專利名稱：新型無油佐劑制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型疫苗佐劑及其應(yīng)用，屬于生物學(xué)領(lǐng)域，特別是獸用生物制品領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，獸用疫苗生產(chǎn)中廣泛使用礦物油佐劑，即分別在礦物油佐劑和疫苗抗原中分別加入乳化劑，在高剪切力的作用下制成油包水或水包油包水型乳劑疫苗。該類疫苗在免疫應(yīng)答和免疫持續(xù)期方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，受到廣泛認(rèn)可。但是該疫苗黏度大、不易注射、不易吸收、疫苗副反應(yīng)大、可不同程度地導(dǎo)致局部產(chǎn)生肉芽腫、無菌性膿腫和炎癥反應(yīng)，甚至有致癌作用，對(duì)動(dòng)物胴體的損傷和動(dòng)物源性食品安全影響較大，諸多問題一直未得到有效解決。鋁膠佐劑也是目前常用的一種疫苗佐劑，是目前唯一通過FDA批準(zhǔn)的能用于人的佐劑，已經(jīng)廣泛用于人獸疫苗生產(chǎn)。鋁膠佐劑作用機(jī)制是其與抗原形成復(fù)合物，注射后在局部形成抗原貯存庫(kù)，使抗原緩慢釋放，從而誘導(dǎo)機(jī)體持續(xù)的免疫反應(yīng)。但是鋁膠佐劑也存在許多不足之處，鋁佐劑主要促進(jìn)體液免疫應(yīng)答而不能很好地誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫。注射后局部反應(yīng)較大，容易形成局部壞死或肉芽腫，影響動(dòng)物源性食品品質(zhì)，而且容易誘導(dǎo)機(jī)體的過敏反應(yīng)。除了油佐劑和鋁膠佐劑，目前報(bào)道的疫苗佐劑還有脂質(zhì)體、免疫刺激復(fù)合物佐劑、CpG序列、細(xì)胞因子、蜂膠、植物皂甙等。上述的佐劑免疫增強(qiáng)效果也確實(shí)存在，但它們也有一些不可避免的缺點(diǎn)，如效果較弱、免疫持續(xù)期短、免疫機(jī)制不明確或者產(chǎn)品成本高、效果不穩(wěn)定、難以應(yīng)用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明￠05無油佐劑)目的在于針對(duì)目前傳統(tǒng)的礦物油佐劑所存在的一系列問題，提供一種可以完全替代礦物油佐劑的新型無油佐劑，該佐劑可以降低疫苗的黏稠度，提高疫苗穩(wěn)定性，降低疫苗副反應(yīng),并可以使動(dòng)物機(jī)體快速產(chǎn)生免疫保護(hù)作用，同時(shí)也提高了動(dòng)物源性肉食品的安全性。本發(fā)明的另外一個(gè)目的在于提供一種上述佐劑的制備方法，該方法制備簡(jiǎn)單，成本低廉，適于規(guī)模化生產(chǎn)。本發(fā)明可應(yīng)用于畜禽疫苗產(chǎn)品的生產(chǎn)和使用過程中，即可用于病毒或細(xì)菌類滅活疫苗作為疫苗佐劑，也可用于病毒或細(xì)菌類活疫苗作為疫苗稀釋保護(hù)劑。本發(fā)明佐劑的原料及其配比為:磷酸氫二鈉2 5g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉3 10g、海藻糖2 10g、黃芪多糖2 10g、谷氨酸鈉I 5g、明膠5 20g、聚乙二醇30003 IOg,葡聚糖I 5g, 1000ml注射用水。優(yōu)選磷酸氫二鈉2 4g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉6 10g、海藻糖4 8g、黃芪多糖4 8g、谷氨酸鈉2 4g、明膠9 16g、聚乙二醇30005 8g，葡聚糖2 4g，IOOOml注射用水。進(jìn)一步優(yōu)選磷酸氫二鈉3 4g、磷酸二氫鉀0.5 0.Sg、氯化鈉7 9g、海藻糖6 8g、黃苗多糖6 8g、谷氨酸鈉3 4g、明膠12 15g、聚乙二醇30006 8g,葡聚糖2 3g。最優(yōu)選磷酸氫二鈉3.5g、磷酸二氫鉀0.6g、氯化鈉7g、海藻糖7g、黃芪多糖7g、谷氨酸鈉3g、明膠13g、聚乙二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水本發(fā)明佐劑的制備方法為按照配比稱取上述原料，充分溶解后，經(jīng)高溫高壓滅菌后備用。進(jìn)一步優(yōu)選，采用超聲波處理充分溶解后，經(jīng)121°C，高壓滅菌20min后備用。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行，用于疫苗生產(chǎn)中即可提高疫苗產(chǎn)品質(zhì)量，又可降低疫苗生產(chǎn)成本。用于凍干活疫苗稀釋保護(hù)劑可提升疫苗免疫效果，降低免疫失敗機(jī)率。
具體實(shí)施例方式結(jié)合實(shí)施對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述和論證，但并不對(duì)本發(fā)明做任何限定。實(shí)施例1本發(fā)明佐劑(605無油佐劑)的配制方法佐劑I組:磷酸氫二鈉3.5g、磷酸二氫鉀0.6g、氯化鈉7g、海藻糖7g、黃芪多糖7g、谷氨酸鈉3g、明膠13g、聚乙 二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經(jīng)121 C，聞壓滅圃20min后備用。佐劑2組:稱取磷酸氫二鈉5g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鈉10g、海藻糖2g、黃芪多糖log、谷氨酸鈉lg、明膠20g、聚乙二醇30003g，葡聚糖5g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經(jīng)121°C，高壓滅菌20min后備用。