環(huán)狀二氨基嘧啶衍生物的制作方法
【專利摘要】式I化合物其中A、L1、L2、X和Y具有在權(quán)利要求1中指出的含義，為Syk的抑制劑且尤其可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
【專利說明】環(huán)狀二氨基嘧啶衍生物
[0001] 發(fā)明背景 本發(fā)明的目的在于發(fā)現(xiàn)具有有價值性質(zhì)的新穎化合物，特別是可用于制備藥物的那些 化合物。
[0002] 本發(fā)明涉及化合物及化合物在抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)制由激酶、特別是酪氨酸激酶 引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的用途，另外涉及包含這些化合物的藥物組合物和所述化合物用于治療 激酶誘導(dǎo)的疾病的用途。
[0003] 因?yàn)榈鞍踪|(zhì)激酶調(diào)節(jié)包括新陳代謝、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和細(xì)胞存活的幾乎每個 細(xì)胞過程，所以它們對于對各種疾病狀態(tài)的治療干預(yù)是有吸引力的靶標(biāo)。例如，蛋白質(zhì)激酶 在其中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞周期控制和血管生成是與諸如但不限于癌癥、發(fā)炎疾病、異常血 管生成和與其有關(guān)的疾病、動脈粥樣硬化、黃斑變性、糖尿病、肥胖癥和疼痛的許多疾病病 況相關(guān)的細(xì)胞過程。
[0004] 在激活肥大細(xì)胞之后的信號途徑中的關(guān)鍵事件之一是激活酪氨酸激酶Syk。肥大 細(xì)胞在哮喘和過敏性病癥中通過釋放促炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子而起到關(guān)鍵作用。IgE的高親 和性受體Fc ε RJ的抗原介導(dǎo)的聚集引起肥大細(xì)胞激活。這觸發(fā)一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件，引起 包括組胺、蛋白酶、白細(xì)胞三烯和細(xì)胞因子等介質(zhì)的釋放。這些介質(zhì)引起血管通透性增加、 粘液產(chǎn)生、支氣管收縮、組織退化和炎癥，因此在哮喘和過敏性病癥的病因?qū)W和癥狀中起關(guān) 鍵作用。Syk激酶充當(dāng)引起介質(zhì)釋放的所有后續(xù)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要引發(fā)劑。Syk激酶在信號 轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑中的關(guān)鍵作用通過由含有Syk激酶的SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)完全抑制介質(zhì)釋放來證 明，該蛋白質(zhì)起Syk激酶的抑制劑的作用（J. A. Taylor等，Molec. and Cell Biol, 15: 4149-4157 (1995)。
[0005] Syk (脾-酪氨酸-激酶）是屬于包含2八?70、？71^2、4131、1^2、1(01?和冊1?等的細(xì) 胞內(nèi)酪氨酸激酶亞家族的72kDa非受體酪氨酸激酶。Syk為FcR (FCYRI、II、III，F(xiàn)ceRI、 Fc a R)和BCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要調(diào)節(jié)劑且在整個造血系統(tǒng)中表達(dá)以及在成纖維細(xì)胞、破骨細(xì) 胞、肝細(xì)胞、上皮和神經(jīng)元細(xì)胞中表達(dá)。除了 C端激酶結(jié)構(gòu)域之外，SYK還展示出兩個SH2結(jié) 構(gòu)域和超過10個自磷酸化位點(diǎn)L
[0006] 借助于它的兩個SH2結(jié)構(gòu)域，SYK被特異性募集到磷酸化的ITAM (在免疫受體中 存在的基于免疫受體酪氨酸的激活基序，諸如Fc γ RI、IIA、IIIA、Fc a R、Fc ε RI和BCR，由 單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和Β細(xì)胞表達(dá)），且特別介導(dǎo)由那些受體在肥大 細(xì)胞、Β細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜伊紅粒細(xì)胞、ΝΚ細(xì)胞、DC細(xì)胞血小板和破 骨細(xì)胞中的激活觸發(fā)的免疫受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)u。
[0007] 在BCR交聯(lián)后，在Iga/Ig0的胞質(zhì)尾的ITAM基序處的酪氨酸殘基通過Src-家 族激酶Lyn磷酸化，產(chǎn)生SYK的對接位點(diǎn)，因此SYK被募集到BCR免疫復(fù)合物。SYK隨后通 過Src-家族激酶Lyn磷酸化并激活。在激活時，SYK將適體蛋白質(zhì)BLNK磷酸化，允許其與 BTK和PLC γ 2經(jīng)由它們的相應(yīng)SH2域相互作用。SYK磷酸化且因此激活的BTK將進(jìn)而磷酸 化并激活PLC γ 2，引起IP3形成、Ca2+活動化、PKC和MAPK激活和繼起的NFAT、AP-1和NF κ B 轉(zhuǎn)錄因子激活，引起激活和表面標(biāo)志物表達(dá)、細(xì)胞因子釋放、B細(xì)胞的存活和增殖3。在肥大 細(xì)胞中，過敏原激活的Fc ε RI通過LYN和FYN磷酸化并募集SYK，SYK進(jìn)而通過LYN磷酸化 并進(jìn)一步自磷酸化，變得完全激活。激活的SYK使兩種適體分子NTAL和LAT磷酸化，產(chǎn)生 用于含SH2的蛋白質(zhì)（諸如PLC Yl、Vav和PI3K的p85調(diào)節(jié)亞基）的更多對接位點(diǎn)，引起肥 大細(xì)胞脫粒和細(xì)胞因子產(chǎn)生 4。在肥大細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中Syk的關(guān)鍵作用通過可重現(xiàn)地觀 察到不能脫粒的來自人類供體的10-15%的嗜堿性細(xì)胞（循環(huán)肥大細(xì)胞）具有減少量的Syk 蛋白質(zhì)來證實(shí)5'6。另外，破骨細(xì)胞的骨再吸收活性需要SYK。在通過ανβ 3整合素剌激破 骨細(xì)胞后，SYK很可能由c-Src以DAP-12/Fc γ RII依賴機(jī)制而變得磷酸化，引起SPL-76和 Vav3磷酸化和隨后的細(xì)胞骨架再組織。缺乏SYK的破骨細(xì)胞是沒有活性的且顯示缺陷性細(xì) 胞骨架再組織。與此相關(guān)，缺乏SYK的胚胎顯示缺陷性的骨骼質(zhì)量 7'8。
[0008] 在淋巴結(jié)中的B細(xì)胞的BCR-介導(dǎo)激活以及在關(guān)節(jié)中的樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬 細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的FcR-介導(dǎo)激活是在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA)期間發(fā)生的細(xì)胞病 理-生理機(jī)制的主要組分。此外，破骨細(xì)胞的激活導(dǎo)致骨骼和軟骨破壞，這是該病理的標(biāo)志 9。SYK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因此將在外周和炎癥部位處兩者的關(guān)節(jié)炎的發(fā)展期間起關(guān)鍵作用1(1。實(shí)際 上，由Rigel研發(fā)的可口服利用的Syk抑制劑R406誘發(fā)臨床評分顯著改善且顯著降低RA 的鼠科模型中血清細(xì)胞因子濃度以及骨侵蝕n'12。此外，該抑制劑在人類中的RA II期研究 中已經(jīng)顯示出功效（ACR評分改善）和良好的耐受性13'14' 15。
[0009] 在SLE中，B細(xì)胞基本上經(jīng)由產(chǎn)生自身抗體而促成病理發(fā)生，引起免疫復(fù)合物形 成、剌激Fc受體且最終引起炎癥的過度和慢性激活。在SLE的鼠科模型中，用Syk抑制劑 治療引起類別切換的生發(fā)中心、緣區(qū)、重新形成且卵泡的B細(xì)胞的數(shù)量減少，且因此產(chǎn)生疾 病減輕效果 18。
[0010] 雖然TCR信號通過在胸腺細(xì)胞和天然T細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶ZAP-70傳輸， 但多個研究指出分化的效應(yīng)T細(xì)胞，諸如在多發(fā)性硬化（MS)或系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE)的病 理生理學(xué)中包括的那些，顯示TCRzeta鏈的下調(diào)和TCR/⑶3鏈及其與FcR γ的相互作用的 伴隨上調(diào)。那些研究顯示在效應(yīng)細(xì)胞中的TCR/⑶3/FcRy復(fù)合物募集并激活Syk酪氨酸激 酶，而非ZAP-70酪氨酸激酶。在TCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中該生理轉(zhuǎn)換專一發(fā)生在效應(yīng)器中，而不是 在天然或記憶T細(xì)胞中發(fā)生 16'17'18。隨后，并不令人驚奇地，已經(jīng)顯示SYK抑制劑延遲疾病 進(jìn)展并改善SLE的鼠科模型的存活率 17·18·19·2°·21。
