專利名稱：一種治療t細胞淋巴瘤的組合藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物，具體地說，是關于治療T細胞淋巴瘤的組合藥物。
背景技術：
T細胞白血病/淋巴瘤之產生，與一種反轉錄病毒HTLV-1之感染有關。臨床上患有成人T-細胞白血病/淋巴瘤的病患會出現淋巴腺腫大、肝脾腫大、皮膚病癥如紅斑、骨骼溶蝕性病癥、及高鈣血癥等癥狀。病患之周邊血液內也可能會出與典型之細胞核呈花瓣狀之T-淋巴球。病患罹病后對感染之抵抗力會降低，因此容易得到伺機性病原菌之感染。此病預后甚差，無論以何種化療組合其緩解期均十分短暫，且大部分病人于診斷確立后十二個月內死亡，平均存活期不到一年(急性期的病患約為五個月，而淋巴瘤型者約為十個月)。中國專利文獻CN:101732329A，公開了一種具有協同作用的治療T細胞淋巴瘤的組合藥物及其應用，但是關于治療淋巴瘤的西藥和中藥的組合是否能夠協同治療腫瘤的，目前還未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是針對·現有技術中的不足，提供一種治療T細胞淋巴瘤的組合藥物。為實現上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是:治療T細胞淋巴瘤的組合藥物，所述的組合藥物由西藥和中藥藥物組成，所述的西藥是SAHA，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參5-15份、玄參5-10份、丹皮10-20份。所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參8-12份、玄參6-9份、丹皮12-18 份。所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參10份、玄參7份、丹皮15份。所述的SAHA和中藥藥物比例為0.5-7.5mM:l_30mg/ml。所述的SAHA和中藥藥物比例為2mM:20mg/mL.
本發(fā)明優(yōu)點在于:通過使用本發(fā)明的組合藥物，發(fā)揮組合藥物的協同作用，可以協同抑制T淋巴瘤細胞生長增殖，協同誘導T淋巴瘤細胞凋亡。藥物組合在提高療效的同時下可大幅降低費用，降低副作用。使用本發(fā)明的組合藥物可以克服現有技術中單獨使用一種藥物引起耐藥的缺點。


圖1顯示流式細胞儀檢測JURKAT凋亡對照組的效果圖。圖2顯示單用西藥JURKAT凋亡的效果圖。圖3顯示單用中藥藥物JURKAT凋亡的效果圖。圖4顯示合用藥物JURKAT凋亡的效果圖。圖5顯示流式細胞儀檢測HUT78凋亡對照組的效果圖。
圖6顯示單用西藥HUT78凋亡的效果圖。圖7顯示單用中藥藥物HUT78凋亡的效果圖。圖8顯示合用藥物HUT78凋亡的效果圖。
具體實施例方式下面對本發(fā)明提供的具體實施方式
作詳細說明。實施例1 中藥藥物制備(一)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(2次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(2次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材5mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例2 中藥藥物制備(二)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(I次)。藥渣加入450 g水 繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(2次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材lmg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例3 中藥藥物制備(三)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(2次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(3次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材10mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例4 中藥藥物制備(四)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例5 中藥藥物制備(五)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(2次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(2次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材30mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例6 中藥藥物制備(六)
取中藥苦參50g、玄參100g、丹皮IOOg置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例7 中藥藥物制備(七)
取中藥苦參150g、玄參50g、丹皮200g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例8 中藥藥物制備(八)
取中藥苦參80g、玄參60g、丹皮180g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例9 中藥藥物制備(九)
取中藥苦參120g、玄參60g、丹皮120g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例10 中藥藥物制備(十)
