專利名稱：一種含有重組人促紅素的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種含有重組人促紅細胞生成素的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
促紅細胞生成素(Erythropoietin, ΕΡ0)簡稱促紅素，是為分子量6_7萬的糖蛋白，是一種促進紅系造血前體細胞分化、繁殖的細胞因子，其能促使未分化的干細胞分化成紅細胞系干細胞(erythropoietin responsive cell)。對進一步再成熟為成紅血細胞、網(wǎng)織紅細胞，血紅蛋白的合成以及流入末梢血管等均有促進作用。一般在貧血和低氧狀態(tài)時，根據(jù)身體組織對氧的需要，促紅細胞生成素的供給量將增加，但在腎臟貧血時其含量則非常低。在臨床上，促紅細胞生成素主要用于增加紅血球的數(shù)目，用于貧血、組織斷離、早產(chǎn)兒，用在癌學(xué)和血液學(xué)方面。1983年由Lin等成功分離并克隆了 EPO基因，1985年利用基因工程技術(shù)開始大批量生產(chǎn)重組人促紅細胞生成(rHuEPO)并開始用于臨床實驗，美國食品藥品管理局(FDA)于1989年正式批準(zhǔn)rHuEPO應(yīng)用于貧血的臨床治療。rHuEPO在水溶液中穩(wěn)定性差，所以rHuEPO在溶液中需要加入保護劑以增加其穩(wěn)定性，并防止器被吸附在容器的內(nèi)壁上。CN1247257C公開了一種充足人促紅細胞生成素制劑，其包括甘露醇、L-組氨酸鹽酸鹽、金屬離子螯合劑、pH值緩沖液、氯化鈉等試劑。CN100502943C公開了一種重組人促紅細胞生成素的藥物注射劑，其包括pH值緩沖液、聚山梨酯80及聚山梨酯20、氯化鈉以及等成分。這兩篇文獻認(rèn)為使用人血白蛋白存在潛在的血源污染以及藥物過敏等問題。 然而，使用金屬離子螯合劑可能會引起低血鈣等問題，而使用聚山梨酯80則會導(dǎo)致膠態(tài)離子形成，一些rHuEPO分子聚集到這些膠態(tài)離子的表面，進入機體后可激發(fā)機體免疫系統(tǒng)，最終導(dǎo)致抗體產(chǎn)生(Schellekens等)，從而引起抗體介導(dǎo)的純紅細胞再生障礙性貧血(PRCA)。研究表明rHuEPO易受保存及運輸過程中溫度過高的影響，其結(jié)構(gòu)中冷鏈變性可能是誘發(fā)抗體產(chǎn)生的關(guān)鍵。另外，在運輸過程中極易導(dǎo)致rHuEPO的失活。目前為止還沒有有效的解決方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中重組人促紅素穩(wěn)定性較差的問題，提供一種穩(wěn)定性更好的含有促紅細胞生成素的藥物組合物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種含有重組人促紅素的藥物組合物，其包括以下組分甘露醇0. 5 10% (W/V);磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液 10 IOOmM, ρΗ5· 5 7· 5 ;重組人血白蛋白0.001 0.1%;
有效量重組人促紅素。優(yōu)選，本發(fā)明藥物組合物包括以下組分甘露醇5% (W/V)；磷酸二氫鈉-枸櫞酸緩沖液 25mM，pH6.5;重組人血白蛋白0.01%;有效量重組人促紅素。上述有效量的重組人促紅素可以是在臨床上直接使用的濃度，或者其濃縮品，例如可以是 200 30000IU/ml，優(yōu)選 500 20000IU/ml。本發(fā)明藥物組合物可以是水針劑，也可以制成凍干粉，優(yōu)選為水針劑。本發(fā)明還提供制備上述藥物組合物的方法，其是將磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液、甘露醇、重組人血白蛋白、重組人促紅素加入注射用水溶解，并定容。所述定容后還包括除菌和灌裝的步驟。所述除菌的方法優(yōu)選采用過濾除菌法，依次使用O. 45 μ m和O. 22 μ m的濾膜過濾除菌。在灌裝時在瓶中填充氮氣，并壓塞軋蓋。本發(fā)明采用重組人血白蛋白和甘露醇作為保護劑，可以有效提高其穩(wěn)定性，并且有效阻止其在注射器或者容器壁吸附，同時在本發(fā)明pH值以及特定的緩沖條件下，能夠有效減緩在常溫下蛋白質(zhì)的失活，從而使得本發(fā)明注射液更容易保存和運輸。有意思的是，單獨使用甘露醇或者人血白蛋白作為穩(wěn)定劑則其在常溫下的保存效果遠不如本發(fā)明注射液的保存效果。本發(fā)明中的人血白蛋 白使用的重組人血白蛋白，因而不存在血源污染的風(fēng)險問題，而本發(fā)明中的人血白蛋白用量極低，僅為人血白蛋白注射用的萬分之一，從而極大地降低了部分人群對人血白蛋白過敏的風(fēng)險。
具體實施例方式以下實施例用于進一步說明本發(fā)明，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實質(zhì)的前提下，對本發(fā)明所作的修飾或者替換，均屬于本發(fā)明的范疇。實施例1配方本發(fā)明藥物組合物包括以下比例的成分甘露醇5% (W/V)；磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液25mM，pH6. 5 ；重組人血白蛋白0.01% (W/V)；重組人促紅素5000IU/ml ；余量為水。制備方法配置500mL50mM的磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液(pH6. 5)，加入50g甘露醇，攪拌溶解，加入O.1g重組人血白蛋白，以及5X IO6IU重組人促紅素，用注射用水定容至1000ml。依次用O. 45μηι和O. 22μηι的濾膜過濾,并分裝,每瓶Iml,用氮氣填充,壓塞軋蓋即得5000IU/ml的重組人促紅細胞生成素制劑。實施例2配方本發(fā)明藥物組合物包括以下比例的成分
