具有抗hiv潛伏作用的藥物及其用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及具有抗HIV潛伏作用的藥物及其用途，具體地，本發(fā)明涉及奧沙利鉑和地拉卓的抗HIV潛伏作用，及其在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。奧沙利鉑和地拉卓分別具有抗HIV潛伏作用，與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用，可清除被激活的潛伏感染的細(xì)胞，以此加速潛伏病毒儲(chǔ)藏庫(kù)的消除，可進(jìn)一步制備新型的抗艾滋病的藥物，將為艾滋病的徹底治愈提供新的途徑。
【專(zhuān)利說(shuō)明】具有抗HIV潛伏作用的藥物及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及治療艾滋病的藥物，具體涉及兩種具有抗HIV潛伏作用的藥物及其用途，尤其涉及奧沙利鉬和地拉卓抗HIV潛伏作用及其在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]獲得性免疫缺陷綜合癥，英文縮寫(xiě)AIDS (Acquired Immune DeficiencySyndrome),即艾滋病，是一種由人體免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的嚴(yán)重傳染性疾病。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)全球艾滋病患者己超過(guò)4000萬(wàn)，每年新增患者500萬(wàn)，而每年死亡約為300萬(wàn)。目前,艾滋病臨床治療方法主要采用高效抗逆?zhèn)麂洸《警煼?Highly active antiretroviral therapy, HAART),該療法不僅有效控制HIV 復(fù)制，并且能重建AIDS患者的免疫功能，為AIDS的治療打開(kāi)了希望之門(mén)。人們?cè)南Ｍ趹{借HAART完全清除體內(nèi)的HIV，從而達(dá)到徹底治愈AIDS的目的。但隨后的實(shí)踐證明，雖然HAART可以最大限度地抑制患者體內(nèi)病毒復(fù)制，使血漿病毒載量(virus load)降低至現(xiàn)有常規(guī)檢測(cè)方法測(cè)不出的水平，但感染者體內(nèi)仍有病毒持續(xù)存在，一旦停止藥物治療，病毒載量又會(huì)反彈到治療前水平(Ho, D.D.Toward HIV eradicat1n or remiss1n:the tasks ahead.Science, 1998.280:18661867) 0研究顯示，HIV難以在體內(nèi)被完全清除的一個(gè)重要原因是HIV-1能夠潛伏在靜息的記憶CD4+T細(xì)胞中，該潛伏感染細(xì)胞是由二小部分HIV感染的活化CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化而產(chǎn)生的，其整合的前病毒缺乏轉(zhuǎn)錄活性，因而，不會(huì)被免疫系統(tǒng)和抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的藥物攻擊。盡管感染個(gè)體攜帶潛伏感染細(xì)胞數(shù)量較少，但衰減率是如此之慢，以至于欲在個(gè)體生存期內(nèi)僅靠HAART治療將其徹底清除是不可能的。因此，HIV潛伏感染的靜息CD4+T細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體內(nèi)病毒儲(chǔ)藏庫(kù)(reservoir)的主要部分，同時(shí)也是目前臨床治療不能徹底清除HIV的巨大障礙(Finzi, D.et al.Latent infect1n of CD4+Tcells provide sa mechanism for life long persistence of HIV-1, even in patientson effective combinat1n therapy.Nature Med.1999, 5, 512517)。一般認(rèn)為 HIV-1 潛伏感染細(xì)胞形成的分子機(jī)制與整合位點(diǎn)處的染色質(zhì)狀態(tài)，抑制性核小體nuc-1的存在，以乙毗化為代表的表觀遺傳修飾，宿主轉(zhuǎn)錄因子如NF-KB以及病毒轉(zhuǎn)錄活化因子Tat等因素有關(guān)(Coiras, M.，M.R.et al.Understanding HIV-1latency provides clues for theeradicat1n of long-term reservoirs.Nat.Rev.Microb1l..2009., 7:798-812) ? 據(jù)此機(jī)制，有研究提出了清除潛伏病毒儲(chǔ)存庫(kù)的治療策略，即試圖通過(guò)藥物誘導(dǎo)HIV潛伏感染細(xì)胞的前病毒表達(dá)，使其潛伏病毒再次激活，同時(shí)結(jié)合高效抗逆?zhèn)麂洸《警煼霸谌嗣庖呦到y(tǒng)作用下，來(lái)殺死激活的潛伏感染的細(xì)胞，以此加速病毒庫(kù)的清除(Richman et al.TheChallenge of Finding a Cure for HIV Infect1n, Science, 2009, 1304, 323)。盡管該策略已在臨床上己有幾個(gè)治療方案，但其結(jié)果仍未盡人意，不是激活劑無(wú)效，就是雖有效但其毒副作用大，因而，研發(fā)安全有效于一體的能消除病毒儲(chǔ)藏庫(kù)的免疫激活劑及相應(yīng)的治療方案已是當(dāng)務(wù)之急。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種新的奧沙利鉬和地拉卓的用途。