[0011] SYK抑制劑還可發(fā)現(xiàn)在哮喘、過敏癥、多發(fā)性硬化及其他疾病如血小板減少性紫癜 和T或B細(xì)胞淋巴瘤中的用途i^1' 14'22#35。
[0012] 用Syk抑制劑治療疾病前期的NZB/W小鼠防止腎病發(fā)展，其通過腎小球硬化、管狀 損傷、蛋白尿和BUN水平降低證明 18。
[0013] 參考f獻(xiàn) 1. Turner, M. , Schweighoffer, E., Colucci，F(xiàn). , Di Santo, J. P. & Tybulewicz, V. L. Tyrosine kinase SYK: essential functions for immunoreceptor signalling (釀 氨酸激酶SYK:對免疫受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本功能）.Immunol Today 21，148-154 (2000). 2. Ghosh, D. & Tsokos， G. C. Spleen tyrosine kinase: an Src family of non-receptor kinase has multiple functions and represents a valuable therapeutic target in the treatment of autoimmune and inflammatory diseases (脾 酪氨酸激酶：非受體激酶的Six家族具有多種功能并代表在自身免疫和炎性疾病的治療中 的有價值的治療性祀標(biāo)）.Autoimmunity 43，48-55. 3. Lindvall, J. Μ.等· Bruton's tyrosine kinase: cell biology, sequence conservation, mutation spectrum, siRNA modifications, and expression profiling (Bruton酪氨酸激酶：細(xì)胞生物學(xué)、序列保守性、突變譜、siRNA修飾和表達(dá)概況）.Immunol Rev 203, 200-215 (2005). 4. Gilfillan，A. Μ. & Tkaczyk, C. Integrated signalling pathways for mast-cell activation (肥大細(xì)胞活化的完整信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑）· Nat Rev Immunol 6， 218-230 (2006). 5. Gomez, G., Schwartz, L & Kepley, C. Syk deficiency in human non-releaser lung mast cells (人類非釋放器肺肥大細(xì)胞中的Syk缺陷）· Clin Immunol 125， 112-115 (2007). 6. Kepley, C. L., Youssef，L，Andrews, R. P., Wilson, B. S. & Oliver, J. M. Syk deficiency in nonreleaser basophils (非釋放器嗜喊粒細(xì)胞中的Syk缺陷）· J Allergy Clin Immunol 104， 279-284 (1999). 7. Zou，W.等. Syk, c_Src，the alphavbeta3 integrin，and ITAM immunoreceptors, in concert, regulate osteoclastic bone resorption (Syk、c_Src、 ανβ3整聯(lián)蛋白和ITAM免疫受體一致調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的骨再吸收）.J Cell Biol 176， 877-888 (2007). 8. Reeve, J. L.等· SLP-76 couples Syk to the osteoclast cytoskeleton (SLP-76 偶聯(lián) Syk 至破骨細(xì)胞細(xì)胞骨架）.J Immunol 183，1804-1812 (2009). 9. Klareskog，L.，Catrina，Α· I. & Paget，S. Rheumatoid arthritis (類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎）· Lancet 373，659-672 (2009). 10 Wong, B. R. , Grossbard，E. B. , Payan, D. G. & Masuda，E. S. Targeting Syk as a treatment for allergic and autoimmune disorders (Syk 作為變應(yīng)性和自身免疫 病癥的治療的標(biāo)革巴）· Expert Opin Investig Drugs 13，743-762 (2004). 11. Braselmann，S.等· R406，an orally available spleen tyrosine kinase inhibitor blocks fc receptor signaling and reduces immune complex-mediated inflammation (R406, 一種口服可用的脾釀氨酸激酶抑制劑，阻礙fc受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)并降低 免疫復(fù)合物介導(dǎo)的炎癥）.J Pharmacol Exp Ther 319，998-1008 (2006). 12. Pine, P. R.等· Inflammation and bone erosion are suppressed in models of rheumatoid arthritis following treatment with a novel Syk inhibitor (用新 的Syk抑制劑治療后，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中炎癥和骨質(zhì)侵蝕受到抑制）.Clin Immunol 124， 244-257 (2007). 13. Tomillero，A. & Moral, M. A. Gateways to clinical trials (臨床試驗(yàn)入 門）· Methods Find Exp Clin Pharmacol 31，47-57 (2009). 14. Bajpai，M. Fostamatinib，a Syk inhibitor prodrug for the treatment of inflammatory diseases (Fostamatinib，一種用于治療炎性疾病的Syk抑制劑前藥）. IDrugs 12, 174-185 (2009). 15. Weinblatt, M.E.等· Treatment of rheumatoid arthritis with a Syk kinase inhibitor: a twelve-week, randomized, placebo-controlled trial (用 Syk 激酶 抑制劑治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎：12周、隨機(jī)化、安慰劑對照的試驗(yàn)）.Arthritis Rheum 58， 3309-3318 (2008). 16. Krishnan，S. , Warke, V. G. , Nambiar，Μ. P. , Tsokos，G. C. & Farber，D. L. The FcR gamma subunit and Syk kinase replace the CD3 zeta-chain and ZAP-70 kinase in the TCR signaling complex of human effector CD4 T cells (FcR γ 亞單位 和Syk激酶置換人效應(yīng)器CD4 T細(xì)胞的TCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物中的CD3 zeta鏈和ZAP-70激 酶）· J Immunol 170，4189-4195 (2003). 17. Krishnan，S.等· Differential expression and molecular associations of Syk in systemic lupus erythematosus T cells (Syk在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的差異表達(dá)和 分子相關(guān)性）· J Immunol 181，8145-8152 (2008). 18. Bahjat，F(xiàn). R.等· An orally bioavailable spleen tyrosine kinase inhibitor delays disease progression and prolongs survival in murine lupus (口 服生物可利用的脾酪氨酸激酶抑制劑延緩疾病進(jìn)展并延長鼠狼瘡的存活）.Arthritis Rheum 58， 1433-1444 (2008). 19. Smith, J.