復(fù)平衡。
[0026]進(jìn)一步提供了治療患有美尼爾氏癥的受試者的試劑盒，其包含治療有效量的下調(diào)CASP2、N0X3、RH0A或CAPNSl基因的表達(dá)的dsRNA化合物。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒進(jìn)一步包括向受試者施用dsRNA化合物的裝置；并且任選包括使用說(shuō)明。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒包含下調(diào)CASP2基因的表達(dá)的dsRNA化合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，CASP2基因編碼SEQ ID NO: 1-3中任一個(gè)列出的mRNA。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述試劑盒提供了包含具有SEQ ID N0:8中列出的核苷酸序列的有義鏈和具有SEQ ID N0:9中列出的核苷酸序列的反義鏈的dsRNA化合物。
[0027]在一些實(shí)施方案中，所述方法和試劑盒牽涉使用dsRNA化合物(例如，短干擾核酸(siNA)、短干擾RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA))，其結(jié)合編碼選自SEQ IDNO: 1-3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5-6 和 SEQ ID NO: 7 分別例示的 CASP2、N0X3、CAPNSl 和RHOA的人靶基因的核苷酸序列(例如mRNA序列)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述方法和試劑盒牽涉使用結(jié)合SEQ ID 1-3中任一個(gè)列出的人CASP2 mRNA的dsRNA化合物。
[0028]在優(yōu)選實(shí)施方案中，CASP2 dsRNA化合物包含有義鏈和反義鏈，其中所述反義鏈包含核苷酸序列(5’ >3’ ) AGGAGUUCCACAUUCUGGC (SEQ ID NO: 9)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，dsRNA化合物具有結(jié)構(gòu):
[0029]5' z" -GCCAGAAUGUGGAACUCCU-Z' 3'(有義鏈，SEQ ID NO:8)
[0030]3' z-CGGUCUUACACCUUGAGGA 5'(反義鏈，SEQ ID NO:9)[0031]其中每個(gè)A、C、U和G均為未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、經(jīng)修飾的核糖核苷酸或非常規(guī)部分并且每個(gè)連續(xù)核糖核苷酸或非常規(guī)部分通過(guò)共價(jià)鍵與下一個(gè)核糖核苷酸或非常規(guī)部分連接；
[0032]其中Z和Z’的每一個(gè)獨(dú)立地存在或不存在，但是如果存在，獨(dú)立地包括在其所在鏈的3’端共價(jià)連接的1-5個(gè)連續(xù)核苷酸或非核苷酸部分或其組合；并且
[0033]其中z”可能存在或不存在，但是如果存在，為在所述有義鏈的5’端共價(jià)連接的加帽部分。在一些實(shí)施方案中，dsRNA化合物包含未經(jīng)修飾和經(jīng)修飾的核糖核苷酸。在優(yōu)選實(shí)施方案中，dsRNA化合物包含未經(jīng)修飾和經(jīng)修飾的核糖核苷酸至少一個(gè)非常規(guī)部分。
[0034]在一些實(shí)施方案中，dsRNA進(jìn)一步包含至少一個(gè)非常規(guī)部分。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，CASP2dsRNA具有結(jié)構(gòu):
[0035]5' z" -GCCAGAAUGUGGAACUCCU-Z' 3'(有義鏈，SEQ ID NO:24)
[0036]3' z-CGGUCUUACACCUUGAGGA 5'(反義鏈，SEQ ID NO:25)
[0037]其中每個(gè)A、C、U和G均為未經(jīng)修飾或經(jīng)修飾的核糖核苷酸或非常規(guī)部分并且每個(gè)連續(xù)核糖核苷酸或非常規(guī)部分通過(guò)磷酸二酯鍵與下一個(gè)核糖核苷酸或非常規(guī)部分連接；其中所述有義鏈包含，從5’端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17和19的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、位置18的L-脫氧胞苷；其中所述反義鏈包含至少五
(5)個(gè)交替的未經(jīng)修飾和經(jīng)2’ -O-甲基糖修飾的核糖核苷酸；并且其中z”、Z和V任選不存在。在一些實(shí)施方案中，反義鏈包含位置(5’ >3’)1、3、5、79、11、13、15、17和19存在的經(jīng)2’ -O-甲基糖修飾的核糖核苷酸和位置2、4、6、8、10、12、14、16和18存在的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸；優(yōu)選地，反義鏈包含位置(5’ >3’)2、4、6、8、11、13、15、17和19上經(jīng)2’ O-甲基糖修飾的核糖核苷酸。
[0038]在優(yōu)選實(shí)施方案中，dsRNA化合物具有結(jié)構(gòu):
[0039]5' iB-GCCAGAAUGUGGAACUCCU-Z' 3'(有義鏈，SEQ ID NO:26)
[0040]3' Z-CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反義鏈，SEQ ID NO:27)
