靶向的脂質體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明是在藥物輸送的領域，并且確切地講，是基于陽離子脂質體的藥物輸送。在實施方案中，本發(fā)明提供了制備適用于將脂質體輸送至腫瘤(包括腦腫瘤)的配體靶向的(例如，抗體或抗體片段靶向的)脂質體的方法。在實施方案中，所述脂質體輸送替莫唑胺越過血腦屏障以用于治療原發(fā)性或轉移性腦腫瘤?？梢杂盟鲋|體來治療的其它癌癥包括：神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、黑素瘤、前列腺癌、頭頸部癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、乳癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、胃癌、結腸直腸癌、宮頸癌、脂肉瘤、橫紋肌肉瘤、絨毛膜癌、胰腺癌、視網(wǎng)膜母細胞瘤以及其它類型的癌癥。在另一個實施方案中，所述脂質體輸送美法侖以用于治療多發(fā)性骨髓瘤、血液的其它腫瘤、或其它實體腫瘤。在其它的實施方案中，所述脂質體可以輸送其它藥物(包括阿托品)以用于治療有機磷中毒。
【專利說明】靶向的脂質體
[0001]發(fā)明背景發(fā)明領域
[0002]本發(fā)明是在藥物輸送的領域，并且確切地講，是基于陽離子脂質體的藥物輸送。在實施方案中，本發(fā)明提供了制備適用于將脂質體輸送至腫瘤(包括腦腫瘤)的配體靶向的(例如，抗體或抗體片段靶向的)脂質體的方法。在實施方案中，脂質體輸送替莫唑胺(temozolomide)越過血腦屏障以用于治療原發(fā)性或轉移性腦腫瘤。可以用脂質體來治療的其它癌癥包括:神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、黑素瘤、前列腺癌、頭頸部癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、乳癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、胃癌、結腸直腸癌、宮頸癌、脂肉瘤、橫紋肌肉瘤、絨毛膜癌、胰腺癌、視網(wǎng)膜母細胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤以及其它類型的癌癥。在另一個實施方案中，脂質體輸送美法侖(melphalan)用于治療多發(fā)性骨髓瘤、血液的其它腫瘤、或其它實體腫瘤。在其它的實施方案中，脂質體可以輸送其它藥物如阿托品(atropine)、培美曲塞(pemetrexed)或伊立替康(irinotecan)越過血腦屏障。
[0003]發(fā)明背景
[0004]原發(fā)性腦腫瘤，并且特別是神經(jīng)膠質瘤，是最難治療的癌癥之一。除了原發(fā)性腫瘤之外，一年會在超過150，000患者中診斷出來自多種原發(fā)性源[肺占多數(shù)(60%)、乳房(20%)和黑素瘤(10%)]的轉移性腦癌(Newton H 和 Malkin M(2010) Neurologic Complicationsof Systemic Cancer and Antineoplastic Therapy.1nforma Healthcare)。因此，迫切需要用于腦癌的改進治療，NCI已經(jīng)將腦癌視為其前5項基金優(yōu)先性中的一項就印證了這一點。盡管最近在藥物發(fā)現(xiàn)和靶向治療方面有所進步，但在過去幾年里患有腦癌的患者的預后仍缺乏改善，主要是因為治療劑不能越過血腦屏障(BBB) (Blakeley, J.(2008) =Drugdelivery to brain tumors.Current Neurology&Neuroscience Reports,8:235-241)。
[0005]用于多形性成膠質細胞瘤(GBM)的目前的標準治療是手術切除，接著用替莫唑胺(TMZ)來放射治療和化療。TMZ是一種第二代烷基化(甲基化)劑，其可引起細胞毒性DNA損傷，并且也被批準用于治療間變性星形細胞瘤(AA)，并且在臨床試驗中用于治療從其它非-CNS實體腫瘤發(fā)生的腦轉移。作用機制和藥理性質在最近已有綜述(TentoriL 和 Graziani G(2009)Recent Approaches to Improve the Antitum or Efficacy ofTemozolomide.Current Medicinal Chemistryl6:第 245-257 頁；和 Mrugala MM、AdairJ 以及 Kiem HP (2010) Temozolomide:Expanding Its Role in Brain Cancer.Drugs ofToday46:第 833-846 頁)。TMZ 是耐受相對良好的(Jiang G、Wei ZP、Pei DS、Xin Y、LiuYQ 以及 Zheng J N(2011) A Novel Approach to Overcome Temozolomide Resistance inGlioma and Melanoma:Inactivation of MGMT by Gene Therapy.Biochemical and Biophysical Research Communications406:第 311-314 頁)，但是骨髓抑制、嗜中性白細胞減少癥和血小板減少屬于它的副作用，并且治療劑量受到這些副作用的限制。還發(fā)現(xiàn)了長期的TMZ給藥方案可引起淋巴細胞減少和機會性感染(Tentori L和Graziani G(2009)Recent Approaches to Improve the Antitumor Efficacy of Temozolomide.CurrentMedicinal Chemistryl6:第245-257頁)。由口服施用的TMZ的非腫瘤特異性攝入所引起的廣泛的組織分布是這些副作用的主要原因。因此，TMZ的靶向腫瘤的輸送可以幫助減少這些不良事件。
