麝香葡萄果渣提取物的制備方法
【專利摘要】本文公開了麝香葡萄果渣提取物的制備方法。所述方法可以包括將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合以產(chǎn)生麝香葡萄果渣提取物，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10（重量/重量）、例如0.3到3（重量/重量）的范圍內(nèi)，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2%的多酚含量。本文還公開了一種用作抗氧化劑、例如用作抗衰老補充劑的麝香葡萄果渣提取物。組合物可以包括具有至少2%的多酚含量的麝香葡萄（圓葉葡萄（Vitis?rotundifolia））果渣提取物和其他活性成分。
【專利說明】麝香葡萄果渣提取物的制備方法
[0001]本申請為國際申請PCT/US2009/052346于2011年3月24日進入中國國家階段、申請?zhí)枮?00980137635.3、發(fā)明名稱為“麝香葡萄果渣提取物的制備方法”的分案申請。
[0002]與相關(guān)申請的交叉參考
[0003]本申請要求2008年7月31日提交的美國臨時申請N0.61/085，371的權(quán)益和優(yōu)先權(quán)，所述臨時申請在此以其全文引為參考。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0004]本公開涉及例如用于抗衰老補充劑中的麝香葡萄果渣提取物以及制備麝香葡萄果渣提取物的方法。
【背景技術(shù)】
[0005]活性氧(R0S)是有氧代謝的必然副產(chǎn)物，因此在人類和其他生物體中持續(xù)不斷地產(chǎn)生。人類還暴露于來自外部/環(huán)境來源例如污染、陽光和飲食的R0S。盡管R0S具有不同的化學(xué)形式，但它們都 對細胞成分和大分子的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生有害作用。R0S產(chǎn)生/暴露的強度被稱為氧化應(yīng)激。
[0006]氧化應(yīng)激與慢性炎性疾病例如糖尿病、癌癥、動脈粥樣硬化和其他心血管疾病以及變性疾病例如阿茨海默氏病和帕金森氏病的發(fā)病機理相關(guān)。此外，多條證據(jù)支持氧化應(yīng)激是造成正常衰老的核心機制這一觀點。因此，對于開發(fā)抑制氧化應(yīng)激的治療方法存在著需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]據(jù)認為，將氧化應(yīng)激降到最低對于健康和長壽來說是關(guān)鍵的。流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，富含抗氧化劑營養(yǎng)物的飲食提供極大益處。除了經(jīng)典的抗氧化劑維生素(維生素C和E)之外，膳食植物含有許多在食用后表現(xiàn)出既快速又長期地降低氧化應(yīng)激的多酚。已經(jīng)建立了幾種用于測量不同食物的抗氧化能力的體外分析法，并且在多酚含量與抗氧化能力之間存在強烈關(guān)聯(lián)。
[0008]盡管植物、包括葡萄提供了有前景的抗氧化劑來源，但植物化學(xué)物質(zhì)在人類群體中的廣泛使用還存在著顯著的障礙。例如，食物中的活性劑的生物利用度對于用作抗氧化劑來說通常不是最佳的?；钚詣┮部赡芗性谥参锏哪承┎糠种校@些部分在用于食用的食品的典型制備中比率偏低或被丟棄。相關(guān)食物的不同種類也可能具有生物化學(xué)差異，使它們對于治療性應(yīng)用來說不太合適。
[0009]本發(fā)明人通過氧自由基吸收能力(0RAC)分析法進行測量，確定了麝香葡萄果渣提取物和虎杖提取物單獨和組合(在混合物或膳食補充劑中)的抗氧化能力。樣品的親水性抗氧化能力和親脂性抗氧化能力都被測量。這些研究證實了混合物或膳食補充劑中的麝香葡萄果渣提取物和虎杖根提取物在產(chǎn)生親脂性抗氧化能力中的強烈協(xié)同效應(yīng)。在親脂性條件下表現(xiàn)出的選擇性協(xié)同是出乎意料的。這些發(fā)現(xiàn)證實了含有至少作為基本上純的白藜蘆醇源的虎杖提取物、和麝香葡萄果渣提取物兩者的混合物和膳食補充劑，與任一種單獨的所述提取物相比具有增加的抗氧化能力。
[0010]本文公開了具有增加的抗氧化活性的組合物。在某些公開的實施方案中，組合物包括具有至少2%的多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和來自麝香葡萄之外的來源(例如虎杖根提取物)的最低純度為至少5%的白藜蘆醇，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比率在0.1/1到10/1(重量/重量)的范圍內(nèi)，從而提供具有抗氧化活性的組合物。在具體實例中，組合物包括具有至少2%的多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物和來自磨香葡萄之外的來源(例如虎杖根提取物)的最低純度為至少5%的白藜蘆醇，其中麝香葡萄果渣提取物與白藜蘆醇的比率在0.2/1到50/1 (重量/重量)、例如5/1到50/1 (重量/重量)或20/1到50/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，從而提供具有抗氧化活性的組合物。在某些實例中，組合物具有每mg多酚至少24μ molTrolox 當(dāng)量(μ molTE/mg 多酌0 的總 0RAC。
[0011]在某些實例中，磨香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物具有約4%的總多酚含量，并且組合物具有約18比1(重量/重量)的麝香葡萄果渣提取物與反式白藜蘆醇比率。在實例中，組合物具有約0.75比1 (重量/重量)的麝香葡萄多酚與白藜蘆醇比率。在某些實例中，麝香葡萄果渣提取物在液體中可以包含20%到50%固形物。例如，麝香葡萄果渣提取物在液體中包含約40%固形物。在某些實例中，白藜蘆醇包含至少98%的從虎杖(Polygonum cuspidatum)根提取的反式白藜蘆醇。
[0012]在某些實例中，所公開的組合物還可以包括接骨木提取物、紫色胡蘿卜提取物、賦形劑(例如甘油、山梨糖醇、膠體二氧化硅或天然調(diào)味添加劑)或其組合。在具體實例中，組合物包括組合物總量的23%到32%的麝香葡萄果渣提取物、總量的1.2%到3.0%的白藜蘆醇、總量的0.12%到0.2 0%的紫色胡蘿卜提取物、總量的0.4%到0.6%的接骨木提取物、總量的50%到61%的山梨糖醇、總量的8%到12%的99.7%甘油組合物和總量的1%到2%的膠體二氧化硅。
[0013]在更具體的實例中，組合物包括總量的約28.9%的麝香葡萄果渣提取物(包含約4.1%多酚)、總量的約1.65%的白藜蘆醇、總量的約0.16%的紫色胡蘿卜提取物、總量的約
0.48%的接骨木提取物、總量的約54.8%的山梨糖醇、總量的約10%的99.7%甘油組合物、總量的約2%的膠體二氧化硅、約1.27%的康科特(Concord)葡萄提取物、約0.16%的解百納(Cabernet)葡萄提取物和約0.48%的紅葡萄粉。
[0014]在另一個具體實例中，組合物包括總量的約23.77%的麝香葡萄果渣提取物(包含約5%多酚)、總量的約1.65%的白藜蘆醇、總量的約0.16%的紫色胡蘿卜提取物、總量的約
0.48%的接骨木提取物、總量的約60%的山梨糖醇、總量的約10%的99.7%甘油組合物、總量的約2%的膠體二氧化硅、約1.27%的康科特葡萄提取物、約0.16%的解百納葡萄提取物和約0.48%的紅葡萄粉。
[0015]任何所公開的組合物可采用液體或固體的形式提供在非飲料食品、飲料或膳食補充劑中。此外，任何所公開的組合物可以用作抗氧化劑，例如抗衰老補充劑、包括皮膚改善劑。例如，公開了阻止或抑制細胞衰老的方法，所述方法包括向需要的對象施用本公開的組合物，其施用的劑量足以在攝入組合物的對象中阻止或抑制與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程，例如阻止或抑制自由基的形成或活性。[0016]本文還提供了生產(chǎn)所公開的抗氧化組合物的方法。這些方法可以包括將具有至少2%的多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物與來自麝香葡萄之外的來源的、反式白藜蘆醇最低純度為至少5%的白藜蘆醇組合，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比率在0.1/1到10/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，由此產(chǎn)生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜蘆醇的混合物。在某些實例中，方法可以包括將具有至少2%的多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物與來自麝香葡萄之外的來源(例如虎杖根提取物)的、反式白藜蘆醇最低純度為至少5%的白藜蘆醇組合，其中麝香葡萄果渣提取物與白藜蘆醇的比率在0.2/1到50/1(重量/重量)、例如5/1到50/1(重量/重量)或20/1到50/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，包括18比1 (重量/重量)，由此提供具有抗氧化活性的組合物。
[0017]所公開的方法還可以包括制備麝香葡萄果渣提取物，然后將麝香葡萄果渣提取物與反式白藜蘆醇組合。在一個具體實例中，制備麝香葡萄果渣提取物包括將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合。在其他實例中，制備麝香葡萄果渣提取物包括從青銅色麝香葡萄果渣與紫色麝香葡萄果渣的混合物制備提取物。
[0018]在具體實例中，方法包括通過將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物相組合來制備麝香葡萄果渣提取物，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10 (重量/重量)、例如0.3到3 (重量/重量)的范圍內(nèi)。在更具體的實例中，青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率為約2.25比1 (重量/重量)。
[0019]從下面的詳細描述中，本公開的上述和其他特點將變得更加明顯。
[0020]詳細描沭
[0021]1.縮寫和術(shù)語
[0022](a)縮寫·
[0023]FRAP:血漿三價鐵降低能力
[0024]mg:毫克
[0025]ml:毫升
[0026]0RAC:氧自由基吸收能力
[0027]R0S:活性氧
[0028]TE:Trolox 當(dāng)量
[0029]TEAC:Trolox當(dāng)量抗氧化能力
[0030]wt:重量
[0031](b)術(shù)語
[0032]提供了下面的術(shù)語和方法的解釋以更好地描述本公開并指導(dǎo)本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通專業(yè)人員實踐本公開。當(dāng)在本文和權(quán)利要求書中使用時，除非上下文另有明確指明，否則不帶具體數(shù)量指示的名詞形式包括其復(fù)數(shù)指示物。除非上下文另有明確指明，否則術(shù)語“或”是指所陳述的可選要素的單一要素或兩個或多個要素的組合。本文中使用的“包含”意指“包括”。因此，“包含A或B”意指“包括A、B或A和B”，不排除有其他要素。