[0004]本發(fā)明的另一目的是提供一種高效、低毒副作用、安全的抗HIV潛伏作用的藥物。
[0005]本發(fā)明的第一方面，提供了一種奧沙利鉬的用途，所述奧沙利鉬用于制備治療艾滋病或抗HIV的藥物。
[0006]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物用于:
[0007](a)用于干預(yù)HIV病毒潛伏；
[0008](b)用于與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用從而治療艾滋?。?br> [0009](c)用于非治療性地激活潛伏的HIV病毒。
[0010]在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明所述奧沙利鉬被用于:
[0011](a)制備干預(yù)HIV病毒潛伏的組合物；
[0012](b)制備與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用從而治療艾滋病的藥物；或
[0013](c)制備非治療性地激活潛伏的HIV病毒的藥物。
[0014]本發(fā)明的第二方面 ，提供了一種用于激活潛伏HIV病毒的組合物，所述組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的奧沙利鉬，以及任選的其他抗HIV病毒的活性成分。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述組合物中還包括抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的活性成分。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述組合物為藥物組合物。
[0017]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還包括選自下組的組分:抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物，較佳地選自下組:反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(RTI)、蛋白酶抑制劑(PI)、融合抑制劑(Fus1ninhibitor)^整合酶抑制劑、固定劑量復(fù)合制劑，或其組合；或
[0018]增強(qiáng)免疫力的藥物，較佳地選自下組:干擾素、免疫球蛋白、胸腺肽、轉(zhuǎn)移因子、核酪，或其組合。
[0019]在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中還包括藥學(xué)上可接受的載體。
[0020]在另一優(yōu)選例中，所述的載體選自下組:淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素、馬鈴薯淀粉、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠、糊精、注射用水、生理鹽水、葡萄糖水、乙醇、丙醇、乙二醇，或其組合。
[0021]在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物是選自下組的制劑形式:片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、乳劑、糖漿劑、注射劑。
[0022]在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還包含其他用于激活潛伏HIV病毒的活性成分。
[0023]在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還包含地拉卓。
[0024]本發(fā)明的第三方面，提供了一種地拉卓用于制備治療艾滋病或抗HIV的藥物的用途。
[0025]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物用于:
[0026](a)用于干預(yù)HIV病毒潛伏；
[0027](b)用于與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用從而治療艾滋??；
[0028](c)用于非治療性地激活潛伏的HIV病毒。
[0029]在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明所述奧沙利鉬被用于:
[0030](a)制備干預(yù)HIV病毒潛伏的組合物；
[0031](b)制備與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用從而治療艾滋病的藥物；或
[0032](c)制備非治療性地激活潛伏的HIV病毒的藥物。
[0033]本發(fā)明的第四方面，提供了一種用于激活潛伏HIV病毒的組合物，所述組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的地拉卓，以及任選的其他抗HIV病毒的活性成分。
[0034]在另一優(yōu)選例中，所述組合物中還包括抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的活性成分。