[0041]其中每個(gè)A、C、U和G均為未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、經(jīng)修飾的核糖核苷酸或非常規(guī)部分并且每個(gè)連續(xù)核糖核苷酸或非常規(guī)部分通過(guò)共價(jià)鍵與下一個(gè)核糖核苷酸或非常規(guī)部分連接；
[0042]其中每個(gè)Z和Z’均不存在，其中所述有義鏈包含，從5’端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、位置18的L-脫
氧胞苷并且z”存在且包含反向脫氧脫堿基部分；并且
[0043]其中所述反義鏈包含，從5’端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置2、4、6、8、11、13、15、17和19的每一處的2’0_甲基糖修飾的核糖核苷酸和在位置1、3、5、7、9、10、12、14、16和18的每一處的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸。這種分子也稱(chēng)為1007。
[0044]dsRNA化合物通過(guò)常規(guī)施用途徑的任一種施用，包括牽涉侵入性和非侵入性遞送方法。應(yīng)該注意的是，dsRNA化合物可作為化合物本身或作為藥學(xué)上可接受的鹽施用或可單獨(dú)施用或作為活性成分與藥學(xué)上 可接受的載體、溶劑、稀釋劑、賦形劑、佐劑和媒介物組合施用。
[0045]dsRNA化合物優(yōu)選經(jīng)鼓室，包括局部或經(jīng)注射施用?？芍苽湟后w形式進(jìn)行施用。液體組合物包括有或無(wú)有機(jī)共溶劑的水溶液、水或油懸浮液、具有食用油的乳液以及類(lèi)似藥物媒介物。在一個(gè)實(shí)施方案中，施用包括局部施用，尤其是向耳道的局部施用、向鼓膜的局部施用或其組合，從而使dsRNA化合物通過(guò)鼓膜。在一些實(shí)施方案中，將本申請(qǐng)的化合物作為滴耳劑施加鼓膜上。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，通過(guò)經(jīng)鼓室注射或通過(guò)滴耳劑施用dsRNA化合物。
[0046]在各個(gè)實(shí)施方案中，特別是局部施用本發(fā)明的藥物組合物的實(shí)施方案中，藥物組合物進(jìn)一步包含也稱(chēng)為促滲劑的滲透性促進(jìn)劑。
[0047]在各個(gè)實(shí)施方案中，促滲劑選自促進(jìn)治療性寡核苷酸滲透過(guò)患有美尼爾氏癥的受試者耳內(nèi)的鼓膜的任何化合物或兩種或更多種化合物的任何組合。在某些實(shí)施方案中，滲透性促進(jìn)劑為多元醇。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸與多元醇混合。在一些實(shí)施方案中，多元醇選自甘油、丙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、木糖醇、麥芽糖醇及其組合。
[0048]根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，多元醇為甘油。在各個(gè)實(shí)施方案中，按藥物組合物的體積計(jì)，甘油存在的最終濃度為約0.1 %至約35%、約I %至約30%、約5%至約25%，優(yōu)選約10%至約20%。
[0049]在一些實(shí)施方案中，當(dāng)受試者的頭部斜向一側(cè)而治療的耳部朝上時(shí)，向耳道施加藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，對(duì)于液體而言使用容器，例如使用(例如)10-100μ I/滴的滴管或管芯向耳部施加藥物組合物。
[0050]本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了以上任一組合物在制備用于治療患有美尼爾氏癥的受試者的藥劑中的用途。進(jìn)一步提供了抑制CASP2的表達(dá)，為有需要的受試者耳內(nèi)的神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的化合物。
[0051]現(xiàn)將描述的方法、材料和實(shí)施例僅為說(shuō)明性而非旨在限制；與本文所述材料和方法類(lèi)似或等效的材料和方法可用于本發(fā)明的實(shí)踐或試驗(yàn)中。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)從下列發(fā)明詳述和權(quán)利要求中將顯而易見(jiàn)。
[0052]本公開(kāi)旨在包括在本文各個(gè)實(shí)施方案中公開(kāi)的特征組合的任何和所有改編或變化。雖然本文已經(jīng)說(shuō)明和描述了特定實(shí)施方案，但是應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明涵蓋這些實(shí)施方案的特征的任何排列以達(dá)到相同目的。查看本說(shuō)明書(shū)后，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，以上形成本文未特別描述的實(shí)施方案的特征的組合將顯而易見(jiàn)。
[0053]附圖簡(jiǎn)述
[0054]圖1示出了野生型(左圖)和Phexhyp_Duk突變(右圖)內(nèi)耳組織的組織切片。箭頭示出了內(nèi)淋巴積水(ELH)。在左下圖中，G指螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元，而在右下圖中M指突變螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元，其中在Phexhyp_Duk突變小鼠中的更少(比較G與M)。Phexhyp_Duk突變小鼠自發(fā)發(fā)展內(nèi)淋巴積水并因此呈現(xiàn)平衡問(wèn)題和聽(tīng)力喪失表現(xiàn)型。主要缺陷之一是因細(xì)胞死亡或凋亡引起內(nèi)耳神經(jīng)節(jié)(前庭和螺旋)中的神經(jīng)元損失。