[0006]TMZ已被證實一部分GBM患者有存活益處，但是與單獨的放射比較，這種中位值增加僅是2.5個月(Chamberlain MC (2010) Temozolomide:Therapeutic Limitations in theTreatment of Adult High-Grade Gliomas.Expert Review of Neurotherapeuticsl0..%1537-1544頁)。最近的研究也已經(jīng)指出60%至75%的GBM患者和50%的AA患者不能受益于TMZ(Chamberlain MC(2010)Temozolomide:Therapeutic Limitations in the Treatmentof Adult High-Grade Gliomas.Expert Review of NeurotherapeuticslO:第 1537-1544頁)?？梢詫⒒煹氖w因于許多因素，包括:循環(huán)中的短半衰期、藥物通過P-糖蛋白而從腫瘤中流出、腫瘤對藥物的抗性、以及無法越過血腦屏障。抵抗TMZ的主要機制是過度表達O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉移酶(MGMT)，這種酶通過去除O6-鳥嘌呤加合物來修復TMZ誘導的 DNA 損傷(Mrugala MM、Adair J 和 Kiem HP (2010) Temozolomide !Expanding ItsRole in Brain Cancer.Drugs of Today46:第 833-846 頁)。因此，用以例如經(jīng)由腫瘤特異性輸送P53腫瘤抑制基因來下調(diào)MGMT活性的方法將增強TMZ的治療效果。 [0007]因此，急切需要開發(fā)用于治療腦癌和其它癌癥的新型治療。本發(fā)明通過提供用于輸送替莫唑胺的基于陽離子脂質體的藥物輸送系統(tǒng)來滿足這些需要。
[0008]發(fā)明簡要概述
[0009]在實施方案中，提供了制備靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物的方法。此類方法適合地包括:在乙醇中制備包含一種或多種陽離子脂質的脂質溶液，制備替莫唑胺的溶液，將脂質溶液與替莫唑胺的溶液混合，將脂質與替莫唑胺的混合物注入水溶液中，從而形成替莫唑胺陽離子脂質體，并且將替莫唑胺陽離子脂質體與配體混合以形成靶向的替莫唑胺陽離子脂質體，其中配體直接與陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0010]適合地，配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈 Fv (TfRscFv)。
[0011]適合地，在二甲亞砜(DMSO)中制備替莫唑胺的溶液。適合地，在約ImM至約200mM、或約50mM至約200mM的濃度下制備替莫唑胺的溶液。
[0012]在實施方案中，脂質溶液包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2_二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)。
[0013]適合地，脂質:替莫唑胺的摩爾比是約0.1:1至約5:1，更適合地約0.5:1至約2:1或約1:1。適合地,脂質體的濃度是約ImM至約2mM、或約2mM至約10mM。
[0014]在實施方案中，配體:脂質的重量比是約0.01:1至約0.5:1，更適合地約0.3:1至約0.4:1。在實施方案中，TfRscFv:脂質的重量比是約0.33:1。
[0015]適合地，提供了一種制備靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物的方法。在實施方案中，所述方法包括:在乙醇中制備包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)的脂質溶液，制備替莫唑胺的溶液，將脂質溶液與替莫唑胺的溶液混合，將脂質與替莫唑胺的混合物注入水溶液中，從而形成替莫唑胺陽離子脂質體，將替莫唑胺陽離子脂質體與抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)混合以形成靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物，其中TfRscFv直接與陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0016]在另一個實施方案中，提供了一種制備靶向的美法侖陽離子脂質體復合物的方法。在實施方案中，所述方法包括:在乙醇中制備包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)的脂質溶液，制備美法侖的溶液，將脂質溶液與美法侖的溶液混合，將脂質與美法侖的混合物注入水溶液中，從而形成美法侖陽離子脂質體，將美法侖陽離子脂質體與一種配體混合以形成靶向的美法侖陽離子脂質體復合物，所述配體包括例如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv),其中配體(例如，TfRscFv)直接與陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0017]在另外的實施方案中，提供了治療患者的癌癥的方法，所述方法包括對患者施用靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物。適合地，靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物包含:陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油酰基-Sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE);替莫唑胺；和配體，其與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0018]在另外的實施方案中，提供了治療患者的癌癥的方法，所述方法包括對患者施用靶向的美法侖陽離子脂質體復合物。適合地，靶向的美法侖陽離子脂質體復合物包含:陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?Sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE);美法侖；和配體，其與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0019]在實施方案中，施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(頂)、真皮內(nèi)的(ID)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、舌下的(SL)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