[0035]在另一優(yōu)選例中，所述組合物為藥物組合物。
[0036]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還包括選自下組的組分:抗逆?zhèn)麂洸《舅幬?，或增?qiáng)免疫力的藥物。
[0037]在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中還包括藥學(xué)上可接受的載體。
[0038]在另一優(yōu)選例中，所述的載體選自下組:淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素、馬鈴薯淀粉、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠、糊精、注射用水、生理鹽水、葡萄糖水、乙醇、丙醇、乙二醇，或其組合。
[0039]在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物是選自下組的制劑形式:片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、乳劑、糖漿劑、注射劑。
[0040]在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還包含奧沙利鉬。
[0041]本發(fā)明的第五方面，提供了一種體外非治療性誘導(dǎo)HIV病毒潛伏感染細(xì)胞中HIV前病毒表達(dá)的方法，所述方法包括步驟:
[0042]在奧沙利鉬或如本發(fā)明第二方面所述的組合物、或在地拉卓或如本發(fā)明第四方面所述的組合物的存在下，培養(yǎng)所述的HIV病毒潛伏感染細(xì)胞，使得潛伏的HIV前病毒表達(dá)，從而激活潛伏的HIV病毒。
[0043]在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括:對(duì)被激活的HIV病毒進(jìn)行殺滅或抑制。
[0044]在另一優(yōu)選例中，所述的奧沙利鉬的濃度為0.001-100 μ mol/L。
[0045]在另一優(yōu)選例中，所述的地拉卓的濃度為0.001-130 μ mol/L,較佳地為
0.001—60 μmol/L。
[0046]本發(fā)明的第六方面，提供了一種體外非治療性激活潛伏的HIV病毒的方法，所述方法包括步驟:
[0047]將HIV病毒潛伏感染細(xì)胞與奧沙利鉬、如本發(fā)明第二方面所述的組合物、地拉卓或如本發(fā)明第四方面所述的組合物接觸，或給需要的對(duì)象施用藥物有效量的奧沙利鉬、如本發(fā)明第二方面所述的組合物、地拉卓或如本發(fā)明第四方面所述的組合物，從而激活潛伏的HIV病毒。
[0048]在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括:對(duì)被激活的HIV病毒進(jìn)行殺滅或抑制。
[0049]在另一優(yōu)選例中，所述的對(duì)象為哺乳動(dòng)物或人。
[0050]本發(fā)明的第七方面，提供了一種制備用于治療艾滋病的藥物組合物的方法，所述方法包括步驟:
[0051]將治療有效量的奧沙利鉬和/或地拉卓與藥學(xué)上可接受的載體混合，從而形成藥物組合物。
[0052]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物還包括選自下組的組分:抗逆?zhèn)麂洸《舅幬?，或增?qiáng)免疫力的藥物。
[0053]本發(fā)明的第八方面，提供了一種用于體外非治療性激活潛伏HIV病毒的藥物組合物，所述藥物組合物包括有效量的奧沙利鉬和地拉卓。
[0054]本發(fā)明的第九方面，提供了一種艾滋病的治療方法，其特征在于，包括:對(duì)對(duì)象施用治療有效量的奧沙利鉬，或如本發(fā)明第二方面所述的組合物；
[0055]對(duì)患者施用治療有效量的地拉卓，或如本發(fā)明第四方面所述的組合物；或
[0056]對(duì)患者使用如本發(fā)明第八方面所述的藥物組合物。
[0057]在另一優(yōu)選例中，所述的對(duì)象為哺乳動(dòng)物或人。
[0058]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0059]圖1~3顯示了實(shí)施例1中奧沙利鉬和地拉卓對(duì)HIV潛伏誘導(dǎo)激活熒光顯微鏡圖片，圖中分別列出了未加藥(mock)和奧沙利鉬、地拉卓分別處理細(xì)胞后明場(chǎng)、暗場(chǎng)的照片。為了便于在打印文本上識(shí)別，熒光照片經(jīng)去色處理后，其熒光細(xì)胞為白色。其中:
[0060]圖1為未加藥(mock)組明場(chǎng)、暗場(chǎng)的照片；其中，圖1A為明場(chǎng)照片，圖1B為暗場(chǎng)照片；
[0061]圖2為奧沙利鉬處理組明場(chǎng)、暗場(chǎng)的照片；其中，圖2A為明場(chǎng)照片，圖2B為暗場(chǎng)照片;
[0062]圖3為地拉卓處理組明場(chǎng)、暗場(chǎng)的照片；其中，圖3A為明場(chǎng)照片，圖3B為暗場(chǎng)照片。