等· A Spleen Tyrosine Kinase Inhibitor Reduces the Severity of Established Glomerulonephritis (脾釀氨酸激酶抑制劑減輕建立的腎小球腎炎的嚴(yán) 重性）· J Am Soc Nephrol (2009). 20. Enyedy, E. J.等· Fc epsilon receptor type I gamma chain replaces the deficient T cell receptor zeta chain in T cells of patients with systemic lupus eiythematosus (在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的T細(xì)胞中Fc ε受體I型γ鏈置換缺陷型T細(xì) 胞受體 zeta 鏈）· Arthritis Rheum 44，1114-1121 (2001). 21. Perl, A. Systems biology of lupus: mapping the impact of genomic and environmental factors on gene expression signatures, cellular signaling, metabolic pathways, hormonal and cytokine imbalance, and selecting targets for treatment (狼瘡的系統(tǒng)生物學(xué)：將基因組和環(huán)境因素對基因表達(dá)標(biāo)記、細(xì)胞信號轉(zhuǎn) 導(dǎo)、代謝途徑、激素和細(xì)胞因子不平衡的影響作圖，并選擇治療祀標(biāo)）.Autoimmunity 43， 32-47. 22. Smith, J.等· A spleen tyrosine kinase inhibitor reduces the severity of established glomerulonephritis (脾酪氨酸激酶抑制劑減輕建立的腎小球腎炎的嚴(yán) 重性）· J Am Soc N印hrol 21，231-236. 23. Sanderson, Μ. Ρ. , Gelling, S. J., Rippmann，J. F. & Schnapp，A. Comparison of the anti-allergic activity of Syk inhibitors with optimized Syk siRNAs in FcepsilonRI-activated RBL-2H3 basophilic cells (Fee RI 活化的RBL-2H3 嗜喊粒細(xì)胞 中Syk抑制劑與最佳的Syk SiRNA的抗變應(yīng)性活性的比較）.Cell Immunol 262，28-34. 24. Podolanczuk, A. , Lazarus, A. H. , Crow, A. R. , Grossbard，E. & Bussel， J. B. Of mice and men: an open-label pilot study for treatment of immune thrombocytopenic purpura by an inhibitor of Syk (在小鼠和人中用于通過 Syk 抑 制劑治療免疫性的血小板減少性紫癜的開放標(biāo)簽的先導(dǎo)研究）.Blood 113，3154-3160 (2009) . 25. Bajpai，Μ., Chopra, P., Dastidar，S. G. & Ray, A. Spleen tyrosine kinase: a novel target for therapeutic intervention of rheumatoid arthritis (脾釀氨 酸激酶：用于治療性干預(yù)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的新祀標(biāo)）.Expert Opin Investig Drugs 17， 641-659 (2008). 26. Friedberg，J. W.等· Inhibition of Syk with fostamatinib disodium has significant clinical activity in non-Hodgkin lymphoma and chronic lymphocytic leukemia (用fostamatinib二鈉抑制Syk在非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴細(xì)胞性白血病中 具有顯著的臨床活性）.Blood 115，2578-2585. 27. Gao, C.等.Eptifibatide-induced thrombocytopenia and thrombosis in humans require FcgammaRIIa and the integrin beta3 cytoplasmic domain (依替巴月太 誘導(dǎo)的人類中血小板減少和血栓形成需要FcYRIIa和整聯(lián)蛋白β3胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域）.JClin Invest 119, 504-511 (2009). 28. Marjon, K. D. , Marnell, L. L. , Mold, C. & Du Clos, T. W. Macrophages activated by C-reactive protein through Fc gamma RI transfer suppression of immune thrombocytopenia (由C反應(yīng)蛋白活化的巨嗤細(xì)胞通過Fc γ RI傳送免疫性血小板 減少癥的阻遏）· J Immunol 182，1397-1403 (2009). 29. Chen, L 等· SYK-dependent tonic B-cell receptor signaling is a rational treatment target in diffuse large B-cell lymphoma (SYK依賴性增強(qiáng)的B細(xì)胞受體信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)是彌散性大B細(xì)胞淋巴瘤的合理治療靶標(biāo)）.Blood 111，2230-2237 (2008). 30. Ponzoni, Μ. , et al. Syk expression patterns differ among B-cell lymphomas. Leuk Res (2010). 31. Pechloff，K.等· The fusion kinase ITK-SYK mimics a T cell receptor signal and drives oncogenesis in conditional mouse models of peripheral T cell lymphoma (融合激酶ITK-SYK模擬T細(xì)胞受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)并驅(qū)使外周T細(xì)胞淋巴瘤的條件性 小鼠模型中的腫瘤形成）· J Exp Med 207，1031-1044 (2009). 32. Uckun，F(xiàn). Μ. , Ek，R. 0. , Jan, S. T. , Chen, C. L. & Qazi, S. Targeting SYK kinase-dependent anti-apoptotic resistance pathway in B-lineage acute lymphoblastic leukaemia (ALL) cells with a potent SYK inhibitory pentapeptide mimic (在B細(xì)胞系的急性成淋巴細(xì)胞性白血?。ˋLL)細(xì)胞中用有效的SYK抑制劑胸腺 噴丁模擬物靶向SYK激酶依賴性抗細(xì)胞凋亡抵抗途徑）.Br J Haematol 149，508-517 (2010) . 33. Wilcox, R. A.等· Inhibition of Syk protein tyrosine kinase induces apoptosis and blocks proliferation in T-cell non-Hodgkin's lymphoma cell lines (Syk蛋白酪氨酸激酶的抑制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并阻止T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞系的增殖）. Leukemia 24, 229-232 (2009). 34. Feldman, A. L.等· Overexpression of Syk tyrosine kinase in peripheral T-cell lymphomas (Syk釀氨酸激酶在外周T細(xì)胞淋巴瘤中的過表達(dá)）.Leukemia 22， 1139-1143 (2008). 35. Wang, L.等.Alternative splicing disrupts a nuclear localization signal in spleen tyrosine kinase that is required for invasion suppression in breast cancer (選擇剪接分裂乳腺癌侵入阻抑所必需的脾酪氨酸激酶的核定位信號區(qū)）. Cancer Res 63， 4724-4730 (2003). 除了肥大細(xì)胞之外，Syk還在包括B細(xì)胞的其它造血細(xì)胞中表達(dá)，其中認(rèn)為其在轉(zhuǎn)導(dǎo)將 不成熟的B細(xì)胞轉(zhuǎn)變成成熟的再循環(huán)B細(xì)胞所需要的信號中起重要作用（M. Turner等， Immunology Today，21: 148 (2000))。據(jù)報道B細(xì)胞在某些炎性病況諸如狼瘡（0· T. Chan 等，Immunological Rev, 169: 107-121 (1999))和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（A. Gause 等， Biodrugs, 15(2): 73-79 (2001))中起重要作用。
