專利名稱：一種絞股藍(lán)提取物及其制備治療腫瘤藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富含達(dá)木林A、達(dá)木林B、gypenoside L和gypenosideLI的絞股藍(lán)(Gynostemma pentaphyllum)提取物,該提取物的制備方法，以及該提取物和這4種阜苷類化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術(shù)：
皂苷(saponin)是天然物質(zhì)中一類重要的化學(xué)成分，具有多種生物活性和藥理活性,如抗腫瘤、抗真菌、防治心血管疾病、降血糖、增加免疫調(diào)節(jié)等因此含有皂苷類成分天然物質(zhì)的應(yīng)用很廣。絞股藍(lán)和人參中都因富含達(dá)瑪烷型皂苷表現(xiàn)出強(qiáng)的生物活性。研究發(fā)現(xiàn)，皂苷中糖的數(shù)量以及取代位置不同時(shí)，其產(chǎn)生的生物活性也會(huì)大有不同。如，3位和20位各連有兩個(gè)糖的人參阜苷Rbl具有營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、保護(hù)心肌、改善記憶力、抗衰老、抗氧化、保用等作用，而3位上只有一個(gè)糖的人參皂苷Rh2和3位連有兩個(gè)糖的Rg3卻具有良好地抗腫瘤活性[5’6]。因此，對(duì)化合物進(jìn)行合理的結(jié)構(gòu)修飾可創(chuàng)造巨大的經(jīng)濟(jì)效益[7’8]。目前利用生物轉(zhuǎn)化方法獲取生物活性強(qiáng)的皂苷的研究也是一個(gè)熱點(diǎn)[9]。絞股藍(lán)為葫蘆科(Cucurbitaceae)絞股藍(lán)屬(Gynostemma)絞股藍(lán)GynostemmapentaphyIIum(Thunb.)Makino的全草[1°]，具有清熱解毒，止咳祛痰等功能。由于絞股藍(lán)中含有與人參相似的達(dá)瑪烷類皂苷，又被冠予“南方人參”、“第二人參”的美譽(yù)[11]。近年來(lái)，許多研究表明，人參屬植物中抗癌活性與低極性、稀有或微量人參皂苷直接相關(guān)，如稀有人參皂苷Rh2、Rg3、Rb3等藥效更為珍貴，在某些難治性疾病腫瘤治療方面顯示獨(dú)特的療效[12’13]。但是在天然植物中人參皂苷Rbl含量較高，而Rg3、Rh2、Compand K等含量甚微。同樣，絞股藍(lán)中最主要的藥效成分也是皂苷類成分。絞股藍(lán)中的gypenosideL、gypenosideL1、達(dá)木林A及達(dá)木林B也具有抑制癌細(xì)胞增殖作用，但它們?cè)诮g股藍(lán)中的含量甚微[14]，是強(qiáng)活性的稀有絞股藍(lán)皂苷。對(duì)于這些有較強(qiáng)活性的稀有皂苷來(lái)說(shuō)，它們的來(lái)源有限而且在植物體內(nèi)含量較低。如果用傳統(tǒng)方法進(jìn)行分離，不但耗費(fèi)大量的藥用資源，而且得率也很低。因此，如何提高稀有活性成分的含量或獲得更有活性的成分已經(jīng)成為現(xiàn)代藥學(xué)研究的重點(diǎn)。利用微生物，對(duì)絞股藍(lán)總提物進(jìn)行成分轉(zhuǎn)化。發(fā)現(xiàn)微生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物與原植物相比，具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性。利用微生物轉(zhuǎn)化后得到更多強(qiáng)抗腫瘤活性的稀有絞股藍(lán)皂苷，為尋找高效低毒的抗癌藥提供了理論依據(jù)。參考文獻(xiàn):[I]張存莉，吳戰(zhàn)庫(kù)，馬惠玲，朱瑋.留體皂苷的生物活性研究進(jìn)展[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào)、2003、18 (2) =95-100.
[2]王立青，江榮高.人參皂苷Rbl的藥理活性[J].國(guó)外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè))，2005，20 (6):245-248.
[3]賈繼明，王宗權(quán)，吳立軍，等.人參皂苷Rbl的藥理活性研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33 (12):1371-1377.
[4]Ng TB.Pharmacological activity of sanchi ginseng(Panax notoginscng)[J].J Pharm Pharmacol，2006，58(8):1007-1019.
[5] Cwikowska M，Pruchnik FP, Starosta R.Dinuclear Rh (II) complexeswith one polypyridyl ligand，structure，properties and antitumor activity[J].1norganica Chimica Acta，2010，363(11):2401-2408.
[6] Zhang Q，Kang X，Zhao W.Antiangiogenic effect of low-doseeyelophosphamidc combined with ginsenoside Rg3on Lewis lung carcinoma[J].Biochemical and Biophysical Researeh Communications，2006，342(3):824-828.
[7]Lee YJ, Kim HY, Kang KS, et al.The chemical and hydroxyl radicalscavenging activity changes of ginsenoside-Rblby heat processing[J].Bioorg MedChem Lett，2008，18(16):4515-4520.
