治療阿耳茨海默氏病的組合物和方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種超免疫制劑，其包含對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特異性的人多克隆抗體或其片段。所述環(huán)肽可包含氨基酸序列GSNK(SEQ?ID?NO:1)、SNKG(SEQ?ID?NO:2)、GSNKG(SEQ?ID?N0:3)、CSNKG(SEQ?ID?NO:4)、CGSNKGC(SEQ?ID?NO:5)、CGSNKGG(SEQ?ID?NO:6)或CCGSNKGC(SEQ?ID?NO:7)。所述超免疫制劑中的所述抗體可具有范圍從約200至約400平均熒光強(qiáng)度(MFI)的滴度。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述超免疫制劑中大于約80％的所述抗體為IgG。所述抗體的片段為Fab、F(ab')2、scFv、二硫鍵連接的Fv或其混合物。
【專利說(shuō)明】治療阿耳茨海默氏病的組合物和方法
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)案的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/558, 430號(hào)（2011年11月10日提交）和第 61/589, 809號(hào)（2012年1月23日提交）及美國(guó)申請(qǐng)第13/582, 308號(hào)（2012年8月31日 提交）的優(yōu)先權(quán)，其各自通過(guò)引用整體并入本文。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003] 本發(fā)明涉及治療和預(yù)防受試者的阿耳茨海默氏病的組合物和方法。本發(fā)明還公開(kāi) 了篩選和診斷阿耳茨海默氏病的組合物和方法。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 阿耳茨海默氏?。ˋD)是常見(jiàn)的癡呆性（記憶與認(rèn)知混亂）神經(jīng)退行性疾病。與 腦部積累主要由β淀粉樣肽（也稱為淀粉樣蛋白iKAbeta或Αβ)，包括Αβ(1-40)、 Α β (1-42)和Α β (1-43)構(gòu)成的細(xì)胞外斑塊相關(guān)。這些Α β肽為淀粉樣前體蛋白（ΑΡΡ) 的蛋白水解產(chǎn)物。另外，主要由異常磷酸化tau蛋白（神經(jīng)元微管相關(guān)蛋白）構(gòu)成的神經(jīng) 纖維纏結(jié)在垂死神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)積累。Α β (1-42)為阿耳茨海默氏病患者淀粉樣蛋白斑塊中 的優(yōu)勢(shì)種。已經(jīng)證實(shí)Α β寡聚是阿耳茨海默氏病中神經(jīng)毒性的關(guān)鍵部分。
[0006] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，其中肽經(jīng)寡聚的特定Α β分子種類介導(dǎo)在阿耳茨海默氏病和所述 疾病的小鼠模型中觀察到的神經(jīng)毒性的主要組成部分（Walsh等，Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo, Nature, 2002, 416 (6880) : 535-9) 〇 A β 寡聚物毒性可表現(xiàn)為神 經(jīng)兀膜島素受體功能障礙（Zhao 等，Amyloid beta oligomers induce impairment of neuronal insulin receptors, FASEB J. 2008, 22 (1) : 246-60)和通過(guò)異位激活谷氨酸能 受體干擾特別是海馬中的正常突觸功能（De Felice等2007. Abeta oligomers induce neuronal oxidative stress through an N-methyl-D-aspartate receptor-dependent mechanism that is blocked by the Alzheimer drug memantine，J. Biol. Chem. 282:11590-11601 ;Nimmrich等，Amyloid beta oligomers(Abeta(l_42)globulomer) suppress spontaneous synaptic activity by inhibition of P/Q-type calcium currents, J Neurosci.，2008, 23 ；28(4):788-97) 〇
