專利名稱：一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物及其制備方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中藥重樓為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七葉一枝花 Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根莖,具有清熱解毒，消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風(fēng)抽搐等癥，是中成藥云南白藥、宮血寧膠囊、季德勝蛇藥片等的主要組成藥物?，F(xiàn)代藥理研究表明重樓具有細(xì)胞毒活性、抑菌抗炎、鎮(zhèn)痛、止血、鎮(zhèn)靜、抗早孕、殺精、對(duì)呼吸系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)作用等，在臨床應(yīng)用于治療肺系疾病、功能性子宮出血、淋巴結(jié)結(jié)核潰瘍、神經(jīng)性皮炎和外科炎癥以及治療腫瘤等療效顯著。目前有重樓入藥的上市中成藥復(fù)方有金復(fù)康口服液、軟堅(jiān)口服液、樓蓮膠囊、肝復(fù)樂片等。近年來，重樓及其抗腫瘤有效成分重樓總皂苷的文獻(xiàn)報(bào)道日益增多。中國(guó)中藥雜志，2008，33 (16) =2057-2060公開了滇重樓皂苷對(duì)10種腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒譜及構(gòu)效關(guān)系研究；黃賢校等在中草藥雜志2009，4`0 (3) =483-489發(fā)表了重樓屬藥用植物皂苷類化學(xué)成分及其生源途徑的研究進(jìn)展；陳志紅等考察了重樓總皂苷對(duì)人肺癌細(xì)胞A549的增殖抑制作用及對(duì)細(xì)胞周期的影響；朱麗麗等對(duì)重樓皂苷抑制SGC-7901細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡進(jìn)行了研究；林云華研究發(fā)現(xiàn)重樓和奧沙利鉬在體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中可能具有一定抗血管生成的作用，兩者聯(lián)合應(yīng)用可能具有協(xié)同增效作用。賈科等發(fā)現(xiàn)重樓總皂苷可顯著抑制MGC-803細(xì)胞的生長(zhǎng)并呈時(shí)間-劑量依賴關(guān)系，可阻滯細(xì)胞于S期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率的升高；可顯著抑制EphA2、survivin蛋白的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)Caspase_3蛋白的表達(dá),進(jìn)而得出結(jié)論其作用機(jī)制可能與下調(diào)EphA2和survivin的表達(dá)以及促進(jìn)Caspase_3的表達(dá)有關(guān)。中國(guó)專利200610052223.8公開了重樓總皂苷的制備方法，200810052092.2也公開了以重樓總皂苷為有效成分的藥物制劑及其制備方法。姜黃始載于《唐本草》,為姜科植物姜黃Curcuma longa L.的干燥根莖,其性味辛、苦、溫，歸脾、肝經(jīng)，具有破血行氣，通經(jīng)止痛之功效，可用于胸脅刺痛，胸痹心痛，痛經(jīng)經(jīng)閉，癥瘕，風(fēng)濕肩臂疼痛，跌撲腫痛等病癥的治療。姜黃含有多種化學(xué)成分，主要成分為姜黃素類化合物:姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、二氫姜黃素等；倍半萜類化合物:姜黃新酮、姜黃酮醇A、B等；揮發(fā)油(4.2%):姜黃酮、姜黃烯、莪術(shù)醇等。姜黃素等有效成分的藥理作用廣泛，其抗炎、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗抑郁、抗腫瘤等作用已被普遍認(rèn)可，其中抗腫瘤作用自1985年首次提出后，已有大量的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，作用機(jī)制主要包括誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制血管生成，有阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥等方面。黃東生等研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素能夠增強(qiáng)caspase-8的表達(dá)，從而啟動(dòng)外源性凋亡途徑，誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞凋亡。方悅等報(bào)道姜黃素具有抗食道癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌等消化系統(tǒng)腫瘤的作用。中國(guó)專利CN1931353A公開了姜黃素提取及其藥物組合物制備方法。