一種三黃瀉心湯配方顆粒及其制備方法和檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種三黃瀉心湯配方顆粒及其制備方法和檢測方法，所述三黃瀉心湯配方顆粒由質量比為2：1：1的大黃、黃岑和黃連加水煎煮，濾過后，再將濾液濃縮干燥而成；所述檢測方法包括通過薄層色譜法鑒定所述三黃瀉心湯配方顆粒；通過高效液相色譜法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒的指紋圖譜；通過熱浸法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒的浸出物含量；通過高效液相色譜法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中物質的含量。本發(fā)明的三黃瀉心湯按傳統(tǒng)方法合煎，充分發(fā)揮中藥配伍的優(yōu)勢，體現(xiàn)了中醫(yī)藥整體觀念，確保其達到減毒增效的目的，克服了目前單味配方顆粒服用時各藥味簡單相加帶來的不足建立了三黃瀉心湯配方顆粒的工藝條件和完善質量標準。
【專利說明】一種三黃瀉心湯配方顆粒及其制備方法和檢測方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥領域。具體涉及一種中藥及其制備方法和檢測方法，尤其涉及一種三黃瀉心湯配方顆粒及其制備方法和檢測方法。

【背景技術】
[0002]三黃瀉心湯又名大黃黃連瀉心湯，出自張仲景《金匱要略》卷中，主治邪火內熾，迫血妄行，吐血，衄血，便秘溲赤；或濕熱內蘊而成黃疸，胸痞煩熱；三焦積熱，眼目赤腫，口舌生瘡，外證瘡瘍，心胸煩悶，大便秘緒；濕熱黃疸，胸中煩熱痞滿，舌苔黃膩，脈數(shù)實者。常用的制劑有一清系列制劑及三黃片，三黃膠囊等，現(xiàn)代臨床和藥理研究表明三黃瀉心湯具有明顯的抗病原微生物、抗炎、保護胃黏膜、促凝血和止血等作用，近年來三黃瀉心湯在血壓、血糖、腦缺血再灌注和肥胖等方面的藥理作用的研究有了一定的突破。
[0003]目前藥典收錄品種，如片劑、膠囊劑等，大多采用了乙醇提取有效成分，改變傳統(tǒng)湯劑共煎的方式，雖然極大的減少了服藥量，但在成型工藝時引入了大量的輔料，改變了傳統(tǒng)防己的物質基礎，如三黃片等。
[0004]中藥配方顆粒是在中醫(yī)藥理論指導下，以規(guī)范炮制加工的中藥飲片為原料，采用提取、低溫濃縮和瞬間干燥等工藝技術而制成的顆粒劑。單味的配方顆粒最早出現(xiàn)在日本，20世紀80年代發(fā)展加快，約2/3的日本醫(yī)生在臨床中應有配方顆粒劑，在開發(fā)研究領域取得了矚目的成就，其中研究的復方配方顆粒約有200種，單味中藥濃縮顆粒200余種。我國于90年代初開始研制配方顆粒，以成功研制出400余種單味的中藥配方顆粒，復方的配方顆粒劑未見報告。因此，復方配方顆粒的研究和開發(fā)具有很大的必要性和廣泛的前景。
[0005]中醫(yī)用藥講究整體，辯證施制。根據(jù)不同的病因，病機而靈活運用，配方顆粒正適應這一需要，即保留了原中藥飲片的特征，又可隨證加減。同時中藥配方顆粒精選道地藥材，遵循炮制規(guī)范，采用先進設備、多成分提取工藝，低溫濃縮，噴霧干燥，減少了中藥加熱時間，避免了湯劑煎煮過程中的有效成分的揮發(fā)、破壞和變質已經先煎、后下、包煎和煎煮容器不規(guī)范導致臨床療效的減弱。同時中藥配方顆粒采用鋁箔袋包裝，劑量準確，避免傳統(tǒng)中藥飲片貯藏中常見的走油、變色、蟲蛀和霉變等難題，有利于藥物儲存和患者攜帶使用，省去了煎煮的麻煩，即使出差、旅游，也不會中斷治療。配方顆粒的生產過程中實施GMP監(jiān)控，每個品種自原料、中間體、半成品及成品的各個環(huán)節(jié)分別建立了各自的生產和質量管理文件，確保產品質量的穩(wěn)定。
[0006]盡管單味的中藥配方顆粒具有很多優(yōu)點，但在臨床藥效中也存在許多的不足，中藥的臨床運用體現(xiàn)了辯證統(tǒng)一的觀點，各藥物經適當配伍后，既能增強原來藥物療效，又能調和藥物偏性，體現(xiàn)了“藥有個性之特長，方有合群之妙用”。傳統(tǒng)湯劑中的藥物通過共同煎煮能相互促進，相互制約，增加療效，緩和藥性。而單味的中藥配方顆粒，直接沖服，對它的藥效具有一定的影響。同時由于患者受到傳統(tǒng)思想的束縛，湯劑的應有在人們的腦中已根深蒂固，因此，需要加大配方顆粒的宣傳突破這種格局。