[0007] 通常通過(guò)由β_分泌酶，然后由Y-分泌酶異常裂解淀粉樣前體蛋白（APP)形成 淀粉樣蛋白斑塊，以形成不溶性肽Α β (1-42)。這些肽聚集形成為阿耳茨海默氏病標(biāo)志之 一的淀粉樣蛋白斑塊。雖然很多腦淀粉樣蛋白斑塊通常與阿耳茨海默氏病相關(guān)，但是已經(jīng) 發(fā)現(xiàn)認(rèn)知喪失與淀粉樣蛋白斑塊的數(shù)量關(guān)聯(lián)較少。相反，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)認(rèn)知喪失與其它形式的 Α β，例如可溶性Α β寡聚物或聚集物關(guān)聯(lián)更好，表明Α β寡聚物可能與神經(jīng)元和突觸喪 失更直接地聯(lián)系。
[0008] 已經(jīng)進(jìn)行了許多體外和體內(nèi)研究并且結(jié)果證明對(duì)Α β的免疫療法可引起表達(dá)人 突變?chǔ)ˇ宝钡霓D(zhuǎn)基因小鼠的病理和行為改善。不幸的是，這些積極免疫療法導(dǎo)致因?yàn)榕R床試 驗(yàn)期間存在與治療相關(guān)的不良事件，包括自身免疫性腦膜腦炎，所以小鼠在人類中未很好 轉(zhuǎn)化（Gilman 等，Clinical effects of Abeta immunization (AN1792) in patients with AD in an interrupted trial. Neurology, 2005, 10 ;64 (9) : 1553-62)。然而，在臨床試驗(yàn)中 還有許多被動(dòng)和主動(dòng)的免疫療法治療。
[0009] 在健康個(gè)體中，自然存在對(duì)至少一種Α β (1-42)有特異性的抗體。據(jù)報(bào)道，對(duì) 寡聚形式的Α β (1-42)的抗體濃度尤其隨年齡和晚期阿耳茨海默氏病降低。Britschgi 等，Neuroprotective natural antibodies to assemblies of amyloidogenic peptides decrease with normal aging and advancing Alzheimer's disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 2009, 106(29):12145-50。
[0010] 宜開(kāi)發(fā)阻止或減緩疾病進(jìn)展，而不引起對(duì)人體的負(fù)面和潛在致死性影響的生物制 齊IJ。鑒于普通人群壽命增加，并且隨著這種增加，每年診斷有阿耳茨海默氏病的患者的數(shù)量 伴隨上升，所述需要尤其明顯。還宜開(kāi)發(fā)測(cè)定疾病進(jìn)展的不同階段的診斷工具。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 本發(fā)明提供了一種超免疫制劑，其包含對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特 異性的人多克隆抗體或其片段。所述環(huán)肽可包含氨基酸序列GSNK(SEQ ID N0:1)、SNKG(SEQ ID N0:2)、GSNKG(SEQ ID N0:3)、CSNKG(SEQ ID N0:4)、CGSNKGC(SEQ ID N0:5)、CGSNKGG(SEQ ID N0:6)或CCGSNKGC(SEQ ID N0:7)。所述超免疫制劑中的所述抗體可能具有范圍從約200 至約400平均熒光強(qiáng)度（MFI)的滴度。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述超免疫制劑中大于約80% 的所述抗體為IgG。所述抗體的片段為Fab、F(ab'） 2、scFv、二硫鍵連接的Fv或其混合物。
[0013] 所述超免疫制劑可由人血漿或血清制備。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述超免疫制劑為 靜脈注射免疫球蛋白（IVIG)。
[0014] 所述超免疫制劑可呈適合腸胃外注射或輸注的形式。