[0063]圖4顯示不同濃度的奧沙利鉬和地拉卓對(duì)HIV潛伏誘導(dǎo)激活的影響。分別用不同濃度的奧沙利鉬和地拉卓處理Cll細(xì)胞48h，用流式細(xì)胞儀分析GFP+細(xì)胞的比例。以上數(shù)據(jù)均為3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)的平均值，丙戊酸鈉(valproic acid, VPA ；Sigma T8552)作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

【具體實(shí)施方式】
[0064]本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，抗腫瘤藥物奧沙利鉬和心血管系統(tǒng)藥物地拉卓在用于調(diào)控HIV感染細(xì)胞時(shí)，能夠有效地使?jié)摲腍IV病毒再次被激活，從而被抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物識(shí)別并清除?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。
[0065]術(shù)語(yǔ)
[0066]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“奧沙利鉬”指化合物草酸合(反式-(_)-1，2-環(huán)己二胺)鉬
(II)，英文名稱(chēng):0xaliplatin。奧沙利鉬為白色或類(lèi)白色凍干疏松塊狀物或粉末.分子式:C8H14N2O4Pt,分子量:397.29。特別地，在本發(fā)明中，“奧沙利鉬”還包括上述化合物的衍生物，以及包含上述化合物的組合物。目前臨床上奧沙利鉬被用于治療經(jīng)過(guò)氟尿嘧啶治療失敗之后的結(jié)、直腸癌轉(zhuǎn)移的患者。
[0067]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“地拉卓”指化合物3-(4-{3-[(3，4，5_三甲氧基苯基)羰氧基]丙基} _1，4- 二氮雜環(huán)庚燒-1-基)丙基-3，4, 5- 二甲氧基苯，英文名稱(chēng):dilazep,別名為:地拉齊普、克冠卓、擴(kuò)冠嗪、擴(kuò)冠卓、雙酯嗪、克冠二氮卓。分子式=C31H44N2Oltl ;分子量:604.69。特別地，在本發(fā)明中，“地拉卓”還包括上述化合物的鹽、衍生物，以及包含上述化合物的組合物。目前地拉卓臨床適用于冠脈功能不全、心絞痛，并用于心肌梗塞的預(yù)防及其恢復(fù)期。
[0068]HIV潛伏細(xì)胞
[0069]研究顯示，HIV難以在體內(nèi)被完全清除的一個(gè)重要原因是HIV-1能夠潛伏在靜息的記憶CD4+T細(xì)胞中，該潛伏感染細(xì)胞是由二小部分HIV感染的活化CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化而產(chǎn)生的。其整合的前病毒缺乏轉(zhuǎn)錄活性，因而，不會(huì)被免疫系統(tǒng)和抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的藥物攻擊。因此，通過(guò)激活所述的HIV潛伏細(xì)胞，能夠使HIV潛伏細(xì)胞受到抗艾滋病藥物，如抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物等識(shí)別并殺死，從而治療艾滋病。
[0070]為試驗(yàn)本發(fā)明的抗HIV潛伏細(xì)胞藥物，需要構(gòu)建HIV潛伏細(xì)胞模型。本發(fā)明涉及的HIV潛伏細(xì)胞模型包括:
[0071]一個(gè)攜帶綠色熒光蛋白基因的人T細(xì)胞10.6克隆株(J-Lat Full LengthClonel0.6)。由美國(guó)國(guó)家健康衛(wèi)生研究院AIDS參考試劑計(jì)劃部提供，加州大學(xué)EricVerdin博士建立 。該小球形細(xì)胞被懸浮培養(yǎng)，由攜帶綠色熒光蛋白基因HIV-R7/E-/GFP反轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染人T細(xì)胞Jurkat細(xì)胞分選而來(lái)(Jordan A.Bisgrove D.Verdin E.HIVreproducibly establishes a latent infect1n after acute infect1n of T cells invitr0.EMBO J22:1868-1877.2003)
[0072]另二個(gè)建立的HIV潛伏篩選模型C 11克隆，由HIV慢病毒感染T細(xì)胞經(jīng)2次分選和激活而獲得(方法如中國(guó)專(zhuān)利:200810038851.X)。
[0073]組合物和施用方法
[0074]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“組合物”包括(a)治療和/或預(yù)防艾滋病的組合物，(b)激活潛伏的HIV病毒的組合物。此外，所述的組合物包括藥物組合物、食品組合物或保健品組合物。
[0075]本發(fā)明的抗HIV潛伏的有效部位具有干預(yù)HIV潛伏的作用。因此，當(dāng)在治療上施用或給予本發(fā)明的抗HIV潛伏的有效部位時(shí)，可促進(jìn)潛伏的HIV病毒的表達(dá)，進(jìn)而激活潛伏的HIV病毒。通常，可將本發(fā)明的有效部位配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的載體介質(zhì)。配制好的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于):口服、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。
