專利名稱：一種西洋參提取物的制備方法及其在制備防治艾滋病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體涉及一種西洋參提取物的制備方法及制藥用途，更具體的涉及一種西洋參提取物在制備防治艾滋病藥物中的應用。
背景技術：
艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired ImmunodeficiencySyndrome, AIDS),由人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)感染引起。導致被感染者免疫功能的部分或完全喪失，CD4+T淋巴細胞數(shù)量減少，功能降低，繼而發(fā)生多系統(tǒng)、多器官、多病原體的復合感染(機會性感染)和腫瘤等。自世界上1981年(我國自1985年)出現(xiàn)第I例AIDS病人以來，艾滋病病毒在全球范圍內的傳播速度驚人，截至2011年底，我國累計報告HIV感染者·和病人約78萬人，約占世界上3400萬感染者的2.3%。其中2011年新發(fā)感染者約4.8萬人，因AIDS相關死亡約2.8萬人。從HIV感染到AIDS發(fā)病需要經歷很長一段時間，大致包括潛伏期、無癥狀期、最后發(fā)展成艾滋病期。雞尾酒療法是目前國際上通用的艾滋病治療方法，該療法以往僅用于艾滋病期的病人，無癥狀期HIV感染者幾乎無藥可用。雖然隨著研究的進步，國內外均提倡CD4+T淋巴細胞< 350/mm3的無癥狀期HIV感染者宜提早進行雞尾酒療法干預；但該療法副作用大、病人難耐受，病毒變異及出現(xiàn)耐藥性等問題尚無法解決，而且其并不能完全清除體內的艾滋病病毒，停藥后病人馬上出現(xiàn)反彈，如果早期就應用，更是存在病人的并發(fā)癥多、后期無法繼續(xù)治療等諸多潛在危險。因此有相當數(shù)量的患者在無癥狀期不適宜或不能使用抗病毒治療，只能任其發(fā)展至艾滋病期再治療。中醫(yī)提出艾滋病系艾滋病毒邪侵襲機體，直傷本元之氣，多臟受損(以脾腎為主)，陰陽失調，痰瘀內生，險證叢生，最后致命元敗亡、陰陽離決而死，艾滋病毒邪直傷本元之氣為艾滋病的主要病機特點。因艾滋病臨床多出現(xiàn)咳痰、泄瀉、口糜、皰疹、瘰疬、身熱不揚、胸脘痞悶、皮膚潰瘍、舌苔膩或黃厚膩等濕性癥狀患者發(fā)病緩、病程長，邪深滯痼、粘滯難拔，故與溫病中濕熱病邪的特征相合。治療上應扣其“正虛邪實”病機實質，予以培補元氣，提高免疫力。同時，正氣的培補應具有預見性，艾滋病濕熱之毒邪易耗氣傷陰，無癥狀期的證候調查結果也顯示氣陰兩虛證居多，應以益氣滋陰為主，阻其氣陰耗傷，以延緩發(fā)病進程，“既病防變”。西洋參為五加科人參屬植物西洋參Panax quinquefolium L.的干燥根，又名花旗參，西洋人參、洋參，在我國臨床應用已有300多年的歷史，并已載入中國藥典。西洋參具有補氣養(yǎng)陰，清熱生津之功效，可用于氣虛陰虧，內熱，咳喘痰血，虛熱煩倦，消渴，口燥咽干；而且其幾乎無毒副作用，是法定的保健食品原料?，F(xiàn)在研究已顯示西洋參具有調節(jié)或增強已受損機體免疫力的作用。正因西洋參補氣養(yǎng)陰的功效，及正向調節(jié)免疫力的獨特醫(yī)療保健價值及毒副作用小、宜于長期服用的特點，均與艾滋病無癥狀期的治療原則相符，切中要害，是一個非常有希望的防治艾滋病的藥物。西洋參中含有皂苷、脂肪酸類、聚炔類、留醇類、黃酮類、揮發(fā)油類、糖類、氨基酸類及無機元素類等多種活性成分西洋參化學成分及藥理活性研究進展[J].特產研究，2007, (3): 73-77，其中人參皂苷是有效成分之一，如:中國藥典2010年版規(guī)定西洋參中人參皂苷Rbl、Re及Rgl的總量不得少于2.0%。中國發(fā)明專利CN102000447A涉及“富含皂苷類物質的藥材中提取有效成分的新方法”，并具體公開了皂苷類藥材中有效成分提取方法的改進，其申請文件中明確記載將富含皂苷類物質的藥材破碎后再提取，富含皂苷類物質的藥材選自人參屬植物，人參屬植物選自人參、珠子參、竹節(jié)參、西洋參、三七。而該方法仍需要將人參屬植物粉碎后置于閃式提取器中，粉碎過程中存在粉塵大，有損失，耗能等缺點，而且此項專利申請僅涉及人參屬提取物的提取方法，并沒有公開人參屬提取物抗HIV病毒的藥效學實驗以及用于防治艾滋病的用途。