專利名稱：一種高純度穿山龍總皂苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥成分的制備方法，特別是一種高純度穿山龍總皂苷的制備方法。
背景技術(shù)：
穿山龍為薯菌科(iT/oscoreaceae)植物穿山薯菌(Af1Scoreanipponica Makino)的干燥根莖，別名穿龍骨、穿地龍、狗山藥、穿山骨、地龍骨、串山龍等，主產(chǎn)于遼寧、吉林、黑龍江、河北、內(nèi)蒙古、山西、陜西等省及自治區(qū)。穿山龍藥材氣微、味苦澀、性溫，具有活血舒筋、消食利水、祛痰截瘧和祛風(fēng)止痛的功效，常用于治療風(fēng)寒濕痹、慢性氣管炎、消化不良、勞損扭傷和瘧疾等癥?，F(xiàn)代藥理學(xué)證明，穿山龍總皂苷具有調(diào)節(jié)免疫、治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、改善心腦血管功能、祛痰、抗腫瘤等多種藥理作用。為了對穿山龍總皂苷進行更深入的藥理活性與作用機制研究，為了實現(xiàn)穿山龍總皂苷的推廣和應(yīng)用，建立一種簡單、有效的總皂苷純化工藝具有重要意義。從穿山龍中提取穿山龍總皂苷一般采用傳統(tǒng)的柱色譜法，如大孔樹脂柱色譜、硅膠柱色譜、聚酰胺色譜柱等。利用該方法對穿山龍中的總皂苷進行分離，不僅費時費力，而且分離過程中所使用的有機試劑還會對環(huán)境造成污染，同時上述色譜柱對樣品均存在一定程度的、不可逆的吸附作用。因此現(xiàn)在需要一種能夠解決上述問題的新型穿山龍總皂苷的制備方法
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述不足，提出一種簡單有效、綠色環(huán)保的從穿山龍中提取穿山龍總皂苷的方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:一種高純度穿山龍總皂苷的制備方法，其特征在于:
a、取穿山龍，按照質(zhì)量體積比為lg:6-10mL的比例向穿山龍中加入濃度為60%_80%的乙醇，進行熱提取，熱提取時間為l_3h，將提取液減壓濃縮至浸膏，
b、將提取物浸膏與純水進行混合并混勻，純水的體積為浸膏體積的3倍以上，在(TC -4°C的條件下低溫靜置直至分層，棄去上層溶液，重復(fù)浸膏與純水混合后的步驟3-5次，干燥至粉末狀，獲得目標(biāo)成分。所述的熱提取是在加熱回流的狀態(tài)下進行熱提取。所述的熱提取操作需進行2-3次，并將每次熱提取操作后的提取液合并，減壓濃
縮至浸膏。所述的干燥采用的是冷凍真空干燥法。本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點:
傳統(tǒng)的穿山龍總皂苷的制備方法為柱色譜法，這種方法費時費力，并且在制備過程中需要使用某些有機試劑，如果不對這些有機試劑進行處理則會對周圍環(huán)境造成污染，但處理這些有機試劑則會增加成本；同時一部分樣品還會媳婦在色譜柱上，降低回收率。而本種穿山龍總皂苷的分離制備方法相比于傳統(tǒng)的柱色譜法，具有節(jié)省操作步驟、不需使用有機試劑、綠色環(huán)保等優(yōu)點，為穿山龍的總皂苷提取提出了全新的思路和方向。


圖1為穿山龍總皂苷含量測定中以薯蕷皂苷為對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2為薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品用香草醛-高氯酸法顯色后的紫外掃描圖。圖3為穿山龍總皂苷樣品用香草醛-高氯酸法顯色后的紫外掃描圖。
具體實施例方式下面將說明本發(fā)明的具體實施方式
。首先取穿山龍，為了保證提取效果，穿山龍應(yīng)切成1-2_厚度均勻的切片，或粉碎成粉末狀后進行操作，向穿山龍中加入濃度為60%-80%的乙醇，穿山龍和乙醇的質(zhì)量體積比為Ig:6-10mL，并在加熱回流的狀態(tài)下進行熱提取，熱提取時間為l_3h，熱提取的次數(shù)為2-3次，將每次熱提取后所獲得的提取液進行合并，并減壓濃縮至浸膏；然后將浸膏與純水混合均勻，添加的純水的體積為浸膏體積的3倍以上，將混合后的液體在(TC -4°C的條件下低溫靜置，待分層后棄去上層溶液，重新按照上述步驟加入純水進行水洗操作，進行3-5次水洗操作后，將產(chǎn)物用冷凍真空干燥法干燥至粉末狀，獲得目標(biāo)成分。為了檢測目標(biāo)成分中總皂苷的含量，利用薯蕷皂苷作為對照品，采用香草醛-高氯酸比色法對目標(biāo)成分中的總皂苷含量進行測定。實施例一
取穿山龍藥材800 g， 全部切成厚度為Imm的片狀，用4800 mL濃度為60%的乙醇加熱回流提取2次，每次2.0 h，將合并后的提取液在60°C的條件下減壓濃縮至浸膏1000 mL ；然后IOOOmL將提取物浸膏1000 mL與3000 mL純水混勻，4°C靜置分層，棄去上層液體，繼續(xù)加入純水清洗，重復(fù)3次，最后冷凍干燥得到目標(biāo)成分30.3 g，得率為3.78%。稱取薯蕷皂苷對照品10.72 mg，加甲醇定容于50 mL量瓶中，分別取對照品0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8和0.9 mL置于具塞試管中，揮干溶劑，分別加入0.8 mL的高氯酸和