[0020]適合地，被治療的癌癥是腦癌，例如神經(jīng)膠質瘤或星形細胞瘤。
[0021]在其它的實施方案中，被治療的癌癥是轉移性腦腫瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、黑素瘤、前列腺癌、頭頸部癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、乳癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、胃癌、結腸直腸癌、宮頸癌、脂肉瘤、橫紋肌肉瘤、絨毛膜癌、胰腺癌、視網(wǎng)膜母細胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤以及其它類型的癌癥。
[0022]在另一個實施方案中，脂質體輸送美法侖以用于治療多發(fā)性骨髓瘤。
[0023]在其它的實施方案中，脂質體可以輸送其它藥物，如阿托品、培美曲塞或伊立替康和/或其衍生物。
[0024]在實施方案中，所述方法進一步包括對患者施用與靶向的替莫唑胺、美法侖、阿托品、培美曲塞或伊立替康陽離子脂質體復合物組合的另一治療。適合地，所述另一治療包括施用化療劑、小分子、放射治療或基于核酸的治療。在實施方案中，基于核酸的治療包括施用包含表達野生型P53的質粒DNA的陽離子脂質體復合物。在實施方案中，所述另一治療包括在癌細胞中施用下調(diào)、改變或另外使MGMT的作用無效的任何分子。在其它的實施方案中，所述另一治療包括施用干擾乙酰膽堿產(chǎn)生或干擾乙酰膽堿結合至其受體的任何分子。
[0025]在實施方案中，提供了治療患者的腦癌的方法，所述方法包括對患者施用靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物。適合地，靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物包含:陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油酰基-Sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE);替莫唑胺；和抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)，其與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0026]還提供了治療患者的癌癥的方法，其適合地包括對患者施用通過本文描述的方法制備的靶向替莫唑胺陽離子脂質體復合物。
[0027]在其它的實施方案中，提供了治療患者的多發(fā)性骨髓瘤的方法，所述方法包括對患者施用靶向的陽離子脂質體復合物。適合地，靶向的美法侖陽離子脂質體復合物包含:陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE);美法侖；和抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv),其與所述陽離子脂質體直接復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0028]在其它的實施方案中，提供了治療患者的任何癌癥的方法，所述方法包括對患者施用靶向的陽離子脂質體復合物。適合地，靶向的美法侖陽離子脂質體復合物包含:陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE);美法侖；和抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv),其與所述陽離子脂質體直接復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0029]還提供了治療患者的癌癥的方法，其適合地包括對患者施用通過本文描述的方法制備的靶向的美法侖陽離子脂質體復合物。
[0030]還提供了治療患者的腦癌的方法，所述方法包括對患者施用陽離子脂質體復合物和替莫唑胺，所述陽離子脂質體復合物包含:陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE);質粒DNA，其表達野生型p53 ；以及抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv),其與所述陽離子脂質體直接復合,但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0031]以下參閱附圖詳細描述了另外的實施方案、特征、和實施方案的優(yōu)點、以及各種實施方案的結構和操作。
[0032]附圖簡述
[0033]圖1示出游離的TMZ和如本文所述的包含TMZ的三種陽離子脂質體的U251細胞存活率相對TMZ濃度的關系。
[0034]圖2示出游離的TMZ和如本文所述的包含TMZ的陽離子脂質體的U87細胞存活率相對TMZ濃度的關系。
[0035]圖3A示出游離的TMZ和如本文所述的包含TMZ的靶向陽離子脂質體的T98G細胞存活率相對TMZ濃度的關系。
[0036]圖3B示出游離的TMZ和如本文所述的包含TMZ的靶向陽離子脂質體的KMS-1l細胞存活率相對TMZ濃度的關系。
[0037]圖4A示出使用Maestro?體內(nèi)熒光成像系統(tǒng)的腦腫瘤的熒光強度。
[0038]圖4B示出U87MG_luc2成膠質細胞瘤腫瘤異種移植對用游離的TMZ和scL_TMZ治療的反應的磁共振成像(MRI)圖像。
[0039]圖5示出用游離的TMZ或scL-TMZ治療之后，通過MRI測量的腦腫瘤的大小。
[0040]圖6示出用游離的TMZ和scL-TMZ治療的小鼠的生物發(fā)光成像。
[0041]圖7示出用游離的TMZ和scL-TMZ治療的小鼠的其它生物發(fā)光成像。[0042]圖8示出用游離的TMZ和scL-TMZ治療的小鼠的生物發(fā)光信號強度的量化。
[0043]圖9示出用游離的TMZ和scL-TMZ治療的小鼠的生物發(fā)光信號強度的量化。
[0044]圖10示出用游離的TMZ和scL-TMZ治療期間和之后小鼠的體重測量值。
[0045]圖11示出Kaplan-Meier曲線圖，其證明用游離的TMZ和scL_TMZ治療的動物的長期存活。
[0046]圖12示出Kaplan-Meier曲線圖，其證明用游離的TMZ和不同劑量的scL_TMZ治療的動物的長期存活。
[0047]圖13示出腦腫瘤的重量，其證明游離的TMZ和scL-TMZ的作用。