[0033]除非另有解釋，否則本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本公開所屬【技術(shù)領(lǐng)域】中的普通專業(yè)人員所通常理解的相同的意義。盡管與本文所述的相似或等價的方法和材料可用于本公開的實踐或試驗，但是下面描述了適合的方法和材料。此外應(yīng)該理解，不論是否陳述了單詞“約”或“大約”等，任何數(shù)量值都是近似值。除非另有指明，否則所有百分率和比率都以重量計算。
[0034]施用:通過任何有效途徑向?qū)ο筇峁┗蚪o予藥劑，例如包含麝香葡萄果渣提取物和反式白藜蘆醇的組合物。示例性的施用途徑包括但不限于口服、注射(例如皮下、肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)和腫瘤內(nèi))、舌下、透皮、鼻內(nèi)、局部和吸入途徑。
[0035]抗氧化活性:包括清除和中和氧化性自由基的活性?？寡趸钚钥梢允褂帽疚墓_的方法以及本【技術(shù)領(lǐng)域】已知的方法來測量，包括氧自由基吸收能力(0RAC)分析法、血漿三價鐵降低能力(FRAP)分析法和Trolox當(dāng)量抗氧化能力(TEAC)分析法。例如，如果組合物具有至少24 μ mol Trolox當(dāng)量/mg多酹(μ molTE/mg多酹)的總0RAC,則其具有抗氧化活性并可用作抗氧化劑。
[0036]接骨木(西洋接骨木(Sambucus nigra)):一種見于歐洲和北美洲的屬于五?；?Adoxaceae)的植物，具有幾個地區(qū)性品種或亞種?；槠降膫銧罨ㄐ?。漿果為黑色到藍綠色，并含有花青苷和其他多酚物質(zhì)，其中花青苷和其他多酚物質(zhì)的量和類型隨品種而變。
[0037]“接骨木提取物”可以是按照本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員已知的任何提取方法提取接骨木所獲得的物質(zhì)，只要它具有所需活性(例如顏色穩(wěn)定活性、抗氧化活性或其組合)即可。例如，接骨木提取物可以包括通過壓榨接骨木果實而獲得的果汁，或通過本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員所通常了解的任選提取方法提取接骨木的整果或果實的果皮或種子的適合部分而獲得的提取物等。此外，接骨木果實壓碎產(chǎn)物或干燥的接骨木果實濃縮物，可以用作“接骨木提取物”。
[0038]賦形劑:用作組合物活性成分的載體的無活性物質(zhì)。賦形劑可以包括用于為具有非常強活性成分的制劑增加體積、允許方便和精確配劑量、使活性成分穩(wěn)定和使遞送系統(tǒng)在光學(xué)和/或器官感覺上(organoleptically)可接受的物質(zhì)。藥用賦形劑的實例包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。在具體實例中，所公開的抗衰老補充劑包括下列賦形劑:甘油、山梨`糖醇、膠體二氧化硅和天然調(diào)味添加劑。
[0039]抑制(包括阻止)細胞衰老:在攝入組合物的對象中抑制(例如阻止)與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程，例如抑制自由基的形成或活性。阻止細胞衰老是指改善細胞衰老的征兆或癥狀的干預(yù)。阻止包括預(yù)防以延遲與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程的發(fā)生。細胞衰老的阻止或抑制不需要完全沒有細胞衰老。在具體實例中，所公開的組合物使與細胞衰老相關(guān)的過程降低或延遲至少10%、至少20%、至少50%或甚至至少90%。這樣的降低可以使用本文公開的方法以及本【技術(shù)領(lǐng)域】已知的方法測量。
[0040]磨香葡萄(圓葉葡萄(Vitus rotundifolia)):原產(chǎn)于美國東南部的葡萄,見于從特拉華河(Delamare)到墨西哥灣并向西到密蘇里、堪薩斯、俄克拉荷馬和德克薩斯的野外。麝香葡萄非常適應(yīng)美國東南部的溫暖潮濕條件。結(jié)出的果實是3-40顆葡萄的松散小簇，與歐洲和美洲葡萄的大的、緊密成束的特征顯著不同。果實圓形，1到1-1/2英寸，具有厚的、堅韌的果皮，并含有最多5粒堅硬的橢圓形種子。果實的顏色范圍從發(fā)綠的青銅色到青銅色、桃紅色、紫色和幾乎黑色。
[0041]麝香葡萄有許多不同品種可用，包括雌性(僅有雌蕊的)品種例如Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、Supreme 和Sweet Jenny,以及自花授粉的的品種例如 Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、FrySeedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale 和 Sterling。
[0042]例如，本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員所鑒定的青銅色磨香葡萄品種包括Carlos、Chowan、Doreen、Higgins、Magnolia、Nevermiss、Pamlico、Roanoke、Scuppernong、Sterling 和Summit 栽培品種。紫色到黑色品種包括 Albermarle、Bountiful、Cowart、GA-l、Hunt、NC_l、Noble、Regale、Tarheel 和 Jumbo。
[0043]完整的麝香葡萄的植物化學(xué)成分與歐洲葡萄(Vitis vinifera)不同。麝香葡萄具有較高的總酚類物質(zhì)含量，特征為鞣花、沒食子和類黃酮糖苷的濃度高。鞣花酸在麝香葡萄中的存在是獨有的，其被發(fā)現(xiàn)是游離鞣花酸、鞣花酸糖苷、甲氧基化衍生物和鞣花單寧的形式。另一個獨有特點是在麝香葡萄中觀察到的花青苷化學(xué)。這些化合物以非?；问阶鳛榛ù渌?、花青素、矮牽牛素、甲基花青素和二甲花翠素的3，5- 二葡萄糖苷(與3-葡萄糖苷相反)存在，與葡萄中存在的其他花青苷的天然顏色影響一起，賦予果汁和果渣深紫色。紫色果渣提取物含有花青苷，而青銅色果渣提取物不含。
[0044]紅色和紫色花青苷是具有抗氧化性質(zhì)的多酚類化合物。黃酮醇是完整麝香葡萄中存在的第二豐富的類黃酮。麝香葡萄果皮級份中報道的主要酚類物質(zhì)(以降序)是鞣花酸、楊梅黃酮、槲皮黃酮和莰非醇，而種子中報道的是表兒茶素、兒茶素和沒食子酸(Patrana-Bonilia 等，J.Agric.Food Chem.51:5497-5503，2003)。
[0045]可藥用介質(zhì):可用于本公開的可藥用介質(zhì)(載體)是常規(guī)的。E.W.Martin主編的〈〈Remington 藥物學(xué)〉〉(Remington’s Pharmaceutical Sciences) , Mack PublishingC0., Easton, PA,第1 9版(1995)中描述了適用于一種或多種組合物、例如一種或多種磨香葡萄組合物與其他藥劑的藥物遞送的組合物和制劑。
[0046]—般來說，介質(zhì)的性質(zhì)取決于所使用的具體給藥方式。例如，腸胃外制劑通常包含可注射流體，其包括可藥用和生理可接受的流體例如水、生理鹽水、平衡鹽溶液、葡萄糖水、甘油等作為介質(zhì)。對于固體組合物(例如粉劑、丸劑、片劑或膠囊形式)來說，常規(guī)的無毒固體介質(zhì)可以包括例如藥用級甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸鎂。除了生物中性介質(zhì)之外，待施用的藥物組合物可以包含少量無毒輔助物質(zhì)，例如潤濕或乳化劑、防腐劑、pH緩沖劑等，例如乙酸鈉或失水山梨糖醇單月桂酸酯。
[0047]純化的:術(shù)語純化的不需要絕對純度；相反，它打算用作相對術(shù)語。因此，例如，純化的物質(zhì)是其中物質(zhì)比該物質(zhì)在其天然環(huán)境中例如在果實(例如葡萄)中更加富集的物質(zhì)。在一個實施方案中，制備物被純化，使得物質(zhì)占制備物總含量的至少約5% (例如但不限于至少10%、20%、30%、40%、50%、70%、80%、90%、95%、98%或99%)。在實例中，所公開的具有抗氧化活性的組合物包括反式白藜蘆醇，其最低純度為總白藜蘆醇制備物的至少50%、70%、80%、90%、95%、98% 或 99% (以重量計)。
[0048]果渣:在果汁提取后剩余的果皮、種子和果肉。在一個實例中，果渣提取物是青銅色麝香葡萄果渣提取物、紫色麝香葡萄果渣提取物或其組合。許多不同品種的麝香葡萄果洛可用作原料，它們包括雌性(僅有雌蕊的)品種例如Black Beauty> Black Fry、Darlene、Fry>Higgins> Jumbo> Scuppernong> Sugargate> Summits Supreme 和 Sweet Jenny,以及自花授粉品種例如 Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red>Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale 和 Sterling。
[0049]麝香葡萄果渣含有具有抗氧化性質(zhì)的酚類化合物，包括沒食子酸和鞣花酸。
[0050]紫色胡蘿卜(Daucus carota):含有花青苷色素的胡蘿卜栽培品種?！白仙}卜提取物”可以是按照本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員已知的任何提取方法提取紫色胡蘿卜所獲得的物質(zhì)，只要它具有所需活性(例如顏色穩(wěn)定活性、抗氧化活性或其組合)即可。在一個實例中，紫色胡蘿卜提取物具有穩(wěn)定麝香葡萄顏色色素的性質(zhì)，并因此能夠隨后用作顏色穩(wěn)定添加劑。
[0051]白藜蘆醇:一種植物抗毒素，屬于芪類化合物，是芪的衍生物，并且在植物中在芪合酶的幫助下產(chǎn)生。白藜蘆醇作為兩種結(jié)構(gòu)異構(gòu)體存在:順式和反式白藜蘆醇。當(dāng)加熱或暴露于紫外輻射時，反式白藜蘆醇可以經(jīng)歷異構(gòu)化變成順式形式。
[0052]白藜蘆醇以各種各樣的量存在于葡萄、覆盆子、桑椹、李、花生、越桔物種包括藍莓、歐洲越桔和蔓越桔的漿果、某些松樹例如歐洲赤松和東部白松以及大虎杖和虎杖的根和莖中。在葡萄中，白藜蘆醇主要發(fā)現(xiàn)于果皮和種子中。在葡萄果皮中發(fā)現(xiàn)的白藜蘆醇的量，隨著葡萄的栽培品種、其地理起源和在真菌感染中的暴露而變。
[0053]在本文中使用的術(shù)語白藜蘆醇可以包括從植物例如葡萄提取的天然反式白藜蘆醇或合成的反式白藜蘆醇。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語白藜蘆醇可以包括反式白藜蘆醇的改性制劑，例如微囊化或可水分散的形式。
[0054]對象:活的多細胞有脊椎生物體，其類別包括人類和獸醫(yī)對象兩者。
[0055]治療有效量:可單獨或與其他藥劑(例如其他抗氧化劑)一起誘導(dǎo)所需的響應(yīng)(例如阻止或抑制細胞衰老)的組合物的量。本文公開的制備物可以治療有效量施用。
[0056]在一個實例中，所需的響應(yīng)是施用組合物的對象中抑制或減少與一個或多個細胞衰老過程相關(guān)的自由基的產(chǎn)生或活性。對于組合物的有效性來說，自由基的產(chǎn)生或活性不需被完全消除。例如，與不存在組合物情況下的自由基產(chǎn)生或活性相比，組合物可以將產(chǎn)生或活性降低期望的量，例如降低至少10%、至少20%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%。