[0015] 本發(fā)明還提供了一種治療或預(yù)防受試者的阿耳茨海默氏病的方法，包括向所述 受試者施用藥學(xué)有效量的包含對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特異性的人多克隆 抗體或其片段的超免疫制劑的步驟。所述環(huán)肽可包含氨基酸序列GSNK(SEQ ID N0:1)、 SNKG(SEQ ID NO:2),GSNKG(SEQ ID NO:3),CSNKG(SEQ ID NO:4),CGSNKGC(SEQ ID NO :5), CGSNKGG(SEQ ID N0:6)或CCGSNKGC(SEQ ID N0:7)。所述超免疫制劑可通過(guò)腸胃外注射或 輸注，例如靜脈注射或輸注施用。所述超免疫制劑可按范圍從約1〇μ g至約200mg抗體/kg 體重或從約10 μ g至約400 μ g抗體/kg體重的劑量施用。所述超免疫制劑也可經(jīng)皮下、肌 肉內(nèi)、透皮或口服施用。
[0016] 所述超免疫制劑可連續(xù)、同時(shí)或與乙酰膽堿酯酶抑制劑（例如他克林、卡巴拉汀、 加蘭他敏和多奈哌齊）或NMDA受體拮抗劑（例如美金剛）組合施用。
[0017] 本發(fā)明還涵蓋了一種診斷受試者的阿耳茨海默氏病的方法，包括以下步驟：（a) 從所述受試者獲得生物樣品；(b)量化樣品中對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的構(gòu)象表位有 特異性的抗體的水平；和（c)將步驟（b)中的抗體水平與對(duì)照樣品比較。
[0018] 本發(fā)明還提供了一種預(yù)測(cè)受試者發(fā)展阿耳茨海默氏病的危險(xiǎn)的方法，包括以下步 驟：(a)從所述受試者獲得生物樣品；(b)量化樣品中對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的構(gòu)象 表位有特異性的抗體的水平；和（c)將步驟（b)中的抗體水平與對(duì)照樣品比較。
[0019] 生物樣品可為血漿、組織、細(xì)胞、生物流體（例如，腦脊髓液（CSF)或血液）或其組 合。所述對(duì)照樣品為來(lái)自一個(gè)或多個(gè)無(wú)阿耳茨海默氏病的受試者的樣品；或一個(gè)時(shí)間段之 前從受試者獲得的樣品，其中所述時(shí)間段范圍從約6個(gè)月至約5年。
[0020] 附圖簡(jiǎn)述
[0021] 圖1用圖表示出了lViagPlex1^!疫測(cè)定（基于Luminex xMAP技術(shù)）結(jié)果，作為平 均熒光強(qiáng)度（MFI)說(shuō)明了一群血漿捐贈(zèng)者中，源自Α β的環(huán)肽的特異性抗體結(jié)合水平。
[0022] 圖2用圖表示出了 MagPlex?免疫測(cè)定（基于Luminex xMAP技術(shù)）結(jié)果，作為平 均熒光強(qiáng)度（MFI)說(shuō)明了來(lái)自于滴度最高的10名捐贈(zèng)者的源自Α β的環(huán)肽、Α β (1-42) 和Α β (1-40)與一群血漿捐贈(zèng)者中源自Α β的環(huán)肽的特異性抗體結(jié)合水平。
[0023] 圖3用圖表示出了 MagPlex'免疫測(cè)定（基于Luminex xMAP技術(shù)）結(jié)果，說(shuō)明 了對(duì)Α β蛋白（1-42)、Α β蛋白（1-40)、源自Α β的環(huán)肽具有高于本底（平均熒光強(qiáng) 度（MFI)>1)的特異性抗體結(jié)合的血漿捐贈(zèng)者的百分比和沒(méi)有結(jié)合的血漿捐贈(zèng)者的百分比 (平均熒光強(qiáng)度（MFI)〈1)。
[0024] 圖4用圖表示出了 VIagPlexK'.免疫測(cè)定（基于Luminex xMAP技術(shù)）結(jié)果，說(shuō)明了 對(duì)按捐贈(zèng)者年齡范圍分類的源自Α β的環(huán)肽和Α β (1-42)蛋白質(zhì)的抗體呈陽(yáng)性（平均熒 光強(qiáng)度（MFI)>試驗(yàn)的另外兩種肽平均熒光強(qiáng)度2倍）的血漿捐贈(zèng)者的百分比。
[0025] 圖5用圖表示出了 MagP丨ex'免疫測(cè)定（基于Luminex xMAP技術(shù)）結(jié)果，說(shuō)明了 具有高特異性抗體滴度（平均熒光強(qiáng)度（MFI) >50)的捐贈(zèng)者的年齡分布。
[0026] 圖6用圖表示出了 MagPlex"免疫測(cè)定（基于Luminex xMAP技術(shù)）結(jié)果，說(shuō)明了 對(duì)源自Α β的環(huán)肽和Α β (1-42)的抗體呈陽(yáng)性（平均熒光強(qiáng)度〉試驗(yàn)的另外兩種肽平均 熒光強(qiáng)度2倍）的男性和女性血漿捐贈(zèng)者的百分比。
[0027] 圖7為CSNKG環(huán)肽的三維模型。
[0028] 圖8為CGSNKGG環(huán)肽的三維模型。
