加氏乳桿菌菌株及其用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種菌株，該菌株為加氏乳桿菌（Lactobacillus?gasseri）的菌株，其特征在于，該菌株的保藏號(hào)為CGMCC?No.6361。本發(fā)明還提供了上述菌株在制備用于預(yù)防和/或治療陰道炎的藥物中的用途、在制備陰道護(hù)理用品中的用途和在制備外生殖器衛(wèi)生用品中的用途。通過(guò)上述技術(shù)方案，本發(fā)明能夠有效地實(shí)現(xiàn)對(duì)多種致病菌的拮抗作用。此外，本發(fā)明的菌株還具有更高的對(duì)陰道上皮細(xì)胞的粘附能力。因而本發(fā)明的菌株能夠較好地滿(mǎn)足實(shí)際的臨床應(yīng)用需求。
【專(zhuān)利說(shuō)明】加氏乳桿菌菌株及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地，涉及一種加氏乳桿菌的菌株以及該菌株的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]健康婦女陰道中存在著一些優(yōu)勢(shì)菌群，這些優(yōu)勢(shì)菌群對(duì)維持陰道正常菌群的平衡起著關(guān)鍵的作用。優(yōu)勢(shì)菌群通過(guò)分泌乳酸、過(guò)氧化氫、細(xì)菌素等物質(zhì)起到殺滅致病菌的作用。同時(shí)，在陰道粘膜上皮細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)黏附作用起到生物屏障的作用，阻止了致病菌在陰道的繁殖。
[0003]但是抗生素的使用、不良衛(wèi)生習(xí)慣、環(huán)境、放化療、精神壓力等諸多原因可以破壞陰道正常菌群平衡，使優(yōu)勢(shì)菌群數(shù)量減少，致病菌大量繁殖，而導(dǎo)致各種陰道疾病如細(xì)菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經(jīng)性陰道炎、老年性陰道炎、混合感染性陰道炎等。[0004]通過(guò)外源菌的介入來(lái)恢復(fù)陰道乳桿菌優(yōu)勢(shì)，從而達(dá)到正常陰道菌群的平衡狀態(tài)是預(yù)防和/或治療陰道炎癥的一種有效手段。但是，已知的外源菌對(duì)致病菌的拮抗作用仍然較弱，難以滿(mǎn)足實(shí)際的臨床應(yīng)用需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種對(duì)致病菌的拮抗作用較強(qiáng)的外源菌菌株，該菌株能夠較好地滿(mǎn)足實(shí)際的臨床應(yīng)用需求。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的發(fā)明人從志愿者的陰道中分離得到了一株乳桿菌，出乎意料地發(fā)現(xiàn)該乳桿菌菌株具有較強(qiáng)的對(duì)致病菌的拮抗作用，由此得到了本發(fā)明。
[0007]一方面,本發(fā)明提供了一種菌株,該菌株為加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)的菌株，其特征在于，該菌株的保藏號(hào)為CGMCC N0.6361。
[0008]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備用于預(yù)防陰道炎的藥物中的用途。
[0009]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備用于治療陰道炎的藥物中的用途。
[0010]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備陰道護(hù)理用品中的用途。
[0011]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備外生殖器衛(wèi)生用品中的用途。
[0012]通過(guò)上述技術(shù)方案，本發(fā)明能夠有效地實(shí)現(xiàn)對(duì)多種致病菌的拮抗作用。此外，本發(fā)明的菌株還具有更高的對(duì)陰道上皮細(xì)胞的粘附能力以及更高的產(chǎn)乳酸能力。因而本發(fā)明的菌株能夠較好地滿(mǎn)足實(shí)際的臨床應(yīng)用需求。
[0013]本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說(shuō)明。
[0014]生物保藏
[0015]本發(fā)明的加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri )菌株,于2012年7月17日被保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼:100101)(保藏單位的縮寫(xiě)為CGMCC)，保藏編號(hào)為CGMCC N0.6361ο【具體實(shí)施方式】
[0016]以下對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的【具體實(shí)施方式】?jī)H用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0017]—方面,本發(fā)明提供了一種菌株,該菌株為加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)的菌株，其特征在于，該菌株的保藏號(hào)為CGMCC N0.6361。
[0018]其中，該菌株具有SEQ ID NO:1所示的16S rDNA序列。16S rDNA序列是編碼16SrRNA的DNA序列，在菌株的分類(lèi)和/或鑒定上具有重要的參考價(jià)值。
[0019]其中，該菌株在MRS固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)為圓形菌落，直徑0.5-0.75mm，表面粗糙，在顯微鏡下呈革蘭氏染色陽(yáng)性短桿菌。
[0020]其中，該菌株的培養(yǎng)條件可以采用已知的加氏乳桿菌的培養(yǎng)方法，例如，該菌株可以在MRS液體培養(yǎng)基和MRS固體培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)。其中，該菌株的生長(zhǎng)溫度可以為常規(guī)的溫度，例如，生長(zhǎng)溫度可以為36-38°C。
[0021]本發(fā)明中，MRS液體培養(yǎng)基是指由IOg的蛋白胨、5g的酵母膏、IOg的牛肉膏、20g的葡萄糖、5g的乙酸鈉、2g的檸檬酸銨、ImL的吐溫-80、0.58g的MgSO4.7H20、0.25g的MnSO4 *4H20,2g的K2HPO4和1000mL的蒸餾水混合，調(diào)節(jié)pH值為6.2-6.4并且經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌后得到的培養(yǎng)基。