[0055]圖2示出了通過(guò)滴耳劑遞送對(duì)siRNA安全性評(píng)估的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)?！癙x”指產(chǎn)后X天。
[0056]圖3為柱狀圖，顯示用dsRNA或媒介物滴耳劑對(duì)內(nèi)耳的每周治療不影響野生型小鼠的聽(tīng)力功能。
[0057]圖4A和4B示出了測(cè)試試驗(yàn)分子在鼠美尼爾氏癥模型中保護(hù)聽(tīng)力功能的功效的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。(P15、P29、P90-產(chǎn)后天數(shù)；在P15之前遞送siRNA不可能，因?yàn)槎ǖ狸P(guān)閉；P29_30之前的ABR測(cè)量在技術(shù)上不可能)。
[0058] 圖5A-?示出了對(duì)陰性對(duì)照(經(jīng)媒介物治療或經(jīng)SiEGFP治療)或經(jīng)siRNA治療的Phexhyp-Duk/Y小鼠的聽(tīng)力功能(ABR)的時(shí)程分析。圖上的數(shù)據(jù)示出在指定試驗(yàn)聲頻(kHz)下的聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)腦干反應(yīng)(ABR)閾值(db)。圖5E為柱狀圖，顯示與經(jīng)媒介物治療和經(jīng)siEGFP治療的動(dòng)物相比，在P90時(shí)經(jīng)siRNA治療的動(dòng)物體內(nèi)ABR相對(duì)提高。
[0059]圖6A-6F示出了 PhexhylrfluVY小鼠內(nèi)耳神經(jīng)元的組織學(xué)評(píng)估和siCASP2(1007)對(duì)螺旋和前庭神經(jīng)節(jié)提供的顯著神經(jīng)保護(hù)。圖6A和6B中的箭頭示出了螺旋神經(jīng)節(jié)(SG)。圖6A和6B示出了經(jīng)媒介物治療的Phexhyp_Duk/Y小鼠SG的病癥和死亡并且圖6B和6D示出了對(duì)經(jīng)siCASP2治療的Phexhyp_Duk/Y小鼠SG的挽救。圖6E和6F分別示出了經(jīng)媒介物治療的phexhyp-Duk/Y小鼠和經(jīng)siCASP2治療的pheXhW_Duk/Y小鼠中前庭神經(jīng)節(jié)的單獨(dú)組織切片。
[0060]圖7A-7D示出了 PheXhyp_Duk/Y小鼠內(nèi)耳神經(jīng)元的組織學(xué)評(píng)估和與經(jīng)媒介物治療和經(jīng) siEGFP 治療的動(dòng)物(圖 7A)相比，siCAPNSI (圖 7B)、siN0X3(圖 7C)和 siRH0A(圖 7D)對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)提供的顯著神經(jīng)保護(hù)。
[0061]圖8A-8D示出了 PheXhyp_Duk/Y小鼠內(nèi)耳神經(jīng)元的組織學(xué)評(píng)估和與經(jīng)媒介物治療和經(jīng) siEGFP 治療的動(dòng)物(圖 8A)相比，siCAPNSI (圖 8B)、siN0X3(圖 8C)和 siRH0A(圖 8D)對(duì)前庭神經(jīng)節(jié)提供的顯著神經(jīng)保護(hù)。
[0062]圖9A和9B示出了在P90時(shí)對(duì)經(jīng)siCASP2治療的耳內(nèi)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)。
[0063]發(fā)明詳述
[0064]本申請(qǐng)?zhí)峁┝斯押塑账岱肿印押塑账岱肿拥慕M合物、其使用方法和治療美尼爾氏癥和改善一種或多種伴隨癥狀，包括波動(dòng)性聽(tīng)力喪失、陣發(fā)性眩暈和/或耳鳴的試劑盒。本發(fā)明部分基于發(fā)現(xiàn)對(duì)選自半胱天冬酶2 (CASP2)、NADPH氧化酶3 (N0X3)、鈣蛋白酶SI (CAPNSl)和Ras同源基因家族成員A(RHOA)中的任一靶基因的抑制。
[0065]一方面，本文提供了一種對(duì)有需要的受試者的螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和/或前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞提供神經(jīng)保護(hù)的方法，包括向受試者施用治療有效量的抑制CASP2表達(dá)的寡核苷酸分子，從而在螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和/或前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中提供神經(jīng)保護(hù)。另一方面，本文提供了一種治療患有美尼爾氏癥的受試者的方法，包括向受試者施用抑制CASP2表達(dá)的寡核苷酸分子，從而治療患者。美尼爾氏癥，也稱(chēng)為特發(fā)性?xún)?nèi)淋巴積水(ELH)，是導(dǎo)致眩暈和耳鳴的內(nèi)耳病癥，并且最終神經(jīng)元損害導(dǎo)致聽(tīng)力喪失。美尼爾氏癥的確切原因未知，但是認(rèn)為潛在機(jī)制是歸因于內(nèi)淋巴積累的膜迷路變形。內(nèi)淋巴主要由耳蝸中的血管紋產(chǎn)生并且也由半月板和前庭迷路中的暗細(xì)胞產(chǎn)生(Saj jadi H, Paparella MM.M6ni6re’s disease.Lancet.372(9636):406-14)。如果內(nèi)淋巴從內(nèi)淋巴流動(dòng)空間通過(guò)前庭導(dǎo)水管流到內(nèi)淋巴囊受阻，則可發(fā)生內(nèi)淋巴積水。美尼爾氏癥可影響受試者的一只或兩只耳朵。與美尼爾氏癥相關(guān)的主要病態(tài)是眩暈虛弱性和進(jìn)行性聽(tīng)力喪失。