[0007]本發(fā)明是在中醫(yī)理論的基礎上，選取《金匱要略》經典藥方:三黃瀉心湯，運用現(xiàn)代提取技術，低溫濃縮，噴霧干燥制得復方配方顆粒，工藝穩(wěn)定可行。既便于臨床的使用，具有單味配方顆粒的優(yōu)點，同時也克服了單味配方顆粒上的藥效上的缺陷，充分發(fā)揮傳統(tǒng)配伍的優(yōu)勢，有廣泛的市場前景。


【發(fā)明內容】

[0008]因此，本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術中存在的三黃瀉心湯配方顆粒單味配方顆粒藥效上的缺陷，提供一種三黃瀉心湯配方顆粒及其制備方法和檢測方法，該三黃瀉心湯配方顆粒充分發(fā)揮配伍的優(yōu)勢，具有廣泛的市場前景，其制備方法簡單，并通過該檢測方法使其能夠更為安全地使用。
[0009]針對上述目的，本發(fā)明提供的技術方案如下:
[0010]一方面，本發(fā)明提供一種三黃瀉心湯配方顆粒，所述三黃瀉心湯配方顆粒由質量比為2:1:1的大黃、黃岑和黃連加水煎煮，濾過后，再將濾液濃縮干燥而成。
[0011]另一方面，本發(fā)明提供一種上述本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法，所述方法包括以下步驟:
[0012]以2:1:1的質量比稱取大黃、黃岑和黃連加水煎煮I~3次，每次提取I~2小時；過濾，合并濾液后，再將其濃縮成浸膏，干燥制粒，即得。
[0013]優(yōu)選地，提取2次。
[0014]優(yōu)選地，每次提取I小時。
[0015]優(yōu)選地，第一次提取每克大黃、黃岑和黃連加8ml的水提取，或第二次提取每克大黃、黃岑和黃連加6ml的水提取。
[0016]優(yōu)選地，在第一次煎煮前，還包括浸泡的步驟，更優(yōu)選地，浸泡0.5~1.5小時，優(yōu)選浸泡0.5小時。
[0017]優(yōu)選地，所述干燥為噴霧干燥。
[0018]還一方面，本發(fā)明提供一種上述本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒的檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟:
[0019]步驟1:通過薄層色譜法鑒定所述三黃瀉心湯配方顆粒；
[0020]步驟2:通過高效液相色譜法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒的指紋圖譜；
[0021]步驟3:通過熱浸法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒的浸出物含量；
[0022]步驟4:通過高效液相色譜法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃和黃連的含量，優(yōu)選地，所述大黃的含量通過測定大黃素和大黃酚確定，所述黃連的含量通過測定鹽酸小檗堿確定。
[0023]優(yōu)選地，所述步驟I包括以下步驟:
[0024]1)制備第一大黃樣品溶液組和第一黃連樣品溶液組,所述第一大黃樣品溶液組包括第一大黃供試品溶液和大黃對照藥材溶液，更優(yōu)選地，所述第一大黃樣品溶液組還包括第一大黃陰性對照樣品溶液，所述大黃陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含大黃的樣品，該樣品不含大黃素和大黃酚；所述第一黃連樣品溶液組包括第一黃連供試品溶液和第一鹽酸小檗堿對照品溶液，更優(yōu)選地，所述第一黃連樣品溶液組還包括第一黃連陰性對照樣品溶液，所述黃連陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃連的樣品，該樣品不含鹽酸小檗堿；
[0025]優(yōu)選地，所述第一大黃樣品溶液組通過包括以下步驟的方法制得:
[0026]分別取所述三黃瀉心湯配方顆粒、大黃對照藥材和大黃陰性對照樣品加甲醇溶解，超聲處理，取上清液作為供試品溶液；還優(yōu)選地，超聲處理5分鐘；更優(yōu)選地，加甲醇5ml ;再優(yōu)選地，取所述三黃瀉心湯配方顆粒0.20~0.30g,優(yōu)選取0.25g，或優(yōu)選地，取所述大黃陰性對照樣品0.20~0.30g,優(yōu)選取0.25g、或優(yōu)選地，取所述大黃對照藥材0.20~0.30g，優(yōu)選取 0.20g ；
[0027]或優(yōu)選地，所述第一黃連供試品溶液或第一黃連陰性對照樣品溶液通過包括以下步驟的方法制得:
[0028]分別取所述三黃瀉心湯配方顆粒、黃連陰性對照樣品加甲醇溶解，超聲處理，取上清液作為供試品溶液；還優(yōu)選地，超聲處理5分鐘；更優(yōu)選地，當制備所述第一黃連供試品溶液或第一黃連陰性對照樣品溶液時，加甲醇5ml，或當制備第一鹽酸小檗堿對照品溶液時，取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇定容，優(yōu)選定容到20ml ;再優(yōu)選地，取所述三黃瀉心湯配方顆粒0.20~0.30g，優(yōu)選取0.25g、黃連陰性對照樣品0.20~0.30g，優(yōu)選取0.20g或鹽酸小檗堿5~7mg,優(yōu)選取5mg ；
[0029]2)將第一大黃樣品溶液組分別點于同一硅膠G薄層板上,將第一黃連樣品溶液組分別點于同一硅膠G薄層板上，加展開劑展開，取出晾干，噴以顯色劑至斑點顯色，檢測，SP得；優(yōu)選置于365nm紫外燈下檢視；
[0030]優(yōu)選地，所述第一大黃樣品溶液組以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸為展開劑展開；更優(yōu)選地，所述環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸中環(huán)己烷、乙酸乙酯和甲酸的體積比為12:3:0.1 ；
[0031]或優(yōu)選地，所述第一黃連樣品溶液組以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑；更優(yōu)選地，所述乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水中乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的體積比為10:7:1:1。
[0032]優(yōu)選地，所述步驟2或4通過包括以下步驟的方法進行:
[0033]制備待測樣品溶液，通過高效液相色譜法測定；
[0034]優(yōu)選地，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；
[0035]優(yōu)選地，當測定指紋圖譜時，以甲醇為流動相A，以磷酸調pH=2.0的0.01mol/L磷酸二氫鉀為流動相B按下述條件進行梯度洗脫:
[0036]O至10分鐘:流動相A的濃度由10體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由90體積％勻速變?yōu)?0體積％ ；
[0037]10至15分鐘:流動相A的濃度由20體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由80體積％勻速變?yōu)?0體積％ ；
[0038]15至30分鐘:流動相A的濃度由30體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由70體積％勻速變?yōu)?0體積％ ；
[0039]30至70分鐘:流動相A的濃度由40體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由60體積％勻速變?yōu)?0體積％ ；
[0040]70至90分鐘:流動相A的濃度由60體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由40體積％勻速變?yōu)?0體積％ ；
[0041 ] 90至100分鐘:流動相A的濃度由80%勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由20體積％勻速變?yōu)?0體積％ ;或
[0042]當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃的含量時，以甲醇-0.1體積％磷酸為流動相，所述甲醇-ο.1體積％磷酸中甲醇和0.1體積％磷酸的體積比為85:15 ;或
[0043]當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連的含量時，以乙腈-水為流動相，所述乙腈-水中乙腈和水的體積比為1:1，其中每100ml流動相中加入磷酸二氫鉀3.4g和十二烷基硫酸鈉1.7g ;