[0057]所公開的麝香葡萄果渣提取物組合物的治療有效量，可以例如在治療過程期間每日以單劑或幾劑給藥。但是，治療有效量可以取決于受治對象、受治病癥的嚴重性和類型以及給藥方式。例如，如果口服給藥，這種藥劑的治療有效量可以在每日約1到約500毫克反式白藜蘆醇、麝香葡萄多酚或其組合的范圍內(nèi)變化。
[0058]單位劑量:含有經(jīng)計算能夠單獨或共同產(chǎn)生所需效應(yīng)例如治療效應(yīng)的預(yù)定量活性物質(zhì)的物理上獨立的單位。單個單位劑量或多個單位劑量可用于提供所需的效應(yīng)或活性，例如抗氧化活性。在一個實例中，單位劑量包括阻止或抑制與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程的所需藥劑量。
[0059]I1.幾個實施方案的描述
[0060]已經(jīng)對植物藥劑作為可用于減少氧化應(yīng)激的營養(yǎng)劑的潛在來源進行了廣泛研究。紅葡萄是成為深入研究對象的眾多食物之一。紅葡萄的抗氧化效應(yīng)被大體上歸因于多酚類化合物例如白藜蘆醇和原花青素，后者在葡萄中以顯著量存在。
[0061]本發(fā)明人進行了一系列研究以開發(fā)足以提高鞣花酸的最大溶解度的麝香葡萄果渣提取物?，F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，未濃縮的65%比35%的青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物(體積/體積)比率提高了鞣花酸在兩種果渣提取物之間的最大溶解度。
[0062]確定鞣花酸(其是麝香葡萄獨有的)在麝香葡萄果渣提取物中的最大溶解度，允許制備鞣花酸溶解度增加的提取物(并因此獲得了果渣的多酚分布圖)，其進一步允許制備具有改進的抗氧化活性的提取物。因此，本文公開了具有改進的鞣花酸溶解度的麝香葡萄果渣提取物以及使用這些提取物的方法。例如，所公開的麝香葡萄提取物可以單獨或與其他化合物組合，在非飲料食品、飲料、膳食補充劑或局部用軟膏中給藥。還提供了生產(chǎn)麝香葡萄果渣提取物的方法，所述方法包括將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合以產(chǎn)生麝香葡萄果渣提取物，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.3到3 (重量/重量)的范圍內(nèi)。
[0063]此外，通過0RAC分析法測量，本發(fā)明人測定了所公開的麝香葡萄果渣提取物和歸一化到98%反式白藜蘆醇的虎杖提取物分別或組合(在混合物或膳食補充劑中)的抗氧化能力。測量了樣品的親水性抗氧化能力和親脂性抗氧化能力兩者。這些研究證實了在混合物或膳食補充劑中，麝香葡萄果渣提取物和歸一化到98%反式白藜蘆醇的虎杖根提取物在產(chǎn)生親脂性抗氧化能力中的強烈協(xié)同效應(yīng)。在親脂性條件下表現(xiàn)出的選擇性協(xié)同是出乎意料的。此外，盡管在組合物中使用的麝香葡萄提取物可以是可能隨物種、提取工藝等而變的天然提取物，但只要維持所公開的麝香葡萄多酚與白藜蘆醇的比率，即可保留協(xié)同的親脂性抗氧化活性。
[0064]這些發(fā)現(xiàn)證實了含有歸一化到98%反式白藜蘆醇的虎杖提取物、和麝香葡萄果渣提取物兩者的混合物和膳食補充劑，與任一種單獨的提取物相比具有增加的親脂性抗氧化能力。重要的是，在親脂性環(huán)境中發(fā)生的氧化性過程據(jù)認為引起和/或啟動了多種疾病狀態(tài)的病理發(fā)生，例如動脈粥樣硬化中的低密度脂蛋白(LDL)氧化和II型糖尿病中肥胖誘導(dǎo)的胰島素抗性。此外，膳食脂類在胃腸道內(nèi)的氧化導(dǎo)致細胞毒性和基因毒性脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物例如丙二醛(MDA)的吸收。因此，所公開的具有高親脂性抗氧化能力的組合物可以提供有益作用，抵消上面提到的脂類氧化的有害結(jié)果。
[0065]該發(fā)現(xiàn)能夠提供具有改進的抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物組合物以及生產(chǎn)這些組合物的方法。例如，本文中公開的具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物，可以在非飲料食品、飲料、液體或固體膳食補充劑或局部用軟膏中給藥。所公開的組合物的生產(chǎn)方法可以包括將具有至少2%多酹含量的磨香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物與來自麝香葡萄之外的來源、最低純度為至少5%的反式白藜蘆醇相組合，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比率在0.1/1到10/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，由此產(chǎn)生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜蘆醇混合物。所公開組合物的生產(chǎn)方法還可以包括將具有至少2%多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物與來自麝香葡萄之外的來源、最低純度為至少5%的反式白藜蘆醇相組合，其中麝香葡萄果渣提取物與反式白藜蘆醇的比率在0.2/1到50/1 (重量/重量)例如5/1到50/1 (重量/重量)、包括20/1到50/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，例如18比1 (重量/重量)，由此產(chǎn)生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜蘆醇混合物。
[0066]已發(fā)現(xiàn)親脂性抗氧化劑能夠有效阻止各種類型的皮膚傷害，例如但不限于抑制脂質(zhì)過氧化作用和由脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生的產(chǎn)物，例如交聯(lián)劑。已知氧化應(yīng)激是構(gòu)成正常衰老基礎(chǔ)的核心機制。在本文中顯示，所公開的組合物具有改進的親脂性抗氧化活性。基于這些觀察，公開了抑制細胞衰老、例如阻止或抑制自由基的產(chǎn)生或活性的方法。方法包括使用所公開的具有改進的抗氧化能力的組合物(例如膳食補充劑)作為抗衰老補充劑。例如，能夠提供在攝入混合物或膳食補充劑組合物的對象中阻止或降低與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程、例如減少或抑制自由基的生產(chǎn)或活性的方法。
[0067]A.麝香葡萄果渣提取物
[0068]本文公開了源自于青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣的麝香葡萄果渣提取物。在某些實施方案中，麝香葡萄果渣提取物中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.3到3 (重量/重量)的范圍內(nèi)。例如，青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率為約2.75比約1 (重量/重量)、2.5比約1 (重量/重量)、約2.25比約1 (重量/重量)、約2比約1 (重量/重量)、約1.5比約1 (重量/重量)或約1比約1 (重量/重量)。本文中使用的術(shù)語“約”被定義為±0.5。在具體實例中，青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率為約2.25比約1(重量/重量)。
[0069]在某些實施方案中，所公開的磨香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物具有至少2%的多酚含量。例如，多酚含量為至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%、至少6%、至少8%、至少10%、至少12%或至少14%。在具體實例中，麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物具有約4%的多酹含量。
[0070]在某些實施方案中，所公開的麝香葡萄果渣提取物在液體中包含20%到50%固形物，例如至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至少46%或至少48%。在具體實例中，提取物在液體中包含約40%固形物。
[0071]B.麝香葡萄果渣提取物的制備方法
[0072]還公開了制備麝香·葡萄果渣提取物的方法，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.3到3 (重量/重量)范圍內(nèi)。在一個公開的實施方案中，通過將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合來制備麝香葡萄果渣提取物。在一個具體實施例中，通過將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合來制備麝香葡萄果渣提取物，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10 (重量/重量)、包括從0.3到3 (重量/重量)的范圍內(nèi)，例如約2.75比約1 (重量/重量)、2.5比約1 (重量/重量)、約2.25比約1 (重量/重量)、約2比約1 (重量/重量)、約1.5比約1 (重量/重量)或約1比約1 (重量/重量)。在更具體的實例中，通過將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合來制備麝香葡萄果渣提取物，其中青銅色麝香葡萄提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率約為
2.25比1 (重量/重量)。
[0073]在某些實例中，制備麝香葡萄果渣提取物的方法可以包括分別制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物。例如，使用水、優(yōu)選為加熱的水分別提取青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣。制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物還可以包括對青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物進行發(fā)酵，以除去提取到的糖類。在一個實例中，發(fā)酵在提取青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣之后、但是在青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合之前進行，以生產(chǎn)所公開的麝香葡萄果渣提取物。在其他實例中，發(fā)酵在將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物以所需的提取后比率(例如約2.25比1的青銅色與紫色比率)組合后進行。