[0066]在各個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括減輕受試者的聽(tīng)力喪失。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括預(yù)防患有美尼爾氏癥的受試者的進(jìn)行性聽(tīng)力喪失。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括保護(hù)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞免于細(xì)胞死亡。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括保護(hù)前庭神經(jīng)節(jié)細(xì)胞免于細(xì)胞死亡。
[0067]在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，受試者為哺乳動(dòng)物,優(yōu)選為人受試者。
[0068]在各個(gè)實(shí)施方案中，下調(diào)CASP2的分子為半胱天冬酶2抑制劑，例如雙鏈RNA寡核苷酸，任選siNA，更優(yōu)選在下文表A中詳述的dsRNA分子并且尤其是，包含下列反義序列5’ AGGAGUUCCACAUUCUGGC (也稱(chēng)為CASP2_4)的siNA，并且使用這種寡核苷酸制備用于治療本文公開(kāi)的病狀和病癥的藥劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述病癥牽涉螺旋神經(jīng)節(jié)死亡或前庭神經(jīng)節(jié)死亡。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞死亡包括凋亡性細(xì)胞死亡。
[0069]表A:用于本文公開(kāi)的方法中的半胱天冬酶2寡核苷酸序列的非限制性實(shí)例
【權(quán)利要求】
1.一種雙鏈RNA(dsRNA)化合物，其下調(diào)編碼具有SEQ ID NO: 1_3中任一個(gè)列出的序列的mRNA的CASP2基因的表達(dá)，用于有需要的受試者耳內(nèi)神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)。
2.一種為有需要的受試者的耳內(nèi)神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的方法，其包括向所述受試者的耳部施用治療有效量的下調(diào)CASP2基因的表達(dá)的雙鏈RNA (dsRNA)化合物，其中所述CASP2基因編碼具有SEQ ID NO: 1-3中任一個(gè)列出的序列的mRNA，從而為所述受試者耳內(nèi)的神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途或方法，其中所述dsRNA化合物包含具有SEQIDN0:8中列出的核苷酸序列的有義鏈和具有SEQ ID N0:9中列出的核苷酸序列的反義鏈。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元是神經(jīng)節(jié)或包含在神經(jīng)節(jié)內(nèi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)節(jié)為螺旋神經(jīng)節(jié)或前庭神經(jīng)節(jié)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括保護(hù)所述神經(jīng)元免于細(xì)胞死亡。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡包括凋亡性細(xì)胞死亡。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥、局部缺血、物理/機(jī)械創(chuàng)傷、化學(xué)試劑、傳染物、免疫反應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)失衡中的一項(xiàng)或多項(xiàng)相關(guān)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥相關(guān)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途或方法，其中所述受試者患有或處于發(fā)展與聽(tīng)覺(jué)器官或前庭器官病理異常相關(guān)的一種或多種疾病或病狀的風(fēng)險(xiǎn)。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途或方法，其中所述疾病或病狀與選自陣發(fā)性眩暈、聽(tīng)力喪失、耳鳴和耳脹的癥狀相關(guān)。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途或方法，其中所述受試者患有或易患美尼爾氏癥。