[0048]圖14示出對細胞凋亡的水平的流式細胞檢測分析的結果，所述結果是通過從腦腫瘤中分離出的單細胞的分裂半胱天冬酶-3抗體染色來測定。
[0049]圖15示出游離的TMZ和scL-TMZ治療的小鼠的腫瘤大小。
[0050]圖16示出用游離的TMZ和scL-TMZ治療的小鼠的體重。
[0051]圖17示出從皮下T98G異種移植腫瘤中分離出的CD133+CSC和CD133-非CSC的TUNEL染色。
[0052]圖18示出通過來自皮下T98G腦腫瘤的SSEA-1+CSC的分裂半胱天冬酶_3抗體染色所評估的細胞凋亡的水平。
[0053]圖19示出游離的TMZ、如本文所述的scL-TMZ以及scL_TMZ連同表達p53基因的靶向陽離子脂質體的組合的T98`G細胞存活率相對TMZ濃度的關系。
[0054]圖20示出全身性施用的SCL-6FAM-0DN到U251異種移植腦腫瘤的腫瘤靶向輸送。
[0055]圖21示出全身性施用之后，從U251異種移植腫瘤中分離出的⑶133+和⑶133-非CSC細胞中攝入的scL輸送的6FAM-0DN的流式細胞檢測分析。
[0056]圖22示出全身性施用之后，通過scL輸送的ODN而在IC GBM中腫瘤特異性靶向CSC。
[0057]圖23示出TMZ添加至細胞之后的XTT分析和IC5tl值。
[0058]圖24示出使用Xenogen的U87IC腫瘤的生物發(fā)光成像，其展示出SGT-53+TMZ的組合的協(xié)同效應。
[0059]圖25示出SGT-53加TMZ對IC U87GBM的協(xié)同效應。
[0060]圖26示出全身性施用的scL_p53加TMZ的組合的協(xié)同效應。
[0061]圖27示出Kaplan-Meier曲線圖，其證明在GBM的IC U87模型中，對TMZ治療的SGT-53敏化作用明顯提高存活率。
[0062]圖28示出Kaplan-Meier曲線圖，其證明在GBM(T98G細胞)的IC抗TMZ的模型中，對TMZ治療的SGT-53敏化作用明顯提高存活率。
[0063]圖29示出如所指出的治療后細胞凋亡中的腫瘤細胞的百分比。
[0064]圖30示出T98G抗TMZ的腦腫瘤細胞和SQ異種移植腫瘤中的MGMT表達通過全身性復合物p53基因治療而下調(diào)。
[0065]圖31示出T98G抗TMZ的顱內(nèi)腦腫瘤中的MGMT表達通過全身性復合物p53基因治療而下調(diào)。
[0066]圖32示出對于scL-p53的建議給藥時間計劃。
[0067]圖33示出游離的美法侖(MEL)和如本文所述的包含美法侖的靶向陽離子脂質體的KMS-1l細胞存活率相對美法侖濃度關系。
[0068]圖34示出未包囊的美法侖與沒有靶向部分的脂質/美法侖和與完全的scL/美法侖復合物、以及與僅是脂質體的比較。
[0069]圖35示出未包囊的美法侖與新鮮的和凍干的scL/美法侖復合物的比較。
[0070]圖36示出靶向p53治療對KMS-1l細胞的作用。
[0071]圖37示出單獨的游離的(未包囊的)美法侖、單獨的scL/美法侖、或游離的(未包囊的)或scL包囊的美法侖加scL-p53的組合對KMS-1l細胞的作用。
[0072]發(fā)明詳述
[0073]應了解的是，本文示出和描述的【具體實施方式】是實施例，并且不意圖以任何方式來另外限制本申請的范圍。
[0074]本文引用的公布的專利、專利申請、網(wǎng)站、公司名以及科學文獻的全部內(nèi)容在此以引用的方式并入，以達到如同它們各自是被確切地和單獨地指出以引用的方式并入一樣。本文引用的任何參考文件與本申請文件的特定教義之間的任何沖突應當以有利于本申請文件的方式來解決。同樣，本領域理解的詞語或短語的定義與如在本申請文件中所確切教授的詞語或短語的定義之間的任何沖突應當以有利于本申請文件的方式來解決。
[0075]如在本申請文件中所使用，除非內(nèi)容另外清楚地指出，否則單數(shù)形式“一個(種)(a/an)”和“所述(the) ” 也確切地涵蓋它們提及的術語的復數(shù)形式。本文使用術語“大約”意指大致地、在…范圍內(nèi)、粗略地或在…左右。當結合數(shù)值范圍來使用術語“大約”時，它通過擴展到在所列舉數(shù)值以上和以下的界限來改變所述范圍。通常，本文使用術語“大約”來使一個數(shù)值改變到所指出的值以上和以下的20%偏差值。
[0076]除非另外定義，否則本文使用的技術的和科學的術語具有本申請所屬領域的技術人員通常所理解的含義。本文引用了對于本領域一般技術人員來說已知的各種方法和材料。
[0077]在實施方案中，提供了制備靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物的方法。適合地，所述方法包括在乙醇中制備包含一種或多種陽離子脂質的脂質溶液。制備替莫唑胺的溶液。將脂質溶液與替莫唑胺的溶液混合。將陽離子脂質與替莫唑胺的混合物注入水溶液中，從而形成替莫唑胺陽離子脂質體。然后將替莫唑胺陽離子脂質體與配體混合以形成靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物。適合地，配體直接與陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0078]在實施方案中，提供了制備靶向的美法侖陽離子脂質體復合物的方法。適合地，所述方法包括在乙醇中制備包含一種或多種陽離子脂質的脂質溶液。適合地，在含有足量鹽酸以促進溶解美法侖的無水乙醇中制備美法侖的溶液。將脂質溶液與美法侖的溶液混合。將陽離子脂質與美法侖的混合物注入水溶液中，從而形成美法侖陽離子脂質體。然后將美法侖陽離子脂質體與配體混合以形成靶向的美法侖陽離子脂質體復合物。適合地，配體直接與陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0079]在實施方案中，提供了制備靶向的阿托品、伊立替康或培美曲塞陽離子脂質體復合物的方法。適合地，所述方法包括在乙醇中制備包含一種或多種陽離子脂質的脂質溶液。在適當?shù)娜軇┤鐭o水乙醇、DMS0、水或緩沖溶液(如磷酸鹽緩沖液或HEPES緩沖液或TRIS緩沖液)中制備阿托品、伊立替康或培美曲塞的溶液。將脂質溶液與阿托品、伊立替康或培美曲塞的溶液混合。將陽離子脂質與阿托品、伊立替康或培美曲塞的混合物注入水溶液中，從而形成陽離子的阿托品、伊立替康或培美曲塞脂質體。然后將阿托品、伊立替康或培美曲塞陽離子脂質體與配體混合以形成靶向的阿托品、伊立替康或培美曲塞陽離子脂質體復合物。適合地，配體直接與陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