中國發(fā)明專利CN101781351A涉及“一種從西洋參中提取人參皂苷Rbl的方法及其粉針劑”，其僅僅從西洋參中提取獲得一種人參皂苷Rbl，體現(xiàn)不出中藥多成分、多靶點的特色，更沒有涉及西洋參提取物在制備防治艾滋病藥物中的應用。中國發(fā)明專利CN10278998A涉及“一種用于治療艾滋病無癥狀HIV感染期的中藥片”，其中公開了一種包含西洋參在內共11味中藥組成的中藥片，該中藥片可有效用于艾滋病無癥狀HIV感染期的治療，其中西洋參為粉碎入藥，此中藥片雖然具有一定的藥效，但由于該中藥片共由11味中藥組成，而中藥復方的作用并不等同于方中幾味中藥功效的簡單疊加，中藥組合后會產生相生、相須、相殺、相畏等多種配伍作用，在眾多的藥味中究竟哪些中藥針對艾滋病無癥狀HIV感染期的治療發(fā)揮主要作用，哪些中藥發(fā)揮次要作用或者不產生明顯作用均是本領域技術人員無法獲知的；即便西洋參是其中的有效組分之一，也只是將其粉末與其他10味中藥進行配伍后達到“有效”的目的，且西洋參是全粉入藥，并沒有對西洋參中起效的活性成分進行追蹤分析。發(fā)明人通過查閱國內外的專利及非專利文獻，發(fā)現(xiàn)至今為止關于西洋參中哪些成分是防治艾滋病的活性成分以及如何從西洋參中提取出可以防治艾滋病的活性提取物，尚無人研究。在天然藥物化學領域，中藥提取是指一種從天然粗材料中去除無用、獲取生物活性精華的工藝過程。常用的提取方法少則花時I小時或數(shù)小時，多則花時數(shù)天乃至數(shù)十天，過程中的污染和浪費十分突 出甚至驚人。因此，如何從西洋參中高效、節(jié)能、減少藥材浪費的提取防治艾滋病的活性物質，并用于制備防治艾滋病的藥物是現(xiàn)有技術中迫切需要解決的問題。

發(fā)明內容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術缺陷，本發(fā)明目的之一在于，提供一種防治艾滋病的西洋參提取物的制備方法。可有效解決從西洋參中提取防治艾滋病的活性物質的技術問題。本發(fā)明的技術方案是，在西洋參中加入重量體積比為6-50倍(重量體積是指固體物用g計，液體物用ml計，以下同)的丙酮(即Ig的西洋參加6-50ml的丙酮)，用組織破碎提取法提取3次，每次提取均為粉碎30秒，間歇2秒，再粉碎60秒，間歇2秒，再粉碎30秒，每次的提取液過濾，得濾液，合并3次的濾液，減壓濃縮至干，得殘渣，用與西洋參重量體積比為1:1的水溶解殘渣(即水的用量為，Ig西洋參按上述方法制得的殘渣，用Iml的水溶解)，經裝有DiaionHP-20大孔吸附樹脂的柱色譜(徑高比為1:6)，先用6倍量柱體積的去離子水洗脫，后用8倍量柱體積的質量濃度為95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得西洋參提取物，所述的丙酮為體積濃度為70%的丙酮。本發(fā)明的另一目的在于，提供上述西洋參提取物在制備防治艾滋病藥物中的應用，該藥物能夠有效用于防治艾滋病，實現(xiàn)對艾滋病的防治?！N用于防治艾滋病的藥物組合物，該藥物組合物包含上述的西洋參提取物以及藥學上可接受的載體；所述藥物組合物為口服制劑或注射劑；所述口服制劑的劑型為膠囊、片劑、滴丸劑、微丸劑、口服液或顆粒劑。本發(fā)明西洋參提取物制備的防治艾滋病藥物在應用時，先試驗提取物對具有免疫功能的T細胞的毒性，在其沒有毒性的前提下，再以HIV病毒感染T細胞，經反復試驗，結果證明本發(fā)明西洋參提取物治療組不僅T細胞生長良好，而且病毒復制量顯著減少。說明了本發(fā)明西洋參提取物能在不損傷免疫功能的前提下，有效阻斷HIV感染，無副作用。本發(fā)明的西洋參提取物可制備成膠囊、片劑、滴丸劑、微丸劑、口服液、顆粒劑和注射劑的形式，用作防治艾滋病的藥物。本發(fā)明的優(yōu)勢在于:首先，本發(fā)明的提取方法與超聲波提取方法相比，在無需粉碎藥材的情況下，依然可在短時間內將有效成分提取出來，具有高效、節(jié)能、省時、環(huán)保、減少藥材浪費的優(yōu)勢；其次，進一步采用大孔吸附樹脂柱層析純化獲得的本發(fā)明西洋參提取物，其對T細胞無毒、不影響T細胞生長，又能抗HIV-1感染，而且效果優(yōu)于中藥片對照藥物，不但達到了篩選有效中藥及找到活性物質的目的，同時本發(fā)明進一步優(yōu)化了療效，有效用于制備防治艾滋病的藥物，用于防治艾滋 病?？傊?，本發(fā)明制備的西洋參提取物在防治艾滋病的應用中充分體現(xiàn)了天然藥物扶正(不損傷有免疫功能的T細胞)、排毒(防治HIV感染)的多層次、多靶點的特色，在防治艾滋病方面具有重要的作用。