13.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括恢復(fù)耳蝸功能和或前庭功能。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述dsRNA化合物下調(diào)所述受試者內(nèi)耳中細(xì)胞內(nèi)的CASP2表達(dá)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述dsRNA化合物具有結(jié)構(gòu): 5’z" -GCCAGAAUGUGGAACUCCU-Z’3’(有義鏈，SEQ ID NO:24) 3’Z-CG⑶CUUACACCUUGAGGA5’(反義鏈，SEQ ID NO:25) 其中每個(gè)A、C、U和G均為未經(jīng)修飾或經(jīng)修飾的核糖核苷酸或非常規(guī)部分并且每個(gè)連續(xù)核糖核苷酸或非常規(guī)部分通過(guò)磷酸二酯鍵與下一個(gè)核糖核苷酸或非常規(guī)部分連接；其中所述有義鏈包含，從5，端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、位置18的L-脫氧胞苷；其中所述反義鏈包含至少5個(gè)交替的未經(jīng)修飾和經(jīng)2’ -O-甲基糖修飾的核糖核苷酸；并且其中z”、Z和V是任選的。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的用途或方法，其中所述共價(jià)鍵為磷酸二酯鍵；其中每個(gè)Z和Z’均不存在，其中所述有義鏈包含，從5’端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、。11、12、13、14、15、16、17和19的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、位置18的L-脫氧胞苷(在SEQ IDNO:24中列出);并且其中所述反義鏈包含，從5’端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置2、4、6、8、11、13、15、17和19的每一處的2’ O-甲基糖修飾的核糖核苷酸和在位置1、3、5、7、9、10、12、14、16和18的每一處的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸(在SEQ ID NO:25中列出)。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途或方法，其中z”與所述有義鏈(SEQID NO: 26)的5端共價(jià)連接并且包含反向脫氧脫堿基部分。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中配制所述dsRNA分子用于經(jīng)鼓室施用。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的用途或方法，其中將所述dsRNA分子配制成滴耳劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述受試者為哺乳動(dòng)物。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的用途或方法，其中所述受試者為人。
22.—種雙鏈RNA(dsRNA)化合物，其下調(diào)編碼具有SEQ ID NO: 5_6中任一個(gè)列出的序列的mRNA的CAPNSl基因的表達(dá)，用于有需要的受試者耳內(nèi)神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)。
23.一種為有需要的受試者的耳內(nèi)神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的下調(diào)CAPNSl基因的表達(dá)的雙鏈RNA (dsRNA)分子，其中所述CAPNSl基因編碼具有SEQ ID NO: 5-6中任一個(gè)列出的序列的mRNA,從而為所述受試者耳內(nèi)的神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元是神經(jīng)節(jié)或包含在神經(jīng)節(jié)內(nèi)。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)節(jié)為螺旋神經(jīng)節(jié)或前庭神經(jīng)節(jié)。
26.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括保護(hù)所述神經(jīng)元免于細(xì)胞死亡。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡包括凋亡性細(xì)胞死亡。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或27所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥、局部缺血、物理/機(jī)械創(chuàng)傷、化學(xué)試劑、傳染物、免疫反應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)失衡中的一項(xiàng)或多項(xiàng)相關(guān)。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥相關(guān)。
30.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的用途或方法，其中所述受試者患有或處于發(fā)展與聽(tīng)覺(jué)器官或前庭器官病理異常相關(guān)的一種或多種疾病或病狀的風(fēng)險(xiǎn)。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的用途或方法，其中所述疾病或病狀與選自陣發(fā)性眩暈、聽(tīng)力喪失、耳鳴和耳脹的癥狀相關(guān)。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的用途或方法，其中所述受試者患有或易患美尼爾氏癥。