[8]Lee WH, Choi JS, Kim HY, et al.Heat-processed neoginseng, KG-135，down-rcguIatesGl CycI in-dependent kinase through the proteasome—mediatedpathway inHcLa cclls[J].0ncol Rep，2009，21(2):467-474.
[9]趙方允，陳自宏，虞泓，等.微生物轉(zhuǎn)化人參皂苷研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)，2010.5(3):216-219.
[10]梁?jiǎn)⒊?，鐘鳴，中國(guó)狀藥學(xué)[M]，廣西民族出版社，2005.
[11]張濤，袁弟順.中國(guó)絞股藍(lán)種質(zhì)資源研究進(jìn)展[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，24(3):459-469.
[12]李學(xué)哲，樸惠順.人參皂苷Rh2含量測(cè)定方法及藥理作用研究現(xiàn)狀[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，2009，32 (2):153-156.
[13]Wang CZ, Xie JT, Fishbein A，et al.Antiproliferative effects ofdifferent plant parts of Panax notoginseng on SW480human colorectal cancercells [J].Phytother Res，2009，23(I):6-13.
[14]吳倩.絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物抗NSCLC A549細(xì)胞有效成分研究[D].北京:中央民族大學(xué)2012.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種富含達(dá)木林A(damulin A)、達(dá)木林B (damulan B)、gypenoside L 和 gypenoside LI 的絞股藍(lán)(Gynostemma pentaphyllum)提取物，該提取物的制備方法，以及該提取物在制備抗腫瘤藥物中的用途。通過(guò)釆用微生物轉(zhuǎn)化的方法制備的絞股藍(lán)提取物中活性成分的含量明顯提高。進(jìn)而提高了本發(fā)明的絞股藍(lán)提取物治療腫瘤的效果。本發(fā)明的絞股藍(lán)提取物中含有以下化合物:
權(quán)利要求
1.一種絞股藍(lán)提取物，其特征在于，所述的絞股藍(lán)提取物中含有以下化合物:
2.如權(quán)利要求1所述的絞股藍(lán)提取物，其特征在于，所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法為:取絞股藍(lán)乙醇提取物，在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基43-75°C條件進(jìn)行發(fā)酵2-8天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用4-10倍量(v/w，mL/g)的95%乙醇超聲提取1_4次，每次10-40min，將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到絞股藍(lán)提取物。
3.如權(quán)利要求1所述的絞股藍(lán)提取物，其特征在于，所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法為:取絞股藍(lán)乙醇提取物，在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基43°C條件進(jìn)行發(fā)酵6天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用8-10倍量(v/w，mL/g)的95%乙醇超聲提取2-4次，每次20-40min。將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到絞股藍(lán)提取物。
4.如權(quán)利要求1所述的絞股藍(lán)提取物，其特征在于，所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法為:在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基43°C條件進(jìn)行發(fā)酵6天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用10倍量(v/w，mL/g)的95%乙醇超聲提取3次，每次30min。將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減10倍量(v/w，mL/g)的95%乙醇超聲提取3次，每次30min。將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到絞股藍(lán)提取物。
5.權(quán)利要求1所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法如下:取絞股藍(lán)乙醇提取物，在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基30-80°C條件進(jìn)行發(fā)酵1-10天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用3-12倍量(v/w，mL/g)的30% -95%乙醇超聲提取1_5次，每次5-60min，將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到絞股藍(lán)提取物。
6.權(quán)利要求1所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法如下:取絞股藍(lán)乙醇提取物，在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基43-75°C條件進(jìn)行發(fā)酵2-8天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用4-10倍量(v/w，mL/g)的95%乙醇超聲提取1_4次，每次10-40min，將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到絞股藍(lán)提取物。
7.權(quán)利要求1所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法如下:所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法為:取絞股藍(lán)乙醇提取物，在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基43°C條件進(jìn)行發(fā)酵6天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用8-10倍量(v/w，mL/g)的95%乙醇超聲提取2-4次，每次20-40min。將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到絞股藍(lán)提取物。
8.權(quán)利要求1所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法如下:所述的絞股藍(lán)提取物的制備方法為:在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基43°C條件進(jìn)行發(fā)酵6天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用10倍量(v/w，mL/g)的95%乙醇超聲提取3次，每次30min。將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到絞股藍(lán)提取物。
9.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的絞股藍(lán)提取物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤選自:肺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌和白血病。`
全文摘要
本發(fā)明涉及一種絞股藍(lán)提取物及其制備抗癌藥物的用途，該提取物的制備方法是取絞股藍(lán)乙醇提取物，在保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基43℃條件進(jìn)行發(fā)酵6天，將發(fā)酵后的絞股藍(lán)總提物冷凍干燥，用8-10倍量(v/w，mL/g)的80％乙醇超聲提取2-4次，每次20-40min。將發(fā)酵絞股藍(lán)乙醇提取液減壓濃縮，干燥得到本發(fā)明所述的絞股藍(lán)提取物。通過(guò)采用微生物轉(zhuǎn)化的方法制備的絞股藍(lán)提取物中活性成分的含量明顯提高。
文檔編號(hào)A61K31/704GK103169725SQ201310033188
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月29日
發(fā)明者樸香蘭, 劉慧敏, 陳道金 申請(qǐng)人:中央民族大學(xué)