[0029] 圖9為乙?；疌CGSNKGC環(huán)肽的三維模型。
[0030] 圖10A-10G示出了 MagPlexκ).免疫測(cè)定和ELISA結(jié)果，表明錯(cuò)誤折疊淀粉樣-β 肽的抗體在正常成人中自然存在。圖10Α:具有淀粉樣-β肽的抗體的血漿捐贈(zèng)者的發(fā)病 率。圖10Β :具有高水平的SNK環(huán)肽抗體的血漿捐贈(zèng)者的百分比。圖10C和10D :較年輕的 人群具有較高水平的自然存在的錯(cuò)誤折疊淀粉樣-β表位的抗體。圖10Ε:通過(guò)ELISA測(cè) 定的錯(cuò)誤折疊Abeta表位的滴度。圖10F:具有錯(cuò)誤折疊ai3表位的抗體的女性捐贈(zèng)者的 發(fā)病率。圖10G:具有錯(cuò)誤折疊ai3表位的抗體的男性捐贈(zèng)者的發(fā)病率。
[0031] 圖11A和11B.示出了純化IgG與Abeta(l-42)寡聚物和cSNK肽的結(jié)合的代表性 傳感圖。合成的Abeta(l-42)寡聚物和BSA-偶聯(lián)的cSNK肽共價(jià)固定在Biacore?傳感器 芯片的單獨(dú)流動(dòng)細(xì)胞和在流動(dòng)細(xì)胞上順序注射的純化IgG上。圖11A:與固定Abeta(l-42) 寡聚物的結(jié)合。圖11B :與固定的BSA-偶聯(lián)cSNK的結(jié)合。
[0032] 圖12.使純化IgG與Abeta (1-42)寡聚物和cSNK肽的結(jié)合相關(guān)聯(lián)。合成的 Abeta (1-42)寡聚物和BSA-偶聯(lián)的cSNK肽共價(jià)固定在Biacore?傳感器芯片的單獨(dú)流動(dòng)細(xì) 胞和在流動(dòng)細(xì)胞上順序注射的純化IgG上。然后通過(guò)皮爾遜相關(guān)（Pearson Correlation) 比較所產(chǎn)生的結(jié)合響應(yīng)。
[0033] 圖13.純化IgG抗體譜分析。通過(guò)順序注射小鼠抗人IgG2 (b)、IgG3 (c)、IgG4 (d)、 總IgG(e)、IgM(f)和IgGl (g)確定與固定cSNK(a)結(jié)合的抗體的同型/亞類。
[0034] 圖14.純化IgG與cSNK的結(jié)合的MagPlex?和Biacore?免疫測(cè)定之間的相關(guān)性。 使BSA-偶聯(lián)的cSNK肽分別與Luminex?超順磁羧基化xMAP?微球和CM5傳感器芯片 偶聯(lián)，并且在MAGPIX分析系統(tǒng)和Bia C〇reTM3000生物傳感器上相應(yīng)地分析純化IgG的結(jié)合。 使結(jié)合響應(yīng)相關(guān)聯(lián)（皮爾遜相關(guān)=〇. 708)。
[0035] 發(fā)明詳述
[0036] 本發(fā)明提供了用于治療和預(yù)防阿耳茨海默氏病的超免疫制劑、藥物組合物和方 法。超免疫制劑富集對(duì)寡聚Α β的構(gòu)象表位有特異性的抗體。超免疫制劑中的抗體具有 高滴度。構(gòu)象表位對(duì)應(yīng)于寡聚Α β的溶劑暴露、抗體可達(dá)指節(jié)區(qū)。構(gòu)象表位可為具有包含 SNK( S卩，絲氨酸-天冬酰胺-賴氨酸或Ser-Asn-Lys)的氨基酸序列的環(huán)肽的一部分，其中 賴氨酸的側(cè)鏈?zhǔn)芟拗贫ㄏ蛴谌芤褐?。在一個(gè)實(shí)施方案中，構(gòu)象表位可為具有至少包含SNK 的氨基酸序列的環(huán)肽的一部分。本組合物可用于阿耳茨海默氏病的被動(dòng)免疫療法或有阿耳 茨海默氏病危險(xiǎn)的群體的預(yù)防疫苗。
[0037] 本超免疫組合物富集對(duì)包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特異性的抗體。抗體滴度 范圍可能從約1至約1，〇〇〇、約5至約800、約10至約600、約1至約50、約50至約100、約 50至約200、約100至約200、約200至約400、約400至約600、約600至約800、約800至 約 1，000、約 1，000 至約 2, 000、約 2, 000 至約 3, 000、約 3, 000 至約 4, 000、約 5, 000 至約 10, 000或約10, 000至約20, 000平均熒光強(qiáng)度（MFI)。在基于Luminex的xMAP'k>技術(shù)的 MagPlexx免疫測(cè)定上，MFI值與結(jié)合強(qiáng)度相關(guān)聯(lián)。