33.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括部分或完全恢復(fù)耳蝸功能和/或前庭功能。
34.根據(jù)權(quán)利要求22-33中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述dsRNA化合物下調(diào)所述受試者內(nèi)耳中細(xì)胞內(nèi)的CAPNSl表達(dá)。
35.一種雙鏈RNA (dsRNA)化合物，其下調(diào)編碼具有SEQ ID NO: 4中列出的序列的mRNA的N0X3基因的表達(dá)，用于有需要的受試者耳內(nèi)神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)。
36.一種為有需要的受試者的耳內(nèi)神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的下調(diào)N0X3基因的表達(dá)的雙鏈RNA (dsRNA)分子，其中所述N0X3基因編碼具有SEQ ID N0:4中列出的序列的mRNA,從而為所述受試者耳內(nèi)的神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)。
37.根據(jù)權(quán)利要求35或36所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元是神經(jīng)節(jié)或包含在神經(jīng)節(jié)內(nèi)。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)節(jié)為螺旋神經(jīng)節(jié)或前庭神經(jīng)節(jié)。
39.根據(jù)權(quán)利要求35-38中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括保護(hù)所述神經(jīng)元免于細(xì)胞死亡。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡包括凋亡性細(xì)胞死亡。
41.根據(jù)權(quán)利要求39或40所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥、局部缺血、物理/機(jī)械創(chuàng)傷、化學(xué)試劑、傳染物、免疫反應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)失衡中的一項(xiàng)或多項(xiàng)相關(guān)。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥相關(guān)。
43.根據(jù)權(quán)利要求35或36所述的用途或方法，其中所述受試者患有或處于發(fā)展與聽(tīng)覺(jué)器官或前庭器官病理異常相關(guān)的一種或多種疾病或病狀的風(fēng)險(xiǎn)。
44.根據(jù)權(quán)利要求42所述的用途或方法，其中所述疾病或病狀與選自陣發(fā)性眩暈、聽(tīng)力喪失、耳鳴和耳脹的癥狀相關(guān)。
45.根據(jù)權(quán)利要求43所述的用途或方法，其中所述受試者患有或易患美尼爾氏癥。
46.根據(jù)權(quán)利要求35或36所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括部分或完全恢復(fù)耳蝸功能和/或前庭功能。
47.根據(jù)權(quán)利要求35-46中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述dsRNA化合物下調(diào)所述受試者內(nèi)耳中細(xì)胞內(nèi)的NOX3表達(dá)。
48.一種雙鏈RNA (dsRNA)化合物，其下調(diào)編碼具有SEQ ID NO: 7中列出的序列的mRNA的RHOA基因的表達(dá)，用于有需要的受試者耳內(nèi)神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)。
49.一種為有需要的受試者的耳內(nèi)神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的下調(diào)RHOA基因的表達(dá)的雙鏈RNA (dsRNA)分子，其中所述RHOA基因編碼具有SEQ ID N0:7中列出的序列的mRNA，從而為所述受試者耳內(nèi)的神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)。
50.根據(jù)權(quán)利要求48或49所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元是神經(jīng)節(jié)或包含在神經(jīng)節(jié)內(nèi)。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)節(jié)為螺旋神經(jīng)節(jié)或前庭神經(jīng)節(jié)。
52.根據(jù)權(quán)利要求48-51中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括保護(hù)所述神經(jīng)元免于細(xì)胞死亡。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡包括凋亡性細(xì)胞死亡。