[0076]本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明的有效部位以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類(lèi)載體包括(但并不限于):鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的藥物組合物可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類(lèi)的藥物組合物，可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無(wú)菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約I微克-10毫克/千克體重。
[0077]作為預(yù)防和抗艾滋病藥物，可以制成口服和非口服制劑。口服給藥可制成片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等常用劑型，所用的賦型劑可以為淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素等中的一種或幾種。崩解劑可以為馬鈴薯淀粉、羥甲基纖維素等中的一種或幾種。粘合劑可以為阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠、糊精等中的一種或幾種?？诜苿┏鲜鰟┬屯?，還可以制成乳劑、糖漿劑等。
[0078]非口服制劑可以制成注射劑，可以與注射用水、生理鹽水、葡萄糖水制成注射劑，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。
[0079]此外，本發(fā)明的有效部位還特別適合與其他抗HIV的藥物聯(lián)用。尤其是本發(fā)明的有效部位可與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用，清除潛伏感染的細(xì)胞，從而用于艾滋病的治療。
[0080]作為抗HIV潛伏作用的藥物，奧沙利鉬推薦劑量為l-130mg/m2，加入250~500ml5%的葡萄糖溶液中輸注2~6個(gè)小時(shí)，每3周(21天)給藥I次。地拉卓的劑量為:口服:每次60 m g，I日3次；靜注:10mg/次加于25%GS中，1-2次/d。兒童的用量和次數(shù)需在成人的基礎(chǔ)上酌情遞減。
[0081]本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)包括:
[0082](a)本發(fā)明所用的奧沙利鉬和地拉卓在低濃度時(shí)即能明顯使感染細(xì)胞內(nèi)潛伏的HIV表達(dá)，能夠作為高效的抗HIV潛伏藥物用于抗艾滋病藥物中，也可以和其他抗艾滋病活性成分一同被應(yīng)用于抗艾滋病藥物中，或和其他抗艾滋病藥物協(xié)同使用，對(duì)于新型抗艾滋病藥物的開(kāi)發(fā)具有重要意義。
[0083](b)奧沙利鉬和地拉卓作為安全的低毒副作用的常用抗腫瘤藥物和低毒副作用的常用心血管系統(tǒng)藥物已被長(zhǎng)期使用，藥物臨床安全性可靠。
[0084](c)提供了一種新的可用于抗HIV藥物的臨床試驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)的抗HIV潛伏作用的組合物，對(duì)于后續(xù)抗HIV藥物的開(kāi)發(fā)和實(shí)驗(yàn)具有很大的幫助。
[0085]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。
[0086]實(shí)施例1奧沙利鉬對(duì)HIV潛伏誘導(dǎo)激活的影響
[0087]Cll細(xì)胞是一種HIV潛伏感染細(xì)胞模型，是將攜帶EGFP報(bào)告基因的HIV-1的慢病毒感染人T淋巴細(xì)胞系Jurkat，通過(guò)細(xì)胞分選和HIV整合檢測(cè)，而獲得的具有HIV整合但未表達(dá)EGFP的T淋巴細(xì)胞系。Cl I細(xì)胞是被攜帶報(bào)告基因GFP的HIV慢病毒感染同時(shí)又不表達(dá)的Jurkat穩(wěn)定株，因而用于篩選激活潛伏感染HIV-1藥物(參見(jiàn)申請(qǐng)?zhí)朇N200810038851.X公開(kāi)的技術(shù))，保藏號(hào)為CCTCC N0.C200821。
[0088]在本實(shí)施例中，按每孔2X 14個(gè)細(xì)胞，將Cll細(xì)胞種植于96孔板，每孔加入100 μ I 含 10%FBS(Gibco)的 1640 培養(yǎng)基(Gibco)。24 小時(shí)后，奧沙利鉬(Oxaliplatin (IR,2R)-eyelohexane-1，2-diamine] (ethaned1ato-O, O’)platinum(II),購(gòu)于上海中山醫(yī)院)10 μ M處理細(xì)胞，至少3個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3次。藥物處理細(xì)胞48小時(shí)后，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞中綠色熒光蛋白GFP表達(dá)情況，并收集細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，分析熒光細(xì)胞所占比例。