[0080]全文可互換地使用術語“復合物”、“納米復合物”、“脂質體復合物”以及“陽離子脂質體復合物”來指本發(fā)明的陽離子脂質體。
[0081]如本文所述，替莫唑胺是引起細胞毒性DNA損傷的第二代烷基化(甲基化)劑，并且還被批準用于治療間變性星形細胞瘤(AA)。以下示出的替莫唑胺的結構具有實驗式:C6H6N6O2。
[0082]
【權利要求】
1.一種制備靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物的方法，所述方法包括: (a)在乙醇中制備包含一種或多種陽離子脂質的脂質溶液； (b)制備替莫唑胺的溶液； (C)將所述脂質溶液與所述替莫唑胺的溶液混合； (d)將脂質與替莫唑胺的所述混合物注入水溶液中，從而形成替莫唑胺陽離子脂質體； (e)將所述替莫唑胺陽離子脂質體與配體混合以形成所述靶向的替莫唑胺陽離子脂質體，其中所述配體直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)。
3.如權利要求1所述的方法，其中在二甲亞砜(DMSO)中制備所述替莫唑胺的溶液。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述脂質溶液包含1，2-二油酰基-3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2- 二油?；?sn-甘油基_3_磷酰乙醇胺(DOPE)。
5.如權利要求1所述的方法，其中在約ImM至約200mM、或約50mM至約200mM的濃度下制備所述替莫唑胺的溶液。
6.如權利要求1所述的方法，其中脂質:替莫唑胺的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1，更適合地約0.5:1至約2:1`或甚至更適合地約1:1。
7.如權利要求1所述的方法,其中配體:脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1，更適合地約0.3:1至約0.4:1。
8.如權利要求2所述的方法，其中TfRscFv:脂質的所述重量比是約0.33:1。
9.一種制備靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物的方法，所述方法包括: (a)在乙醇中制備包含1，2-二油酰基-3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2_二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)的脂質溶液； (b)制備替莫唑胺的溶液； (c)將所述脂質溶液與所述替莫唑胺的溶液混合； (d)將脂質與替莫唑胺的所述混合物注入水溶液中，從而形成替莫唑胺陽離子脂質體； (e)將所述替莫唑胺陽離子脂質體與抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)混合以形成所述靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物，其中所述TfRscFv直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
10.如權利要求9所述的方法，其中在二甲亞砜(DMSO)中制備所述替莫唑胺的溶液。
11.如權利要求9所述的方法，其中在約ImM至約200mM、或約50mM至約200mM的濃度下制備所述替莫唑胺的溶液。
12.如權利要求9所述的方法，其中脂質:替莫唑胺的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1，更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
13.如權利要求9所述的方法，其中TfRscFv:脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1,更適合地約0.3:1至約0.4:1,或甚至更適合地約0.33:1。
14.靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物在制備用于治療患者的癌癥的藥物中的用途，其中所述靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物包含:(a)陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)； (b)替莫唑胺；以及 (c)配體，其直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
15.如權利要求14所述的用途，其中所述配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)。
16.如權利要求14所述的用途，其中以約10mg/m2至約500mg/m2或約50mg/m2至約250mg/m2的劑量對所述患者施用所述替莫唑胺。
17.如權利要求14所述的用途，其中所述陽離子脂質體中的脂質:替莫唑胺的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1,更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
18.如權利要求14所述的用途，其中配體:所述陽離子脂質體中的脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1，更適合地約0.3:1至約0.4:1。
19.如權利要求15所述的用途，其中TfRscFv:所述陽離子脂質體中的脂質的所述重量比是約0.33:1。
20.如權利要求14所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、舌下的(SL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(IM)、真皮內(nèi)的(ID)、眼內(nèi)的(10) 、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
21.如權利要求14所述的用途，其中所述癌癥是頭頸部癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌、腦癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、宮頸癌、肺癌、肝癌、脂肉瘤、橫紋肌肉瘤、絨毛膜癌、黑素瘤、視網(wǎng)膜母細胞瘤、卵巢癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、胃癌、結腸直腸癌、多發(fā)性骨髓瘤或血液的癌癥，適合地，所述腦癌是神經(jīng)膠質瘤、星形細胞瘤或成膠質細胞瘤。