[0044]還優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃的含量時，理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000，或當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連的含量時，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000 ;或當測定指紋圖譜時，理論板數(shù)按黃岑苷峰計算應不低于3000 ；
[0045]進一步優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連的含量或當測定指紋圖譜時，檢測波長為265nm，或當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃的含量時，檢測波長為254nm ；
[0046]或還優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃和黃連的含量時，所述待測樣品溶液包括第二大黃樣品溶液組和第二黃連樣品溶液組，所述第二大黃樣品溶液組包括第二大黃供試品溶液和第二大黃對照品溶液，所述大黃對照品包括大黃素對照品和大黃酚對照品；更優(yōu)選地，所述第二大黃樣品溶液組還包括第二大黃陰性對照樣品溶液，所述大黃陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含大黃的樣品，該樣品不含大黃素和大黃酚；或
[0047]所述第二黃連樣品溶液組包括第二黃連供試品溶液和第二鹽酸小檗堿對照品溶液；更優(yōu)選地，所述第二黃連樣品溶液組還包括第二黃連陰性樣品溶液，還優(yōu)選地，所述黃連陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃連的樣品，該樣品不含鹽酸小檗堿；
[0048]還優(yōu)選地，當測定指紋圖譜時，所述待測樣品溶液包括三黃瀉心湯配方顆粒供試品溶液和黃岑苷對照品溶液；更優(yōu)選地，所述待測樣品溶液還包括陰性樣品溶液組，所述陰性樣品溶液組包括第三大黃陰性對照樣品溶液、第三黃岑陰性對照樣品溶液和第三黃連陰性對照樣品溶液，所述大黃陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含大黃的樣品，該樣品不含大黃素和大黃酚；所述黃連陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃連的樣品，該樣品不含鹽酸小檗堿；所述黃芩陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃芩的樣品。
[0049]優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃含量時，所述待測樣品溶液通過包括以下步驟的方法制得:
[0050]分別取適量所述三黃瀉心湯配方顆粒、大黃對照品或大黃陰性對照樣品，加適量甲醇，即得；
[0051]優(yōu)選地，當制備第二大黃供試品溶液或大黃陰性對照樣品溶液時，加入甲醇后，還包括超聲處理的步驟，優(yōu)選超聲處理10分鐘；還優(yōu)選地，取所述三黃瀉心湯配方顆粒0.5~0.8g，大黃陰性對照樣品0.5~0.8g，優(yōu)選取0.7g，更優(yōu)選加甲醇40ml ；
[0052]更優(yōu)選地，當制備第二大黃對照品溶液時，制成每1ml含20~25 μ g大黃素的對照品溶液、每1ml含5~20 μ g大黃酚的對照品溶液；或
[0053]優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連含量時，所述第二鹽酸小檗堿對照品溶液通過包括以下步驟的方法制得:
[0054]取適量鹽酸小檗堿對照品，加適量甲醇，即得，還優(yōu)選地，制成每1ml含95~105 μ g鹽酸小檗堿的第二鹽酸小檗堿對照品溶液；
[0055]還優(yōu)選地，通過包括分別取適量所述三黃瀉心湯配方顆?；螯S連陰性樣品，加甲醇-鹽酸，超聲處理的步驟制得第二黃連供試品溶液或第二黃連陰性對照樣品溶液，優(yōu)選取甲醇-鹽酸20ml，其中甲醇和鹽酸的體積比為500:1 ;
[0056]優(yōu)選地，取待測樣品0.20~0.3g，優(yōu)選取0.20g。
[0057]優(yōu)選地，當測定指紋圖譜時，所述待測樣品溶液通過包括以下步驟的方法制得:
[0058]分別取所述三黃瀉心湯配方顆粒、黃岑苷對照品或陰性對照樣品，加適量甲醇，SP得;
[0059]優(yōu)選地，當制備三黃瀉心湯配方顆粒供試品溶液或黃岑苷陰性對照樣品溶液時，加入甲醇后，還包括超聲處理的步驟，優(yōu)選超聲處理30分鐘；