[0074]發(fā)酵可以通過本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員已知的任何方法、包括本文描述的方法來進行。例如，發(fā)酵可以包括向果渣加入酵母和酵母營養(yǎng)物，并使提取物發(fā)酵直到殘留的糖內(nèi)含物被轉(zhuǎn)化成乙醇。典型情況下，人們在每1000加侖IX (未濃縮的)提取物中使用2磅酵母。在這樣的實例中，發(fā)酵典型在3天后完成。在其他實例中，酵母的量和/或菌株以及發(fā)酵的持續(xù)時間和溫度可以隨本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員所知的具體方法而變。在某些實例中，可以使用酶在果渣提取物中澄清和/或沉降殘渣，或改進提取收率。例如，這些酶可以包括果膠酶或來自黑曲霉(Aspergillus niger)的酶的混合物，并可以從供應(yīng)源例如ScottLaboratories商購。這些酶可以在發(fā)酵前或發(fā)酵期間添加到果渣提取物中。
[0075]在某些實施方案中，制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物包括對青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物進行過濾。例如，可以在發(fā)酵之前和/或之后過濾青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物。過濾可以按照本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員已知的通用方法、包括本文中公開的過濾方法來進行。在具體實例中，提取物通過具有適合篩眼大小的篩網(wǎng)過濾，例如USP篩網(wǎng)(典型為120目)或類似的濾布(例如可以從Millipore Corporation商購的濾器)。
[0076]在其他實施方案中，制備麝香葡萄果渣提取物可以包括將青銅色麝香葡萄果渣與紫色麝香葡萄果渣以所需比率組合，并同時提取青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣。例如，使用水、優(yōu)選為加熱的水同時提取青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣，以產(chǎn)生所公開的麝香葡萄果渣提取物。在某些實施方案中，該方法還可以包括對麝香葡萄果渣提取物進行發(fā)酵以除 去提取到的糖類。正如前面所述，可以使用本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員已知的任何發(fā)酵方法，包括本文中描述的方法。例如，發(fā)酵可以包括向果渣加入酵母和酵母營養(yǎng)物，并使提取物發(fā)酵直到殘余的糖內(nèi)含物被轉(zhuǎn)化成乙醇。在一個實例中，發(fā)酵包括在每1000加侖IX提取物中加入2磅酵母，并允許提取物在室溫下保持約3天或直到殘余的糖內(nèi)含物被轉(zhuǎn)化成乙醇。該公開方法還可以包括對麝香葡萄果渣提取物進行過濾。例如，可以在發(fā)酵之前和/或之后對麝香葡萄果渣提取物進行過濾。過濾可以按照本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員已知的通用技術(shù)、包括本文公開的過濾方法來進行。
[0077]在某些實施方案中，制備麝香葡萄果渣提取物的方法還包括濃縮青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，以便每種提取物在液體中包含20%到50%的固形物，例如至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至少46%或至少48%。在具體實例中，將提取物濃縮以便每種提取物在液體中包含約40%固形物?？梢允褂霉挠糜跐饪s樣品的方法、包括本文公開的用于濃縮樣品的方法來濃縮青銅色和紫色提取物。
[0078]在具體實例中，為了制備含有40%固形物的麝香葡萄果渣提取物，將麝香葡萄果渣提取物干燥成粉末形式，并在水中復(fù)溶成40%固形物水平?？蛇x地，并且在商業(yè)上更加可接受的方法，是通過在真空下蒸發(fā)除去提取溶劑來進行濃縮。這可以通過批式或連續(xù)工藝來實現(xiàn)。批式工藝包括將提取物置于容器中，抽到20-29”萊柱的真空，同時加熱容器夾套來提供能量以增加溶劑的蒸汽壓。將溶劑蒸汽冷凝到容器外部，冷凝的速率控制冷凝物的溫度。同樣的原理適用于連續(xù)蒸發(fā)工藝，但優(yōu)點是縮短了冷凝物暴露于高溫的時間長度。兩種工藝都適用于本文描述的麝香葡萄果渣提取物的濃縮。
[0079]在具體實施方案中，制備麝香葡萄果渣提取物的方法包括分別提取青銅色和紫色果渣，然后過濾每種提取物，然后將青銅色和紫色果渣提取物以所需比率組合。在某些實例中，該方法還可以包括對合并的麝香葡萄果渣提取物進行發(fā)酵，以除去提取到的糖類。正如前面所述，可以使用本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員已知的任何發(fā)酵方法，包括本文描述的方法。在一個實例中，方法包括一個以上的過濾步驟，例如在發(fā)酵之前和之后對提取物進行過濾。在某些實例中，方法還可以包括如本文所述濃縮提取物。例如，方法可以包括通過在真空下蒸發(fā)以除去提取溶劑來濃縮提取物。
[0080]C.具有抗氧化活性的組合物
[0081]本文公開了具有改進的抗氧化活性的組合物。在某些所公開的實施方案中，組合物包括具有至少2%多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和來自麝香葡萄之外的來源(例如虎杖根提取物)的最低純度為至少5%的反式白藜蘆醇，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比率在0.1/1到10/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，從而提供具有抗氧化活性的組合物。
[0082]在某些實例中，組合物包括具有至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%、至少6%、至少8%、至少10%、至少12%或至少14%的總多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitisrotundifolia))果洛提取物和來自磨香葡萄之外的來源的最低純度為至少5%、至少10%、至少25%、至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少98%的反式白藜蘆醇。在具體實例中，組合物包含具有約4%多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物和來自磨香葡萄之外的來源的最低純度為至少98%的反式白藜蘆醇。
[0083]在具體實施方案中，組合物包括在液體中具有20%到50%固形物、例如至少23%、至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至少46%或至少48%固形物的麝香葡萄果渣提取物。在具體實例中，提取物在液體中包含約40%固形物。
[0084]在某些實施方案中，白`藜蘆醇包含至少5%反式白藜蘆醇，例如至少10%反式白藜蘆醇、至少20%反式白藜蘆醇、至少30%反式白藜蘆醇、至少40%反式白藜蘆醇、至少50%反式白藜蘆醇、至少55%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少98%反式白藜蘆醇。在具體實施方案中，白藜蘆醇包含至少50%反式白藜蘆醇，例如至少55%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少98%從虎杖(Polygonum cuspidatum)根提取的反式白藜蘆醇?？紤]到了在本公開的組合物中可以使用其他反式白藜蘆醇來源，包括合成的反式白藜蘆醇。
[0085]在某些實施方案中，所公開的抗氧化組合物具有至少0.1比1 (重量/重量)的麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇比率，例如0.25比1、0.5比1、0.6比1、0.65比1、0.7比1、0.75比1、0.8比1、0.9比1或1比1 (重量/重量)。在其他實施方案中，麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比率可以高達10比1 (重量/重量)，例如2比1、3比1、4比1、5比1、7.5比1或9比1 (重量/重量)。在具體實例中，所公開的抗氧化組合物具有0.75比1 (重量/重量)的麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇比率。
[0086]在某些實施方案中，所公開的抗氧化組合物具有0.2/1到50/1 (重量/重量)范圍內(nèi)的麝香葡萄果渣提取物與反式白藜蘆醇比率，例如0.5比1、1比1、5比1、10比1、15比1、20比1、22比1、25比1、30比1、35比1、40比1或45比1 (重量/重量)。
[0087]在某些實施方案中，所公開的具有抗氧化活性的組合物具有每mg多酚至少21 μ mol Trolox當(dāng)量(μ molTE/mg多酌.)的總0RAC,例如至少22 μ molTE/mg多酌.、至少24 μ molTE/mg 多酌.、至少 26 μ mol TE/mg 多酌.、至少 28 μ molTE/mg 多酌.或至少 30 μ molTE/mg多酚。在一個實例中，所公開的組合物具有24μ molTE/mg多酚的總0RAC。
[0088]在某些實例中，所公開的組合物還可以包含接骨木提取物、紫色胡蘿卜提取物、賦形劑(例如甘油、山梨糖醇、膠體二氧化硅或天然調(diào)味添加劑)或其組合。例如，可以包含接骨木提取物和紫色胡蘿卜提取物，為組合物提供顏色或附加的抗氧化活性。
[0089]在具體實例中，組合物包含占組合物總量的23%到32% (例如23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%或32%)的麝香葡萄果渣提取物(含有約4%到5%多酚含量)、總量的1.2% 到 3.0% (例如 1.3%、1.5%、1.7%、1.9%、2.1%、2.3%、2.5%、2.7% 或 2.9%)的反式白藜蘆醇、總量的0.12%到0.20% (例如0.12%、0.14%,0.16%,0.18%或0.20%)的紫色胡蘿卜提取物、總量的0.4%到0.6% (例如0.4%、0.45%,0.5%、0.55%或0.6%)的接骨木提取物、總量的50% 到 61%(例如 51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59% 或 60%)的山梨糖醇、總量的 8% 至lj12% (例如8%、9%、10%、11%或12%)的99.7%甘油組合物，以及總量的1%到2% (例如1.2%、1.5%、1.7%或2%)的膠體二氧化硅。在其他具體實例中，組合物包含總組合物的8%到60%的麝香葡萄果渣提取物(含有以液體重量計2%到14%的麝香葡萄多酚)和總組合物的1.2%到3.0%的反式白藜蘆醇。
[0090]在更具體的實例中，組合物包含總量的28%到30%的麝香葡萄果渣提取物、總量的1%到2%的白藜蘆醇、總量的0.1%到0.2%的紫色胡蘿卜提取物、總量的0.4%到0.5%的接骨木提取物、總量的53%到56%的山梨糖醇、總量的9%到11%的99.7%甘油組合物、總量的
