專利名稱：藻藍(lán)蛋白在制備防治有機(jī)磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及涉及藻藍(lán)蛋白的應(yīng)用，具體涉及藻藍(lán)蛋白在制備預(yù)防與治療因有機(jī)磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
有機(jī)磷農(nóng)藥(OPs)是一類高效、低殘留的農(nóng)藥，已經(jīng)成為當(dāng)今中國使用的最廣譜農(nóng)藥。有機(jī)磷農(nóng)藥的使用為農(nóng)、林、漁業(yè)的增產(chǎn)豐收立下了汗馬功勞，但隨著有機(jī)磷農(nóng)藥的廣泛使用，其在蔬菜水果等食物中的殘留現(xiàn)象也較為普遍。雖然大多數(shù)人已經(jīng)注意預(yù)防有機(jī)磷農(nóng)藥的急性中中毒，但有機(jī)磷農(nóng)藥的長(zhǎng)期、低劑量、慢性暴露對(duì)人類健康的影響，尤其是對(duì)男性生殖力影響，還未引起人們的足夠重視。有機(jī)磷農(nóng)藥具有生殖毒性，對(duì)男性生殖系統(tǒng)的影響更為顯著。國內(nèi)外流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在長(zhǎng)期遭受有機(jī)磷農(nóng)藥污染的地區(qū)或者農(nóng)藥廠的工人，男性精子的數(shù)量和質(zhì)量均受到影響，造成精子數(shù)量減少、精子存活率和活動(dòng)度下降、精子畸形率增加，最終導(dǎo)致男性不育人數(shù)明顯增多(Recio-Vega R, Ocampo-Gomez G, Borja-Aburto VH, etal.Organophosphorus pesticide exposure decreases sperm quality-associationbetween sperm parameters and urinary pesticide levels. J Appl Toxicol,2008Jul,28 (5) =674-680.)。我們和國內(nèi)外多位學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)，有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)雄性生殖生殖系統(tǒng)具有損傷作用，有機(jī)磷農(nóng)藥可直接作 用于睪丸、附睪、前列腺、精囊等組織，破壞其結(jié)構(gòu)，最終導(dǎo)致男性生殖力的下降(Koureas M, TsakalofA, Tsatsakis A, et al. Systematic reviewof biomonitoring studies to determine the association between exposure toorganophosphorus and pyrethroid insecticides and human health outcomes. ToxicolLett，20110ctl5.)。因此探討有機(jī)磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性作用機(jī)制，尋找有效的干預(yù)藥物，對(duì)于保護(hù)我國人民的身體健康及優(yōu)生優(yōu)育至關(guān)重要。藻藍(lán)蛋白(phycocyanin)是從螺旋藻中提取的一種藻藍(lán)膽素蛋白質(zhì)，在螺旋藻中的含量高達(dá)10% 20%，是自然界中少見的色素蛋白之一。藻藍(lán)蛋白不僅是一種極好的天然食用色素，而且本身是一種營養(yǎng)豐富的蛋白質(zhì)，其氨基酸組成齊全，必需氨基酸含量高。藻藍(lán)蛋白已被證明能抑制癌癥細(xì)胞擴(kuò)展，可以制成抗腫瘤的輔助治療藥物，用以化療的輔助治療可增強(qiáng)機(jī)體的免疫力；藻藍(lán)蛋白可以幫助調(diào)節(jié)、合成人體代謝所需要的多種重要的酶，促進(jìn)人體細(xì)胞的再生，調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能，提高人體對(duì)疾病的抵抗力；藻藍(lán)蛋白還可清除體內(nèi)自由基，促進(jìn)細(xì)胞活性，改善卵巢功能，促進(jìn)人體快速合成彈力蛋白；藻藍(lán)蛋白還具有刺激紅細(xì)胞集落生成，類似紅細(xì)胞生成素的作用，能夠調(diào)整白血球和提高淋巴細(xì)胞活性的作用，增加體能，促進(jìn)紅血球增長(zhǎng)，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育；藻藍(lán)蛋白還具有抗輻射、抗過敏、抗疲勞、抗病毒、抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用。藻藍(lán)蛋白無任何毒副作用，可以長(zhǎng)期服用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供藻藍(lán)蛋白在制備防治有機(jī)磷農(nóng)藥所致雄性生殖力損傷方面的藥物新用途。具體的說，本發(fā)明涉及藻藍(lán)蛋白在制備防治有機(jī)磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性的藥物中的應(yīng)用。此外，還涉及藻藍(lán)蛋白在制備預(yù)防與治療因有機(jī)磷農(nóng)藥所雄性生殖毒性誘發(fā)的疾病的藥物中的應(yīng)用。其中所述疾病為因有機(jī)磷農(nóng)藥所致的雄性生殖毒性疾病，主要包括精子數(shù)量降低、精子活動(dòng)性下降、變性精子數(shù)量增多、精液減少、精子畸形率升高、睪丸疾病等。本發(fā)明所述有機(jī)磷農(nóng)藥為久效磷、辛硫磷、對(duì)氧磷、三唑磷等常用有機(jī)磷農(nóng)藥。本發(fā)明所屬藥物是指以藻藍(lán)蛋白為主要活性成分，與可藥用載體制成的醫(yī)療上可接受的制劑，如片劑、丸劑或膠囊劑等。本發(fā)明通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)服用藻藍(lán)蛋白可達(dá)到防治低濃度有機(jī)磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性的效果，藻藍(lán)蛋白的治療有效量，應(yīng)按照治療者的年齡、身體狀況、接觸有機(jī)磷農(nóng)藥量等確定。本發(fā)明所述的藻藍(lán)蛋白是螺旋藻的主要活性成分之一，其具有免疫調(diào)節(jié)活性，能起到抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、抗炎、抗輻射、抗疲勞、抗過敏等作用，并且目前尚未發(fā)現(xiàn)其有任何毒副作用。藻藍(lán)蛋白可以通過市售得到，也可以通過多種方法提取獲得，提取方法成熟。