[0022]本發(fā)明中，MRS固體培養(yǎng)基是指由IOg的蛋白胨、5g的酵母膏、IOg的牛肉膏、20g的葡萄糖、5g的乙酸鈉、2g的檸檬酸銨、ImL的吐溫-80、0.58g的MgSO4.7H20、0.25g的MnSO4.4H20、2g的K2HP04、20g的瓊脂粉和1000mL的蒸餾水混合，調(diào)節(jié)pH值為6.2-6.4并且經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌后得到的培養(yǎng)基。
[0023]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備用于預(yù)防陰道炎的藥物中的用途。
[0024]其中，所述陰道炎可以為細(xì)菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經(jīng)性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
[0025]其中，所述陰道炎可以為白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發(fā)的陰道炎。
[0026]其中，上述菌株可以通過(guò)如下方式發(fā)揮預(yù)防陰道炎的作用:(I)在MRS液體培養(yǎng)基中接種上述菌株，并且培養(yǎng)為菌體濃度為IO7個(gè)菌體/每mL，即得到上述菌株的培養(yǎng)液；(2)用無(wú)菌衛(wèi)生棉球蘸取上述培養(yǎng)液，擦拭陰道，每天1-2次，每次使用3-10mL的培養(yǎng)液。SP，上述菌株的培養(yǎng)液即可作為用于預(yù)防陰道炎的藥物。
[0027]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備用于治療陰道炎的藥物中的用途。
[0028]其中，所述陰道炎為細(xì)菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經(jīng)性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
[0029]其中，所述陰道炎可以為白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發(fā)的陰道炎。
[0030] 其中，上述菌株可以通過(guò)如下方式發(fā)揮治療陰道炎的作用:(I)在MRS液體培養(yǎng)基中接種上述菌株，并且培養(yǎng)為菌體濃度為IO7個(gè)菌體/每mL，即得到上述菌株的培養(yǎng)液；(2)用無(wú)菌衛(wèi)生棉球蘸取上述培養(yǎng)液，擦拭陰道，每天1-2次，每次使用3-10mL的培養(yǎng)液。SP，上述菌株的培養(yǎng)液即可作為用于治療陰道炎的藥物。
[0031]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備陰道護(hù)理用品中的用途。
[0032]另一方面，本發(fā)明還提供了上述菌株在制備外生殖器衛(wèi)生用品中的用途。
[0033]以下將通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0034]測(cè)試實(shí)施例1
[0035]按照文獻(xiàn)(16S rDNA快速鑒定血液制品中污染細(xì)菌的測(cè)序方法的建立，應(yīng)燕玲等，中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2009年10期)中的方法，對(duì)本發(fā)明的加氏乳桿菌菌株CGMCCN0.6361的16S rDNA的序列進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果證實(shí)對(duì)本發(fā)明的加氏乳桿菌菌株具有SEQID NO:1所示的16S rDNA序列。
[0036]實(shí)施例1[0037]本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的菌株對(duì)白色念珠菌(Candida albicans)的拮抗作用。本實(shí)施例中所用的白色念珠菌為購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為10231的菌株。
[0038]將加氏乳桿菌CGMCC N0.6361用MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)為菌體濃度I X 107CFU/mL的培養(yǎng)液，命名為培養(yǎng)液A。
[0039]將白色念珠菌(Candida albicans)用MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)為菌體濃度I X IO7CFU/mL的培養(yǎng)液，命名為培養(yǎng)液B。
[0040]將上述培養(yǎng)液A和上述培養(yǎng)液B等體積混合作為實(shí)驗(yàn)組，將單獨(dú)的上述培養(yǎng)液B作為對(duì)照組。
[0041]分別將ImL的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組培養(yǎng)液，接種到150mL的MRS液體培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24小時(shí)，得到共培養(yǎng)的培養(yǎng)液。
[0042]分別取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的共培養(yǎng)培養(yǎng)液100 μ L，接種到15mL白色念珠菌選擇性培養(yǎng)基平板中(沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，購(gòu)自青島高科技園海博生物技術(shù)有限公司，貨號(hào):HB0235-5)中，37°C下選擇培養(yǎng)24小時(shí)，然后對(duì)白色念珠菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。
[0043]計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組的白色念珠菌菌體濃度僅為1.70 X 106CFU/mL,而對(duì)照組的白色念珠菌菌體濃度高達(dá)4.67X 106CFU/mL。
[0044]對(duì)比例I