[0014] 還報道了 Syk是在引起神經(jīng)毒素產(chǎn)物產(chǎn)生的β -淀粉樣蛋白和朊病毒原纖維中的 信號級聯(lián)的要素（C. Κ. Combs 等，J. Neuroscl, 19: 928-939 (1999))。另外，Syk 抑制 劑阻斷這些神經(jīng)毒素產(chǎn)物的產(chǎn)生。因此，呋喃并吡啶衍生物可潛在地用于治療阿爾茨海默 氏病和相關(guān)神經(jīng)炎性疾病。另一報告（Y. Kuno等，Blood, 97，1050-1055 (2001))證明 Syk在惡性進(jìn)展中起重要作用。發(fā)現(xiàn)TEL-Syk融合蛋白轉(zhuǎn)變造血細(xì)胞，這暗示著其在造血惡 性腫瘤的發(fā)病機(jī)理中的作用。因此，呋喃并吡啶衍生物可用于治療某些類型的癌癥。
[0015] 在血液學(xué)惡性腫瘤中包括的其它蛋白質(zhì)酪氨酸激酶包括ABL (ABL1)、ARG (ABL2)、PDGF β R、PDGFaR、JAK2、TRKC、FGFR1、FGFR3、FLT3 和 FRK。
[0016] Janus激酶（JAK)是由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2組成的酪氨酸激酶家族。JAK在 細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。JAK激酶家族的下游底物包括信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子 (STAT)蛋白質(zhì)。JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)已經(jīng)涉及調(diào)解許多異常免疫反應(yīng)諸如過敏癥、哮喘、自 體免疫疾病如移植（同種異體移植）排斥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肌萎縮性側(cè)索硬化和多發(fā)性 硬化以及實(shí)體和血液惡性腫瘤如白血病和淋巴瘤（JAK/STAT途徑的醫(yī)藥干預(yù)的綜述，參見 Frank, Mol. Med. 5，432:456 (1999)和 Seidel 等，Oncogene 19，2645-2656 (2000))。 JAK2是在脊髓增生?。∕PD)的治療中具有強(qiáng)烈可能性的歷經(jīng)驗(yàn)證的靶標(biāo)，脊髓增生病包括 真性紅細(xì)胞增多癥（PV)、特發(fā)性血小板增多癥、慢性特發(fā)性骨髓纖維化、具有骨髓纖維化的 骨髓組織轉(zhuǎn)化、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓單核細(xì)胞性白血病、慢性嗜酸細(xì)胞性白血病、 嗜酸性白細(xì)胞增多綜合征和全身性肥大細(xì)胞病。
[0017] Fms樣酪氨酸激酶3 (FLT3)，亦稱作FLK-2 (胎肝激酶2)和STK-I (干細(xì)胞激酶 1)，在造血干細(xì)胞的增殖和分化中起重要作用。FLT3受體激酶在正常造血細(xì)胞、胎盤、生殖 腺和腦中表達(dá)。然而，該酶以非常高的水平在大于80%的骨髓性患者的細(xì)胞和部分急性淋 巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞中表達(dá)。另外，該酶還可在來自患有處于成淋巴細(xì)胞危象的慢性骨 髓性白血病的患者的細(xì)胞上見到。據(jù)報道FLT3激酶在30%的急性骨髓性白血?。ˋML)中 以及在急性淋巴母細(xì)胞性白血病（ALL)亞組中突變（Gilliland等，Blood 100，1532-1542 (2002) ;Stirewalt 等，Nat. Rev. Cancer, 3，650-665 (2003))。在 FLT3 中最常見的激活 突變是在膜旁區(qū)域內(nèi)的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)，而在激酶結(jié)構(gòu)域中的點(diǎn)突變、插入或刪除是不太常 見的。這些突變體FLT3激酶中的一些是組成性活性的。FLT3突變與預(yù)后差有關(guān)（Malempati 等，Blood, 104，11 (2004))。已經(jīng)在研發(fā)超過十幾個已知的FLT3抑制劑，且一些已經(jīng)顯 示出對 AML 有前途的臨床效果（Levis 等，Int. J. Hematol, 52，100-107 (2005))。
[0018] 已經(jīng)報道一些小分子FLT3抑制劑有效誘發(fā)具有FLT3激活突變的細(xì)胞系中的細(xì) 胞凋亡并有效延長在它們的骨髓細(xì)胞中表達(dá)突變體FLT3的小鼠的存活（Levis等，Blood， 99，3885-3891 (2002) ;Kelly等，Cancer Cell, 1，421-432 (2002) ;Weisberg等，Cancer Cell, 1，433-443 (2002) ;Yee 等，Blood, 100，2941-2949 (2002))。
[0019] 具體地講，本發(fā)明涉及化合物和化合物在其中抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)制由Syk引起的 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)起作用中的用途。
[0020] 因此，特別地抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)制由酪氨酸激酶、特別是Syk引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的 小化合物的合成是合乎需要的，并且是本發(fā)明的一個目標(biāo)。
[0021] 此外，本發(fā)明的目的在于合成用于預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性狼瘡、哮 喘、過敏性鼻炎、ITP、多發(fā)性硬化、白血病、乳腺癌和惡性黑素瘤的新化合物。我們驚奇地確 認(rèn)呋喃并吡啶選擇性地抑制SYK、BTK、KDR、Src、Zap70、Fak、Pyk2、Flt3或Jak或抑制這些 激酶的選擇。
[0022] 此外，式I化合物抑制絲氨酸激酶GCN2。
[0023] 實(shí)體腫瘤的癌癥治療的許多策略集中在盡可能地手術(shù)除去腫瘤塊且隨后通過放 射療法或用細(xì)胞毒素劑或更特異性靶向癌癥細(xì)胞途徑的抑制劑的化學(xué)療法根除任何殘留 的腫瘤細(xì)胞。然而，所述方法的成功是有限的且常常不能持久。這主要是由于所述細(xì)胞毒素 劑的窄治療窗（特異性和副作用）和癌癥細(xì)胞適應(yīng)由細(xì)胞毒素或其他抑制劑施加的選擇壓 力的能力。對初始治療獲得抗性的少量腫瘤（干）細(xì)胞的存活可足以播種腫瘤的再生長。 這些復(fù)發(fā)在多數(shù)情況下比初始腫瘤更難以治療。因此，更成功地靶向腫瘤細(xì)胞可能需要同 時靶向腫瘤細(xì)胞的多個存活和逃避機(jī)制（Muller & Prendegast 2007)。
[0024] 惡性腫瘤的發(fā)展伴隨著細(xì)胞生理學(xué)的主要參與。在該過程期間，癌癥細(xì)胞獲得多 種品質(zhì)，這些品質(zhì)是無限增殖化或?qū)ιL抑制信號不敏感的基礎(chǔ)。另外，腫瘤細(xì)胞還改進(jìn)與 微環(huán)境及其之外的相互作用。后一區(qū)域包括使腫瘤細(xì)胞從免疫監(jiān)視逃脫的策略（Muller & Prendegast 2007)。如由[Dunn等2004]綜述，該免疫監(jiān)視限制惡性腫瘤生長，但也提供觸 發(fā)逃避免疫反應(yīng)的機(jī)制進(jìn)化的選擇壓力?；旧弦呀?jīng)屢次觀察到T細(xì)胞免疫性的摘除足以 增加腫瘤發(fā)病率[Shankaran等，2001]，且認(rèn)為免疫逃避影響腫瘤休眠（相對于進(jìn)展），促進(jìn) 浸入和轉(zhuǎn)移且消極地影響治療反應(yīng)。數(shù)個機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)免疫逃避與在腫瘤微環(huán)境內(nèi)的新陳 代謝改變具有重要界面。此時，在介導(dǎo)對抗原的免疫耐受性方面的重要作用已經(jīng)與分別通 過酶吲哚胺2, 3-二加氧酶（ID0)和精氨酸酶I (ARG)進(jìn)行的必需氨基酸色氨酸和精氨酸的 分解代謝相關(guān)聯(lián)（Bronte 和 Zanovello, 2005 ;Muller 等，2005b ;Muller 和 Prendergast, 2007 ;Munn 和 Mellor, 2007 ;Popovic 等，2007)。