22.如權利要求14所述的用途，其進一步包括對所述患者施用與所述靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物組合的另一治療，優(yōu)選地，所述另一治療包括施用化療劑、小分子、放射治療或基于核酸的治療。
23.如權利要求22所述的用途，其中所述基于核酸的治療包括施用陽離子脂質體復合物，所述陽離子脂質體復合物包含表達野生型P53的質粒DNA。
24.靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物在制備用于治療患者的腦癌的藥物中的用途，其中所述靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物包含: (a)陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)； (b)替莫唑胺；以及 (c)抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)，其直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
25.如權利要求24所述的用途,其中以約10mg/m2至約500mg/m2或約100mg/m2至約250mg/m2的劑量對所述患者施用所述替莫唑胺。
26.如權利要求24所述的用途，其中所述陽離子脂質體中的脂質:替莫唑胺的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1,更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
27.如權利要求24所述的用途，其中TfRscFv:所述陽離子脂質體中的脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1,更適合地約0.3:1至約0.4:1,或甚至更適合地約0.33:1。
28.如權利要求24所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(頂)、真皮內(nèi)的(ID)、舌下的(SL)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
29.如權利要求24所述的用途，其中所述腦癌是神經(jīng)膠質瘤、星形細胞瘤或成膠質細胞瘤。
30.通過權利要求1所述的方法來制備的靶向替莫唑胺陽離子脂質體復合物在制備用于治療患者的癌癥的藥物中的用途。
31.如權利要求30所述的用途，其中所述配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)。
32.如權利要求30所述的用途，其中以約10mg/m2至約500mg/m2或約50mg/m2至約250mg/m2的劑量對所述患者施用替莫唑胺。
33.如權利要求30所述的用途，其中脂質:替莫唑胺的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1,更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
34.如權利要求30所述的用途，其中配體:脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1，更適合地約0.3:1至約0.4:1。
35.如權利要求30所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(頂)、真皮內(nèi)的(ID)、舌下的(SL)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
36.如權利要求30所述的用途，其中所述癌癥是頭頸部癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌、腦癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、宮頸癌、肺癌、肝癌、脂肉瘤、橫紋肌肉瘤、絨毛膜癌、黑素瘤、視網(wǎng)膜母細胞瘤、卵巢癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、胃癌、結腸直腸癌、多發(fā)性骨髓瘤或血液的癌癥，適合地，所述腦癌是神經(jīng)膠質瘤、星形細胞瘤或成膠質細胞瘤。
37.如權利要求30所述的用途，其進一步包括對所述患者施用與所述靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物組合的另一治療，優(yōu)選地，所述另一治療包括施用化療劑、小分子、放射治療或基于核酸的治療。
38.如權利要求37所述的用途，其中所述基于核酸的治療包括施用陽離子脂質體復合物，所述陽離子脂質體復合物包含表達野生型P53的質粒DNA。
39.一種制備靶向的美法侖陽離子脂質體復合物的方法，所述方法包括: (a)在乙醇中制備包含一種或多種陽離子脂質的脂質溶液。 (b)制備美法侖的溶液； (C)將所述脂質溶液與所述美法侖的溶液混合； (d)將脂質與美法侖的所述混合物注入水溶液中，從而形成美法侖陽離子脂質體； (e)將所述美法侖陽離子脂質體與配體混合以形成所述靶向的美法侖陽離子脂質體，其中所述配體直接與所述陽離 子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
40.如權利要求39所述的方法，其中所述配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)。
41.如權利要求39所述的方法，其中在無水乙醇加鹽酸中制備所述美法侖的溶液。
42.如權利要求39所述的方法，其中所述脂質溶液包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2- 二油酰基-sn-甘油基_3_磷酰乙醇胺(DOPE)。
43.如權利要求39所述的方法，其中在約ImM至約200mM或約50mM至約200mM的濃度下制備所述美法侖的溶液。
44.如權利要求39所述的方法，其中脂質:美法侖的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1，更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