[0045]按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行測(cè)試，不同的是，將實(shí)施例1中的加氏乳桿菌CGMCCN0.6361分別替換為購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌。
[0046]計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，對(duì)于購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌，實(shí)驗(yàn)組的白色念珠菌菌體濃度也達(dá)到了 3.09 X IO6CFUAiL，而對(duì)照組的白色念珠菌菌體濃度仍為
4.67X 106CFU/mL。
[0047]實(shí)施例2
[0048]本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的菌株對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli)的拮抗作用。本實(shí)施例中所用的大腸桿菌為購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為35218的菌株。
[0049]將加氏乳桿菌CGMCC N0.6361用MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)為菌體濃度I X 107CFU/mL的培養(yǎng)液，命名為培養(yǎng)液A。
[0050]將大腸桿菌(Escherichia coli)用MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)為菌體濃度I X IO7CFU/mL的培養(yǎng)液，命名為培養(yǎng)液B。
[0051]將上述培養(yǎng)液A和上述培養(yǎng)液B等體積混合作為實(shí)驗(yàn)組，將單獨(dú)的上述培養(yǎng)液B作為對(duì)照組。
[0052]分別將ImL的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組培養(yǎng)液，接種到150mL的MRS液體培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24小時(shí)，得到共培養(yǎng)的培養(yǎng)液。
[0053]分別取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的共培養(yǎng)培養(yǎng)液100 μ L，接種到15mL大腸桿菌選擇性培養(yǎng)基平板中(曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，購(gòu)自青島高科技園海博生物技術(shù)有限公司，貨號(hào):HB7010)中，37°C下選擇培養(yǎng)24小時(shí)，然后對(duì)大腸桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。
[0054]計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組的大腸桿菌菌體濃度僅為6.45X 107CFU/mL,而對(duì)照組的大腸桿菌菌體濃度高達(dá)2.04X 108CFU/mL。
[0055]對(duì)比例2
[0056]按照實(shí)施例2的方法進(jìn)行測(cè)試，不同的是，將實(shí)施例1中的加氏乳桿菌CGMCCN0.6361分別替換為購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌。
[0057]計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，對(duì)于購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌，實(shí)驗(yàn)組的大腸桿菌菌體濃度也達(dá)到了 1.04X 108CFU/mL,而對(duì)照組的大腸桿菌菌體濃度仍為2.04X IO8CFU/mL。
[0058]實(shí)施例3
[0059]本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的菌株對(duì)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的拮抗作用。本實(shí)施例中所用的金黃色葡萄球菌為購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為25923的菌株。
[0060]將加氏乳桿菌CGMCC N0.6361用MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)為菌體濃度I X 107CFU/mL的培養(yǎng)液，命名為培養(yǎng)液A。
[0061]將金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)用MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)為菌體濃度
IX 107CFU/mL的培養(yǎng)液，命名為培養(yǎng)液B。
[0062]將上述培養(yǎng)液A和上述培養(yǎng)液B等體積混合作為實(shí)驗(yàn)組，將單獨(dú)的上述培養(yǎng)液B作為對(duì)照組。
[0063]分別將ImL的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組培養(yǎng)液，接種到150mL的MRS液體培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)24小時(shí)，得到共培養(yǎng)的培養(yǎng)液。
[0064]分別取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的共培養(yǎng)培養(yǎng)液100 μ L，接種到15L的金黃色葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基平板上(甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基，購(gòu)自青島高科技園海博生物技術(shù)有限公司，貨號(hào):ΗΒ4128-1)中，37°C下選擇培養(yǎng)24小時(shí)，然后對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。
[0065]計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組的金黃色葡萄球菌菌體濃度僅為2.04X 107CFU/mL,而對(duì)照組的金黃色葡萄球菌菌體濃度高達(dá)7.94X 107CFU/mL。