[0025] IDO是催化色氨酸降解成犬尿氨酸的單鏈氧化還原酶。IDO不負(fù)責(zé)分解代謝過量 的飲食色氨酸，而是調(diào)制在局部環(huán)境中的色氨酸水平。在癌癥患者中的色氨酸分解代謝升 高表明色氨酸或分解代謝物的顯著改變的血清濃度，且這與通常在腫瘤和引流淋巴結(jié)中升 高的ID0相互關(guān)聯(lián)。根據(jù)多個公開，ID0過度表達(dá)與癌癥的預(yù)后差相關(guān)聯(lián)[Okamoto等，2005 ; Brandacher 等，2006]。
[0026] T細(xì)胞似乎優(yōu)先對ID0激活敏感，因此當(dāng)色氨酸缺乏時，它們不能分開且結(jié)果不能 變得被對其呈現(xiàn)的抗原激活。Munn和Mellor及其同事揭露ID0通過抑制T細(xì)胞激活且通 過對腫瘤抗原產(chǎn)生周邊耐受性來調(diào)制免疫性（Mellor和Munn，2004)。這些機(jī)制涵蓋將腫瘤 細(xì)胞募集的免疫細(xì)胞破壞到其直接微環(huán)境中或腫瘤-引流淋巴結(jié)中。此時，由抗原呈遞細(xì) 胞清除的腫瘤抗原交叉呈遞到適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。除了直接產(chǎn)生耐受之外，成熟DC具有擴(kuò)展 調(diào)節(jié)T細(xì)胞（Treg)的能力[Moser 2003]。
[0027] 除色氨酸分解代謝外，精氨酸的轉(zhuǎn)化率在腫瘤條件的微環(huán)境中增加，且許多報道 指出對于在腫瘤生長和發(fā)展期間精氨酸的激活的作用。在腫瘤侵潤的骨髓細(xì)胞中，精氨酸 通過精氨酸酶I (ARG1)、精氨酸酶II (ARG2)轉(zhuǎn)化成脲和鳥氨酸，且通過可誘導(dǎo)形式的氧化 氮合酶（N0S2)氧化成瓜氨酸和氧化氮（N0)。
[0028] 增加的ARG活性在患有結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌的患者中屢次觀察到 [Cederbaum 2004]，其與在前列腺癌中發(fā)現(xiàn)的ARG和N0S的過度表達(dá)相互關(guān)聯(lián)[Keskinege 等，2001 ;Aaltoma等，2001 ;Wang等，2003]。已經(jīng)顯示在侵潤巨噬細(xì)胞中的ARG活性損害抗 原特異性T細(xì)胞反應(yīng)和CD3受體的表達(dá)。此外，在腫瘤關(guān)聯(lián)的骨髓細(xì)胞中ARG和N0S的累 積活性可對抗原特異性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抑制信號，這最后引起細(xì)胞凋亡[Bronte，2003 a; 2003b]。
[0029] IDO和ARG相關(guān)機(jī)制兩者在檢測各自氨基酸濃度的耗盡濃度的時間點(diǎn)合并。在 氨基酸剝奪期間，稱為一般性控制非不可抑制2 (general control nonderepressible 2 (GCN2))的eIF2激酶EIF2AK4與細(xì)胞內(nèi)聚積的脫?；痶RNA相互作用。因此，推測GCN2自 自抑制構(gòu)象變?yōu)榛钚詷?gòu)象，且由自磷酸化進(jìn)一步激活。然后，唯一已知的底物蛋白eIF2a變 成磷酸化，且因此翻譯起始復(fù)合物受到抑制[Harding等，2000]。這減少了一般性Cap依賴 性翻譯起始且由此減少相應(yīng)蛋白質(zhì)產(chǎn)生。另一方面，這主要通過Cap非依賴性起始經(jīng)由激 活轉(zhuǎn)錄因子4 (ATF4)誘發(fā)應(yīng)激相關(guān)靶基因的特異性表達(dá)。通過表達(dá)相應(yīng)的應(yīng)激反應(yīng)蛋白 質(zhì)如在氨基酸代謝中的酶，細(xì)胞試圖補(bǔ)償特定的細(xì)胞應(yīng)激[Wek等，2006]。如果該應(yīng)激持 續(xù)，則該途徑將切換到經(jīng)由轉(zhuǎn)錄促細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)錄因子、CCAAT/增強(qiáng)子-結(jié)合蛋白同源蛋白 質(zhì)（CHOP)而促進(jìn)細(xì)胞死亡[Oyadomari 2004]。已經(jīng)顯示，色氨酸缺乏觸發(fā)在改變eIF2a磷 酸化的T細(xì)胞中的GCN2依賴性應(yīng)激信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，和導(dǎo)致細(xì)胞生長停止的翻譯起始（Munn 等，2005)。Sharma等[2007]公開了成熟Treg的直接ID0誘發(fā)的且GCN2依賴的激活。類 似地，F(xiàn)allarino 等[2006]發(fā)現(xiàn) CD4+CD25-細(xì)胞經(jīng) GCN2 依賴性轉(zhuǎn)化成 CD25+FoxP3+ Treg， 生成IL-10和TGF。Rodriguez等[2007]確定經(jīng)由色氨酸或精氨酸消耗的GCN2途徑的激 活連同TCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致⑶3鏈下調(diào)、細(xì)胞周期停止和無反應(yīng)性。
[0030] 重要地，GCN2途徑不僅對于腫瘤免疫逃避是重要的，而且在直接調(diào)制腫瘤存活率 方面起活性作用。Ye等[2010]發(fā)現(xiàn)上述轉(zhuǎn)錄因子ATF4在人類實(shí)體腫瘤中過度表達(dá)，暗示 著在腫瘤進(jìn)展中的重要功能。氨基酸和葡萄糖剝奪是在實(shí)體腫瘤中見到的典型應(yīng)激且激活 GCN2途徑以上調(diào)與氨基酸合成和傳輸有關(guān)的ATF4靶基因。與正常組織相比較，在人類和小 鼠腫瘤中觀察到GCN2激活/過度表達(dá)和增加的磷酸-eIF2a，且ATF4或GCN2表達(dá)的廢除顯 著地抑制體內(nèi)腫瘤生長。推斷GCN2-eIF2a-ATF4途徑是維持在腫瘤細(xì)胞中的新陳代謝動態(tài) 平衡的關(guān)鍵。
[0031] 本發(fā)明的生物學(xué)全面干擾ARG/ID0途徑，其對通過適應(yīng)機(jī)制制動腫瘤免疫逃避具 有吸引力。GCN2功能的干擾在此特別重要，因?yàn)槠涫莾煞N途徑ID0和ARG的交合點(diǎn)，并且其 提供直接妨礙腫瘤新陳代謝的另外機(jī)會。
[0032] 已經(jīng)將數(shù)個途徑抑制劑視為免疫調(diào)制劑。這些抑制劑主要解決ID0或ARG蛋白質(zhì) 的酶促功能（Muller和Scherle，2006)。精氨酸酶抑制劑N-輕基-nor-L-Arg的施用阻斷 在小鼠中s.c. 3LL肺癌的生長[Rodriguez 2004]。已經(jīng)報道NO供體阿司匹林（aspirin) 如NCX 4016 (2-(乙酰氧基）苯甲酸3-(硝基氧基甲基）苯酯）干擾骨髓細(xì)胞的抑制酶 促活性?？诜┯肗O阿司匹林使荷瘤宿主的免疫狀況正?；?，增加腫瘤-抗原-特異性T 淋巴細(xì)胞的數(shù)目和功能并增強(qiáng)由癌癥接種引發(fā)的抗癌免疫性的預(yù)防和治療功效（DeSanto 2005)。
[0033] 在癌癥背景和其他設(shè)置中，底物類似物1-甲基-色氨酸（1MT)和相關(guān)分子已經(jīng)廣 泛用于祀向IDCLFriberg等（2002)和Uyttenhove等（2003)的研究證明1MT可限制過度表 達(dá)ID0的腫瘤的生長。然而，在數(shù)種腫瘤模型中，1MT不能引起腫瘤退化，這暗示著當(dāng)將ID0 抑制用作單一療法時僅有適度的抗癌功效。相比之下，1MT和多種細(xì)胞毒素化療劑的組合治 療引起已建立的MMTV-neu/HER2腫瘤的退化，所述腫瘤響應(yīng)任何單藥劑療法差[Muller等， 2005a]。在治療之前來自小鼠的CD4+或CD8+T細(xì)胞的免疫消耗廢除了在該模型中觀察到 的組合功效，證實(shí)對1MT經(jīng)由激活T細(xì)胞介導(dǎo)的抗癌免疫性間接起作用的期望。ID0靶向?qū)?1MT作用是必不可少的重要證據(jù)通過1MT在遺傳缺乏ID0的小鼠中缺乏抗癌活性的證明來 提供[Hou等，2007]。GCN2的抑制作用將使得能夠組合氨基酸缺乏誘發(fā)的免疫編輯的兩個 途徑分支，且將降低對于腫瘤的選擇以繞過任一分支的抑制作用。此外，如上詳述，GCN2抑 制作用提供干擾腫瘤新陳代謝的機(jī)會，同時可增強(qiáng)單一療法或與其它抗癌方法的組合療法 的功效。
