專利名稱：一種多肽修飾的流感病毒感染細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物靶向遞送系統(tǒng)，具體涉及一種新型多肽修飾的流感病毒感染細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
流感是嚴(yán)重危害人類生命健康的一種急性的病毒性呼吸道傳染病，每年冬春季節(jié)均有大規(guī)模爆發(fā)與流行，全世界每年因流感流行可導(dǎo)致300 500萬的嚴(yán)重病例，約有25萬到50萬的患者死亡，尤其是禽流感的爆發(fā)和2009年甲型HlNl流感的全球流行，對各國經(jīng)濟(jì)造成了巨大損失，給人民生活帶來了恐慌。流感病毒具有傳播速度快、變異快、危害大的特點，疫苗預(yù)防難度大，現(xiàn)有的抗流感藥物品種匱乏，且極易產(chǎn)生耐藥。新的流感大流行隨時都有可能爆發(fā)，在這種情況下，研究開發(fā)高效低毒的新型抗流感藥物就顯得尤為重要和緊迫。反義寡核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotide, AS0N)是一段與 mRNA 特異性結(jié)合并阻斷其基因表達(dá)的人工合成的DNA分子。體內(nèi)外實驗證明，ASONs能通過封閉或抑制病毒的關(guān)鍵基因來特異性抑制病毒的復(fù)制與增殖，是治療病毒性傳染病的潛在新型藥物。作為近年來國內(nèi)外研究的熱點，ASONs具有作用機(jī)理新、易于設(shè)計、特異性強(qiáng)、效率高等特點，但其又不同于普通小分子藥物，因為多聚陰離子大分子，對生物膜的通透性差，生理條件下難以通過帶負(fù)電 荷的細(xì)胞膜，因此表現(xiàn)為生物利用度低、靶組織內(nèi)聚集濃度低等狀況，目前解決該難題的辦法主要是開發(fā)新型的藥物靶向遞送系統(tǒng)。針對抗病毒藥物，靶向給藥系統(tǒng)能將ASONs藥物專一高效地運送至被感染細(xì)胞中，減少在正常細(xì)胞內(nèi)的攝取，發(fā)揮抗病毒效果的同時減少全身毒副作用。目前ASONs的靶向轉(zhuǎn)運研究中多選取各類細(xì)胞表面特異性受體的配體作為靶向分子，而針對病毒表面特異性抗原或蛋白的特異性結(jié)合配體作為ASONs靶向轉(zhuǎn)運的靶向分子尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報道，因此我們提出一種通過病毒顆粒介導(dǎo)的ASONs藥物靶向轉(zhuǎn)運新策略，通過化學(xué)合成的手段將靶向分子與抗流感ASONs進(jìn)行連接，借助靶分子與流感病毒表面相應(yīng)抗原/蛋白的結(jié)合，在病毒入胞過程中將ASONs攜帶進(jìn)入靶細(xì)胞中，從而增加病毒感染細(xì)胞的攝取，起到靶向轉(zhuǎn)運的作用。課題組近期研究公開了一種利用噬菌體展示技術(shù)篩選出的針對流感病毒表面血凝素蛋白結(jié)合肽，該結(jié)合肽通常含有7個或12個氨基酸殘基，可借助吞飲方式進(jìn)入流感病毒感染細(xì)胞，并且定位于細(xì)胞漿內(nèi)，靶向性明確。因此該血凝素蛋白結(jié)合肽可作為抗流感ASONs藥物的特異性靶向轉(zhuǎn)運分子。此外，低分子量多肽均可由化學(xué)合成得到，穩(wěn)定性好，臨床應(yīng)用前景廣闊。本發(fā)明中，血凝素蛋白結(jié)合肽通過共價連接的方式與具有抗流感活性的ASONs藥物偶聯(lián)成為綴合物，經(jīng)過胞內(nèi)攝取研究、靶向性評價和抗病毒活性研究等，證實了該綴合物可有效、專一地將ASONs藥物運送至被感染細(xì)胞內(nèi)的作用位點，提高了靶細(xì)胞對藥物的攝取，形成有效的病毒感染細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)。該系統(tǒng)靶向和治療效率高，制備簡便，可應(yīng)用于流感病毒感染及其相關(guān)性疾病的治療
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種多肽修飾的、能靶向遞送抗流感藥物并將其運送到流感病毒感染細(xì)胞內(nèi)的給藥系統(tǒng)及其制備方法和用途。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:所述多肽修飾的流感病毒感染細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)包括作為靶向分子的多肽與結(jié)合到該多肽上的抗流感病毒藥物，二者通過雙功能試劑共價連接成綴合物。其中所述的綴合物中的多肽為流感病毒血凝素蛋白結(jié)合肽，該結(jié)合肽是通過噬菌體展示技術(shù)獲得，包括H7-3、H7-4、H7-5、H17等，其序列如SEQ ID N0.1_18所示。所述的抗流感病毒藥物為反義寡核苷酸類藥物，包括rocD5-1、rocD5-2、rocD5-5等，其序列如SEQ ID N0.19-所示。所述的反義寡核苷酸為與多肽進(jìn)行共價偶聯(lián)，在其5’端進(jìn)行了巰基標(biāo)記；為使其結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，對序列進(jìn)行了不同的化學(xué)修飾。

