專利名稱：一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物及其制備方法，屬于中藥技術領域。
背景技術：
中藥重樓為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七葉一枝花 Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根莖,具有清熱解毒，消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風抽搐等癥，是中成藥云南白藥、宮血寧膠囊、季德勝蛇藥片等的主要組成藥物?，F(xiàn)代藥理研究表明重樓具有細胞毒活性、抑菌抗炎、鎮(zhèn)痛、止血、鎮(zhèn)靜、抗早孕、殺精、對呼吸系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)作用等，在臨床應用于治療肺系疾病、功能性子宮出血、淋巴結結核潰瘍、神經性皮炎和外科炎癥以及治療腫瘤等療效顯著。目前有重樓入藥的上市中成藥復方有金復康口服液、軟堅口服液、樓蓮膠囊、肝復樂片等。近年來，重樓及其抗腫瘤有效成分重樓總皂苷的文獻報道日益增多。中國中藥雜志，2008，33 (16) =2057-2060公開了滇重樓皂苷對10種腫瘤細胞株的細胞毒譜及構效關系研究；黃賢校等在中草藥雜 志2009，40 (3) =483-489發(fā)表了重樓屬藥用植物皂苷類化學成分及其生源途徑的研究進展；陳志紅等考察了重樓總皂苷對人肺癌細胞A549的增殖抑制作用及對細胞周期的影響；朱麗麗等對重樓皂苷抑制SGC-7901細胞增殖及誘導凋亡進行了研究；林云華研究發(fā)現(xiàn)重樓和奧沙利鉬在體外、體內實驗中可能具有一定抗血管生成的作用，兩者聯(lián)合應用可能具有協(xié)同增效作用。賈科等發(fā)現(xiàn)重樓總皂苷可顯著抑制MGC-803細胞的生長并呈時間-劑量依賴關系，可阻滯細胞于S期，誘導細胞凋亡率的升高；可顯著抑制EphA2、survivin蛋白的表達，同時上調Caspase_3蛋白的表達,進而得出結論其作用機制可能與下調EphA2和survivin的表達以及促進Caspase_3的表達有關。中國專利200610052223.8公開了重樓總皂苷的制備方法，200810052092.2也公開了以重樓總皂苷為有效成分的藥物制劑及其制備方法。姜黃始載于《唐本草》,為姜科植物姜黃Curcuma longa L.的干燥根莖,其性味辛、苦、溫，歸脾、肝經，具有破血行氣，通經止痛之功效，可用于胸脅刺痛，胸痹心痛，痛經經閉，癥瘕，風濕肩臂疼痛，跌撲腫痛等病癥的治療。姜黃含有多種化學成分，主要成分為姜黃素類化合物:姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、二氫姜黃素等；倍半萜類化合物:姜黃新酮、姜黃酮醇A、B等；揮發(fā)油(4.2%):姜黃酮、姜黃烯、莪術醇等。姜黃素等有效成分的藥理作用廣泛，其抗炎、抗氧化、抗動脈粥樣硬化、抗抑郁、抗腫瘤等作用已被普遍認可，其中抗腫瘤作用自1985年首次提出后，已有大量的實驗研究證實，作用機制主要包括誘導腫瘤細胞凋亡，抑制血管生成，有阻滯細胞周期進程，逆轉腫瘤細胞多藥耐藥等方面。黃東生等研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素能夠增強caspase-8的表達，從而啟動外源性凋亡途徑，誘導人肺癌細胞凋亡。方悅等報道姜黃素具有抗食道癌、胃癌、肝癌、結腸癌等消化系統(tǒng)腫瘤的作用。中國專利CN1931353A公開了姜黃素提取及其藥物組合物制備方法。目前，重樓皂苷與黃芪多糖的藥物組合物(CN101152408A)的專利已見諸報道，而尚未發(fā)現(xiàn)同時具有抗肝癌和肺癌作用且由重樓提取物和姜黃提取物混合組成的中藥組合物。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物。本發(fā)明的技術方案概述如下:—種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，由質量比為1:5-25的重樓提取物和姜黃提取物組成。所述重樓提取物和姜黃提取物的質量比優(yōu)選為1:10。本發(fā)明的優(yōu)點:經體外MTT法活性試驗證明，本發(fā)明的中藥組合物可顯著抑制LA795等肺癌細胞株以及H印-B3等肝癌細胞 株的生長，IC50分別可達20 μ g/mL以下；對肺腺癌和肝癌荷瘤小鼠模型試驗顯示，抑瘤率分別均在50%以上，提高小鼠脾指數(shù)與肝指數(shù)，與單獨應用原藥材相比，該藥物組合物抗肝癌和肺癌的活性更高且作用明確，對肝癌、肺癌具有很好的抑制作用。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。下面的實施例是為了使本領域的技術人員能夠更好地理解本發(fā)明，但并不對本發(fā)明作任何限制。重樓提取物:為市售重樓提取物(規(guī)格5:1或10:1或20:1)。姜黃提取物的制備:將姜黃藥材或飲片粉碎成小塊，按比例，將Ig姜黃小塊浸泡于7ml的質量濃度為
1.3%的NaOH水溶液中，浸泡I小時，于90°C回流提取I小時，過濾，并且按第I次回流提取操作條件再進行回流提取2次，過濾，合并3次提取液，濾液經減壓濃縮至25°C下相對密度為1.0，用質量濃度為1.7%的鹽酸-乙醇溶液調節(jié)pH至中性，加入無水乙醇至無水乙醇的濃度占總體積的65%，混合，靜置24小時，過濾得到沉淀，沉淀冷凍干燥得到姜黃提取物。實施例1一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物的制備，按質量比將I份的重樓提取物(規(guī)格10:1)和10份的姜黃提取物混勻。實施例2一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物的制備，按質量比將I份的重樓提取物(規(guī)格20:1)和5份的姜黃提取物混勻。實施例3一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物的制備，按質量比將I份的重樓提取物(規(guī)格5:1)和25份的姜黃提取物混勻。本發(fā)明的中藥組合物的藥效試驗如下:一.抗腫瘤活性試驗方法1.體外抗腫瘤活性試驗