1.5%到2%的膠體二氧化硅、約1%到2%的康科特葡萄提取物、約0.1%到0.2%的解百納葡萄提取物和0.4%到0.5%的紅葡萄粉。
[0091]在更加具體的實例中，組合物包含總量的約28.9%的麝香葡萄果渣提取物(含有4.1%的多酚含量)、總量的約1.65%的反式白藜蘆醇、總量的約0.16%的紫色胡蘿卜提取物、總量的約0.48%的接骨木提取物、總量的約54.8%的山梨糖醇、總量的約10%的99.7%甘油組合物、總量的約2%的膠體二氧化硅、約1.27%的康科特葡萄提取物、約0.16%的解百納葡萄提取物和約0.48%的紅葡萄粉。
[0092]在另一個具體實例中，組合物包含總量的23%到25%的麝香葡萄果渣提取物、總量的1%到2%的白藜蘆醇、總量的0.1%到0.2%的紫色胡蘿卜提取物、總量的0.4%到0.5%的接骨木提取物、總量的58%到61%的山梨糖醇、總量的9%到11%的99.7%甘油組合物、總量的1.5%到2%的膠體二氧化硅、約1%到2%的康科特葡萄提取物、0.1%到0.2%的解百納葡萄提取物和0.4%到0.5%的紅葡萄粉。
[0093]在另一個更加具體的實例中，組合物包含總量的約23.77%的麝香葡萄果渣液體提取物(含有5%的多酚含量)、總量的約1.65%的反式白藜蘆醇、總量的約0.16%的紫色胡蘿
卜提取物、總量的約0.48%的接骨木提取物、總量的約60.05%的山梨糖醇、總量的約10%的99.7%甘油組合物、總量的約2%的膠體二氧化硅、約1.27%的康科特葡萄提取物、約0.16%的解百納葡萄提取物和約0.48%的紅葡萄粉。
[0094]任何所公開的組合物可以提供在非飲料食品、飲料或液體或固體膳食補充劑中。在某些實例中，所公開的組合物被提供成飲料。本文的組合物(特別是食品、飲料和膳食補充劑組合物)可以用一種或多種營養(yǎng)物質(zhì)、特別是一種或多種維生素和/或礦物質(zhì)強化。維生素和礦物質(zhì)的美國推薦每日攝入量(U.S.Reco_ended Daily Intake) (USRDI)在國家科學(xué)院-國家研究理事會下食品和營養(yǎng)委員會(Food and Nutrition Board,National Academy of Sciences-National Research Council)的《推薦每日膳食允許量》(Recommended Daily Dietary Allowance)中規(guī)定和說明。除非在本文中另有規(guī)定,否則當(dāng)產(chǎn)品中存在給定礦物質(zhì)時，產(chǎn)品包含這種礦物質(zhì)的USRDI的至少約1%，例如至少約5%、至少約10%、至少約20%、至少約50%、至少約75%、至少約100%、至少約150%。除非在本文中另有規(guī)定，否則當(dāng)產(chǎn)品中存在給定維生素時，產(chǎn)品包含這種維生素的USRDI的至少約1%，例如至少約5%、至少約10%、至少約20%、至少約50%、至少約75%、至少約100%、至少約150%。所添加的維生素和礦物質(zhì)的量可以取決于加工方法和制劑中其他成分的濃度。
[0095]這些維生素和礦物質(zhì)的非限制性的實例包括鐵、鋅、銅、鈣、磷、煙酸、硫胺素、葉酸、泛酸、碘、維生素A、維生素C、維生素B2、維生素B3、維生素B6、維生素B12、維生素D、維生素E和維生素K。商購來源的維生素和礦物質(zhì)也可以包含在本發(fā)明的組合物中。[0096]例如，可以使用這些礦物質(zhì)適合于包含在可食用產(chǎn)品中的任何可溶性鹽，例如檸檬酸鎂、葡萄糖酸鎂、硫酸鎂、氯化鋅、硫酸鋅、碘化鉀、硫酸銅、葡萄糖酸銅和檸檬酸銅。鈣的來源可以包括例如氨基酸螯合鈣、碳酸鈣、氧化鈣、氫氧化鈣、硫酸鈣、氯化鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸二氫鈣、檸檬酸鈣、蘋果酸鈣、calcium titrate、葡萄糖酸鈣、calciumrealate、calcium tantrate和乳酸|丐，特別是檸檬酸-蘋果酸|丐。當(dāng)在本文中使用時維生素A”包括但不限于視黃醇、β-胡蘿卜素、視黃醇棕櫚酸酯和視黃醇乙酸酯。維生素Α可以采用油、珠丸(beadlet)或囊封的形式。也可以使用囊封的抗壞血酸和抗壞血酸的可食用鹽。碘的來源包括含碘鹽類，例如碘化鈉、碘化鉀、碘酸鉀、碘酸鈉或其混合物。這些鹽類可以被囊封。鐵的可接受形式在本【技術(shù)領(lǐng)域】中是公知的。摻入到組合物中的鐵化合物的量將隨最終產(chǎn)品中所需的增補水平和所針對的消費者而變化很大。本公開的鐵強化組合物典型地包含鐵的USRDI的約5%到約100%，例如約15%、約25%、約40%、約50%、約70%、約80%或約 90%。
[0097]亞鐵典型地比三價鐵更好被身體利用?？捎糜诒竟_的可攝取組合物的高度生物可利用的亞鐵鹽是硫酸亞鐵、延胡索酸亞鐵、琥珀酸亞鐵、葡萄糖酸亞鐵、乳酸亞鐵、酒石酸亞鐵、檸檬酸亞鐵、亞鐵氨基酸螯合物以及這些亞鐵鹽的混合物。盡管亞鐵典型生物利用度更高，但某些三價鐵鹽也能提供高度生物可利用的鐵源?？捎糜诒竟_的食品或飲料組合物中的高度生物可利用的三價鐵鹽是蔗糖鐵、檸檬酸鐵銨、檸檬酸鐵、硫酸鐵以及這些三價鐵鹽的混合物。高度生物可利用亞鐵和三價鐵鹽的組合或混合物可用于這些可食用混合物和即食飲料中。除了這些高度生物可利用的亞鐵和三價鐵鹽之外，生物可利用的鐵的其他來源可以包含在本公開的食品和飲料組合物中。特別適合于強化產(chǎn)品的鐵的其他來源包括某些鐵-糖-羧酸復(fù)合物。
[0098]可用于本公開的組合物的鋅化合物可以采用任何常用形式，例如硫酸鋅、氯化鋅、乙酸鋅、葡萄糖酸鋅、抗壞血酸鋅、檸檬酸鋅、天冬氨酸鋅、吡啶甲酸鋅、氨基酸螯合鋅和氧化鋅。
[0099]在某些實例中，食品和飲料組合物還可以包含一種或多種膳食纖維?！吧攀忱w維”是指對哺乳動物酶類的消化有抗性的復(fù)雜碳水化合物，例如見于植物細胞壁和海藻中的碳水化合物，以及通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)的碳水化合物。這些復(fù)雜碳水化合物的實例是麩皮、纖維素、半纖維素、果膠、樹膠和粘膠、海藻提取物、和生物合成的樹膠。纖維素質(zhì)纖維的來源包括蔬菜、水果、種子、谷類和人造纖維(例如由細菌合成)。也可以使用可商購纖維例如純化的植物纖維素或纖維素粉。天然存在的纖維包括來自完整柑橘果皮、柑橘內(nèi)皮、甜菜、柑橘果肉和果囊固形物、蘋果、杏和西瓜皮的纖維。
[0100]可以通過已知和常規(guī)的方法例如使用食品級酸緩沖劑將飲料酸度調(diào)整到并維持在必要范圍內(nèi)。典型地，上面提到的范圍內(nèi)的飲料酸度是抑制微生物的最高酸度與所需飲料口味的最適酸度之間的平衡。在某些實例中，飲料組合物具有約2到約8的pH，例如約2到約4.5或約2.7到約4.2。
[0101]可以使用有機以及無機的可食用酸來調(diào)整飲料組合物的pH。酸可以其未解離的形式或，可選地，作為其相應(yīng)的鹽存在，例如磷酸氫鉀或鈉、磷酸二氫鉀或鈉鹽。在某些實例中，酸包括檸檬酸、蘋果酸、延胡索酸、己二酸、磷酸、葡萄糖酸、酒石酸、抗壞血酸、乙酸、磷酸、丙酮酸或其混合物。酸化劑也可以用作抗氧化劑以穩(wěn)定飲料組分。常用的抗氧化劑的實例包括但不限于抗壞血酸、EDTA (乙二胺四乙酸)及其鹽。
[0102]D.具有抗氧化活性的麝香葡萄組合物的制備方法
[0103]還公開了具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物組合物的制備方法。本發(fā)明的組合物可以按照普通專業(yè)人員熟知的方法來制造。一般來說，可以通過將所有組分單獨或適當(dāng)?shù)亟M合在一起，在水中溶解、分散或以其它方式混合，適合的情況下用機械攪拌器攪拌直到所有成分已經(jīng)溶解或充分分散，來制備組合物。在適合時，可以將所有分離的溶液組合。當(dāng)需要儲存穩(wěn)定的組合 物時，最終的混合物可以任選地在適合的工藝條件下進行巴斯德消毒或無菌裝填。
[0104]這些方法可以包括將含有至少2%多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitisrotundifolia))果洛提取物與來自磨香葡萄之外的來源的最低純度為至少5% (例如至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%)的白藜蘆醇組合，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比率在
0.1/1到10/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，由此產(chǎn)生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜蘆醇的混合物。所公開的方法還可以包括制備麝香葡萄果渣提取物，然后將麝香葡萄果渣提取物與反式白藜蘆醇組合。
[0105]在一個具體實例中，制備麝香葡萄果渣提取物包括將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合。在其他實例中，制備麝香葡萄果渣提取物包括同時提取青銅色麝香葡萄果渣與紫色麝香葡萄果渣的混合物。在某些實例中，包含在本公開的組合物中的麝香葡萄果渣提取物按照本文公開的方法制備。但是，考慮到了麝香葡萄果渣提取物可以按照本【技術(shù)領(lǐng)域】的已知方法制備，包括通過壓碎、壓榨、提取、過濾(幾次)、并通過真空蒸發(fā)然后冷凍來濃縮提取物。在一個實例中，在提取工藝中只使用水，不向提取物自身添加其他成分例如溶劑、載體或防腐劑。工藝在保存多酚類化合物同時減少存在的其他分子例如大部分糖類的條件下進行。在其他實例中，提取工藝利用了乙醇或乙醇與水的混合物。在具體實例中，提取工藝還可以包括使用酶類來澄清或促進提取。例如，來自黑曲霉(Aspergillus niger)或果膠酶的酶的混合物可用于這些目的。商業(yè)化的實例包括來自Scott Laboratories 的 Scottzyme KS和 Scottzyme PEC5L。
[0106]在其他實例中，通過利用總酚濃度為至少2%的麝香葡萄果渣提取物來制備所公開的組合物。例如，可以使用總酚濃度為至少2%的可商購麝香葡萄提取物來制備所公開的具有抗氧化活性的組合物。
[0107]在具體實例中，具有抗氧化活性的組合物的制備方法還可以包括將麝香葡萄果渣提取物和白藜蘆醇與接骨木提取物、紫色胡蘿卜提取物、賦形劑(例如甘油、山梨糖醇、膠體二氧化硅或天然調(diào)味添加劑)或其組合進行組合。在具體實例中，方法包括將總組合物的23%到32%的麝香葡萄果渣提取物(含有約4%到約5%多酚含量)與總量的1.2%到3.0%的反式白藜蘆醇、總量的0.12%到0.20%的紫色胡蘿卜提取物、總量的0.4%到0.6%的接骨木提取物、總量的50%到61%的山梨糖醇、總量的8%到12%的99.7%甘油組合物和總量的1%到2%的膠體二氧化硅進行組合。
[0108]在更具體的實例中，組合物包括將總量的約28.9%的麝香葡萄果渣提取物(含有
4.1%多酚含量)與總量的約1.65%的白藜蘆醇、總量的約0.16%的紫色胡蘿卜提取物、總量的約0.48%的接骨木提取物、總量的約54.8%的山梨糖醇、總量的約10%的99.7%甘油組合物、總量的約2%的膠體二氧化硅、約1.27%的康科特葡萄提取物、約0.16%的解百納葡萄提取物和約0.48%的紅葡萄粉相組合。
[0109]在另一個更具體的實例中，組合物包括將總量的約23.77%的麝香葡萄果渣液體提取物(含有5%多酚含量)與總量的約1.65%的反式白藜蘆醇、總量的約0.16%的紫色胡蘿 卜提取物、總量的約0.48%的接骨木提取物、總量的約60.05%的山梨糖醇、總量的約10%的99.7%甘油組合物、總量的約2%的膠體二氧化硅、約1.27%的康科特葡萄提取物、約0.16%的解百納葡萄提取物和約0.48%的紅葡萄粉相組合。