[0038] 抗體濃度或滴度范圍可從約100 μ g/ml至約5mg/ml、約200 μ g/ml至約4mg/ml、 約 500μ g/ml 至約 3mg/ml、約 lmg/ml 至約 2mg/ml、約 2mg/ml 至約 3mg/ml、約 3mg/ml 至約 4mg/ml、約 4mg/ml 至約 5mg/ml、約 100 μ g/ml 至約 200 μ g/ml、約 200 μ g/ml 至約 300 μ g/ ml、約 300 μ g/ml 至約 400 μ g/ml、約 400 μ g/ml 至約 500 μ g/ml、約 500 μ g/ml 至約 600 μ g/ ml、約 600 μ g/ml 至約 800 μ g/ml 或約 800 μ g/ml 至約 lmg/ml。
[0039] 超免疫制劑可由來(lái)自正常個(gè)體或患病捐贈(zèng)者，例如有阿耳茨海默氏病或癡呆癥家 族之一的捐贈(zèng)者的人血漿制備。超免疫制劑可能含混合免疫球蛋白（即，抗體）。本發(fā)明進(jìn) 一步提供了包含超免疫制劑，用于被動(dòng)免疫療法的藥物組合物。
[0040] 本發(fā)明還涵蓋了用于診斷和篩選阿耳茨海默氏病的組合物和方法。
[0041] Α β寡聚時(shí)，限制性肽轉(zhuǎn)變形式并且呈指節(jié)樣構(gòu)象。在寡聚Α β的指節(jié)區(qū)，包括 賴氨酸側(cè)鏈的表位GSNKG暴露于溶劑并且易受抗體結(jié)合。這種表位表示錯(cuò)誤折疊形式的 Α β中的新型靶標(biāo)。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)" Α β寡聚物"或"寡聚Α β "指一種形式的Α β 肽，其中Α β單體非共價(jià)或共價(jià)聚集。Α β寡聚物可具有少于約200個(gè)Α β單體。在一 個(gè)實(shí)施方案中，Α β寡聚物可具有少于約50個(gè)Α β單體。
[0042] 進(jìn)行包含殘基25-29 (CGSNKGC)的二硫鍵連接環(huán)肽的分子動(dòng)力學(xué)建模的圖像捕 獲；為二硫鍵添加非天然半胱氨酸。這種建模揭示，如圖所示賴氨酸28的側(cè)鏈為外定向， 與參考文獻(xiàn) Luhrs 等，3D structure of Alzheimer's amyloid-beta(l-42)fibrils, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 2005, 102 (48) : 17342-7 和 Rauk, A. , Why is the amyloid beta peptide of Alzheimer's disease neurotoxic ? Dalton Trans. ,2008(10):1273-82 中預(yù)測(cè)的內(nèi)定向賴氨酸28側(cè)鏈相反。賴氨酸28殘基向外定向的發(fā)現(xiàn)與這種包含殘基 25-29 (CGSNKGC)的環(huán)肽的高免疫原性一致，賴氨酸側(cè)鏈經(jīng)溶劑暴露、大且經(jīng)由ε-氨基帶 電。賴氨酸28殘基向外定向的發(fā)現(xiàn)與還展示出溶劑中呈抗體可達(dá)形式的類似賴氨酸側(cè)鏈 定向的真正Α β寡聚物一致。位于Α β寡聚物的指節(jié)區(qū)內(nèi)的絲氨酸26、天冬酰胺27和 賴氨酸28殘基SNK全部帶電或有極性，并且具有比非極性小氨基酸更強(qiáng)的免疫原性。位于 Α β寡聚物的指節(jié)區(qū)內(nèi)的SNK殘基的環(huán)狀構(gòu)象形成溶劑暴露且可用于抗體結(jié)合的新型構(gòu) 象表位。在Α β寡聚物表面對(duì)這種結(jié)構(gòu)受限表位的發(fā)現(xiàn)具有選擇性抗體結(jié)合的有利性質(zhì)。 [0043] 一方面，表位由Α β寡聚物表面上溶劑暴露且結(jié)構(gòu)受限的強(qiáng)極性/帶電殘基構(gòu) 成。另一方面，新型構(gòu)象特異性表位的結(jié)構(gòu)依賴于氨基酸相對(duì)固定的空間排列。
[0044] 在一個(gè)實(shí)施方案中，在ΑΡΡ(淀粉樣前體蛋白）分子表面不存在具有受限環(huán)狀構(gòu)型 的本構(gòu)象表位，從而限制了 ΑΡΡ的自身免疫性識(shí)別。位于神經(jīng)元和單核細(xì)胞的細(xì)胞表面的 ΑΡΡ的GSNKG基序很大程度上非結(jié)構(gòu)化。與具有受限環(huán)狀構(gòu)型的新型構(gòu)象表位結(jié)合的構(gòu)象 特異性抗體限制或不識(shí)別細(xì)胞表面ΑΡΡ上的非結(jié)構(gòu)化GSNKG基序。識(shí)別新型構(gòu)象表位的抗 體顯示出很少或沒(méi)有與單體Α β的反應(yīng)。另一方面，識(shí)別新型構(gòu)象表位的抗體顯示出很少 或沒(méi)有與纖絲Α β的反應(yīng)。