本發(fā)明人以高毒有機(jī)磷農(nóng)藥久效磷和低毒有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷為代表，研究了低濃度有機(jī)磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性作用，發(fā)現(xiàn)有機(jī)磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性作用主要是引起雄性小鼠睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)下降；精子數(shù)量減少、精子活率降低、精子畸形率增加；誘導(dǎo)睪丸組織CAT活性和LDH活性降低、MDA含量增加，睪丸組織氧化損傷，從而引起如精子數(shù)量降低、精子活動(dòng)性下降、變性精子數(shù)量增多、精液減少、生殖器畸變、睪丸疾病、男性不孕等一系列疾病。本發(fā)明通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察了有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)雄性小鼠的生殖毒性作用，以及藻藍(lán)蛋白對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥雄性生殖毒性的抑制作用。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，藻藍(lán)蛋白能抑制(如久效磷和辛硫磷)有機(jī)磷農(nóng)藥所致的雄性小鼠睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)下降；精子數(shù)量減少、精子活率降低、精子畸形率增加；睪丸組織CAT活和LDH活性降低、MDA含量增加，睪丸組織氧化損傷；藻藍(lán)蛋白能抑制有機(jī)磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性。本發(fā)明的有益效果在于1.本發(fā)明提供了有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)雄性生殖毒性作用的直接證據(jù)，并以此尋找有效的干預(yù)藥物。2.本發(fā)明提供了藻藍(lán)蛋白的醫(yī)藥新用途，其對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥引起的雄性生殖毒性具有很好的抑制和保護(hù)作用。藻藍(lán)蛋白能抑制有機(jī)磷農(nóng)藥(如久效磷和辛硫磷)所致的雄性小鼠睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)下降；精子數(shù)量減少、精子活率降低、精子畸形率增加；睪丸組織CAT活和LDH活性降低、MDA含量增加啊，睪丸組織氧化損傷；藻藍(lán)蛋白能抑制有機(jī)磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性。3.本發(fā)明對(duì)長(zhǎng)期接觸有機(jī)磷農(nóng)藥的人尤其是農(nóng)藥廠的工人和農(nóng)民具有深遠(yuǎn)的意義，能起到保護(hù)男性及其子代身體健康、提高生活質(zhì)量、降低不孕不育、優(yōu)生優(yōu)育、延長(zhǎng)壽命等作用。
具體實(shí)施例方式以下通過試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明中藻藍(lán)蛋白的醫(yī)藥新用途及其有益效果，但不用來限制本發(fā)明的范圍。試驗(yàn)例1:藻藍(lán)蛋白抑制久效磷所致雄性生殖毒性的試驗(yàn)研究I材料與方法1.1 材料久效磷(40%的水溶性制劑，青島農(nóng)藥廠)，藻藍(lán)蛋白(中國海洋大學(xué)提供)，過氧化氫酶(CAT)試劑盒、乳酸脫氫 酶(LDH)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒均購自南京建成生物公司。1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組選擇健康SPF級(jí)雄性昆明小鼠90只，體重在(25 ± 2) g之間，購自新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。適應(yīng)性飼養(yǎng)7d，室溫(25±2)°C，濕度50%-55%。將小鼠隨機(jī)分為6組，每組15只。分別為正常對(duì)照組(A)、藻藍(lán)蛋白對(duì)照組(B)、久效磷對(duì)照組(C)、藻藍(lán)蛋白低劑量保護(hù)組(D)、藻藍(lán)蛋白中劑量保護(hù)組(E)、藻藍(lán)蛋白高劑量保護(hù)組(F)。其中對(duì)照組(A)不給藥，給予蒸餾水，藻藍(lán)蛋白對(duì)照組(B)給予藻藍(lán)蛋白100mg/kg,久效磷對(duì)照組(C)給予O. 20mg/kg,藻藍(lán)蛋白低劑量保護(hù)組(D)給予藻藍(lán)蛋白50mg/kg+久效磷O. 20mg/kg,藻藍(lán)蛋白中劑量保護(hù)組(E)給予藻藍(lán)蛋白100mg/kg+久效磷O. 20mg/kg,藻藍(lán)蛋白高劑量保護(hù)組(F)給予藻藍(lán)蛋白200mg/kg+久效磷O. 20mg/kg。并保證充足的飲水和飼料供應(yīng)。