[0110]在即飲組合物的制備中，可以任選地首先形成飲料濃縮物。制備濃縮形式的飲料組合物的一種方法，是以比在飲料組合物的制備中所需的水體積更少的水開始。另一種方法是將最終制備的飲料組合物部分脫水，以僅除去一部分水和存在的任何其他揮發(fā)性液體。脫水可以按照公知的程序例如真空蒸發(fā)來實現(xiàn)。濃縮物可以采取相對濃的液體的形式。稠漿液典型地通過向飲料濃縮物中添加適合的成分例如電解質(zhì)或乳液來形成。然后將稠漿液與水混合以形成成品飲料或成品飲料濃縮物。
[0111]所公開的組合物的基本上干燥的混合物可以通過將適當(dāng)量和比率的所有所需的干燥成分混合在一起來制備?？蛇x地，可以將最后制備的飲料組合物脫水以給出飲料組合物的基本上干燥的混合物?；旧细稍锏幕旌衔镒鳛槔绶勰?、顆粒或片劑以后可以溶解在適量的含碳酸或不含碳酸的水中，以制成最終的可飲用飲料，或與水一起服用。
[0112]作為食品的形式，所公開的組合物可以配制成任何任選形式，例如顆粒狀態(tài)、晶粒狀態(tài)、糊劑狀態(tài)、凝膠狀態(tài)、固體狀態(tài)或液體狀態(tài)。在這些形式中，可以包含各種其他物質(zhì)，例如粘合劑、崩解劑、增稠劑、分散劑、重吸收促進劑、調(diào)味劑、緩沖劑、表面活性劑、溶解助劑、防腐劑、乳化劑、等滲劑、穩(wěn)定劑或PH控制劑。在具體實例中，當(dāng)所公開的組合物被用作保護健康(包括但不限于改善膚質(zhì))的食品、功能食品等時，它優(yōu)選包含本發(fā)明的組合物和提取物(例如麝香葡萄果渣提取物、白藜蘆醇、紫色胡蘿卜提取物和接骨木提取物)的活性成分，其量使得本公開的預(yù)定效應(yīng)表現(xiàn)出足以提供抗氧化活性。
[0113]E.用于抑制(例如阻止)細胞衰老的方法和試劑盒[0114]本文中顯示了具有改進的親脂性抗氧化活性的所公開組合物。已知氧化應(yīng)激是造成正常衰老的核心機制。也已知道，親脂性抗氧化劑能夠抑制各種類型的皮膚傷害?；谶@些觀察，公開了抑制細胞衰老、例如抑制或降低自由基的產(chǎn)生和活性的方法。在一個實例中，方法包括向需要的對象施用具有抗氧化活性的所公開組合物，其劑量足以抑制或降低與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程。例如，抑制與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程包括在攝入組合物的對象中降低或抑制自由基的形成或活性。
[0115]在某些所公開的實施方案中，方法包括施用可攝取的的組合物，例如本文描述的組合物，組合物包含源自于青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物。在某些實施方案中，麝香葡萄果渣提取物中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10 (重量/重量)、例如0.3到3 (重量/重量)的范圍內(nèi)。例如，青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率為約2.75比約1 (重量/重量)、2.5比約1 (重量/重量)、約2.25比約1(重量/重量)、約2比約1 (重量/重量)、約1.5比約1 (重量/重量)或約1比約1 (重量/重量)。本文中使用的術(shù)語“約”被定義為±0.5。在具體實例中，青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率為約2.25比約1 (重量/重量)。
[0116]在某些實施方案中，口服的磨香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物具有至少2%的多酚含量。例如，多酚含量為至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%、至少6%、至少8%、至少10%、至少12%或至少14%。在具體實例中，麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果洛提取物具有約4%的多酹含量。
[0117]在某些實施方案中，方法包括施用可攝取的組合物，組合物包含麝香葡萄果渣提取物以及其他附加成分，包括但不限于白藜蘆醇。在某些實例中，方法包括施用具有約0.75比1 (重量/重量)的麝香葡萄多酚與白藜蘆醇比率的口服組合物。在其他實例中，方法包括施用至少包含麝香葡萄果渣提取物總組合物的8%到60%的麝香葡萄果渣提取物(包含以液體重量計2%到14%，例如4%、6%、8%、10%或12%的麝香葡萄多酚)和總量的1.2%到3.0%的反式白藜蘆醇的組合物?！?br> [0118]在其他實施方案中，方法包括施用口服組合物，組合物包含具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物和來自麝香葡萄之外的來源(例如虎杖根提取物)的最低純度為至少5%的白藜蘆醇，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比率在0.1/1到10/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，由此提供具有足以抑制或降低與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程(包括但不限于改善膚質(zhì))的抗氧化活性的組合物。在具體實例中，方法包括施用組合物，組合物包含具有至少2%多酚含量的麝香葡萄(圓葉葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和來自麝香葡萄之外的來源(例如虎杖根提取物)的最低純度為至少5%的白藜蘆醇，其中麝香葡萄果渣提取物與白藜蘆醇的比率在0.2/1到50/1 (重量/重量)、例如5/1到50/1 (重量/重量)或20/1到50/1 (重量/重量)的范圍內(nèi)，由此提供具有抗氧化活性的組合物。在某些實例中，組合物具有每mg多酹至少24 μ mol Trolox當(dāng)量(μ mol TE/mg多酹)的總0RAC。
[0119]在其他實施方案中，施用含有單獨或與其他活性成分包括但不限于白藜蘆醇組合的麝香葡萄果渣提取物的溶液或局部用軟膏，通過抑制或降低皮膚細胞中的自由基形成或活性，提供了改善膚質(zhì)的方法。在一個實例中，溶液或局部用軟膏包含所公開的麝香葡萄果渣提取物但不含白藜蘆醇。在另一個實例中，溶液或局部用軟膏包括所公開的麝香葡萄果渣提取物和白藜蘆醇兩者，例如麝香葡萄果渣提取物所包含的麝香葡萄多酚濃度使得麝香葡萄多酚與白藜蘆醇的比率為約0.75比1(重量/重量)。方法可以由臨床醫(yī)生或其他健康護理提供者執(zhí)行。方法還被設(shè)計用于家庭使用。方法可以減少與衰老相關(guān)的皮膚外觀的變化、可見地減少人類皮膚皺紋并改進皮膚的肌理質(zhì)量。還提供了用于改善膚質(zhì)的組合物和試劑盒，組合物和試劑盒可以包含所公開的具有抗氧化活性的組合物(包括口服和局部用)或麝香葡萄提取物與一種或多種其他的抗衰老組合物，例如一種或多種其他抗氧化劑。
[0120]任何皮膚表面(例如皮膚的表皮)都可以使用本文提供的方法處理?？梢蕴幚淼钠つw表面包括但不限于眼眶、嘴唇、面頰、鼻唇溝、前額、頸部、上唇紋(rhytides)、胃部、頸部、背部、胸部、手部、腿部、足部或其任何組合。在實例中，可以使用本文提供的方法處理任何面部表面的皮膚。方法可以應(yīng)用于任何面部區(qū)域和/或任何身體表面區(qū)域，其他可直接施用的區(qū)域是胸部和頸部。在同一次處理期間可以處理一個以上皮膚表面。在具體實例中，將液體或霜劑形式的本公開的組合物或提取物基本上均勻地施加在皮膚表面上，在皮膚上形成一層組合物或提取物。
[0121]所公開的組合物或提取物可以包含其他慣常用于化妝品的物質(zhì)，例如香料；抗微生物劑；抗細菌劑；加脂劑；絡(luò)合和螯合劑；珠光劑；植物提取物；維生素例如視黃醇或維生素C;活性劑；防腐劑；殺菌劑；表面活性劑；染料、色素、顏料或任何具有著色效應(yīng)的物質(zhì)；乳化劑；增稠劑；軟化、加濕和/或保濕物質(zhì)；或化妝或皮膚制劑的其他常見組成成分，例如醇類、多元醇、聚合物、泡沫穩(wěn)定劑、電解質(zhì)、有機溶劑或有機硅衍生物。組合物還可以包含功能性添加劑，例如角質(zhì)軟化劑、氧化劑、防曬劑和皮膚光滑劑。組合物還可以包含據(jù)認為在皮膚及其下方的皮下組織的中胚層療法注射治療中有益的組分，包括抗氧化劑例如二甲基氨基乙醇、α -硫辛酸和抗壞血酸。組合物中也可以包含可增強組合物或提取物的功效的藥劑，例如親脂性 和疏脂性滲透增強劑(例如檸檬酸三乙酯、丙二醇、脂肪酸酯等)?？梢栽鰪娖つw的血管灌注的藥劑例如氨茶堿或己酮可可堿，也可以包含在組合物中。組合物中還可以包含可增加皮膚的充盈和張力以及允許下方的皮下組織結(jié)構(gòu)縮緊或收縮的藥劑，例如磷脂酰膽堿和硫酸脫氧膽酸?？梢蕴峁┘に匾嫣幍纳砦镔|(zhì)，例如引起皮膚的雌激素或雄激素刺激的物質(zhì)，包括雌三醇和睪酮，也可以包含在組合物中。
[0122]所公開的麝香葡萄組合物可以包含一種或多種防腐劑。這些防腐劑包括例如Opthiphen? (來自 International Specialty Products 公司)、Geogard?Ultra1 (來自Lonza公司)、列入《歐盟化妝品指令》(European Union Cosmetic Directive)的防腐劑等，例如甲醛供體(例如DMDM乙內(nèi)酰脲，其可以在商品名GLYDAN?下從Lonza公司購買)、丁基氨基甲酸碘代丙酯(例如在商品名GLYCACIL-STM下可以從L0NZATM公司購買和/或在DEKABEN LMBTM下從Jan Dekker公司購買的)、對羥苯甲酸酯(例如對羥基苯甲酸的烷基酯，例如對羥苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和/或丁酯)、苯氧乙醇、乙醇、苯甲酸和水楊酸。防腐系統(tǒng)還可以包含防腐助劑，例如辛氧基甘油或大豆油(glycinesoya)。其他防腐劑或防腐助劑包括二溴氰基丁烷(2-溴-2-溴甲基戊二腈)、3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯、2-溴-2-硝基丙烷-1，3- 二醇、咪唑烷基脲、5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮、2-氯乙酰胺、苯扎氯銨和苯甲醇。
[0123]組合物還可以包含一種或多種調(diào)理劑，例如水溶性調(diào)理劑。其他調(diào)理劑包括例如根據(jù)《化妝品成分國際命名法》(International Nomenclature for Cosmetic Ingredients(INCI))被稱為聚季胺鹽的化合物，特別是聚季胺鹽-1到聚季胺鹽-56。
[0124]組合物可以從軟管、廣口瓶、瓶、泵、罐、噴霧罐或噴霧瓶，或從一些其他已知容器分配。
[0125]在本文中還公開了在家中或由臨床醫(yī)生使用的用于改善膚質(zhì)的麝香葡萄果渣提取物組合物和試劑盒。在一個實例中，該試劑盒適合于由臨床醫(yī)生或美容師使用。在這樣的實例中，試劑盒還可以包含涂敷器，用于輔助組合物的施加。一般來說，試劑盒還包含使用說明書。這些說明書可以是書面的，或采用用于電子裝置例如計算機、⑶播放器、mp3播放器或DVD播放器等的數(shù)字格式(例如錄像帶、DVD或CD)。在另一個實例中，試劑盒適合于在家中使用。該試劑盒可以包括涂敷器例如海綿或布，用于施加組合物。可選地，可以使用一個或多個手指施加組合物。一般來說，試劑盒還包括使用說明書。這些說明書可以是書面的，或采用用于電子裝置例如計算機、CD播放器、mp3播放器或DVD播放器的數(shù)字格式(例如錄像帶、DVD或CD)。