[0089]實(shí)施例2地拉卓對(duì)HIV潛伏誘導(dǎo)激活的影響
[0090]重復(fù)實(shí)施例1，不同點(diǎn)僅在于，用地拉卓(0;11326口3-(4-{3-[(3，4, 5-trimethoxyphenyl)carbonyloxy]propyl}-1, 4-diazepan-1-yl)propyl-3, 4, 5-trimethoxybenzoate,購(gòu)于Tocris) 10 μ M處理細(xì)胞。
[0091]結(jié)果如圖1~3所示，圖1為未加藥(mock)組明場(chǎng)、暗場(chǎng)的照片；圖2為奧沙利鉬處理組明場(chǎng)、暗場(chǎng)的照片；圖3為地拉卓處理組明場(chǎng)、暗場(chǎng)的照片。為了便于在打印文本上識(shí)別，熒光照片經(jīng)去色處理后，其熒光細(xì)胞為白色。
[0092]結(jié)果顯示，HIV潛伏感染細(xì)胞經(jīng)奧沙利鉬和地拉卓分別處理后綠色熒光陽(yáng)性的細(xì)胞比例達(dá)高達(dá)16% ;未加有效部位處理的HIV潛伏感染細(xì)胞，其熒光陽(yáng)性的細(xì)胞比例僅有不到1%背景激活。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，奧沙利鉬和地拉卓對(duì)HIV潛伏感染細(xì)胞有顯著的干預(yù)作用。
[0093]實(shí)施例3不同濃度的奧沙利鉬和地拉卓對(duì)HIV潛伏誘導(dǎo)激活的影響
[0094]重復(fù)實(shí)施例1，不同點(diǎn)僅在于，用終濃度為2.5μΜ、5μΜ、10μΜ、20μΜ的奧沙利鉬和濃度為?ο μ Μ、20 μ Μ、40 μ Μ、60 μ M的地拉卓處理細(xì)胞。
[0095]結(jié)果如圖4所示，圖4顯示不同濃度的奧沙利鉬和地拉卓對(duì)HIV潛伏誘導(dǎo)激活的影響。分別用不同濃度的奧沙利鉬和地拉卓處理Cll細(xì)胞48h，用流式細(xì)胞儀分析GFP+細(xì)胞的比例。以上數(shù)據(jù)均為3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)的平均值。丙戊酸鈉(valproic acid,VPA ；Sigma T8552)作為陽(yáng)性對(duì)照藥物，其濃度為0.5 μ M、I μ Μ、2 μ Μ、4 μ M。
[0096]

【權(quán)利要求】
1.一種奧沙利鉬的用途，其特征在于，用于制備治療艾滋病或抗HIV的藥物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物用于: (a)用于干預(yù)HIV病毒潛伏； (b)用于與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用從而治療艾滋病； (c)用于非治療性地激活潛伏的HIV病毒。
3.一種用于激活潛伏HIV病毒的組合物，其特征在于，包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的奧沙利鉬，以及任選的其他抗HIV病毒的活性成分。
4.一種地拉卓的用途，其特征在于，用于制備治療艾滋病或抗HIV的藥物。
5.如 權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的藥物用于: (a)用于干預(yù)HIV病毒潛伏； (b)用于與抗逆?zhèn)麂洸《舅幬锫?lián)合使用從而治療艾滋??； (c)用于非治療性地激活潛伏的HIV病毒。
6.一種用于激活潛伏HIV病毒的組合物，其特征在于，包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的地拉卓，以及任選的其他抗HIV病毒的活性成分。
7.—種體外非治療性誘導(dǎo)HIV病毒潛伏感染細(xì)胞中HIV前病毒表達(dá)的方法，其特征在于，包括步驟: 在奧沙利鉬或如權(quán)利要求3所述的組合物、或在地拉卓或如權(quán)利要求6所述的組合物的存在下，培養(yǎng)所述的HIV病毒潛伏感染細(xì)胞，使得潛伏的HIV前病毒表達(dá)，從而激活潛伏的HIV病毒。
8.—種體外非治療性激活潛伏的HIV病毒的方法，其特征在于，包括步驟: 將HIV病毒潛伏感染細(xì)胞與奧沙利鉬、如權(quán)利要求3所述的組合物、地拉卓或如權(quán)利要求6所述的組合物接觸，或給需要的對(duì)象施用藥物有效量的奧沙利鉬、如權(quán)利要求3所述的組合物、地拉卓或如權(quán)利要求6所述的組合物，從而激活潛伏的HIV病毒。
9.一種制備用于治療艾滋病的藥物組合物的方法，其特征在于，包括步驟: 將治療有效量的奧沙利鉬和/或地拉卓與藥學(xué)上可接受的載體混合，從而形成藥物組合物。
10.一種用于體外非治療性激活潛伏HIV病毒的藥物組合物，其特征在于，包括有效量的奧沙利鉬和地拉卓。
【文檔編號(hào)】A61K31/282GK104069096SQ201310104006
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2013年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月27日
【發(fā)明者】朱煥章, 劉思杰, 張龍飛 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué), 上海鑫昊生物科技有限公司