白芍是毛茛科植物芍藥屬的去皮干燥根，性微寒，味苦、酸。有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗的功效。白芍的藥效成分包括芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷、芍藥內(nèi)酯苷，苯甲酰茍藥苷等，統(tǒng)稱為白茍總苷(total glucosides of peony, TGP)0研究發(fā)現(xiàn)，其可以在多個(gè)環(huán)節(jié)影響自身免疫疾病的細(xì)胞免疫、體液免疫以及炎癥過程，并有鎮(zhèn)痛、保肝的作用。芍藥苷作為占TGP90%以上的化合物，近年來發(fā)現(xiàn)亦有抗腫瘤活性。其作用機(jī)制除了增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，還有體內(nèi)外引起腫瘤細(xì)胞周期停滯、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、對(duì)化療藥物減毒增效等。楊加域等發(fā)現(xiàn)白芍醇提液超濾膜分離藥效部位在體外具有抗腫瘤活性；詹可順等報(bào)道TGP聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌優(yōu)于單純化療，并能提高患者生存質(zhì)量、改善患者細(xì)胞免疫功能和升高外周血象。200510045840.0公開了一種具有升高白細(xì)胞作用的芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷的組合物，適合用于制備治療各種原因引起的白細(xì)胞減少、血小板和血紅球蛋白降低的病癥的藥物。高小蓉等采用水提醇沉、膜分離、DEAE-纖維素柱層析分離純化等方法得到白芍多糖Lewis肺癌和S180肉瘤模型均有較好的抑制率。目前，重樓皂苷與黃芪多糖的藥物組合物(CN101152408A)的專利已見諸報(bào)道，而尚未發(fā)現(xiàn)具有抗肺癌和肝癌作用且由重樓提取物、姜黃提取物以及白芍提取物三者混合而成的中藥組合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下:一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物，由質(zhì)量比為1:15-25:5-15的重樓提取物、姜黃提取物和白芍提取物組成。所述重樓提取物、姜黃提取物和白芍提取物的質(zhì)量比優(yōu)選為1:20:10。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明的中藥組合物可顯著抑制LA795等肺癌細(xì)胞株以及ifep-B3等肝癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)，IC50分別可達(dá)20 μ g/mL以下；對(duì)肺腺癌和肝癌荷瘤小鼠模型試驗(yàn)顯示，抑瘤率分別均在50%以上，提高小鼠脾指數(shù)與肝指數(shù)，與單獨(dú)應(yīng)用原藥材相比，該藥物組合物抗肺癌和肝癌的活性更高且作用明確，對(duì)肺癌、肝癌具有很好的抑制作用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。下面的實(shí)施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明，但并不對(duì)本發(fā)明作任何限制。重樓提取物:為市售重樓提取物(規(guī)格5:1或10:1或20:1)。姜黃提取物的制備:將姜黃藥材或飲片粉碎成小塊，按比例，將Ig姜黃小塊浸泡于7ml的質(zhì)量濃度為
1.3%的NaOH水溶液中，浸泡I小時(shí)，于90°C回流提取I小時(shí)，過濾，并且按第I次回流提取操作條件再進(jìn)行回流提取2次，過濾，合并3次提取液，濾液經(jīng)減壓濃縮至25°C下相對(duì)密度為1.0，用質(zhì)量濃度為1.7%的鹽酸-乙醇溶液調(diào)節(jié)pH至中性，加入無水乙醇至無水乙醇的濃度占總體積的65%，混合，靜置24小時(shí)，過濾得到沉淀，沉淀冷凍干燥得到姜黃提取物。白芍提取物的制備:
將白芍藥材或飲片粉碎成粗粉，采用9倍白芍粗粉干重的質(zhì)量濃度為65%的乙醇水溶液，浸泡I小時(shí)，于95°C回流提取2小時(shí)，過濾，并且按第I次回流提取操作條件再進(jìn)行回流提取2次，過濾，合并3次提取液；濾液經(jīng)減壓濃縮至原體積的1/2，加入1.5倍體積的水，加熱至微沸后于陰涼處?kù)o置12小時(shí)后過濾，沉淀物在85°C下蒸發(fā)干燥，得到白芍提取物。實(shí)施例1一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物的制備，按質(zhì)量比將I份的重樓提取物(規(guī)格10:1),20份的姜黃提取物和10份的白芍提取物混勻。實(shí)施例2一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物的制備，按質(zhì)量比將I份的重樓提取物(規(guī)格20:1),15份的姜黃提取物和5份的白芍提取物混勻。