[0126]在某些實例中，試劑盒包含一種本公開的組合物或提取物以及一種或多種其他的抗衰老化合物例如另一種抗氧化劑(例如維生素C、維生素E、硒和/或β -胡蘿卜素)，其在兩個分開的容器中或作為單一組合物在單一容器中。在一個實例中，組合物或提取物被施加到靶皮膚區(qū)域上。在一個具體的非限制性實例中，麝香葡萄果渣提取物抗衰老試劑盒可以由個人在家中如下使用。首先，通過使用涂敷器例如海綿或布、或通過使用一個或多個手指將酌量的組合物或提取物施加到皮膚表面，以在皮膚表面上提供組合物或提取物的均勻的層。允許組合物或提取物經(jīng)過一定時間長度以被動吸收到皮膚表面中，或組合物/提取物被皮膚表面的吸收可以通過用指尖將組合物輕柔摩擦到皮膚表面中來促進。一般來說，在施用麝香葡萄果渣組合物/提取物后，可以繼續(xù)進行正常的皮膚護理程序，例如上妝和施用其他保濕劑。
[0127]該過程可以按 照描述每天兩次、每天一次、每兩天一次、每周兩次、每周一次、每兩周一次或每月一次，或使用一些其他的時間間隔例如每3到5天一次來進行。改善膚質(zhì)包括逆轉(zhuǎn)、減慢與天然或固有的衰老相關(guān)的皮膚變化的進程或阻止所述皮膚變化。在本文中使用，阻止及其變化形式是指皮膚變化的發(fā)生的任何程度的延遲。例如，改善膚質(zhì)包括逆轉(zhuǎn)、減慢與自由基形成和活性相關(guān)的皮膚變化的進程或阻止所述皮膚變化。在一個實例中，改善膚質(zhì)包括逆轉(zhuǎn)、減慢與暴露于日光或其他形式的光化輻射(例如UV輻射和曬黑機)相關(guān)的日光損傷或光致衰老皮膚變化的進程或阻止所述皮膚變化。作為另一個實例，改善膚質(zhì)還可以包括逆轉(zhuǎn)、減緩由外界因素包括但不限于輻射、空氣污染、風(fēng)、寒冷、潮濕、熱、化學(xué)物質(zhì)、煙、吸煙及其組合引起的皮膚變化的進程或阻止所述皮膚變化。改善膚質(zhì)還可以包括逆轉(zhuǎn)、阻止或減少可由某些皮膚病癥(例如痤瘡)、感染(例如利什曼病)或損傷(例如擦傷、刺傷、劃傷或手術(shù)傷口)引起的瘢痕形成。皮膚的改善還可以包括至少下列之一:使面部紋路顯得不太顯著，使面部紋路和/或皺紋感覺充起，改善眼眶下紋路和/或眼眶周圍紋路的外觀，改善魚尾紋的外觀，減少和/或消除皺紋的出現(xiàn)、特別是面頰、前額(例如眼睛之間的豎皺紋、眼睛上方的橫皺紋)上和/或嘴周圍的面部皺紋、以及特別是深皺紋、褶皺或皺痕的出現(xiàn)，改善皮膚柔軟性，減少和/或消除細紋和/或深紋、褶皺和皺痕，以及使皮膚光滑。用于測量膚質(zhì)改善的方法在本【技術(shù)領(lǐng)域】中是已知的。參見例如美國專利N0.6，866，856和6，682，763。[0128]可以通過實踐本文公開的方法和使用本文公開的試劑盒治療的皮膚變化包括例如皺紋(包括但不限于人類面部皺紋)、褶皺、深紋、褶皺和細紋，皮膚紋路加深，皮膚變薄，阻止或減少瘢痕形成、皮膚發(fā)黃、色斑形成、色素沉著過度、色素沉著和/或非色素沉著老年斑的出現(xiàn)、革質(zhì)化、失去彈性、失去回彈能力、失去膠原纖維、彈性纖維的異常變化、真皮小血管的退化、皮膚表面上日曬增加的可見血管的形成，及其組合。
[0129]改善膚質(zhì)包括減少、減輕和/或最小化一種或多種上面討論的皮膚變化。改善膚質(zhì)可以導(dǎo)致皮膚具有更年輕的外觀。改善膚質(zhì)可以導(dǎo)致皮膚具有更光滑、含水(不太干燥)或較少起屑的外觀。例如，在某些實施方案中，改善膚質(zhì)可以包括減少粗糙度、干燥度或起屑。改善膚質(zhì)包括消除和改善紋路和皺紋、改善充盈和張力，具有觀察到的所需提升和拉緊效應(yīng)。
[0130]可以改善皮膚的肌理特性，包括柔軟度、柔順性和光滑度，導(dǎo)致光澤、純凈度和亮度的增加。皮膚的其他并且重要的、可以客觀和主觀測量的特性包括但不限于皮膚松弛度或相反的皮膚緊致度，以及皮膚中肌理性細紋和較粗紋路的存在和程度。
[0131]這些特性與判斷表觀的外部情況(例如皮膚衰老)的特性相同。通過本文公開的處理方法和試劑盒改善這些特性，在表觀的目測判斷的基礎(chǔ)上產(chǎn)生了益處。通過本文公開的方法改變膚質(zhì)，減少了皮膚衰老的出現(xiàn)。
[0132]所需好處可以不僅包括對皮膚的生理好處，而且包括治療和藥理好處，例如可能的惡性腫瘤預(yù)防和治療，不論是通過化學(xué)預(yù)防還是改進的光動力療法。好處還可以包括通過包含抑制皮脂腺活性的組合物來進行痤瘡治療和抑制。
[0133]F.藥物組合物
[0134]所公開的麝香葡萄果渣提取物和組合物至少可用于抑制(例如阻止)一個或多個氧化過程，例如與細胞事件例如細胞衰老相關(guān)的自由基形成。因此，本文還描述了包含至少一種所公開的麝香葡萄果渣提取物單獨或與白藜蘆醇組合的藥物組合物。
[0135]藥物組合物的配制在`本【技術(shù)領(lǐng)域】中是公知的。例如，E.ff.Martin的《Remington藥物學(xué)〉〉(RemingtonJ s Pharmaceutical Sciences), Mack Publishing C0., Easton, PA,第19版，1995，描述了適合用于至少一種所公開的麝香葡萄果渣提取物單獨或與白藜蘆醇組合的藥物遞送的示例性制劑(及其組分)。在某些實例中，組合物還包括其他藥劑例如紫色胡蘿卜根提取物或接骨木提取物。可以配制包含至少一種這些化合物的藥物組合物，用于人類或獸醫(yī)醫(yī)學(xué)。所公開的藥物組合物的具體制劑可以取決于例如給藥方式(例如口服、局部或腸胃外)和/或待治療的病癥(例如自由基的生產(chǎn)或活性)。在某些實施方案中，制劑包括可藥用載體以及至少一種活性成分，例如麝香葡萄果渣提取物。
[0136]可用于本公開的方法和組合物的可藥用載體是本【技術(shù)領(lǐng)域】中常規(guī)的。藥用載體的性質(zhì)取決于所使用的具體給藥方式。例如，腸胃外制劑通常包含可注射流體作為介質(zhì)，所述流體包括藥物和生理可接受的流體例如水、生理鹽水、平衡鹽溶液、葡萄糖水、甘油等。對于固體組合物例如粉劑、丸劑、片劑或膠囊形式來說，可以包含常規(guī)的無毒固體載體，例如藥用級甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸鎂。除了生物中性載體之外，待給藥的藥物組合物可以任選地包含少量無毒性輔助物質(zhì)或賦形劑，例如潤濕或乳化劑、防腐劑和pH緩沖劑等；例如乙酸鈉或失水山梨糖醇單硬脂酸酯。其他非限制性的賦形劑包括非離子性增溶劑例如克列莫佛(cremophor),或蛋白質(zhì)例如人血清白蛋白。[0137]所公開的藥物組合物可以配制成可藥用鹽?？伤幱名}是化合物的游離堿形式的無毒性鹽，其具有游離堿的所需藥理活性。這些鹽可以源自于無機或有機酸。適合的無機酸的非限制性實例是鹽酸、硝酸、氫溴酸、硫酸、氫碘酸和磷酸。適合的有機酸的非限制性實例是乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、延胡索酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲基苯磺酸、甲基磺酸、水楊酸、甲酸、三氯乙酸、三氟乙酸、葡萄糖酸、天冬氨酸(asparagic acid)、天冬氨酸(aspartic acid)、苯磺酸、甲基苯磺酸、萘磺酸等。其他適合的可藥用鹽的名單可見于〈〈Remington藥物學(xué)〉〉(Remington,s Pharmaceutical Sciences),第 19版,Mack PublishingCompany, Easton, PA, 1995。可藥用鹽也可用于調(diào)整組合物的滲透壓。
[0138]所公開的藥物組合物的劑型由所選的施用方式?jīng)Q定。例如，可以使用口服劑型?？诜苿┛梢允且后w例如糖漿、溶液或懸液，或固體例如粉劑、丸劑、片劑或膠囊。制備這些劑型的方法在本文中公開，或?qū)τ诒尽炯夹g(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員來說是顯而易見的。
[0139]包含本公開化合物的藥物組合物的某些實施方案，可以配制成適合于單次施用精確劑量的單位劑型。施用的活性成分的量取決于受治對象、疾病嚴重性和給藥方式，并且是本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員公知的。在這些界限內(nèi)，待施用的制劑所包含的本文公開的提取物或化合物的量，是能夠在受治對象中有效獲得所需效應(yīng)的量。在具體實例中，對于口服施用來說，組合物被提供成液體形式，其含有約75mg麝香葡萄果渣提取物多酚和lOOmg反式白藜蘆醇。在其他實例中，對于口服施用來說，組合物被提供成片劑形式，其含有約1.0到約500mg 活性成分，特別是約 10.0mg、約 50mg、100mg、約 150mg、約 175mg、約 200mg、約 210mg、約225mg、約250mg、約300mg、約400mg或約500mg活性成分，用于根據(jù)癥狀調(diào)整給予受治對象的劑量。在一個示例性口服劑量方案中，每天至少一次施用含有約lmg到約500mg(例如約150mg到約225mg)活性成分的片劑。在其他實例中，每周至少一次、例如每周至少兩次、三次、至少四次、至少五次或至少六次或每天施用含有約lmg到約500mg (例如約150mg到約225mg)活性成分的片劑。
[0140]G.所公開的提取物和組合物的施用
[0141]任何所公開的組合物和提取物的給藥方法都是常規(guī)的。例如，所公開的方法(例如包含具有抗氧化活性、用于阻止或降低與衰老相關(guān)的一個或多個過程的組合物的方法)可以通過注射、腫瘤內(nèi)、口服、局部、透皮、腸胃外或通過吸入或噴霧來施用。在具體實例中，組合物以非飲料的食品、飲料或膳食補充劑的形式口服施用于哺乳動物對象、例如人類。在另一個實例中，組合物局部施用于哺乳動物對象例如人類的皮膚表面。
[0142]所施用的藥劑的治療有效量可以根據(jù)所需效應(yīng)和待治療的對象而變。在一個實例中，方法包括向?qū)ο?例如人類對象)每日施用至少lmg組合物。例如，人類可以每日施用至少lg或至少10g組合物，例如每日lg到5g、每日5g到10g,例如每日7g。在一個實例中，對象被施用至少5g包含麝香葡萄果渣提取物和白藜蘆醇的組合物。在其他實例中，對象被口服施用至少6.3g這樣的組合物。劑量可以在分劑量(例如每天2、3或4個分劑量)或以每日單一劑量施用。
[0143]在具體實例中，以多劑每日給藥時間表向?qū)ο笫┯弥委熜越M合物(例如所公開的含有白藜蘆醇和磨香葡萄提取物的抗衰老補充劑)，例如至少連續(xù)兩天、連續(xù)10天等，例如數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年的時間。在一個實例中，向?qū)ο笫┯弥委熜越M合物(例如所公開的含有白藜蘆醇和麝香葡萄提取物的抗衰老補充劑)，其包括在至少30天、例如至少2個月、至少4個月、至少6個月、至少12個月、至少24個月或至少36個月的時間內(nèi)每日施用。