0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混勻、密塞。于60°C水浴顯色20 min。取出后立即以冰水冷卻5 min，再加入5.0 mL冰醋酸搖勻。靜置10 min，以空白試劑做參比，測定吸光度。以吸光度值為縱坐標(biāo)(y)，薯蕷皂苷的濃度為橫坐標(biāo)(X)進行線性回歸，得回歸方程y=26.662x — 0.0612 (R2=0.9991)。標(biāo)準(zhǔn)曲線見附圖1。分別稱取3份約10 g樣品置于50 mL容量瓶中，采用甲醇溶液溶解樣品并定容。精密量取樣品溶液0.5 mL置于具塞試管中，每個樣品重復(fù)6份。揮干溶劑，分別加入0.8mL的高氯酸和0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混勻、密塞。于60°C水浴顯色20 min。取出后立即以冰水冷卻5 min，再加入5.0 mL冰醋酸搖勻。靜置10 min，以空白試劑作參t匕，進行紫外掃描、測定吸光度值，紫外掃描圖見附圖2。根據(jù)回歸方程計算樣品中穿山龍總皂苷的含量為74.79±0.04%ο實施例二
取穿山龍藥材800 g，全部切成厚度為Imm的片狀，用8000 mL濃度為60%的乙醇加熱回流提取2次，每次2.0 h，將合并后的提取液在60°C的條件下減壓濃縮至浸膏1000 mL ；然后IOOOmL將提取物浸膏1000 mL與3000 mL純水混勻，4°C靜置分層，棄去上層液體，繼續(xù)加入純水清洗，重復(fù)3次，最后冷凍干燥得到目標(biāo)成分23.31 g，得率為2.91%。按照與同實施例一完全相同的步驟和條件進行操作，得到回歸方程y=26.662x 一
0.0612 (R2=0.9991) 分別稱取3份約10 g樣品置于50 mL容量瓶中，甲醇溶解、定容。精密量取樣品溶液0.5 mL置于具塞試管中，每個樣品重復(fù)6份。揮干溶劑，分別加入0.8 mL的高氯酸和
0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混勻、密塞。于60°C水浴顯色20 min。取出后立即以冰水冷卻5 min，再加入5.0 mL冰醋酸搖勻。靜置10 min，以空白試劑作參比測定吸光度值。根據(jù)回歸方程計算樣品中穿山龍總皂苷的含量為87.20±0.05%。實施例三
取穿山龍藥材800 g，全部切成厚度為Imm的片狀，用6400 mL濃度為70%的乙醇加熱回流提取3次，每次2.0 h，將合并后的提取液在60°C的條件下減壓濃縮至浸膏1000 mL ；然后IOOOmL將提取物浸膏1000 mL與4000 mL純水混勻，4°C靜置分層，棄去上層液體，繼續(xù)加入純水清洗，重復(fù)3次，最后冷凍干燥得到目標(biāo)成分24.24 g，得率為3.03%。按照與同實施例一完全相同的步驟和條件進行操作，得到回歸方程y=26.662x 一
0.0612 (R2=0.9991)。 分別稱取3份約10 g樣品置于50 mL容量瓶中，甲醇溶解、定容。精密量取樣品溶液0.5 mL置于具塞試管中，每個樣品重復(fù)6份。揮干溶劑，分別加入0.8 mL的高氯酸和
0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混勻、密塞。于60°C水浴顯色20 min。取出后立即以冰水冷卻5 min，再加入5.0 mL冰醋酸搖勻。靜置10 min，以空白試劑作參比測定吸光度值。根據(jù)回歸方程計算樣品中穿山龍總皂苷的含量為74.80±0.05%。
權(quán)利要求
1.一種高純度穿山龍總皂苷的制備方法，其特征在于: a、取穿山龍，按照質(zhì)量體積比為lg:6-10mL的比例向穿山龍中加入濃度為60%_80%的乙醇，進行熱提取，熱提取時間為l_3h，將提取液減壓濃縮至浸膏， b、將提取物浸膏與純水進行混合并混勻，純水的體積為浸膏體積的3倍以上，在(TC -4°C的條件下低溫靜置直至分層，棄去上層溶液，重復(fù)浸膏與純水混合后的步驟3-5次，干燥至粉末狀，獲得目標(biāo)成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿山龍總皂苷的制備方法，其特征在于:所述的熱提取是在加熱回流的狀態(tài)下進行熱提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的 穿山龍總皂苷的制備方法，其特征在于:所述的熱提取操作需進行2-3次，并將每次熱提取操作后的提取液合并，減壓濃縮至浸膏。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的穿山龍總皂苷的制備方法，其特征在于:所述的干燥采用的是冷凍真空干燥法。
全文摘要
本發(fā)明公開一種高純度穿山龍總皂苷的制備方法，其特征在于取穿山龍，按照質(zhì)量體積比為1g:6-10mL的比例向穿山龍中加入濃度為60%-80%的乙醇，進行熱提取，熱提取時間為1-3h，將提取液減壓濃縮至浸膏；將提取物浸膏與純水進行混合并混勻，純水的體積為浸膏體積的3倍以上，在0℃-4℃的條件下低溫靜置直至分層，棄去上層溶液，重復(fù)浸膏與純水混合后的步驟3-5次，干燥至粉末狀，獲得目標(biāo)成分。這是一種簡單有效、綠色環(huán)保的從穿山龍中提取穿山龍總皂苷的方法。
文檔編號A61P19/02GK103083513SQ20131000708
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月9日
發(fā)明者彭金詠, 于浩, 尹連紅, 鄭玲俐, 劉克辛, 許麗娜, 齊艷 申請人:大連醫(yī)科大學(xué)