具體實施例方式以下結合具體實施例對本發(fā)明的技術方案作詳細說明，其僅是對本發(fā)明實施方式的具體舉例，不能被理解為是對本發(fā)明的限制。實施例1:西洋參加入6倍重量體積的丙酮，用組織破碎提取法提取3次，每次提取均為粉碎30秒，間歇2秒，再粉碎60秒，間歇2秒，再粉碎30秒，每次的提取液過濾，得濾液，合并3次的濾液，減壓濃縮至干，得殘渣，用西洋參與水重量體積比為1:1的水溶解殘渣，經裝有DiaionHP-20大孔吸附樹脂的柱色譜，先用6倍量柱體積的去離子水洗脫，后用8倍量柱體積的質量濃度為95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得西洋參提取物。實施例2:西洋參加入15倍量重量體積的丙酮，用組織破碎提取法提取3次，每次提取均為粉碎30秒，間歇2秒，再粉碎60秒，間歇2秒，再粉碎30秒，每次的提取液過濾，得濾液，合并3次的濾液，減壓濃縮至干，得殘渣，用西洋參與水重量體積比為1:1的水溶解殘渣，經裝有DiaionHP-20大孔吸附樹脂的柱色譜，先用6倍量柱體積的去離子水洗脫，后用8倍量柱體積的質量濃度為95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得西洋參提取物。
實施例3:西洋參加入30倍重量體積的丙酮，用組織破碎提取法提取3次，每次提取均為粉碎30秒，間歇2秒，再粉碎60秒，間歇2秒，再粉碎30秒，每次的提取液過濾，得濾液，合并3次的濾液，減壓濃縮至干，得殘渣，用西洋參與水重量體積比為1:1的水溶解殘渣，經裝有DiaionHP-20大孔吸附樹脂的柱色譜，先用6倍量柱體積的去離子水洗脫，后用8倍量柱體積的質量濃度為95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得西洋參提取物。實施例4:西洋參加入40倍重量體積的丙酮，用組織破碎提取法提取3次，每次提取均為粉碎30秒，間歇2秒，再粉碎60秒，間歇2秒，再粉碎30秒，每次的提取液過濾，得濾液，合并3次的濾液，減壓濃縮至干，得殘渣，用西洋參與水重量體積比為1:1的水溶解殘渣，經裝有DiaionHP-20大孔吸附樹脂的柱色譜，先用6倍量柱體積的去離子水洗脫，后用8倍量柱體積的質量濃度為95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得西洋參提取物。實施例5:西洋參加入50倍重量體積的丙酮，用組織破碎提取法提取3次，每次提取均為粉碎30秒，間歇2秒，再粉碎60秒，間歇2秒，再粉碎30秒，每次的提取液過濾，得濾液，合并3次的濾液，減壓濃縮至干，得殘渣，用西洋參與水重量體積比為1:1的水溶解殘渣，經裝有DiaionHP-20大孔吸附樹脂的柱色譜，先用6倍量柱體積的去離子水洗脫，后用8倍量柱體積的質量濃度為95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得西洋參提取物。

上述實施例制備的西洋參提取物，經試驗驗證，均具有防治艾滋病的作用，可有效用于制備防治艾滋病的藥物，有關試驗的具體情況如下:試驗例1:按常規(guī)方法將1G5T細胞在含有10%胎牛血清(Hyclone)及青霉素和鏈霉素的RPM1-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37° C，飽和濕度為5%C02，培養(yǎng)生長24小時，加入西洋參提取物，使西洋參提取物的終濃度達到0.005-0.5mg/ml，作用24小時后，以臺盼藍染色排除法測定1G5T細胞的細胞活力，經測定，加入西洋參提取物作用24小時后的1G5T細胞的細胞活力均大于60%，均不抑制T細胞增殖，取上述作用24小時后的1G5T細胞以HBSS平衡鹽溶液(Gibco-Brl公司)洗3次，每次HBSS平衡鹽溶液的用量為RPM1-1640培養(yǎng)液體積量的1/2，將洗滌后的1G5T細胞以0.01M0I (multiplicity of infection，感染復數(shù)，是一個比值、沒有單位，其含義是感染時病毒與細胞數(shù)量的比值，即病毒顆粒數(shù)/細胞數(shù))的親X4的HIV-lNL4-3(HIV-lX4-tropic