生物活性肽復(fù)合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及具有免疫調(diào)節(jié)性和抗病毒活性的蛋白質(zhì)和生物活性肽。本發(fā)明的肽復(fù)合物具有三維結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)式如下：其中，X1不存在或者含有至少1個(gè)氨基酸；R1和R2–肽鏈，含有與過(guò)渡金屬離子相互作用的His或者Cys氨基酸殘基，其中R1含有至多5個(gè)氨基酸殘基或者不存在；R2含有至多3個(gè)氨基酸或者不存在。富含組氨酸的肽復(fù)合物，尤其是具有Zn離子的麗蠅抗病毒肽家族肽,將使制造具有靶向作用機(jī)制的藥物并且根據(jù)對(duì)藥物靶向結(jié)構(gòu)的理解設(shè)計(jì)它們變成可能。
【專利說(shuō)明】生物活性肽復(fù)合物
[0001] 本發(fā)明涉及具有免疫調(diào)節(jié)活性和抗病毒活性的蛋白質(zhì)和生物活性肽。
[0002] 基于肽，多肽和蛋白質(zhì)的化合物在醫(yī)學(xué)上被用作抗病毒藥物是已知的。在類型I 干擾素誘導(dǎo)劑（IFI)中，它們以高分子量化合物，低分子量的誘導(dǎo)劑著稱[F.I.Yersh0v，0. I. Koselev.Interferonsandtheirinducersfromthemoleculetothedrug-(從 分子到藥物的干擾素和它們的誘導(dǎo)物），M. :Publ.House.Geotar-Media，2005-P. 356]， [BergK. ,BoltG.,AndersenH.,OwenTC.Zinkpotentiatestheantiviralaction ofhumanIFN-alphatenfold.(鋅加強(qiáng)人類的IFN-ct的抗病毒作用十倍）J.Interferon CytokineRes，2001，Jul;21(7):471-4]。就后者，首先，應(yīng)該注意本國(guó)的藥物環(huán)形酶蛋白 (cycloferon)和美國(guó)藥物咪喹莫特。這些藥物分別指的是P丫啶酮和苯并咪挫衍生物。對(duì)于 咪喹莫特和接近的衍生物，在不同細(xì)胞中相互作用引起IFN-a的合成誘導(dǎo)的這組藥物所 利用的To11 樣類型的受體是已知的[F.I.Yershov.，0?I.Kiselev.Interferonsandtheir inducers(fromthemoleculetothedrug)干擾素和它們的誘導(dǎo)物（從分子到藥物） M. ：Publ.House.Geotar-Media, 2005. -P. 356] 〇
[0003] 低分子量肽的生物活性是眾所周知的。首先，這涉及到具有抗菌活性的動(dòng)物源肽 和植物源肽[BomanH.Peptideantibioticsandtheirroleininnateimmunity(肽 抗生素和它們?cè)谙忍烀庖咧械淖饔茫?Anu.Rev.ofImmunol.，1995,Vol. 13,p. 61-92]。 然而，已經(jīng)描述了一些具有直接抗病毒和抗腫瘤作用的肽[AkiyamaN.，Hijikata M.,KobayashiA.,YamoriT.,TsuruoT.,NatoriS.Anti-tumoreffectof N-0 -alany1-5-S-glutathionyldihydroxyphenylalanine(5-S-GAD)anovel anti-bacterialsubstancefromaninsect.AnticancerResearch(―種來(lái)自于昆蟲的新 的抗菌物質(zhì)：N-0-丙氨酰-5-S-谷胱甘肽二羥基苯丙氨酸（5-S-GAD)的抗腫瘤作用.抗 癌研究），2000,Vol. 20,p. 357-362]。
[0004]這里兩棲類動(dòng)物和昆蟲的肽占據(jù)特定的位置[BuletP.，HetruC.，Diamarcq J.,HoffmannD.Antimicrobialpeptidesininsects:structureandfunction.(昆 蟲內(nèi)的抗菌肽：結(jié)構(gòu)和功能）Devel.Comp.Immunol.，1999,Vol. 23,p. 329-344,Chinchar V.G. ,WangJ. ,MurtiG. ,CareyC.,Rolling-SmithL.Inactivationoffrogvirus3and channelcatfishvirusbyesculentin_2Pandranatuerin_2P，twoantimicrobial peptidesisolatedfromfrogskin.Virology，（從娃皮膚分離出的兩種抗菌肽可食用 肽-2P(esculentin_2P)和擾納汀肽（ranatuerin_2P)導(dǎo)致娃病毒3和斑點(diǎn)叉尾鮰病毒的 失活，.病毒學(xué)），2001，Vol. 288,p. 351-357]。
[0005] 免疫調(diào)節(jié)肽-麗蠅抗病毒肽（allofeixms)是已知的（參考專利FR2172322的專 利）。病毒性感染的治療是麗蠅抗病毒肽的主要應(yīng)用領(lǐng)域。從化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用方式考慮，麗 蠅抗病毒肽是本發(fā)明的最接近的類似物。