45.如權利要求39所述的方法，其中配體:脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1，更適合地約0.3:1至約0.4:1。
46.如權利要求40所述的方法，其中TfRscFv:脂質的所述重量比是約0.33:1。
47.一種制備靶向的美法侖陽離子脂質體復合物的方法，所述方法包括: (a)在乙醇中制備包含1，2-二油酰基-3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2_二油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)的脂質溶液； (b)制備美法侖的溶液； (c)將所述脂質溶液與所述美法侖的溶液混合； (d)將脂質與美法侖的所述混合物注入水溶液中，從而形成美法侖陽離子脂質體； (e)將所述美法侖陽離子脂質體與抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)混合以形成所述靶向的美法侖陽離子脂質體復合物，其中所述TfRscFv直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
48.如權利要求47所述的方法，其中在無水乙醇加鹽酸中制備所述美法侖的溶液。
49.如權利要求47所述的方法，其中在約ImM至約200mM或約50mM至約200mM或約145mM至約150mM的濃度下制備所述美法侖的溶液。
50.如權利要求47所述的方法，其中脂質:美法侖的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1，更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
51.如權利要求47所述的方法，其中TfRscFv:脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1,更適合地約0.3:1至約0.4:1,或甚至更適合地約0.33:1。
52.靶向的美法侖陽離子脂質體復合物在制備用于治療患者的癌癥的藥物中的用途，其中所述靶向的替莫唑胺陽離子脂質體復合物包含: (a)陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)； (b)美法侖；以及 (c)配體，其直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
53.如權利要求52所述的用途，其中所述配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)。
54.如權利要求52所述的用途,其中以約lmg/m2至約100mg/m2或約5mg/m2至約20mg/m2的劑量對所述患者施用所述美法侖。
55.如權利要求52所述的用途，其中所述陽離子脂質體中的脂質:美法侖的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1,更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
56.如權利要求52所述的用途，其中配體:所述陽離子脂質體中的脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1,更適合地約0.3:1至約0.4:1,或甚至更適合地約0.33:1。
57.如權利要求52所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、舌下的(SL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(IM)、真皮內(nèi)的(ID)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
58.如權利要求52所述的用途，其中所述癌癥是頭頸部癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌、腦癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、宮頸癌、肺癌、肝癌、脂肉瘤、橫紋肌肉瘤、絨毛膜癌、黑素瘤、視網(wǎng)膜母細胞瘤、卵巢癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、胃癌、結腸直腸癌、多發(fā)性骨髓瘤或血液的癌癥，適合地，所述癌癥是多發(fā)性骨髓瘤。
59.如權利要求52所述的用途，其進一步包括對所述患者施用與所述靶向的美法侖陽離子脂質體復合物組合的另一治療，優(yōu)選地，所述另一治療包括施用化療劑、小分子、放射治療或基于核酸的治療。
60.如權利要求59所述的用途，其中所述基于核酸的治療包括施用陽離子脂質體復合物，所述陽離子脂質體復合物包含表達野生型P53的質粒DNA。
61.靶向的美法侖陽離子脂質體復合物在制備用于治療患者的癌癥的藥物中的用途，其中所述靶向的美法侖陽離子脂質體復合物包含: (a)陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)； (b)美法侖；以及 (c)抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv),其直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
62.如權利要求61所述的用`途,其中以約lmg/m2至約100mg/m2或約5mg/m2至約20mg/m2的劑量對所述患者施用所述美法侖。
63.如權利要求61所述的用途，其中所述陽離子脂質體中的脂質:美法侖的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1,更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
64.如權利要求61所述的用途，其中TfRscFv:所述陽離子脂質體中的脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1,更適合地約0.3:1至約0.4:1,甚至更適合地約0.33:1。
65.如權利要求61所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(頂)、真皮內(nèi)的(ID)、舌下的(SL)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
