一種關白附二萜類總生物堿及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種關白附二萜類總生物堿及其制備方法，具體來說公開了一種從關白附中制備二萜類總生物堿的方法。該方法采用CO2超臨界萃取法提取關白附，再進行加酸-堿化-萃取處理，萃取物再以堿水洗滌。具體來說該方法包括如下步驟：步驟1：取關白附藥材以CO2為溶劑進行超臨界萃?。徊襟E2：將步驟1得到的萃取物以酸水溶解，將酸水液進行堿化處理后以有機溶劑萃?。灰约安襟E3：將步驟2得到的有機溶劑萃取物以堿水洗滌，回收有機溶劑。其總生物堿含量高達到50%以上，且大大降低了毒性成分關附辛素的含量。
【專利說明】一種關白附二萜類總生物堿及其制備方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及從中草藥中制備得到關白附二萜類總生物堿的方法，尤其是從毛茛科植物黃花烏頭Aconitum coreanum(Levl.) Rapaics的塊根(關白附)中提取、萃取、分離得到關白附二萜類總生物堿的方法。

【背景技術】
[0002]中藥毛茛科黃花烏頭Aconitum coreanum(L6vl.) Rapaics是主產于我國北方的藥用植物，其塊根稱為關白附，為常用中藥之一，主治心痛血痹，具有祛風、燥濕、化痰、止痛的作用，民間用藥療效好。其化學成分主要由關附庚素(Guanfu base G，GFG)、關附甲素(Guanfu base A, GFA)、關附壬素(Guanfu base I, GFI)、關附辰素、關附己素、關附Z素等,為一系列母核為赫替(Hetisine)新型C20 二萜類生物堿。其中關附甲素為首次發(fā)現的全新結構類型的安全、有效的廣譜抗心率失常一類新藥。然而現有技術中，提取關附甲素工藝復雜、有效成分損失大，提取得率較低，導致鹽酸關附甲素成本較高，而且很大程度上浪費了中藥材資源(關白附藥材中，關附甲素的含量僅為0.2%-0.5%左右)。
[0003]研究發(fā)現，關白附總堿中其他活性成分(如關附己素、關附Z素、關附庚素以及關附壬素等)也具有較強的抗心率失常活性，其中關附庚素活性較鹽酸關附甲素強，對治療房顫具有較好作用。而關附辛素(atisinium chloride),也是關白附中的主要生物堿類成分之一，為一種水溶性生物堿，能抑制骨骼肌系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，對小鼠的LD5tl為9.0mg/kg,為高毒性成分，應加以控制。
[0004]現有技術中關白附總生物堿的制備工藝，主要以有機溶劑提取后進行加酸-堿化-萃取的方法，并進一步包括常規(guī)精制工藝如過大孔樹脂凈化(如CN1709892A)或以親脂性有機溶劑除雜(如CN1039198C)。上述工藝提取效率低，萃取步驟乳化嚴重，而且酸性條件下萃取，生物堿損失嚴重，大孔樹脂吸附時，生物堿也會較大損失，也導致總生物堿得率比較低。