[0060]還優(yōu)選地，分別取所述三黃瀉心湯配方顆粒和陰性對照樣品0.20~0.3g，優(yōu)選取0.20g ；
[0061]優(yōu)選地，當制備黃岑苷對照品溶液時，取黃岑苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含
0.1~0.2mg黃岑苷對照品的黃岑苷對照品溶液。
[0062]優(yōu)選地，所述步驟3中浸出物的質量百分比含量≥41.84%。
[0063]本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒，清熱解毒，瀉火通便。用于三焦熱盛所致的目赤腫痛、口鼻生瘡、咽喉腫痛、牙齦腫痛、心煩口渴、尿黃和便秘；亦用于急性胃腸炎、痢疾。
[0064]【用法與用量】供配方用，遵醫(yī)囑。
[0065]【規(guī)格】每g相當于飲片3.4g。
[0066]【包裝規(guī)格】每袋裝1.5g。
[0067]【貯藏】密封，陰涼干燥處保存。
[0068]本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒的有效期為24個月。
[0069]本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒具有以下優(yōu)點:
[0070]( 1)三黃瀉心湯按傳統(tǒng)方法合煎，充分發(fā)揮中藥配伍的優(yōu)勢，體現(xiàn)了中醫(yī)藥整體觀念，確保其達到減毒增效的目的，克服了目前單味配方顆粒服用時各藥味簡單相加帶來的不足；
[0071](2)建立了三黃瀉心湯配方顆粒的工藝條件和完善質量標準，可以有效地控制該配方顆粒的質量；
[0072](3)三黃瀉心湯配方顆粒便于藥物儲存和患者攜帶使用，患者在使用上省去了煎煮的麻煩；
[0073](4)對促進傳統(tǒng)中醫(yī)藥現(xiàn)代化有較大意義。
[0074]本發(fā)明應用于三黃瀉心湯配方顆粒的制備和質量控制。
[0075]本發(fā)明在極大保留三黃瀉心湯湯劑藥效的基礎上開發(fā)出一種服用方便便于保存的中藥制劑。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0076]以下，結合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施方案，其中:
[0077]圖1為本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒的第一大黃樣品溶液組的薄層層析色譜圖，圖中，I為大黃對照藥材，2為大黃陰性對照樣品，3-4為三黃瀉心湯配方顆粒的大黃供試品1_2 ；
[0078]圖2為本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒的第一黃連樣品溶液組的薄層層析色譜圖；圖中，I為鹽酸小檗堿對照藥材，2為鹽酸小檗堿陰性對照樣品，3-6為三黃瀉心湯配方顆粒的鹽酸小檗堿供試品1-3 ；
[0079]圖3為本發(fā)明所述的三黃瀉心湯配方顆粒的指紋圖譜；
[0080]圖4為本發(fā)明所述的黃岑陰性對照樣品的指紋圖譜；
[0081]圖5為本發(fā)明所述的大黃陰性對照樣品的指紋圖譜；
[0082]圖6為本發(fā)明所述的黃連陰性對照樣品的指紋圖譜；
[0083]其中上述圖4-6中3號、7號、9號、11號、12號為黃連特征峰，6號、14號、15號、16號、17號為黃芩特征峰，I號、2號、4號、5號、10號、13號、18號、19號、20號為大黃特征峰；
[0084]圖7a_圖7c為本發(fā)明實施例5中大黃樣品溶液組的專屬性試驗結果，其中，圖7a為按處方制備的缺少大黃藥材的陰性對照樣品的高效液相色譜圖；圖7b為大黃素和大黃酚對照品的高效液相色譜圖；圖7c為所述的三黃瀉心湯配方顆粒的高效液相色譜圖；
[0085]圖8為本發(fā)明所述的實施例5中大黃酚的標準曲線；
[0086]圖9為本發(fā)明所述的實施例5中大黃素的標準曲線；
[0087]圖1Oa-圖1Oc為本發(fā)明實施例5中第二黃連樣品溶液組的專屬性試驗結果，其中，圖1Oa為按處方制備的缺少黃連藥材的黃連陰性對照樣品的指紋圖譜；圖1Ob為鹽酸小檗堿對照藥材的高效液相色譜圖，圖1Oc為所述的三黃瀉心湯配方顆粒的高效液相色譜圖；
[0088]圖11為本發(fā)明所述的實施例5中鹽酸小檗堿的標準曲線。

【具體實施方式】
[0089]除非特別指明，以下實施例中所用的大黃、黃岑和黃連均購自康美藥業(yè)。