1.1細胞株及培養(yǎng)小鼠肺腺癌LA795細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的RPMn640培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3_4天傳代一次。人肺腺癌A549細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3 4天傳代一次。BEL-7402肝癌細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的RPMn640培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3-4天傳代一次。!fep-B3肝癌細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3 4天傳代一次。1.2藥物抗腫瘤活性測定MTT法:將對數(shù)生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為3X104個/mL的細胞懸液，接種于96孔酶標板，每孔加200 μ L0 24h后換不含血清培養(yǎng)液使細胞同步化生長，每孔200 μ L0第三天向孔中加入受試藥，即分別加入重樓提取物水溶液(簡稱重樓組)，姜黃提取物水溶液(簡稱姜黃組)和按實施例1制備的本藥組合物水溶液(簡稱組合物組實施例1制備);另設對照組=0.1% 二甲基亞砜(DMS0)，每孔加20(^匕受試藥每組分別設0.01，0.1,1,10，100，1000 μ g/mL六個濃度，每個濃度設8個平行孔，于37°C下培養(yǎng)24h后，每孔加無血清無酚紅培養(yǎng)液新鮮配制的0.5mg/mL MTT100 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后，每孔加100 μ L DMSO溶解MTT甲臜顆粒，用微型振蕩器振蕩混勻后，于酶標儀上測定光密度值(0D)，實驗重復三次，取平均值。以溶劑對照處理腫瘤細胞為對照組，由OD值計算抑制率，公式為:細胞生長抑制率=(對照組OD值一 實驗組OD值)/對照組ODX 100%，并以藥物濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制細胞生長曲線，并求得IC5tl (半數(shù)抑制率)，IC50=細胞生長抑制率為50%的藥物濃度。結果見表I。表I組合物體外抗癌活性試驗結果
紐別LA 795Α549BEL-7402Hep-B3
iCjfi (^igZmL) ICjo (^igZmL) IC5o ( ng/mL) IC50 (‘ug/mL) 重樓組67.6861.3666.2564.62
姜黃組72.2673.5776.2778.73
組合物組14.3715.9515.2617.962.體內抗腫瘤活性試驗2.1HepA肝癌模型實驗2.1.1動物造模用80只(隨機分成8組，每組10只，各組名稱見2.1.2)昆明小鼠(雌性，18_20g)給予實施例1制備的藥物組合物進行小鼠HepA肝癌模型體內藥效試驗。取接種HepA肝癌細胞后腹水飽滿的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超凈工作臺中抽取乳白色腹水為瘤源，生理鹽水洗滌,腹水4mL，腹水與生理鹽水的比例為1:1,生理鹽水4mL，配成細胞懸液，以無菌注射器抽取0.lmL，分別接種于80只小鼠腋下。整個操作在無菌條件下進行。2.1.2動物分組及給藥接種次日開始給藥，每日I次:(I)模型組，灌服生理鹽水，每只0.2mL ; (2)化療組:按20mg/kg.bw腹腔注射環(huán)磷酰胺；(3)重樓高劑量組:按5g (生藥量)/kg.bw灌服；
(4)重樓低劑量組:按2.5g (生藥量)/kg.bw灌服；(5)姜黃高劑量組:按5g (生藥量)/kg.bw灌服；(6)姜黃低劑量組:按2.5g (生藥量)/kg.bw灌服；(7)藥物組合物高劑量組:按5g (生藥量)/kg.bw灌服；(8)藥物組合物低劑量組:按2.5g (生藥量)/kg.bw灌服；給藥兩周，于給藥結束后次日頸部脫白處死小鼠，解剖取其瘤組織，摘取肝，脾并稱重。測抑瘤率:(i)抑瘤率(％)= (1-給藥組平均瘤重/生理鹽水組平均瘤重)X 100%，摘取肝，脾并稱重。肝指=(肝臟重量/體重)*1000，脾指=(脾臟重量/體重)*1000。結果見表2和表3。表2組合物對HepA肝癌荷瘤小鼠抑瘤率試驗結果
權利要求
1.一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，其特征在于，由質量比為1:5-25的重樓提取物和姜黃提取物組成。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，其特征在于所述重樓提取物和姜黃提取物的質量比 為1:10。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，由質量比為1:5-25的重樓提取物和姜黃提取物組成。經試驗證明，本發(fā)明的中藥組合物可顯著抑制LA795等肺癌細胞株以及Hep-B3等肝癌細胞株的生長，IC50分別可達20μg/mL以下；對肺腺癌和肝癌荷瘤小鼠模型試驗顯示，抑瘤率分別均在50%以上，提高小鼠脾指數(shù)與肝指數(shù)，與單獨應用原藥材相比，該藥物組合物抗肝癌和肺癌的活性更高且作用明確，對肝癌、肺癌具有很好的抑制作用。
文檔編號A61P11/00GK103142935SQ20131008615
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月18日 優(yōu)先權日2013年3月18日
發(fā)明者高文遠, 張瑤, 劉振, 滿淑麗 申請人:天津大學