[0066]對(duì)比例3
[0067]按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行測(cè)試，不同的是，將實(shí)施例1中的加氏乳桿菌CGMCCN0.6361分別替換為購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌。
[0068]計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，對(duì)于ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌，實(shí)驗(yàn)組的金黃色葡萄球菌菌體濃度也達(dá)到了 3.54X 107CFU/mL，而對(duì)照組的金黃色葡萄球菌菌體濃度仍為
7.94X 107CFU/mL。
[0069]根據(jù)實(shí)施例1-3和對(duì)比例1-3的結(jié)果可以看出，本發(fā)明的加氏乳桿菌CGMCCN0.6361對(duì)白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)具有優(yōu)異的拮抗作用。
[0070]實(shí)施例4
[0071]本實(shí)施例按照文獻(xiàn)(王紅艷，嗜酸乳桿菌對(duì)生殖道上皮細(xì)胞的黏附和黏附拮抗作用的研究，中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2004年10月第24卷第10期)中的方法測(cè)定本發(fā)明的加氏乳桿菌CGMCC N0.6361對(duì)陰道上皮細(xì)胞的粘附能力。
[0072]經(jīng)測(cè)定，本發(fā)明的加氏乳桿菌CGMCC N0.6361對(duì)陰道上皮細(xì)胞的粘附指數(shù)為
14.34±2.38。
[0073]對(duì)比例4
[0074]按照實(shí)施例4的方法測(cè)定購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌。
[0075]經(jīng)測(cè)定，購(gòu)自ATCC的 商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌對(duì)陰道上皮細(xì)胞的粘附指數(shù)為
11.64±1.47。
[0076]根據(jù)實(shí)施例4和對(duì)比例4的結(jié)果可以看出，本發(fā)明的加氏乳桿菌CGMCC N0.6361具有更高的對(duì)陰道上皮細(xì)胞的粘附能力。
[0077]實(shí)施例5
[0078]本實(shí)施例按照文獻(xiàn)(樊永紅，王麗，柳丹，等.米根霉發(fā)酵液中乳酸含量的測(cè)定方法研究[J].生物技術(shù)，2007,17 (I):54-55)中的方法測(cè)定本發(fā)明的加氏乳桿菌CGMCCN0.6361的乳酸含量。
[0079]結(jié)果本發(fā)明的加氏乳桿菌CGMCC N0.6361的乳酸含量為6.7258g/L。
[0080]對(duì)比例5
[0081]按照實(shí)施例5的方法測(cè)定購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌的乳酸含量。
[0082]經(jīng)測(cè)定，購(gòu)自ATCC的商品號(hào)為9857的加氏乳桿菌的乳酸含量是6.6683g/L。
[0083]根據(jù)實(shí)施例5和對(duì)比例5的結(jié)果可以看出，本發(fā)明的加氏乳桿菌CGMCCN0.6361具有更高的產(chǎn)乳酸能力。
[0084]以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0085]另外需要說(shuō)明的是，在上述【具體實(shí)施方式】中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過(guò)任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說(shuō)明。
[0086]此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開(kāi)的內(nèi)容。
【權(quán)利要求】
1.一種菌株,該菌株為加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri )的菌株,其特征在于,該菌株的保藏號(hào)為CGMCC N0.6361。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌株，其中，該菌株具有SEQID N0:1所示的16S rDNA序列。
3.權(quán)利要求1或2所述的菌株在制備用于預(yù)防陰道炎的藥物中的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中，所述陰道炎為細(xì)菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經(jīng)性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途,其中，所述陰道炎為白色念珠菌(Candidaalbicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發(fā)的陰道炎。
6.權(quán)利要求1或2所述的菌株在制備用于治療陰道炎的藥物中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中，所述陰道炎為細(xì)菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經(jīng)性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途,其中，所述陰道炎為白色念珠菌(Candidaalbicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發(fā)的陰道炎。
9.權(quán)利要求1或2所述的菌株在制備陰道護(hù)理用品中的用途。
10.權(quán)利要求1或2所述的菌株在制備外生殖器衛(wèi)生用品中的用途。
【文檔編號(hào)】A61P33/02GK103911309SQ201310004366
【公開(kāi)日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2013年1月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月5日
【發(fā)明者】張文杰 申請(qǐng)人:欣力菲生物醫(yī)藥技術(shù)（天津）有限公司