[0090]除非特別指明，以下實施例中所用的試劑均為分析純試劑，且可從正規(guī)渠道商購獲得。
[0091]除非特別指明，本文中的“本品”均指“三黃瀉心湯配方顆粒”。
[0092]實施例1三黃瀉心湯配方顆粒的制備
[0093]1.藥材來源，如下述表1所示。
[0094]表1

【權利要求】
1.一種三黃瀉心湯配方顆粒，所述三黃瀉心湯配方顆粒由質量比為2:1:1的大黃、黃岑和黃連加水煎煮，濾過后，再將濾液濃縮干燥制成。
2.根據(jù)權利要求1所述的三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法，所述方法包括以下步驟: 以2:1:1的質量比稱取大黃、黃岑和黃連加水煎煮I~3次，每次提取I~2小時；過濾，合并濾液后，再將其濃縮成浸膏，干燥制粒，即得。
3.根據(jù)權利要求2所述的三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法，其特征在于，提取2次，優(yōu)選地，每次提取I小時；更優(yōu)選地，在第一次煎煮前，還包括浸泡的步驟，還優(yōu)選地，浸泡0.5~1.5小時，優(yōu)選浸泡0.5小時。
4.根據(jù)權利要求2或3所述的三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法，其特征在于，第一次提取每克大黃、黃岑和黃連加8ml的水提取,或第二次提取每克大黃、黃岑和黃連加6ml的水提取，優(yōu)選地，所述干燥為噴霧干燥。
5.根據(jù)權利要求1所述的三黃瀉心湯配方顆粒的檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟: 步驟1:通過薄層色譜法鑒定所述三黃瀉心湯配方顆粒； 步驟2:通過高效液相色譜法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒的指紋圖譜； 步驟3:通過熱浸法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒的浸出物含量； 步驟4:通過高效液相色譜法測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃和黃連的含量，優(yōu)選地，所述大黃的含量通過測定大黃素和大黃酚確定，所述黃連的含量通過測定鹽酸小檗堿確定。
6.根據(jù)權利要求1所述的三黃瀉心湯配方顆粒的檢測方法，其特征在于，所述步驟I包括以下步驟: I)制備第一大黃樣品溶液組和第一黃連樣品溶液組，所述第一大黃樣品溶液組包括第一大黃供試品溶液和大黃對照藥材溶液；優(yōu)選地，所述第一大黃樣品溶液組還包括第一大黃陰性對照樣品溶液，所述大黃陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含大黃的樣品；所述第一黃連樣品溶液組包括第一黃連供試品溶液和第一鹽酸小檗堿對照品溶液；優(yōu)選地，所述第一黃連樣品溶液組還包括第一黃連陰性對照樣品溶液，所述黃連陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃連的樣品; 優(yōu)選地，所述第一大黃樣品溶液組通過包括以下步驟的方法制得: 分別取所述三黃瀉心湯配方顆粒、大黃對照藥材或大黃陰性對照樣品加甲醇溶解，超聲處理，取上清液作為待測溶液；還優(yōu)選地，超聲處理5分鐘；更優(yōu)選地，加甲醇5ml ;再優(yōu)選地，取所述三黃瀉心湯配方顆粒0.20~0.30g,優(yōu)選取0.25g，或優(yōu)選地，取所述大黃陰性對照樣品0.20~0.30g,優(yōu)選取0.25g、或優(yōu)選地，取所述大黃對照藥材0.20~0.30g,優(yōu)選取 0.20g ； 或優(yōu)選地，所述第一黃連供試品溶液或第一黃連陰性對照樣品溶液通過包括以下步驟的方法制得: 取所述三黃瀉心湯配方顆?