佐劑3組:磷酸氫二鈉2g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉3g、海藻糖10g、黃芪多糖2g、谷氨酸鈉5g、明膠5g、聚乙二醇300010g，葡聚糖lg，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經(jīng)121 C，聞壓滅囷20min后備用。佐劑4組:磷酸氫二鈉4g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉5g、海藻糖9g、黃芪多糖Sg、谷氨酸鈉2g、明膠16g、聚乙二醇30005g，葡聚糖3g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經(jīng)121 C，聞壓滅囷20min后備用。佐劑5組:磷酸氫二鈉2g、磷酸二氫鉀0.4g、氯化鈉Sg、海藻糖4g、黃芪多糖Sg、谷氨酸鈉4g、明膠6g、聚乙二醇30007g，葡聚糖4g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經(jīng)121 C，聞壓滅囷20min后備用。實(shí)施例2佐劑用于禽流感滅活疫苗的研究將檢驗(yàn)合格的禽流感病毒滅活液與本發(fā)明佐劑按照4: 6比例進(jìn)行混合，500 IOOOrpm攪拌30分鐘。然后按照現(xiàn)行《中華人民共和國(guó)獸藥典》三部規(guī)定的方法分別進(jìn)行無菌檢驗(yàn)、物理性狀、穩(wěn)定性、黏度、安全性和效力檢驗(yàn)，試驗(yàn)同時(shí)設(shè)立注射用白油佐劑疫苗和商品疫苗對(duì)照。結(jié)果表明采用本發(fā)明佐劑與傳統(tǒng)的油佐劑制成的滅活疫苗比較，在穩(wěn)定性、黏稠度、安全性、疫苗配制工藝方面，均具有顯著的優(yōu)勢(shì)。結(jié)果見表I。表1各批次新城疫滅活疫苗檢驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種不含有礦物油和/或氫氧化鋁的佐劑復(fù)合物。
2.一種佐劑復(fù)合物，其特征在于原料及其配比為:磷酸氫二鈉2 5g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉3 10g、海藻糖2 10g、黃苗多糖2 10g、谷氨酸鈉I 5g、明膠5 20g、聚乙二醇30003 IOg,葡聚糖I 5g,注射用水1000ml。
優(yōu)選磷酸氫二鈉2 4g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉6 10g、海藻糖4 8g、黃芪多糖4 8g、谷氨酸鈉2 4g、明膠9 16g、聚乙二醇30005 8g,葡聚糖2 4g, 1000ml注射用水。
進(jìn)一步優(yōu)選磷酸氫二鈉3 4g、磷酸二氫鉀0.5 0.8g、氯化鈉7 9g、海藻糖6 8g、黃苗多糖6 8g、谷氨酸鈉3 4g、明膠12 15g、聚乙二醇30006 8g,葡聚糖2 3g。
最優(yōu)選磷酸氫二鈉3.5g、磷酸二氫鉀0.6g、氯化鈉7g、海藻糖7g、黃芪多糖7g、谷氨酸鈉3g、明膠13g、聚乙二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述佐劑復(fù)合物的制備方法，其特征在于，按照配比稱取原料后，直接經(jīng)高壓滅菌后使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述佐劑 復(fù)合物的應(yīng)用，其特征在于將其與疫苗滅活抗原按照4:1 1:4的比例直接進(jìn)行混合攪拌均勻即制成滅活疫苗。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述疫苗包括但不限于新城疫滅活疫苗、禽流感滅活疫苗、傳染性支氣管炎滅活疫苗、傳染性法氏囊滅活疫苗、口蹄疫滅活疫苗、豬支原體肺炎滅活疫苗、雞傳染性鼻炎滅活疫苗等病毒或細(xì)菌滅活疫苗。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述佐劑復(fù)合物的應(yīng)用，其特征在于將其進(jìn)行5 10倍稀釋后可用作凍干活疫苗的稀釋液和抗原保護(hù)劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中所述疫苗包括但不限于新城疫活疫苗、傳染性支氣管炎活疫苗、傳染性喉氣管炎活疫苗、傳染性法氏囊活疫苗、豬痕活疫苗、偽狂犬病活疫苗等病毒或細(xì)菌活疫苗。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型無油佐劑(605佐劑)復(fù)合物制備方法及其在獸用疫苗中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的佐劑用于滅活疫苗生產(chǎn)可完全代替礦物油佐劑和鋁膠佐劑，能被機(jī)體在短期內(nèi)完全吸收，無殘留，副反應(yīng)小，可提高疫苗的安全性，同時(shí)簡(jiǎn)化疫苗生產(chǎn)工藝，降低疫苗生產(chǎn)成本。本發(fā)明制備的佐劑也可作為活疫苗稀釋保護(hù)液，具有保護(hù)疫苗抗原生物活性，增強(qiáng)疫苗免疫效果，延長(zhǎng)疫苗抗體持續(xù)期等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/14GK103083659SQ201310018498
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月18日
發(fā)明者趙 卓, 王力, 江厚生 申請(qǐng)人:北京華夏興洋生物科技有限公司