[0034] 文獻(xiàn) 1. Aaltoma, S. Η. , Ρ. Κ. Lipponen和 V. Μ· Kosma. 2001. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression and its prognostic value in prostate cancer (可 誘導(dǎo)的一氧化氮合酶（iNOS)表達(dá)和其在前列腺癌中的預(yù)后價值）.Anticancer Res. 21:3101 - 3106. 2. Brandacher, G. ; Perathoner, A. ; Ladurner, R. ; Schneeberger, S. ; Obrist, P. ; Winkler, C. ; Werner, E. R. ; fferner-Felmayer, G. ; Weiss, H. G. ; Gobel, G.; Margreiter, R. ; Konigsrainer, A. ; Fuchs, D. ; Amberger, A. Prognostic value of indoleamine 2, 3- dioxygenase expression in colorectal cancer: effect on tumorinfiltrating T cells (H引哚胺2, 3-二氧酶表達(dá)在結(jié)腸直腸癌中的預(yù)后價值：作用 于腫瘤侵潤 T 細(xì)胞）· Clin. Cancer Res. 2006, 12, 1144-1151. 3. Bronte V, Zanovello P. (2005). Regulation of immune responses by L-arginine metabolism (通過 L_ 精氨酸代謝調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)）· Nat Rev Immunol 5: 641 - 654. 4. Bronte, V. , P. Serafini, C. De Santo, I. Mari go, V. Tosello, A. Mazzoni, D. M. Segal, C. Staib, M. Lowel, G. Sutter 等 2003a. IL_4_ induced arginase 1 suppresses alloreactive T cells in tumor-bearing mice (IL-4 誘導(dǎo)的精氨酸酶 1 阻 抑荷瘤小鼠中的同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞）.J. Immunol. 170:270 - 278. 5. Bronte, V·，P. Serafini, A. Mazzoni, D.M. Segal 和 P. Zanovello. 2003b. L-arginine metabolism in myeloid cells controls T-lymphocyte functions (骨髓細(xì) 胞中的L-精氨酸代謝控制T淋巴細(xì)胞功能）.Trends Immunol. 24:302 - 306 6. Carmel a De Santo, Paolo Serafini, Ilaria Marigo, Luigi Dolcetti, Manlio Bolla， § Piero Del Soldato， Cecilia Melani， Cristiana Guiducci， Mario P. Colombo, Manuela Iezzi, Piero Musiani， Paola Zanovello 和 Vincenzo Bronte. Nitroaspirin corrects immune dysfunction in tumor-bearing hosts and promotes tumor eradication by cancer vaccination (硝基阿司匹林校正荷瘤宿主中的免疫機(jī) 能障礙并通過癌癥疫苗促進(jìn)腫瘤根除）.Proc Natl Acad Sci U S A. 2005 March 15; 102(11): 4185 - 4190 7. Cederbaum，S.D·，H. Yu，W.W. Grody，R.M. Kern，P. Yoo 和凡1(.1761'.2004· Arginases I and II: do their functions overlap?(精氨酸酶 I 和 II:它們的功能重 疊嗎？）Mol. Genet. Metab. 81:S38 - 44. 8. Dey, M. , Cao，C., Sicheri，R 和 T.E. Dever. Conserved Intermolecular Salt Bridge Required for Activation of Protein Kinases PKR，GCN2，and PERK (蛋白激 酶PKR、GCN2和PERK的活化所需的保守分子間鹽橋）.JBC 282(9): 6653，2007. 9. Dunn, G. P. ; Old, L J. ; Schreiber，R. D. The immunobiology of cancer immunosurveillance and immunoediting (癌癥免疫監(jiān)視和免疫編輯的免疫生物學(xué)）· Immunity 2004， 21， 137-148. 10. Fallarino，F(xiàn). U. Grohmann，S. You, B. C.等 The combined effects fo tryptophan starvation and tryptophan catabolites down-regulate T cell receptor zeta-chain and induce a regulatory phenotype in naive T cells (色氨酸饑餓和色氨 酸分解代謝產(chǎn)物的組合作用下調(diào)T細(xì)胞受體ζ鏈并誘導(dǎo)天然T細(xì)胞中的調(diào)控表型）.J. Immunol. 176:6752，2006. 11. Friberg M， Jennings R， Alsarraj M， Dessureault S， Cantor A, Extermann M等（2002). Indoleamine 2,3-dioxygenase contributes to tumor cell evasion of T cell-mediated rejection (Π 引哚胺2, 3-二氧酶促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃脫T細(xì)胞介導(dǎo)的排斥）. Int. J Cancer 101: 151 - 155 12. Harding HP, Novoa I，Zhang Y，Zeng H，Wek R，Schapira M，Ron D. Regulated translation initiation controls stress-induced gene expression in ma_alian cells (受調(diào)控的翻譯起始控制哺乳動物細(xì)胞中應(yīng)激誘導(dǎo)的基因表達(dá)）.Mol Cell. 2000 Nov;6(5):1099-108. 13. Hou DY，Muller AJ，Sharma MD，DuHadaway J，Banerjee T，Johnson M 等(2007). Inhibition of indoleamine 2,3-dioxygenase in dendritic cells by stereoisomers of 1-methyl-tryptophan correlates with antitumor responses (樹 突細(xì)胞中通過1-甲基-色氨酸的立體異構(gòu)體的吲哚胺2, 3-二氧酶的抑制與抗腫瘤反應(yīng)有 關(guān)）· Cancer Res 67: 792 - 801. 14. Keskinege，A. , S. Elgun 和 E. Yilmaz. 2001. Possible implications of arginase and diamine oxidase in prostatic carcinoma (前列腺癌中可會巨涉及精氛酸 酶和二胺氧化酶）· Cancer Detect. Prev. 25:76 - 79. 15. Mellor AL，Munn DH. (2004). IDO expression by dendritic cells: tolerance and tryptophan catabolism (通過樹突細(xì)胞的IDO表達(dá)：耐受性和色氨酸代 謝）· Nat Rev Immunol 4: 762 - 774. 16. Moser, M. Dendritic cells in immunity and tolerance-do they display opposite functions?(樹突細(xì)胞的免疫性和耐受性-它們顯示相反的功能？） Immunity 2003, 19, 5-8. 17. Muller, A.J.和P.A. Scherle. Targeting the mechanisms of tumoral immune tolerance with small-molecule inhibitors (用小分子抑制劑祀向腫瘤免疫耐受性的機(jī) 制）· Nat. Rev. Cancer. 6:613，2006. 18. Muller AJ，Prendergast GC. (2007). Indoleamine 2,3-dioxygenase in immune suppression and cancer (免疫抑制和癌癥中的卩引哚胺2, 3-二氧酶）· Curr Cancer Drug Targets 7: 31 - 40. 19. Muller AJ, DuHadaway JB, Sutant〇-Ward E, Donover PS, Prendergast GC. (2005a). Inhibition of indoleamine 2, 3-dioxygenase, an immunomodulatory target of the tumor suppressor gene Binl，potentiates cancer chemotherapy (口引噪胺 2, 3-二氧酶（腫瘤抑制基因 Binl的一個免疫調(diào)節(jié)靶標(biāo)）的抑制使癌癥化學(xué)治療成為可 會巨）· Nature Med 11: 312-319. 20. Muller AJ, Malachowski WP, Prendergast GC. (2005b). Indoleamine 2, 3-dioxygenase in cancer: targeting pathological immune tolerance with small-molecule inhibitors (癌癥中的卩引哚胺2, 3-二氧酶：用小分子抑制劑祀向病理免 疫耐受性）· Expert Opin Ther Targets 9: 831 - 849. 