[0045] 在另一實(shí)施方案中，與具有受限環(huán)狀構(gòu)型的新型構(gòu)象表位結(jié)合的抗體識(shí)別Α β 寡聚物的氨基酸25-29區(qū)域內(nèi)亞基之間的非線性表位結(jié)構(gòu)。因?yàn)榇嬖诒裙丫郐?β的量大 得多的單體Α β，抗體對(duì)新型構(gòu)象表位的特異性使抗體能夠特異性靶向寡聚形式的Α β 并且同樣，避免靶向已知影響神經(jīng)元和免疫功能的單體Α β和ΑΡΡ并且增加抗體結(jié)合的可 用性。PCT/CA2011/000238。
[0046] 本發(fā)明提供了一種源自Α β，包含構(gòu)象表位的肽。這種構(gòu)象表位模擬錯(cuò)誤折疊 的寡聚Α β中的指節(jié)樣表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，構(gòu)象表位具有包含SNK的氨基酸序列。 在另一實(shí)施方案中，構(gòu)象表位可為具有至少包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽的一部分。所 述肽為環(huán)肽。所述肽可能或可能不源自Α β。構(gòu)象表位可能為二硫鍵連接的環(huán)肽的一部 分。肽的環(huán)化也可通過(guò)任何其它適合的共價(jià)鍵。本肽可為環(huán)狀、非環(huán)狀、支鏈、直鏈或可在 寡聚Α β中產(chǎn)生與構(gòu)象表位相對(duì)應(yīng)的受限構(gòu)型的任何其它合適形式。在國(guó)際申請(qǐng)第PCT/ CA2011/000238號(hào)中詳細(xì)描述了這種構(gòu)象表位，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用整體并入。
[0047] 如本文所使用，術(shù)語(yǔ)"構(gòu)象表位"指其中氨基酸殘基呈特定三維結(jié)構(gòu)的表位。特異 性結(jié)合構(gòu)象表位的抗體識(shí)別該構(gòu)象表位的氨基酸殘基的空間排列。
[0048] 本發(fā)明含構(gòu)象表位的肽可包括位于SNK表位序列任一端的甘氨酸殘基。所述肽可 包括SNK表位序列兩端的甘氨酸殘基。甘氨酸殘基可能對(duì)構(gòu)象表位的免疫原性具有有限的 貢獻(xiàn)或沒(méi)有貢獻(xiàn)，或可緩解肽環(huán)化中固有的一些空間張力。所述肽可包括更靠近C末端的 賴氨酸和更靠近序列Ν末端的半胱氨酸后面的甘氨酸。構(gòu)象表位可進(jìn)一步包括半胱氨酸， 后面是Ν末端的天然甘氨酸和C末端的天然甘氨酸和第二個(gè)甘氨酸。構(gòu)象表位可進(jìn)一步包 括Ν末端乙?；腚装彼幔竺媸橇硪粋€(gè)半胱氨酸和C末端的天然甘氨酸和半胱氨酸。 [0049] 本發(fā)明含構(gòu)象表位的肽可包含任何標(biāo)準(zhǔn)（或天然）氨基酸、非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸和/或 氨基酸類似物。標(biāo)準(zhǔn)氨基酸包括表1中標(biāo)出的20種L-氨基酸。標(biāo)準(zhǔn)氨基酸還包括硒代半 胱氨酸和吡咯賴氨酸。
[0050] 表1 :20種標(biāo)準(zhǔn)L_氛基酸的命名和縮寫
[0051]

【權(quán)利要求】
1. 一種超免疫制劑，其包含對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特異性的人多克隆 抗體或其片段。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超免疫制劑，其中所述抗體具有范圍從約200至約400平均 熒光強(qiáng)度（MFI)的滴度。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超免疫制劑，其中大于約80%的所述抗體為IgG。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超免疫制劑，其中所述超免疫制劑由人血漿或血清制備。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的超免疫制劑，其中所述超免疫制劑為靜脈注射免疫球蛋白 (IVIG)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超免疫制劑，其中所述抗體的片段為Fab、F(ab'）2、scFv、二 硫鍵連接的Fv或其混合物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超免疫制劑，其呈適合腸胃外注射或輸注的形式。