NL4-3)病毒株感染1.5小時，被感染的細胞用HBSS平衡鹽溶液(Gibco-Brl公司)洗3次，每次HBSS平衡鹽溶液的用量為RPM1-1640培養(yǎng)液體積量的1/2，加入含有10%胎牛血清(Hyclone)及青霉素和鏈霉素的RPM1-1640培養(yǎng)液后，再加入西洋參提取物，使西洋參提取物的終濃度達到0.005-0.5mg/ml，在37° C，飽和濕度為5%0)2的條件下，繼續(xù)培養(yǎng)3天后，以臺盼藍染色排除法和四唑鹽(MTT)法測定細胞活力，以熒光素酶分析試劑盒測定熒光素酶表達，按照公式計算細胞存活率和本發(fā)明西洋參提取物對HIV感染T細胞的抑制率，其中，未治療組指僅感染病毒的細胞；溶劑組為未感染病毒、未治療的細胞，在加入本發(fā)明西洋參提取物的相應時間點僅加入溶解本發(fā)明西洋參提取物的二甲基亞砜溶劑；藥物組為感染病毒、經本發(fā)明西洋參提取物治療的細胞；細胞存活率％=藥物組光吸收值/溶劑組光吸收值X 100%
權利要求
1.一種西洋參提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)在西洋參中加入重量體積比為6-50倍的丙酮，用組織破碎提取法提取3次，每次提取均為粉碎30秒，間歇2秒，再粉碎60秒，間歇2秒，再粉碎30秒，每次的提取液過濾，得濾液，所述重量體積比是指固體物用g計，液體物用ml計； (2)合并3次的濾液，減壓濃縮至干，得殘渣，用與西洋參重量體積比為1:1的水溶解殘渣，經裝有DiaionHP-20大孔吸附樹脂的柱色譜，先用6倍量柱體積的去離子水洗脫，后用8倍量柱體積的質量濃度為95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； (3)減壓回收溶劑乙醇至干，即得西洋參提取物。
2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，在步驟(I)中，所述的丙酮為體積濃度為70%的丙酮。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，在步驟(I)中，在西洋參中優(yōu)選加入重量體積比為6、15、30、40或50倍的丙酮。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述大孔吸附樹脂的徑聞比為1:6。
5.根據(jù)權利要求1至4中任一項所述的制備方法制備的西洋參提取物。
6.權利要求5所述的西洋參提取物在制備防治艾滋病藥物中的用途。
7.根據(jù)權利要求6所述的用途，其特征在于，所述西洋參提取物在不損傷免疫功能的前提下，有效阻斷HIV感染，無副作用，從而實現(xiàn)對艾滋病的防治。
8.一種用于防治艾滋病 的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物包含權利要求5所述的西洋參提取物以及藥學上可接受的載體。
9.根據(jù)權利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為口服制劑或注射劑。
10.根據(jù)權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述口服制劑的劑型為膠囊、片齊U、滴丸劑、微丸劑、口服液或顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治艾滋病的藥物的制備方法及其應用，具體涉及西洋參提取物的制備方法及其在制備防治艾滋病的藥物中的應用，可通過添加藥學上可接受的載體，將西洋參提取物制備成口服制劑或注射劑，所述口服制劑的劑型優(yōu)選為膠囊、片劑、滴丸劑、微丸劑、口服液或顆粒劑。藥效學試驗表明西洋參提取物能在不損傷免疫功能的前提下，有效阻斷HIV感染，無副作用，從而實現(xiàn)對艾滋病的防治。
文檔編號A61K36/258GK103110677SQ20131004589
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月5日 優(yōu)先權日2013年2月5日
發(fā)明者劉延澤, 郭會軍, 李青雅, 肖培根, 李精云, 馬里奧·堪奇 申請人:中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所, 河南中醫(yī)學院