取中藥苦參150g、玄參100g、丹皮200g置煎煮容器內，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例11 藥效實驗
(一)試劑
環(huán)庚基?；桨樊惲u肟酸(SAHA)是異羥肟酸類組蛋白去乙酰化酶抑制劑，苦參、玄參、丹皮，
(二)細胞培養(yǎng)
本研究應用了以下兩種細胞株:人T-細胞性淋巴瘤細胞株JURKAT和HUT78，細胞在5%C02-95%空氣，飽和濕度以及37° C的條件下，培養(yǎng)于RPM1-1640培養(yǎng)液中(Gibco/BRL)，并加入10%胎牛血清。在每次實驗中，細胞接種密度為3X IO5/ml。細胞的存活率采用臺盼蘭拒染實驗檢測。細胞形態(tài)學觀察采用瑞氏染色法。(三)MTT實驗
在96孔板中，用SAHA終濃度選用0、0.5、1.0,2.0,5.0和7.5mM,中藥藥物(苦參、玄參和丹皮)組終濃度選用0、1、5、10、20和30mg/ml處理細胞。O劑量組用1640培養(yǎng)液代替。72小時后，向每孔中加入0.1 mg MTT，在37°C下孵育4小時后，在分光光度計570nm處測量標本吸光度值。(四)流式細胞儀檢測annexin-V和線粒體跨膜電位:
細胞凋亡用ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis kit(BD)進行分析。在檢測線粒體跨膜電位中，細 胞用PBS洗后，在37°C下與10 mg/ml Rhl23孵育30分鐘，然后再用50 mg/ml PI染色。熒光強度用流式細胞儀進行測量。(五)免疫印跡分析:
用 200 ml Laemmli 裂解緩沖液(0.5 M Tris-HCl, pH 6.8，2mM EDTA, 10% glycerol,2% SDS and 5% b-mercaptoethanol)裂解 5xl06 細胞。蛋白裂解物(20 mg)用于 10%聚丙烯酰胺凝膠電泳，再轉移至硝酸纖維素膜上。硝酸纖維素膜在溶于TBS/0.05% Tween 20的5%脫脂牛奶中封閉，之后與一抗在室溫孵育2小時，與辣根過氧化物酶標記的二抗孵育I小時。免疫復合物用辣根過氧化物酶化學發(fā)光檢測試劑盒檢測。(六)核蛋白分離:
每1父107細胞與裂解緩沖液(10 1111!^^5，10 mM KCl, 1.5 mM MgCl2, 0.5 mM DTT,pH 7.9)洗后，重懸于提取緩沖液(20 mM HEPES, pH 7.9，420 mM NaCl, 0.5 mM DTT, 0.2mM EDTA and 25%甘油)中，冰上孵育20分鐘。12000Xg離心10分鐘后，上清即為核蛋白。(七)統(tǒng)計分析:
實驗結果用三次獨立實驗的平均值和標準差表示，用t檢驗來比較差異。P值小于0.05則認為具有統(tǒng)計學差異。所有的統(tǒng)計采用SAS8.2軟件。(A)結果:
采用JURKAT，HUT78細胞進行培養(yǎng)，通過分析觀察SAHA、中藥藥物組單獨及聯合應用對細胞生長增殖的影響。SAHA (2.0mM)聯合中藥藥物(20mg/ml)應用48小時可顯著抑制JURKAT，HUT78細胞的增殖。用流式細胞儀檢測單用及合用藥后細胞的凋亡(Annexin V和PI雙染法)。JURKAT (細胞株 I)經 SAHA (2.0mM)、中藥藥物(20mg/ml)及 SAHA (2.0mM)聯合中藥藥物(20mg/ml)處理的48小時后，Annexin V陽性細胞分別為:對照組3.4% (見圖1) ;SAHA組13.7% (見圖2);中藥藥物組7.3% (見圖3) ;SAHA與中藥藥物合用組36.7%(見圖4)。在HUT78 (細胞株2):對照組3.0% (見圖5);SAHA組12.2% (見圖6);中藥藥物組6.4% (見圖7);5么通與中藥藥物合用組36.7% (見圖8)。同時我 們應用Berenbaum建立的等效應線圖法分析SAHA與中藥藥物的聯合應用是協同、相加或拮抗。
權利要求
1.一種治療T細胞淋巴瘤的組合藥物，所述的組合藥物由西藥和中藥藥物組成，其特征在于，所述的西藥是SAHA，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成苦參5-15份、玄參5-10份、丹皮10-20份。
2.根據權利要求I所述的組合藥物，其特征在于，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成苦參8-12份、玄參6-9份、丹皮12-18份。
3.根據權利要求I所述的組合藥物，其特征在于，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成苦參10份、玄參7份、丹皮15份。
4.根據權利要求I所述的組合藥物，其特征在于，所述的SAHA和中藥藥物比例為.O. 5-7. 5 μ M 1-30 μ g/ml。
5.根據權利要求I所述的組合藥物，其特征在于，所述的SAHA和中藥藥物比例為2μ M 20 μ g/ ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療T細胞淋巴瘤的組合藥物，所述的組合藥物由西藥和中藥藥物組成，所述的西藥是SAHA，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成苦參5-15份、玄參5-10份、丹皮10-20份。本發(fā)明優(yōu)點在于通過使用本發(fā)明的組合藥物，發(fā)揮組合藥物的協同作用，可以協同抑制T淋巴瘤細胞生長增殖，協同誘導T淋巴瘤細胞凋亡。藥物組合在提高療效的同時下可大幅降低費用，降低副作用。使用本發(fā)明的組合藥物可以克服現有技術中單獨使用一種藥物引起耐藥的缺點。
文檔編號A61P35/00GK103223023SQ20131012417
公開日2013年7月31日 申請日期2013年4月11日 優(yōu)先權日2013年4月11日
發(fā)明者夏飛 申請人:太倉市勝舟生物技術有限公司