所述的反義寡核苷酸穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的化學(xué)修飾包括硫代磷酸酯骨架修飾、核糖2’ -O-甲基修飾、核糖2’ -O-甲氧乙基修飾、核糖2’ -O位與4’ -C氧亞甲基橋連接修飾。所述的雙功能試劑結(jié)構(gòu)如⑴、(II)、(III)所示:
權(quán)利要求
1.一種多肽修飾的流感病毒感染細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述系統(tǒng)包括作為靶向分子的多肽與結(jié)合到該多肽上的抗流感病毒藥物，二者通過雙功能試劑共價連接成綴合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的綴合物中的多肽為流感病毒血凝素蛋白結(jié)合肽，具有SEQ ID N0.1-18的序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述流感病毒血凝素蛋白結(jié)合肽是通過噬菌體展示技術(shù)獲得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的綴合物中的抗流感病毒藥物為反義寡核苷酸類藥物，具有SEQ ID N0.19-25的序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的反義寡核苷酸包含序列5’端巰基標(biāo)記和穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的化學(xué)修飾。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的反義寡核苷酸穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的化學(xué)修飾包括硫代磷酸酯骨架修飾、核糖2’ -O-甲基修飾、核糖2’ -O-甲氧乙基修飾、核糖2’ -O位與4’ -C氧亞甲基橋連接修飾。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的雙功能試劑選自下列結(jié)構(gòu)之
8.一種根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項中所述的給藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，所述系統(tǒng)是將流感病毒血凝素蛋白結(jié)合肽與5’端巰基標(biāo)記的反義寡核苷酸通過作為空間間隔的雙功能試劑進(jìn)行共價連接后制備而得。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中所述的多肽修飾的流感病毒感染細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)在制備治療流感病毒感染及其相關(guān)性疾病藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物靶向遞送系統(tǒng)，具體涉及一種新型多肽修飾的流感病毒感染細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)及其制備方法和用途。本發(fā)明針對現(xiàn)有的抗流感病毒感染藥物靶向遞送系統(tǒng)的不足，使用流感病毒血凝素蛋白結(jié)合肽作為靶向探針，與具有抗流感活性的反義寡核苷酸藥物通過雙功能試劑共價連接，形成靶向給藥系統(tǒng)。該系統(tǒng)可以胞吞的方式進(jìn)入流感病毒感染細(xì)胞，提高被感染細(xì)胞對藥物的攝取。本發(fā)明具有靶向到流感病毒表面血凝素蛋白的作用，可有效避免其他正常細(xì)胞的攝取，靶向和治療效率高，制備簡便，可應(yīng)用于流感病毒感染及其相關(guān)性疾病的治療。
文檔編號A61K47/48GK103182091SQ20131003952
公開日2013年7月3日 申請日期2013年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月1日
發(fā)明者王升啟, 丁曉然, 魯?shù)さ? 汪崇文, 楊靜, 張莉 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所