21. Munn，D. Η. , M. D. Sharma，B. Baban，Η. P. Harding, Y. Zhang, D. Ron, A. L. Mellor. GCN2 kinase in T cells mediates proliferative arrest and anergy induction in response to indoleamine 2, 3-dioxygenase (在口向應(yīng)口引哚胺 2, 3_ 二氧酶 時T細(xì)胞中的GCN2激酶介導(dǎo)增殖停止和無反應(yīng)性誘導(dǎo)）.Immunity. 22:633，2005 22. Okamoto，A. ; Nikaido，T. ; Ochiai，K. ; Takakura，S. ; Saito，M. ; Aoki，Y.; Ishii，N. ; Yanaihara，N. ; Yamada，K. ; Takikawa, 0. ; Kawaguchi, R. ; Isonishi， S. ; Tanaka, T. ; Urashima，M. Indoleamine 2,3-dioxygenase serves as a marker of poor prognosis in gene expression profiles of serous ovarian cancer cells (在 血清卵巢癌細(xì)胞的基因表達(dá)概況中吲哚胺2, 3-二氧酶起預(yù)后差的標(biāo)記的作用）.Clin. Cancer Res. 2005，11，6030-6039. 23. Oyadomari S， Mori M. Roles of CH0P/GADD153 in endoplasmic reticulum stress (CH0P/GADD153 在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用）.Cell Death Differ. 2004 Apr; 11 (4) :381-9. 24. GC Prendergast， Immune escape as a fundamental trait of cancer: focus on IDO (作為癌癥基本特征的免疫逃脫：重點(diǎn)在于IDO). Oncogene (2008) 27，3889 - 3900 25. Popovic PJ，Zeh III HJ，Ochoa JB. (2007). Arginine and immunity (精氨 酸和免疫性）.J Nutr 137: 1681S- 1686 S. 26. Rodriguez, P. C. , D. G. Quiceno，J. Zabaleta，B. Ortiz, A. H. Zea，Μ. B. Piazuelo, A. Delgado, P. Correa, J. Brayer, E. M. Sotomayor, S. Antonia, J. B. Ochoa 和 A. C. Ochoa. Arginase I Production in the Tumor Microenvironment by Mature Myeloid Cells Inhibits T-Cell Receptor Expression and Antigen-Specific T-Cell Responses (腫瘤微環(huán)境中通過成熟骨髓細(xì)胞的精氨酸酶I的產(chǎn)生抑制T細(xì)胞受體表達(dá)和 抗原特異性Τ細(xì)胞反應(yīng)）.Cane. Res. 64:5839, 2004 27. Rodriguez, P. C. , D. G. Quiceno 和 A. C. Ochoa. L-arginine availability regulates T-lymphocyte cell-cycle progression (L_ 精氨酸利用度調(diào)節(jié) T 淋巴細(xì)胞循 環(huán)進(jìn)展）.Blood. 109:1568，2007. 28. Shankaran，V. ; Ikeda，Η. ; Bruce, A. Τ. ; White, J. M. ; Swanson, P. E.; Old, L J. ; Schreiber， R. D. IFNgamma and lymphocytes prevent primary tumour development and shape tumour immunogenicity (IFNy 和淋巴細(xì)胞阻止原發(fā)性腫瘤發(fā)生 并塑造腫瘤免疫原性）.Nature 2001，410，1107-1111. 29. Sharma，M. D.，B. Baban，P. Chandler，D_Y. Hou，N. Singh，H. Yagita，Μ. Azuma, B. R. Blazar, A. L. Mellor和D.H. Munn. Plasmacytoid dendritic cells from mouse tumor-draining lymph nodes directly activate mature Tregs via indoleamine 2, 3-dioxygenase (小鼠腫瘤-引流淋巴結(jié)的菜細(xì)胞樣樹突細(xì)胞通過卩引哚胺2, 3-二氧酶直 接活化成熟 Treg). J. Clin. Invest. 117:2570，2007. 30. Uyttenhove C, Pilotte L， Theate I， Stroobant V, Colau D， Parmentier N等 (2003). Evidence for a tumoral immune resistance mechanism based on tryptophan degradation by indoleamine 2, 3- dioxygenase (基于通過卩引哚胺 2, 3_二氧酶的色氨酸 降解的腫瘤免疫抵抗機(jī)制的證據(jù)）.Nat Med 9: 1269 - 1274 31. Wang，J·，Μ· Torbenson，Q. Wang，J.Y. Ro和Μ· Becich. 2003. Expression of inducible nitric oxide synthase in paired neoplastic and non-neoplastic primary prostate cell cultures and prostatectomy specimen (可誘導(dǎo)的一氧化氮 合酶在成對的腫瘤和非腫瘤原發(fā)性前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)物和前列腺切除術(shù)樣本中的表達(dá)）. Urol. Oncol. 21:117-122. 32. Wek RC， Jiang HY， Anthony TG. Coping with stress: eIF2 kinases and translational control (對抗應(yīng)激：eIF2 激酶和翻譯調(diào)控）.Biochem Soc Trans. 2006 Feb;34 (Pt 1) :7-11. 33. Ye J，Kumanova M，Hart LS， Sloane K， Zhang H，De Panis DN， Bobrovnikova-Marjon E， Diehl JA， Ron D， Koumenis C. The GCN2-ATF4 pathway is critical for tumour cell survival and proliferation in response to nutrient derivation (在響應(yīng)營養(yǎng)剝奪時，GCN2-ATF4途徑對腫瘤細(xì)胞存活和增殖而言是關(guān)鍵的）. EMBO J. 2010 Jun 16:29(12):2082-96.已經(jīng)發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的化合物及其鹽具有很高價 值的藥理學(xué)性質(zhì)，同時是非常耐受的。
[0035] 本發(fā)明特別涉及抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)制由Syk引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的式I化合物，包含 這些化合物的組合物及其用于治療Syk誘發(fā)的疾病和癥狀（complaint)的方法。
[0036] 所述式I化合物另外可用于分離和研究Syk的活性或表達(dá)。另外，它們特別適合 用于與Syk活性失調(diào)或紊亂有關(guān)的疾病的診斷方法。
[0037] 宿主或患者可屬于任何哺乳動物物種，例如靈長類物種，特別為人類；嚙齒動物， 包括小鼠、大鼠和倉鼠；兔；馬、牛、狗、貓等。動物模型具有實(shí)驗(yàn)研究的意義，提供治療人類 疾病的模型。
[0038] 特定細(xì)胞對于用根據(jù)本發(fā)明的化合物治療的敏感性可通過體外試驗(yàn)測定。通常， 將細(xì)胞的培養(yǎng)物與以各種濃度的根據(jù)本發(fā)明的化合物混合足以允許活性劑（例如抗IgM) 誘發(fā)細(xì)胞反應(yīng)（例如表面標(biāo)志物的表達(dá)）的一段時間，通常約1小時-1周。體外試驗(yàn)可使 用來自血液或來自活檢樣品的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行。所表達(dá)的表面標(biāo)志物的量通過流式細(xì)胞術(shù)使 用識別該標(biāo)志物的特異性抗體來評價。