甘露醇0.5% (W/V);磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液10mM，pH5. 5 ；重組人血白蛋白 0.001% (W/V)；重組人促紅素200IU/ml ；余量為水。制備方法配置500mL20mM的磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液(pH5. 5)，加入5g甘露醇，攪拌溶解，加入O. Olg重組人血白蛋白，以及2X IO5IU重組人促紅素，用注射用水定容至1000ml。依次用O. 45μηι和O. 22μηι的濾膜過濾,并分裝,每瓶Iml,用氮氣填充,壓塞軋蓋即得200IU/ml的重組人促紅細胞生成素制劑。實施例3配方本發(fā)明藥物組合物包括以下比例的成分甘露醇10% (W/V)；磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液lOOmM，pH7. 5 ；重組人血白蛋白0.1% (W/V)；重組人促紅素30000IU/ml ；

余量為水。制備方法配置500mL200mM的磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液(pH7. 5)，加入IOOg甘露醇，攪拌溶解，加入O.1g重組人血白蛋白，以及3X IO7IU重組人促紅素，用注射用水定容至1000ml。依次用O. 45μηι和O. 22μηι的濾膜過濾,并分裝,每瓶Iml,用氮氣填充,壓塞軋蓋即得30000IU/ml的重組人促紅細胞生成素制劑。實施例4安全性試驗材料和方法實驗組實驗組I 3分別為實施例1 3配置的重組人促紅細胞生成素制劑；對照組對照組I為按照實施例1的方法配置，但不含重組人血白蛋白；空白對照組注射用水。試驗對象健康豚鼠100只，雌雄各半,體重350 420g試驗方法將豚鼠隨機分為5組，每組20只，雌雄各半，每只按照200IU的劑量注射，空白對照組注射生理鹽水1ml，隔天注射一次，共注射3次，每次注射后觀察I小時。試驗結(jié)果結(jié)果顯示，實驗組和對照組均未出現(xiàn)異?；蜻^敏反應(yīng)，實驗組和對照組之間沒有
顯著差異。實施例5穩(wěn)定性試驗實驗對象實驗組I 3，分別為實施例1 3配置的重組人促紅細胞生成素制劑；對照組I，按照實施例1的方法配置，但不含重組人血白蛋白；對照組2 :按照實施例1的方法配置，但不含甘露醇。
以上各組的材料均采用相同批次。試驗方法將實驗組和對照組于37°C下放置3個月，檢測制劑的外觀、pH值以及體內(nèi)活性。另取實驗組和對照組于4°C下存放2年，定期檢測制劑的外觀、pH值以及體內(nèi)活性。實驗結(jié)果按上述試驗方法，進行試驗，37°C下放置3個月的檢測結(jié)果如表I所示，4°C下存放的結(jié)果如表2和3所示。表137 °C下放置3個月的檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種含有重組人促紅素的藥物組合物，其包括以下組分 甘露醇O. 5 10% (W/V); 磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液10 lOOmM，pH5. 5 7· 5 ; 重組人血白蛋白O. 001 0.1%; 有效量重組人促紅素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其包括以下組分 甘露醇5% (W/V)； 磷酸二氫鈉-枸櫞酸緩沖液25mM，pH6. 5 ； 重組人血白蛋白0.01%; 有效量重組人促紅素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，所述重組人促紅素的含量為2 00 30000IU/mL·
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，所述重組人促紅素的含量為500 20000IU/ml。
5.制備權(quán)利要求1 4任一項所述藥物組合物的方法，其特征在于，將磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液、甘露醇、重組人血白蛋白、重組人促紅素加入注射用水溶解，并定容。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，定容后還包括除菌和灌裝的步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述除菌的方法是依次使用0.45μπι和O.22 μ m的濾膜過濾除菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，灌裝時在瓶中填充氮氣，并壓塞軋蓋。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種含有重組人促紅素的藥物組合物及其制備方法，所述藥物組合物包括以下組分甘露醇、磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液、重組人血白蛋白以及有效量重組人促紅素。本發(fā)明采用重組人血白蛋白和甘露醇作為保護劑，可以有效提高其穩(wěn)定性，并且有效阻止其在注射器或者容器壁吸附，同時在本發(fā)明pH值以及特定的緩沖條件下，能夠有效減緩在常溫下蛋白質(zhì)的失活，從而使得本發(fā)明注射液更容易保存和運輸。
文檔編號A61K47/42GK103041370SQ201310009279
公開日2013年4月17日 申請日期2013年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月11日
發(fā)明者羅誠 申請人:羅誠