[0144]治療性組合物，例如所公開的包含反式白藜蘆醇和麝香葡萄果渣提取物或單獨的麝香葡萄果渣提取物的抗衰老補充劑，還可以包含一種或多種生物活性或無活性化合物(或兩者)，例如分別為其他抗氧化劑和常規(guī)的無毒性可藥用載體。在具體實例中，治療性組合物還包含一種或多種無生物活性的化合物。這樣的無生物活性化合物的實例包括但不限于:載體、增稠劑、稀釋劑、緩沖劑、防腐劑和載體。可用于這些制劑的可藥用載體是常規(guī)的(參見E.W.Martin 的《Remington 藥物學(xué)》(Remington，s Pharmaceutical Sciences), MackPublishing C0.，Easton, PA,第19版(1995))。一般來說，載體的性質(zhì)取決于將要使用的具體給藥方式。例如，腸胃外制劑可以包括可注射流體作為介質(zhì)，所述流體包括藥物和生理可接受的流體例如水、生理鹽水、平衡鹽溶液、葡萄糖水、甘油等。對于固體組合物(例如粉劑、丸劑、片劑或膠囊形式)來說，常規(guī)的無毒性固體載體可以包括例如藥用級甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸鎂。除了生物中性載體之外，待施用的藥物組合物可以包括少量無毒性輔助物質(zhì)，例如潤濕或乳化劑、防腐劑和pH緩沖劑等，例如乙酸鈉或失水山梨糖醇單硬脂酸酯。
[0145]盡管本公開對使用任何所公開的組合物和提取物以阻止或抑制與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程提供了詳細描述，但應(yīng)該考慮到，所公開的組合物和提取物不僅可用作抗氧化劑來阻止或抑制與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程，而且可用于治療任何與氧化應(yīng)激相關(guān)的疾病。例如，考慮到了本發(fā)明的提取物和組合物可用于減輕、阻止或治療與慢性炎性疾病例如糖尿病、癌癥、動脈粥樣硬化和其他心血管疾病的發(fā)病機理以及與變性疾病例如阿茨海默氏病和帕金森氏病相關(guān)的氧化應(yīng)激。
[0146]通過下面非限制性的實施例，對本公開的主題進行了進一步說明。
【具體實施方式】
[0147]實施例1
[0148]測定麝香葡萄果渣提取物中鞣花酸的溶解度
[0149]本實施例說明了青銅色與紫色果渣提取物的各種比率對鞣花酸溶解度的影響。
[0150]將分別發(fā)酵的青銅色和紫色果渣提取物加熱，然后以表1中提供的比率混合成總體積100ml。
[0151]表1.1X濃度下青銅色/紫色果渣提取物的各種比率
[0152]
【權(quán)利要求】
1.生產(chǎn)麝香葡萄果渣提取物的方法，所述方法包括:將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合以產(chǎn)生鞣花酸溶解度增加的麝香葡萄果渣提取物，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2%的多酚含量。
2.權(quán)利要求1的方法，其中將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合以產(chǎn)生麝香葡萄果渣提取物，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率按重量/重量計在0.1到10的范圍內(nèi)，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2%的多酹含量。
3.麝香葡萄果渣提取物組合物，所述組合物包含青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄提取物，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄提取物的混合物增加了鞣花酸在所述提取物中的溶解度，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2%的多酚含量。
4.權(quán)利要求2的方法，其中麝香葡萄果渣提取物具有4%的總多酚含量。
5.權(quán)利要求3的組合物，其中麝香葡萄果渣提取物具有4%的總多酚含量。
6.權(quán)利要求3的組合物，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物的比率按重量/重量計在0.1到10的范圍內(nèi)。
7.權(quán)利要求2或4的方法，所述方法還包括制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，然后將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合以產(chǎn)生具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物包括用水分別提取青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣以產(chǎn)生青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，然后將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合以產(chǎn)生具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。
9.權(quán)利要求8的方法，其中制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物還包括將青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物分別過濾，然后將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合以產(chǎn)生具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。
10.權(quán)利要求9的方法，其中制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物還包括在將青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣分別過濾之后、但在將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合之前，對青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物進行發(fā)酵以除去提取出的糖類，產(chǎn)生具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。
11.權(quán)利要求10的方法，其中制備青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物還包括在對青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物進行發(fā)酵之后、但在將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合之前，將青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物過濾，以產(chǎn)生具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。
12.權(quán)利要求11的方法，所述方法還包括濃縮青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，使得每種提取物在液體中包含20%到50%固形物，然后將青銅色果渣提取物與紫色果渣提取物組合。
13.權(quán)利要求12的方法，其中青銅色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物各自在液體中包含40%固形物。
14.權(quán)利要求8的方法，所述方法還包括將青銅色麝香葡萄果渣提取物與紫色麝香葡萄果渣提取物組合后對麝香葡萄果渣提取物進行過濾，以產(chǎn)生具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。
15.權(quán)利要求14的方法，所述方法還包括在將麝香葡萄果渣提取物過濾后對麝香葡萄果渣提取物進行發(fā)酵。
16.權(quán)利要求15的方法，所述方法還包括在將麝香葡萄果渣提取物發(fā)酵后對麝香葡萄果渣提取物進行過濾。
17.權(quán)利要求16的方法，所述方法還包括在將麝香葡萄果渣提取物過濾后對麝香葡萄果渣提取物進行濃縮，使得麝香葡萄果渣提取物在液體中包含20%到50%固形物。
18.權(quán)利要求17的方法，其中麝香葡萄果渣提取物在液體中包含40%固形物。
19.權(quán)利要求6的方法，所述方法還包括在將青銅色麝香葡萄果渣與紫色麝香葡萄果渣組合后，用水同時提取青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣。
20.權(quán)利要求19的方法，所述方法還包括在同時提取青銅色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣之后，對麝香葡萄果渣提取物進行過濾。
21.權(quán)利要求20的方法，所述方法還包括在將麝香葡萄果渣提取物過濾后對麝香葡萄果渣提取物進行發(fā)酵，以除去提取出的糖類。
22.權(quán)利要求21的方法，所述方法還包括在將麝香葡萄果渣提取物發(fā)酵后對麝香葡萄果渣提取物進行 過濾，以產(chǎn)生具有至少2%多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。
23.權(quán)利要求22的方法，所述方法還包括將麝香葡萄果渣提取物濃縮，使得提取物在液體中含有20%到50%固形物。
24.權(quán)利要求23的方法，其中麝香葡萄果渣提取物在液體中包含40%固形物。
25.權(quán)利要求2或4的方法，所述方法還包括向麝香葡萄果渣提取物添加賦形劑或其他成分。
26.權(quán)利要求25的方法，其中賦形劑包含甘油、山梨糖醇、膠體二氧化硅、天然調(diào)味添加劑或其組合。
27.權(quán)利要求3或5的組合物，其中組合物還包含賦形劑或其他成分。
28.權(quán)利要求2或4的方法，其中組合物提供在非飲料食品、飲料或膳食補充劑或美容組合物中。
29.權(quán)利要求3或5的組合物，其中組合物提供在非飲料食品、飲料或膳食補充劑或美容組合物中。
30.權(quán)利要求3或5的組合物，其用作抗氧化劑。
31.權(quán)利要求3或5的組合物，其用作抗衰老補充劑。
32.一定劑量的權(quán)利要求3、5、27和29-31任一項的組合物在制備用于阻止或抑制細胞衰老的藥物中的應(yīng)用，其中所述劑量足以阻止或抑制與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程。
33.權(quán)利要求32的應(yīng)用，其中阻止或抑制與細胞衰老相關(guān)的一個或多個過程包括在攝入組合物的對象中阻止或抑制自由基的形成或活性。
34.一定劑量的權(quán)利要求3、5、27和29-31任一項的組合物在制備用于抑制氧化應(yīng)激的藥物中的應(yīng)用，其中所述劑量足以降低或抑制氧化應(yīng)激。
35.權(quán)利要求34的應(yīng)用，其中組合物在用餐之前或之后10到30分鐘施用。
36.權(quán)利要求35的應(yīng)用，其中組`合物在用餐前10分鐘施用。
【文檔編號】A61K36/87GK103623135SQ201310097622
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2009年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2008年7月31日
【發(fā)明者】特奧多羅·T·安尼羅, 勞勒爾·A·費舍, 威廉·J·摩根斯 申請人:嘉康利公司