在連續(xù)60d采用灌胃方式進(jìn)行染毒，染毒劑量為10ml/kg，每天I次。1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS10. O軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x±s進(jìn)行表示，多組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析(One Way AN0VA)。進(jìn)一步進(jìn)行組間兩兩比較時(shí)，若方差齊時(shí)，采用SNK檢驗(yàn)；若方差不齊時(shí)，采用Games-Howell檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以率表示，組間兩兩比較采用X 2檢驗(yàn)。以P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2方法與結(jié)果染毒60天后，稱量體重，處死小鼠，立即取出雙側(cè)睪丸及附睪，剝離周圍脂肪組織和結(jié)締組織準(zhǔn)確稱量睪丸和附睪的重量，計(jì)算睪丸及附睪的臟器系數(shù)；將雙側(cè)附睪置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中剪碎，制備精子懸液。采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)上述精子懸液中的精子數(shù)，并換算為每克附睪精子數(shù)；取混勻的精子懸液一滴滴于載玻片上，加蓋玻片于光鏡下觀察精子活動(dòng)力，按WHO推薦的方法，按精子的泳動(dòng)狀態(tài)將精子活動(dòng)度分為四級(jí)1級(jí)直線運(yùn)動(dòng)明顯活躍，活動(dòng)良好；11級(jí)直線運(yùn)動(dòng)，活動(dòng)稍差；ΙΠ級(jí)精子向前移動(dòng)的能力差，在原處移動(dòng)或作旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng);IV級(jí):精子無任何活動(dòng)，每只至少檢查400個(gè)精子，計(jì)算精子活率(精子活率=Ι+Π+ΙΙΙ級(jí)精子數(shù)/I+II+III+IV級(jí)精子數(shù)X100% );將部分精子懸液作涂片，空氣干燥后，用甲醇固定5min，干燥后用2%伊紅水溶液染色lh，用水輕沖，干燥，在光鏡下，每只小鼠檢查至少檢查400個(gè)精子，記錄精子的畸形類型和數(shù)量，凡精子輪廓不清，有頭無尾，或頭部與其它精子或碎片重疊，或兩個(gè)以上精子重疊，或明顯屬人為剪碎者均不計(jì)算，畸形類型主要分為無鉤、香蕉形、無定形、胖頭、尾折疊、雙頭、雙尾等，畸形率以百分率表示(％);取睪丸組織加入適量的冰生理鹽水，在冰浴條件下用玻璃勻漿器研磨制成睪丸組織勻漿，然后在低溫(4°C)條件下以2000rpm，離心lOmin，靜置片刻，取上清液，參照試劑盒說明書，檢測(cè)睪丸勻漿液中CAT、LDH活性和MDA含量。表I藻藍(lán)蛋白對(duì)久效磷所致小鼠睪丸和附睪臟器系數(shù)下降的保護(hù)作用(η = 15)
權(quán)利要求
1.藻藍(lán)蛋白在制備防治因有機(jī)磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述雄性生殖毒性疾病為精子數(shù)量降低、 精子活動(dòng)性下降、變性精子數(shù)量增多、精液減少或睪丸疾病。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于藻藍(lán)蛋白在制備抑制因有機(jī)磷農(nóng)藥所致精子活率降低的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于藻藍(lán)蛋白在制備抑制因有機(jī)磷農(nóng)藥所致精子畸形率升高的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于藻藍(lán)蛋白在制備抑制因有機(jī)磷農(nóng)藥所致睪丸組織MDA含量增多的藥物中的應(yīng) 用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于藻藍(lán)蛋白在制備抑制因有機(jī)磷農(nóng)藥所致睪丸組織CAT活性和LDH活性下降的藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的有機(jī)磷農(nóng)藥為久效磷、辛硫磷、對(duì)氧磷或三唑磷。
全文摘要
本發(fā)明涉及藻藍(lán)蛋白的一種醫(yī)藥新用途，即預(yù)防與治療有機(jī)磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性的作用，更進(jìn)一步的說是在制備抑制因有機(jī)磷農(nóng)藥所致精子活率降低、精子畸形率升高、睪丸組織MDA含量增多、睪丸組織CAT活性和LDH活性下降的藥物中的應(yīng)用。以高毒有機(jī)磷農(nóng)藥久效磷和低毒有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷為代表，研究了藻藍(lán)蛋白對(duì)因低濃度有機(jī)磷農(nóng)藥暴露所致的雄性生殖毒性的預(yù)防和治療作用，證明藻藍(lán)蛋白能抑制有機(jī)磷農(nóng)藥所致的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性，從而提出藻藍(lán)蛋白作為活性物質(zhì)在制備因有機(jī)磷農(nóng)藥所致的雄性生殖毒性藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P15/08GK103041369SQ20131001842
公開日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月18日
發(fā)明者閆建國, 周亞莉, 武紅艷, 邢雪琨, 單琳琳 申請(qǐng)人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院