[0006] 應(yīng)該注意的是，專利號(hào)2172322的發(fā)明人只考慮麗蠅抗病毒肽的主要結(jié)構(gòu)的變 種，沒(méi)有重點(diǎn)考慮組氨酸殘基分布。
[0007] 而且，麗蠅抗病毒肽應(yīng)該被稱為相當(dāng)"弱"的干擾素誘導(dǎo)劑，這在與環(huán)形酶蛋白比 較它們的活性時(shí)是明顯的。
[0008] 同時(shí)，麗蠅抗病毒肽的結(jié)構(gòu)中尤為重要的是具有規(guī)則的組氨酸殘基排列和豐富的 甘氨酸殘基。例如通過(guò)金屬離子的引入可以加強(qiáng)麗蠅抗病毒肽結(jié)構(gòu)，使賦予它們?nèi)?jí)結(jié)構(gòu) 元素。
[0009] 還已知氯高鐵血紅素肽和它的具有殺病毒和抗病毒作用的藥學(xué)上可接受的鹽，它 們金屬離子，其中可使用211、（：11、？6、1111的。（參考專利？1?2296131)。然而，這種化合物指 的是第二類肽，并且不是免疫調(diào)節(jié)物。
[0010] 具有有序的三級(jí)結(jié)構(gòu)要素且具有Zn++離子和一型干擾素誘導(dǎo)劑活性的肽復(fù)合物， 在文獻(xiàn)中沒(méi)有描述。
[0011] 對(duì)具有Zn++離子的含組氨酸肽的修飾的需求是由下列原因引起：
[0012] 1、生物活性短肽具有無(wú)序的二級(jí)結(jié)構(gòu)，不可避免地減小了它們的生物活性、與其 它大分子的相互作用性、以及代謝穩(wěn)定性。
[0013] 2、肽的生物和藥理活性主要取決于向細(xì)胞運(yùn)輸?shù)男省Ｊ闺慕Y(jié)構(gòu)緊密可以 提高它們通過(guò)細(xì)胞膜的迀移效率，并且隨后提高它們的藥理活性[LengQ.，Mixson J.Modifiedbranchedpeptideswithhistidine-richtailenhanceinvitrogene transfection.(富含組氨酸的尾巴修飾的支狀肽加強(qiáng)了體外基因轉(zhuǎn)染）Nucl.Acids. Res.，2005,Vol.33,e40]。
[0014] 3、具有Zn++離子的含組氨酸肽復(fù)合物的形成導(dǎo)致肽類性質(zhì)的根本改變，使它們與 病毒和細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄激活因子的區(qū)域相同。
[0015] 本發(fā)明的目的是研制具有有序的三維結(jié)構(gòu)的肽復(fù)合物。設(shè)計(jì)的復(fù)合物與其它分子 基團(tuán)具有高結(jié)合力，并且展現(xiàn)出較寬范圍的藥理作用，包括類型IIFN誘導(dǎo)和在細(xì)胞功能不 同水平上的作用，以它們?yōu)榛A(chǔ)能夠制造用于病毒感染的防治和治療的新藥物
[0016] 基于已知的肽，已經(jīng)開發(fā)了生物活性肽的新家族，該新家族富含組氨酸殘基，利用 已知功能的Zn指狀物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域的麗蠅抗病毒肽和它們的同系物作為原型。麗蠅抗病 毒肽被用作具有6-35個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)的肽基質(zhì)。以這種方式，設(shè)計(jì)的肽能夠形成具有Zn++ 離子的復(fù)合物，生成寡聚物和聚合物，并且在結(jié)構(gòu)和生物學(xué)性能方面它們能夠滿足免疫調(diào) 節(jié)物的要求。
[0017] 本發(fā)明的肽復(fù)合物具有三維結(jié)構(gòu)，并具有以下結(jié)構(gòu)式：
[0018]
【權(quán)利要求】
1. 一種肽復(fù)合物，其中，肽組織為三維結(jié)構(gòu)，并具有以下結(jié)構(gòu)式：
其中，X1 選自Gln、Ser、Asn、Val、Ala、Phe、Asp或不存在；RJPR2-肽鏈含有His-或者Cys-氨基酸殘基，且能夠與過(guò)渡金屬離子相互作用，其中R1選自His-Gly-Val-Ser-Gly-、Cys-Val-Val-Thr-Gly-、Cys-Gly-、His-Gly-Ser-Asp-Gly-、Gly-、 His-Gly-Asp-Ser-Gly-、Val-Ser-Gly-、His_Gly-或不存在；R2選自-Val-His-Gly'-Val-Phe-Val、-Val_His，-Val-Asp或不存在。
2. 根據(jù)權(quán)利要求I所述的肽復(fù)合物，其中，該肽復(fù)合物具有干擾素合成誘導(dǎo)劑性質(zhì)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽復(fù)合物，其中，該肽復(fù)合物具有抗病毒活性性質(zhì)。
【文檔編號(hào)】A61K38/08GK104507958SQ201280064984
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2012年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月21日
【發(fā)明者】奧列格·伊萬(wàn)諾維奇·基謝廖夫, 費(fèi)利克斯·伊萬(wàn)諾維奇·葉爾紹夫 申請(qǐng)人:奧布施斯托夫·S·奧格蘭尼肯諾伊·奧特維茨特維諾斯特于“阿羅夫羅恩”