【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種從關白附中制備二萜類總生物堿的方法，該方法制備的總生物堿含量高，且毒性成分關附辛素含量低。
[0006]本發(fā)明的目的是通過如下技術方案實現的:
[0007]一種制備關白附二萜類總生物堿的方法，該方法包括如下步驟:
[0008]步驟1:取關白附藥材以CO2為溶劑進行超臨界萃?。?br> [0009]步驟2:將步驟I得到的萃取物以酸水溶解，將酸水液進行堿化后以有機溶劑萃??；
[0010]步驟3:將步驟2得到的有機溶劑萃取物以堿水洗滌，回收有機溶劑。
[0011]進一步，步驟I關白附藥材進行超臨界萃取前進行粉碎，過60-100目篩。
[0012]進一步，步驟I超臨界萃取條件為:萃取壓力為15_50MPa，萃取溫度為30_70°C，超臨界CO2流量為10-45kg/h，萃取時間為1-6小時，解析壓力為4-llMPa，解析溫度為45-60。。。
[0013]進一步，步驟I超臨界萃取過程中加入夾帶劑，所述夾帶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進一步的，所述夾帶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的任意兩種組成的混合溶液；更進一步的，所述夾帶劑為乙醇和丙酮組成的混合溶液。進一步的，所述夾帶劑加入量為按質量比夾帶劑:關白附藥材=1: (1.5-20);更進一步的，所述夾帶劑加入量為按質量比夾帶劑:關白附藥材=1: (5-15)。
[0014]進一步，步驟2加酸水至pH為1-3，所述酸水選自1-5%的鹽酸、硫酸或醋酸溶液中的任意一種。
[0015]進一步,步驟2酸水液堿化至pH為8-11,堿化所用的堿溶液選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、濃氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。
[0016]進一步，步驟2所述有機溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正丁醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和醋酸甲酯中的一種或者其中幾種的混合物。
[0017]進一步，步驟3所述堿水pH為8-12，堿水選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。優(yōu)選，步驟3所述堿水pH為9-12 ;更優(yōu)選，步驟3所述堿水pH 為 10-12。
[0018]進一步，步驟3回收有機溶劑后，干燥處理后即得關白附二萜類總生物堿
[0019]另外，本發(fā)明還提供了一種通過上述方法制備得到的關白附二萜類總生物堿。
[0020]與現有技術相比，本發(fā)明采用CO2超臨界萃取法對藥材進行提取，提取物雜質少，溶液粘度低，再進行加酸-堿化-萃取處理，避免了萃取時乳化嚴重的問題，總生物堿含量高(達到50%以上)；另外，本發(fā)明萃取及洗滌過程可以將水溶性成分去除，尤其是毒性成分關附辛素，純化后提取物中其含量小于1%。。
[0021]效果實驗例
[0022]實驗例I C02超臨界萃取對提取物得率和總生物堿含量的影響
[0023]I實驗方法
[0024]1.1樣品制備
[0025]實驗組:取5kg關白附藥材，按本發(fā)明實施例1方法制備總生物堿，得產物262g。
[0026]對照組:取5kg關白附藥材，粉碎，95%乙醇回流提取2次，回收溶劑，得到浸膏，以少量1%鹽酸溶解，以濃氨水堿化pH為10，以氯仿萃取，回收溶劑，于80°C減壓干燥，得關白附總生物堿185g。
[0027]1.2總生物堿含量測定
[0028]1.2.1對照品溶液制備:
[0029]取鹽酸關附甲素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.50mg的溶液，搖勻，即得。
[0030]1.2.2供試品溶液制備:
[0031]取實驗組總生物堿、對照組總生物堿細粉各20mg，精密稱定，分別置1ml量瓶中，加甲醇超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0032]1.2.3測定方法:
[0033]分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，采用內標法進行測定，即得。
[0034]2實驗結果
[0035]結果見表1。
[0036]表1不同方法制備總生物堿得率和含量比較
[0037]

【權利要求】
1.一種制備關白附二萜類總生物堿的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: 步驟1:取關白附藥材以CO2為溶劑進行超臨界萃取； 步驟2:將步驟I得到的萃取物以酸水溶解，將酸水液進行堿化處理后以有機溶劑萃??；以及 步驟3:將步驟2得到的有機溶劑萃取物以堿水洗滌，回收有機溶劑。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I超臨界萃取過程中加入夾帶劑，所述夾帶劑選自甲醇、 乙醇、丙酮中的一種或幾種。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述夾帶劑為乙醇和丙酮按1:1組成的混合溶液。
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述夾帶劑加入量為按質量比計，夾帶劑:關白附藥材=1: (1.5-20)。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3所述堿水的pH為8-12。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟3所述堿水選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2加酸水至pH為1-3，所述酸水選自1-5%的鹽酸、硫酸或醋酸溶液中的任意一種。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2酸水液堿化至pH為8-11，堿化所用的堿溶液選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、濃氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2所述萃取用有機溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正丁醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和醋酸甲酯中的一種或者其中幾種的混合物。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I超臨界萃取條件為:萃取壓力為15-50MPa，萃取溫度為30_70°C，超臨界C02流量為10_45kg/h，萃取時間為1-6小時，解析壓力為4-llMPa，解析溫度為45-60°C。
【文檔編號】A61K36/714GK104069196SQ201310097075
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年3月25日 優(yōu)先權日:2013年3月25日
【發(fā)明者】董秀華, 孫申國, 朱天全, 曾艷, 李娜, 吳丹, 劉巍, 程志國 申請人:吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司