54.根據(jù)權(quán)利要求52或53所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥、局部缺血、物理/機(jī)械創(chuàng)傷、化學(xué)試劑、傳染物、免疫反應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)失衡中的一項(xiàng)或多項(xiàng)相關(guān)。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)元的細(xì)胞死亡與疾病或病癥相關(guān)。
56.根據(jù)權(quán)利要求48或49所述的用途或方法，其中所述受試者患有或處于發(fā)展與聽(tīng)覺(jué)器官或前庭器官病理異常相關(guān)的一種或多種疾病或病狀的風(fēng)險(xiǎn)。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的用途或方法，其中所述疾病或病狀與選自陣發(fā)性眩暈、聽(tīng)力喪失、耳鳴和耳脹的癥狀相關(guān)。
58.根據(jù)權(quán)利要求56所述的用途或方法，其中所述受試者患有或易患美尼爾氏癥。
59.根據(jù)權(quán)利要求48或49所述的用途或方法，其中所述神經(jīng)保護(hù)包括部分或完全恢復(fù)耳蝸功能和/或前庭功能。
60.根據(jù)權(quán)利要求48-59中任一項(xiàng)所述的用途或方法，其中所述dsRNA化合物下調(diào)所述受試者內(nèi)耳中細(xì)胞內(nèi)的RHOA表達(dá)。
61.一種為有需要的受試者的耳內(nèi)神經(jīng)元提供神經(jīng)保護(hù)的試劑盒，其包含下調(diào)受試者體內(nèi)CASP2、N0X3、CAPNSl或RHOA的表達(dá)的dsRNA化合物。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的試劑盒，其中所述dsRNA化合物下調(diào)CASP2的表達(dá)。
63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的試劑盒，其中所述dsRNA化合物下調(diào)N0X3的表達(dá)。
64.根據(jù)權(quán)利要求61所述的試劑盒，其中所述dsRNA化合物下調(diào)CAPNSl的表達(dá)。
65.根據(jù)權(quán)利要求61所述的試劑盒，其中所述dsRNA化合物下調(diào)RHOA的表達(dá)。
66.根據(jù)權(quán)利要求61-65中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述神經(jīng)元是神經(jīng)節(jié)或包含在神經(jīng)節(jié)內(nèi)。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的試劑盒，其中所述神經(jīng)節(jié)為螺旋神經(jīng)節(jié)或前庭神經(jīng)節(jié)。
68.根據(jù)權(quán)利要求61、62、66或67中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述dsRNA具有雙鏈結(jié)構(gòu): 5' z" -GCCAGAAUGUGGAACUCCU-Z' 3'(有義鏈，SEQ ID NO:8) 3' z-CGGUCUUACACCUUGAGGA 5'(反義鏈，SEQ ID NO:9) 其中每個(gè)A、C、U和G均為未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、經(jīng)修飾的核糖核苷酸或非常規(guī)部分并且每個(gè)連續(xù)核糖核苷酸或非常規(guī)部分通過(guò)共價(jià)鍵與下一個(gè)核糖核苷酸或非常規(guī)部分連接; 其中Z和V的每一個(gè)獨(dú)立地存在或不存在，但是如果存在，獨(dú)立地包括在其所在鏈的.3’端共價(jià)連接的1-5個(gè)連續(xù)核苷酸或非核苷酸部分或其組合；并且 其中z”可能存在或不存在，但是如果存在，為在所述有義鏈的5’端共價(jià)連接的加帽部分。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的試劑盒，其中所述共價(jià)鍵為磷酸二酯鍵；其中每個(gè)Z和V均不存在，其中所述有義鏈包含，從5’端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、.13、14、15、16、17和19的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸、位置18的L-脫氧胞苷、與5’端共價(jià)連接的反向脫氧脫堿基部分(在SEQ ID NO:26中列出)；并且其中所述反義鏈包含，從5’端開(kāi)始計(jì)數(shù)，在位置2、4、6、8、11、13、15、17和19的每一處的2’ O-甲基糖修飾的核糖核苷酸和在位置1、3、5、7、9、10、12、14、16和18的每一處的未經(jīng)修飾的核糖核苷酸(在SEQ ID NO: 27中列出)。
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的試劑盒，其中z”存在并且包含反向脫氧脫堿基部分。
71.根據(jù)權(quán)利要求61-70中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其進(jìn)一步包含用于向所述受試者經(jīng)鼓室施用所述dsRNA化合物的裝置。
【文檔編號(hào)】A61K31/713GK103917647SQ201280054213
【公開(kāi)日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2012年11月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月3日
【發(fā)明者】埃琳娜·費(fèi)因斯坦 申請(qǐng)人:夸克制藥公司