實(shí)施例3一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物的制備，按質(zhì)量比將I份的重樓提取物(規(guī) 格5:1),25份的姜黃提取物和15份的白芍提取物混勻。本發(fā)明的中藥組合物的藥效試驗(yàn)如下:一.抗腫瘤活性試驗(yàn)方法1.體外抗腫瘤活性試驗(yàn)1.1細(xì)胞株及培養(yǎng)小鼠肺腺癌LA795細(xì)胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的RPMn640培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3_4天傳代一次。人肺腺癌A549細(xì)胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3 4天傳代一次。BEL-7402肝癌細(xì)胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的RPMn640培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3-4天傳代一次。!fep-B3肝癌細(xì)胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3 4天傳代一次。1.2藥物抗腫瘤活性測(cè)定MTT法:將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用胰酶消化后配制成濃度為3X IO4個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，接種于96孔酶標(biāo)板，每孔加200 μ L0 24h后換不含血清培養(yǎng)液使細(xì)胞同步化生長(zhǎng)，每孔200 μ L0第三天向孔中加入受試藥，即分別加入重樓提取物水溶液(簡(jiǎn)稱重樓組)，姜黃提取物水溶液(簡(jiǎn)稱姜黃組)，白芍提取物水溶液(簡(jiǎn)稱白芍組)和本發(fā)明實(shí)施例1制備的組合物水溶液(簡(jiǎn)稱組合物組實(shí)施例1制備);另設(shè)對(duì)照組:0.1% 二甲基亞砜(DMSO)每孔加200 μ L0受試藥每組分別設(shè)0.01,0.1,1,10,100,1000 μ g/mL六個(gè)濃度,每個(gè)濃度設(shè)8個(gè)平行孔,于37°C下培養(yǎng)24h后，每孔加無血清無酚紅培養(yǎng)液新鮮配制的0.5mg/mL MTT100 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后，每孔加100μ L DMSO溶解MTT甲臜顆粒，用微型振蕩器振蕩混勻后，于酶標(biāo)儀上測(cè)定光密度值(0D)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值。以溶劑對(duì)照處理腫瘤細(xì)胞為對(duì)照組，由OD值計(jì)算抑制率，公式為:細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照組OD值一實(shí)驗(yàn)組OD值)/對(duì)照組ODX 100%，并以藥物濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，并求得IC5tl(半數(shù)抑制率)，IC50=細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為50%的藥物濃度。結(jié)果見表I。表I體外抗腫瘤活性試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物，其特征在于，由質(zhì)量比為1:15-25:5-15的重樓提取物、姜黃提取物和白芍提取物組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物，其特征在于所述重樓提取物、姜黃提取物和白芍提取物的質(zhì)量比為1:20:10。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗肺癌和肝癌的中藥組合物，由質(zhì)量比為1:15-25:5-15的重樓提取物、姜黃提取物和白芍提取物組成。經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明的中藥組合物可顯著抑制LA795等肺癌細(xì)胞株以及Hep-B3等肝癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)，IC50分別可達(dá)20μg/mL以下；對(duì)肺腺癌和肝癌荷瘤小鼠模型試驗(yàn)顯示，抑瘤率分別均在50%以上，提高小鼠脾指數(shù)與肝指數(shù)，與單獨(dú)應(yīng)用原藥材相比，該藥物組合物抗肺癌和肝癌的活性更高且作用明確，對(duì)肺癌、肝癌具有很好的抑制作用。
文檔編號(hào)A61K36/9066GK103142934SQ20131008600
公開日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月18日
發(fā)明者高文遠(yuǎn), 張瑤, 劉振, 滿淑麗 申請(qǐng)人:天津大學(xué)