；螯S連陰性對照樣品加甲醇溶解，超聲處理，取上清液作為待測溶液；還優(yōu)選地，超聲處理5分鐘； 更優(yōu)選地，當制備所述第一黃連供試品溶液或第一黃連陰性對照樣品溶液時，加甲醇5ml，或當制備第一鹽酸小檗堿對照品溶液時，取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇定容，優(yōu)選定容到20ml ;再優(yōu)選地，取所述三黃瀉心湯配方顆粒0.20~0.30g,優(yōu)選取0.25g，或優(yōu)選地，取所述黃連陰性對照樣品0.20~0.30g，優(yōu)選取0.20g，或優(yōu)選地，取所述鹽酸小檗堿5~7mg,優(yōu)選取5mg ； 2)將第一大黃樣品溶液組分別點于同一硅膠G薄層板上,將第一黃連樣品溶液組分別點于同一硅膠G薄層板上，加展開劑展開，取出晾干，噴以顯色劑至斑點顯色，檢測，即得；優(yōu)選置于365nm紫外燈下檢視； 優(yōu)選地，所述第一大黃樣品溶液組以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸為展開劑展開，更優(yōu)選地，所述環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸中環(huán)己烷、乙酸乙酯和甲酸的體積比為12:3:0.1 ； 或優(yōu)選地，所述第一黃連樣品溶液組以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑；更優(yōu)選地，所述乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水中乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的體積比為10:7:1:1。
7.根據(jù)權利要求5所述的三黃瀉心湯配方顆粒的檢測方法，其特征在于，所述步驟2或4通過包括以下步驟的方法進行: 制備待測樣品溶液，通過高效液相色譜法測定； 優(yōu)選地，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 優(yōu)選地，當測定指紋圖譜時，以甲醇為流動相A，以磷酸調pH=2.0的0.01mol/L磷酸二氫鉀為流動相B，按下述條件進行梯度洗脫: O至10分鐘:流動相A的濃度由10體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由90體積％勻速變?yōu)?0體積％ ； 10至15分鐘:流動相A的濃度由20%勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由80體積％勻速變?yōu)?0體積％ ； 15至30分鐘:流動相A的濃度由30體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由70體積％勻速變?yōu)?0體積％ ； 30至70分鐘:流動相A的濃度由40體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由60體積％勻速變?yōu)?0體積％ ； 70至90分鐘:流動相A的濃度由60體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由40體積％勻速變?yōu)?0體積％ ； 90至100分鐘:流動相A的濃度由80體積％勻速變?yōu)?0體積％，流動相B濃度由20體積％勻速變?yōu)?0體積％ ； 當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃的含量時，以甲醇-0.1體積％磷酸為流動相，所述甲醇-0.1體積％磷酸中甲醇和0.1體積％磷酸的體積比為85:15 ;或 當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連的含量時，以乙腈-水為流動相，所述乙腈-水中乙腈和水的體積比為1:1，其中每100ml流動相中加入磷酸二氫鉀3.4g和十二烷基硫酸鈉1.7g ； 還優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃的含量時，理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000，或當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連的含量時，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000 ;或當測定指紋圖譜時，理論板數(shù)按黃岑苷峰計算應不低于.3000 ； 進一步優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連的含量或當測定指紋圖譜時，檢測波長為265nm，或當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃的含量時，檢測波長為254nm ； 還優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃和黃連的含量時，所述待測樣品溶液包括第二大黃樣品溶液組和第二黃連樣品溶液組，所述第二大黃樣品溶液組包括第二大黃供試品溶液和第二大黃對照品溶液組，所述大黃對照品包括大黃素對照品和大黃酚對照品，優(yōu)選地，所述第二大黃樣品溶液組還包括第二大黃陰性對照樣品溶液，所述大黃陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含大黃的樣品，或 所述第二黃連樣品溶液組包括第二黃連供試品溶液和第二鹽酸小檗堿對照品溶液，優(yōu)選地，所述第二黃連樣品溶液組還包括第二黃連陰性樣品溶液，所述黃連陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃連的樣品； 還優(yōu)選地，當測定指紋圖譜時，所述待測樣品溶液包括三黃瀉心湯配方顆粒供試品溶液和黃岑苷對照品溶液，優(yōu)選地，所述待測樣品溶液還包括陰性樣品溶液組，所述陰性樣品溶液組包括第三大黃陰性對照樣品溶液、第三黃岑陰性對照樣品溶液和第三黃連陰性對照樣品溶液，所述大黃陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含大黃的樣品；所述黃連陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃連的樣品；所述黃芩陰性對照樣品為按照所述三黃瀉心湯配方顆粒的制備方法制得的不含黃岑的樣品。
8.根據(jù)權利要求7所述的三黃瀉心湯配方顆粒的檢測方法，其特征在于，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中大黃含量時，所述待測樣品溶液通過包括以下步驟的方法制得: 分別取適量所述三黃瀉心湯配方顆粒、大黃對照品或大黃陰性對照樣品，加適量甲醇，即得； 優(yōu)選地，當制備第二大黃供試品溶液或第二大黃陰性對照樣品溶液時，加入甲醇后，還包括超聲處理的步驟，優(yōu)選超聲處理10分鐘；還優(yōu)選地，取所述三黃瀉心湯配方顆粒0.5~0.8g，大黃陰性對照樣品0.5~0.8g，優(yōu)選取0.1g,更優(yōu)選地，加甲醇40ml ； 更優(yōu)選地，當制備第二大黃對照品溶液時，制成每1ml含20~25 μ g大黃素對照品的對照品溶液、每1ml含5~20 μ g大黃酚對照品的對照品溶液； 優(yōu)選地，當測定所述三黃瀉心湯配方顆粒中黃連含量時，所述第二鹽酸小檗堿對照品溶液通過包括以下步驟的方法制得: 取適量鹽酸小檗堿對照品，加適量甲醇，即得，還優(yōu)選地，制成每1ml含95~105 μ g鹽酸小檗堿的第二鹽酸小檗堿對照品溶液； 還優(yōu)選地，通過包括取適量所述三黃瀉心湯配方顆粒或黃連陰性對照樣品，加甲醇-鹽酸，超聲處理的步驟制得第二黃連供試品溶液或第二黃連陰性對照樣品溶液，優(yōu)選取甲醇-鹽酸20ml，其中甲醇和鹽酸的體積比為500:1 ; 再優(yōu)選地，取待測樣品0.20~0.3g，優(yōu)選取0.20g。
9.根據(jù)權利要求8所述的三黃瀉心湯配方顆粒的檢測方法，其特征在于，當測定指紋圖譜時，所述待測樣品溶液通過包括以下步驟的方法制得: 分別取所述三黃瀉心湯配方顆粒、黃岑苷對照品或陰性對照樣品，加適量甲醇，即得；優(yōu)選地，當制備三黃瀉心湯配方顆粒供試品溶液或黃岑苷陰性對照樣品溶液時，加入甲醇后，還包括超聲處理的步驟，優(yōu)選超聲處理30分鐘；還優(yōu)選地，分別取所述三黃瀉心湯配方顆粒和陰性對照樣品0.20~0.3g，優(yōu)選取.0.20g ； 優(yōu)選地，當制備黃岑苷對照品溶液時，取黃岑苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含.0.1~0.2mg黃岑苷對照品的黃岑苷對照品溶液。
10.根據(jù)權利要求5至9中任一項所述的三黃瀉心湯配配方顆粒的檢測方法，其特征在于，所述步驟3中浸出 物的質量百分比含量≥41.84%。
【文檔編號】A61P9/00GK104069200SQ201310102415
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年3月27日 優(yōu)先權日:2013年3月27日
【發(fā)明者】金維維, 許冬瑾, 馬興田, 向飛軍, 吳小明, 陳有軍 申請人:康美藥業(yè)股份有限公司, 廣東康美藥物研究院有限公司