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超免疫制劑，其中所述環(huán)肽包含氨基酸序列GSNK(SEQ ID NO:l)、SNKG(SEQ ID NO:2)、GSNKG(SEQ ID NO:3)、CSNKG(SEQ ID N0:4)、CGSNKGC(SEQ ID NO:5)、CGSNKGG(SEQ ID NO:6)或 CCGSNKGC(SEQ ID NO:7)。
9. 一種治療或預(yù)防受試者的阿耳茨海默氏?。ˋlzheimer's Disease)的方法，包括向 所述受試者施用藥學(xué)有效量的包含對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特異性的人多 克隆抗體或其片段的超免疫制劑的步驟。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述超免疫制劑通過(guò)腸胃外注射或輸注施用。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述超免疫制劑通過(guò)靜脈注射或輸注施用。
12. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述超免疫制劑按范圍從約10 μ g至約200mg 抗體/kg體重的劑量施用。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述超免疫制劑按范圍從約10 μ g至約400 μ g 抗體/kg體重的劑量施用。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述超免疫制劑經(jīng)皮下、肌肉內(nèi)、透皮或口服施 用。
15. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述超免疫制劑連續(xù)、同時(shí)或與乙酰膽堿酯酶抑 制劑或NMDA受體拮抗劑組合施用。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述乙酰膽堿酯酶抑制劑為他克林（tacrine)、 卡巴拉?。╮ivastigmine)、加蘭他敏（galantamine)或多奈哌齊（donepezil)。
17. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述NMDA受體拮抗劑為美金剛（memantine)。
18. -種診斷受試者的阿耳茨海默氏病的方法，包括以下步驟： (a) 從所述受試者獲得生物樣品； (b) 量化所述樣品中對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特異性的抗體的水平；和 (c) 將步驟（b)中的抗體水平與對(duì)照樣品比較。
19. 一種預(yù)測(cè)受試者發(fā)展阿耳茨海默氏病的危險(xiǎn)的方法，包括以下步驟： (a) 從所述受試者獲得生物樣品； (b) 量化樣品中對(duì)具有包含SNK的氨基酸序列的環(huán)肽有特異性的抗體的水平；和 (c) 將步驟（b)中的抗體水平與對(duì)照樣品比較。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述生物樣品為血漿、組織、細(xì)胞、生物流 體或其組合。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述生物流體為腦脊髓液（CSF)或血液。
22. 根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述對(duì)照樣品為來(lái)自一個(gè)或多個(gè)無(wú)阿耳茨 海默氏病的受試者的樣品，或一個(gè)時(shí)間段之前從受試者獲得的樣品，其中所述時(shí)間段范圍 從約6個(gè)月至約5年。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK104093454SQ201280066632
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月10日
【發(fā)明者】N·R·卡什曼, G·馬克拉蒂 申請(qǐng)人:坎格尼美國(guó)股份有限公司, 不列顛哥倫比亞大學(xué)