[0039] 劑量根據(jù)所使用的具體化合物、具體疾病、患者狀況等而不同。治療劑量典型地足 以顯著減少目標(biāo)組織中不想要的細(xì)胞群體，同時維持患者的成活力。該治療通常持續(xù)到出 現(xiàn)顯著的減少，例如細(xì)胞負(fù)荷減少至少約50%，且可持續(xù)到在體內(nèi)基本上不再檢出不想要的 細(xì)胞。
[0040] 對于細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的確認(rèn)和在各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之間的相互作用的檢測，多 個科學(xué)家已經(jīng)研發(fā)了合適的模型或模型系統(tǒng)，例如細(xì)胞培養(yǎng)模型（例如，Khwaja等， ΕΜΒ0，1997，16，2783-93)和轉(zhuǎn)基因動物模型（例如，White 等，Oncogene, 2001，20， 7064-7072)。為了測定信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)的某些階段，可利用相互作用化合物以調(diào)制信號（例 如，Stephens等，Biochemical J·，2000，351，95-105)。根據(jù)本發(fā)明的化合物也可用作 用于試驗(yàn)在動物和/或細(xì)胞培養(yǎng)模型中或在本申請中提到的臨床疾病中的激酶依賴性信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的試劑。
[0041] 激酶活性的測量是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的技術(shù)。用于使用底物如組蛋白（例如 Alessi 等，F(xiàn)EBSAlessi 等，F(xiàn)EBSLett. 1996，399，3,第 333-338 頁）或堿性髓磷脂蛋白 質(zhì)測定激酶活性的通用試驗(yàn)系統(tǒng)描述在文獻(xiàn)中（例如，Campos-Gonzdilez, R.和Glenney, Jr·，J.R. 1992，J. Biol. Chem. 267,第 14535 頁）。
[0042] 對于激酶抑制劑的確認(rèn)，可利用各種測定系統(tǒng)。在閃爍迫近測定（Sorg等，J. of. Biomolecular Screening, 2002，7，11-19)和 flashplate 測定中，測量用 γΑΤΡ 使作為 底物的蛋白質(zhì)或肽的放射性磷酸化。在抑制化合物存在下，可檢測到放射性信號減小或檢 測不到。另外，均勻時間分辨熒光共振能量傳遞（HTR-FRET)和熒光極化（FP)技術(shù)適合作 為測定方法（Sills 等，J. of Biomolecular Screening, 2002，191-214)。
[0043] 其他非放射性ELISA測定方法使用特異性磷酸-抗體（磷酸-AB)。該磷酸-AB僅 結(jié)合磷酸化底物。該結(jié)合可通過化學(xué)發(fā)光使用第二過氧化物酶-綴合的抗-綿羊抗體檢測 (Ross 等，2002，Biochem. J·)。 現(xiàn)有技術(shù)
[0044] 其它大環(huán)嘧啶衍生物在W0 2010/028116 A1中公開為極光（aurora)激酶抑制劑。
[0045] 發(fā)明概述 本發(fā)明涉及式I的化合物及其藥學(xué)上有用的溶劑合物、鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體， 包括其以所有比率的混合物
【權(quán)利要求】
其中：
1. 式I化合物及其藥學(xué)上可接受的溶劑合物、鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其以 所有比率的混合物，

表示亞苯基或2, 3-二氫-吲哚-1，6-二基，其各自未被取代或被0A單取代， X表示Hal, Y表示具有1、2、3或4個C原子的烷基， U 表示（CHJnNfco、（α^ρΜΚα^ρΟα^ΗΟΗ'ΝΗακα^ρΟΚα^ηΝ?^α)·2、（ch2) nCONR1、0 (CH2) pCONR1、NRiCONRSCHI^CONR1、SC^NR1 (CH2) pCONR1 或 0 (CH2) pNfCO， L2 表示 0 (CH2) p、（CH2) ##(：0、0 (CH2) pNfCO、Cffi^NfCO 或 CHR3NR4C0， R1表示H或甲基， R2表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、嗎啉基、2, 3-二氫-吡唑基、1，2-二氫-吡啶基或四 氫吡喃基，其各自未被取代或被A和/或=0單取代或二取代， R3和R4 -起表示具有2、3或4個CH2基團(tuán)的亞烷基鏈， R5表不A或節(jié)基， A表示具有1-10個C原子的非支鏈或支鏈的烷基，其中1-7個Η原子可被F置換和/ 或其中一個或兩個不相鄰的CH和/或CH2基團(tuán)可被0或Ν置換， Hal 表示 F、Cl、fc 或 I， η 表示 0、1、2、3 或 4， Ρ表示1、2、3或4。
2. 權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的溶劑合物、鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體， 包括其以所有比率的混合物，所述化合物選自




)
3.制備權(quán)利要求1-2的式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立 體異構(gòu)體的方法，其特征在于使式II化合物環(huán)化， 其中

(和Y具有在權(quán)利要求1中指出的含義， 和/或 使所述式I的堿或酸轉(zhuǎn)化成其鹽中的一種。
4. 藥物組合物，其包含至少一種式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互 變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其以所有比率的混合物，及任選藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑 或媒劑。
5. 式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其以 所有比率的混合物，其用于治療和/或預(yù)防炎性病況、免疫病況、自體免疫病況、過敏病況、 風(fēng)濕性病況、血栓性病況、癌癥、感染、神經(jīng)退化性疾病、神經(jīng)炎性疾病、心血管疾病及新陳 代謝病況，方法包括向有需要的受試者施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。
6. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防癌癥， 其中所述欲治療的癌癥為實(shí)體腫瘤或血液和免疫系統(tǒng)的腫瘤。
7. 權(quán)利要求6的化合物，其中所述實(shí)體腫瘤來源于以下的腫瘤：上皮組織、膀胱、胃、 腎、頭頸部、食管、宮頸、甲狀腺、腸管、肝、腦、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系統(tǒng)、胃、喉頭、骨骼 包括軟骨肉瘤和Ewing肉瘤、生殖細(xì)胞包括胚組織腫瘤和/或肺，來自單核細(xì)胞白血病、肺 腺癌、小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、纖維神經(jīng)瘤、血管肉瘤、乳腺癌和/或惡性黑素 瘤。
8. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性狼瘡、哮 喘、多發(fā)性硬化、骨關(guān)節(jié)炎、缺血性損傷、巨細(xì)胞動脈炎、炎性腸病、糖尿病、囊性纖維化、銀 屑病、Sj5grens綜合征和移植器官排斥的疾病。
9. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防選自阿爾茨海默氏病、唐氏綜合征、具 有淀粉樣變性-Dutch型的遺傳性腦出血、淀粉樣腦血管病、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、額 顳性癡呆、亨廷頓氏病、帕金森氏病的疾病。
10. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防選自利什曼原蟲；分枝桿菌，包括麻 風(fēng)分支桿菌、結(jié)核分支桿菌和/或鳥分支桿菌；利什曼原蟲；瘧原蟲；人類免疫缺陷病毒； 愛潑斯坦-巴爾氏病毒；單純皰疹病毒；丙肝病毒的疾病。
11. 藥物組合物，其包含至少一種式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物和 立體異構(gòu)體，包括其以所有比率的混合物，及至少一種另外的藥物活性成分。
12.套盒（試劑盒），其由以下單獨(dú)的包裝組成： (a) 有效量的式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、鹽和立體異構(gòu)體，包 括其以所有比率的混合物， 和 (b) 有效量的另一藥物活性成分。
【文檔編號】A61K31/506GK104254531SQ201280070330
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2012年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月21日
【發(fā)明者】H.余, L.C.德塞爾姆 申請人:默克專利股份公司