66.如權利要求61所述的用途，其中所述癌癥是多發(fā)性骨髓瘤。
67.通過權利要求39所述的方法來制備的靶向的美法侖陽離子脂質體復合物在制備用于治療患者的癌癥的藥物中的用途。
68.如權利要求67所述的用途，其中所述配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)。
69.如權利要求67所述的用途,其中以約lmg/m2至約100mg/m2或約5mg/m2至約20mg/m2的劑量對所述患者施用美法侖。
70.如權利要求67所述的用途，其中脂質:美法侖的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1，更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
71.如權利要求67所述的用途，其中配體:脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1，更適合地約0.3:1至約0.4:1。
72.如權利要求67所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(頂)、真皮內(nèi)的(ID)、舌下的(SL)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
73.如權利要求67所述的用途，其中所述癌癥是頭頸部癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌、腦癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、宮頸癌、肺癌、肝癌、脂肉瘤、橫紋肌肉瘤、絨毛膜癌、黑素瘤、視網(wǎng)膜母細胞瘤、卵巢癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、胃癌、結腸直腸癌、多發(fā)性骨髓瘤或血液的癌癥，適合地，所述癌癥是多發(fā)性骨髓瘤。
74.如權利要求67所述的用途，其進一步包括對所述患者施用與所述靶向的美法侖陽離子脂質體復合物組合的另一治療，優(yōu)選地，所述另一治療包括施用化療劑、小分子、放射治療或基于核酸的治療。
75.如權利要求74所述的用途，其中所述基于核酸的治療包括施用陽離子脂質體復合物，所述陽離子脂質體復合物包含表達野生型P53的質粒DNA。
76.(a)陽離子脂質體復合物與(b)替莫唑胺的組合在制備用于治療患者的腦癌的藥物中的用途，其中: (a)陽離子脂質體復合物，其包含: (1)陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2_二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇 胺(DOPE)； (2)質粒DNA，其表達野生型p53；以及 (3)抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)，其直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
77.如權利要求76所述的用途，其中與所述陽離子脂質體復合物同時或在所述陽離子脂質體復合物之前或之后施用所述替莫唑胺。
78.如權利要求76所述的用途,其中以約10mg/m2至約500mg/m2或約100mg/m2至約250mg/m2的劑量對所述患者施用所述替莫唑胺。
79.如權利要求76所述的用途，其中所述替莫唑胺也包囊在陽離子脂質體復合物中。
80.如權利要求76所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(頂)、真皮內(nèi)的(ID)、舌下的(SL)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
81.如權利要求76所述的用途，其中所述腦癌是神經(jīng)膠質瘤、星形細胞瘤或成膠質細胞瘤。
82.靶向的阿托品陽離子脂質體復合物在制備用于治療患者的有機磷中毒的藥物中的用途，其中所述靶向的阿托品陽離子脂質體復合物包含: (a)陽離子脂質體，其包含1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)和1，2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)；(b)阿托品；以及 (c)配體，其直接與所述陽離子脂質體復合，但不是與所述陽離子脂質體化學偶聯(lián)。
83.如權利要求82所述的用途，其中所述配體是抗體、抗體片段或蛋白質，包括單鏈Fv抗體片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv (TfRscFv)。
84.如權利要求82所述的用途,其中以約Img至約IOmg或約2mg至約6mg的劑量對所述患者施用所述阿托品。
85.如權利要求82所述的用途，其中所述陽離子脂質體中的脂質:阿托品的所述摩爾比是約0.1:1至約5:1,更適合地約0.5:1至約2:1或甚至更適合地約1:1。
86.如權利要求82所述的用途，其中配體:所述陽離子脂質體中的脂質的所述重量比是約0.01:1至約0.5:1，更適合地約0.3:1至約0.4:1。
87.如權利要求82所述的用途，其中TfRscFv:所述陽離子脂質體中的脂質的所述重量比是約0.33:1。
88.如權利要求82所述的用途，其中所述施用是靜脈內(nèi)的(IV)、瘤內(nèi)的(IT)、病灶內(nèi)的(IL)、舌下的(SL)、氣溶膠的、經(jīng)皮的、口服的、內(nèi)窺鏡的、局部的、肌肉內(nèi)的(IM)、真皮內(nèi)的(ID)、眼內(nèi)的(10)、腹膜內(nèi)的(IP)、經(jīng)真皮的(TD)、鼻內(nèi)的(IN)、腦內(nèi)的(1C)、器官內(nèi)的(例如肝內(nèi)的)、緩釋植入、或皮下施用、或經(jīng)由使用滲透泵或機械泵的施用。
89.如權利要求82所述的用途，其中所述脂質體越過所述血腦屏障。
【文檔編號】A61P35/00GK103655475SQ201310055120
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年2月21日 優(yōu)先權日:2012年9月19日
【發(fā)明者】E·H·常, S·金, A·雷特 申請人:喬治敦大學