專利名稱：5-HT_2C受體特異性阻斷劑對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及5-HT2。受體特異性阻斷劑對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)作用。
背景技術(shù)：
哺乳動(dòng)物延髓神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)能夠產(chǎn)生節(jié)律性呼吸放電，已有研究證實(shí)面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)(the medial region of Nucleus Retrofacialis, mNRF)是呼吸節(jié)律發(fā)生的關(guān)鍵位置，
也有研究發(fā)現(xiàn)延髓腹外側(cè)區(qū)前包欽格復(fù)合體(preBtitzinger complex, PBC)是呼吸節(jié)律產(chǎn)
生部位。這兩個(gè)部位雖不完全相同，但有部分重疊。大鼠5羥色胺能神經(jīng)元從中縫核尾部投射到舌下神經(jīng)核參與調(diào)整呼吸，5-羥色胺受體(5-HT受體)存在于新生大鼠和新生小鼠腹側(cè)呼吸組。除了 5-HT3受體是配體門控離子通道外其余5-HT受體均為G蛋白偶聯(lián)受體
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供5-HT2。受體特異性阻斷劑的新用途，即5-HT2。受體特異性阻斷劑對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)作用。本發(fā)明提供了 5-HT2。受體特異性阻斷劑在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述產(chǎn)品的功能為如下(a)和/或(b)和/或(c): (a)縮短舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的吸氣時(shí)程；(b)延長舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的呼吸周期；(C)降低舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的放電積分幅度。所述5-HT2。受體特異性阻斷劑具體可為RS102221。本發(fā)明還保護(hù)5-HT2。受體特異性阻斷劑的應(yīng)用，為如下(a)和/或(b)和/或(c):(a)縮短舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的吸氣時(shí)程；(b)延長舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的呼吸周期；(C)降低舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的放電積分幅度。所述5-HT%受體特異性阻斷劑具體可為RS102221。本發(fā)明還保護(hù)5-HT%受體特異性阻斷劑在對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)作用。所述5-HT2。受體特異性阻斷劑具體可為RS102221。所述哺乳動(dòng)物可為大鼠，具體可為Sprague - Dawley大鼠,具體可為1_3天新生大鼠。本發(fā)明還保護(hù)5-HT%受體特異性阻斷劑在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述產(chǎn)品的功能為:對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼吸放電進(jìn)行調(diào)節(jié)。所述5-HT2。受體特異性阻斷劑具體可為RS102221。所述哺乳動(dòng)物可為大鼠，具體可為Sprague-Dawley大鼠，具體可為1_3天新生大鼠。吸氣神經(jīng)元是產(chǎn)生吸氣模式的基本組成成分，是呼吸節(jié)律形成的前提。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)MK212可以顯著延長T1、縮短RC、增加IA，證明在吸氣神經(jīng)元細(xì)胞膜上存在5_HT2C受體調(diào)節(jié)RRDA。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)RS102221可以顯著縮短T1、延長RC、降低IA，證明在mNRF有內(nèi)源性5-羥色胺能神經(jīng)元釋放5-羥色胺調(diào)節(jié)RRDA，阻斷5-HT2。受體對吸氣神經(jīng)元有抑制作用。MK212縮短RC和RS102221延長RC提示在呼吸中間神經(jīng)元和呼氣神經(jīng)元細(xì)胞膜上同樣存在5-HT2。受體，通過調(diào)節(jié)這兩類神經(jīng)元興奮性影響呼吸的時(shí)相轉(zhuǎn)換。激活或阻斷5-HT2C受體影響RC說明通過影響呼吸中間神經(jīng)元的興奮性影響了呼氣-吸氣時(shí)相轉(zhuǎn)換從而影響呼吸周期。5-HT2C受體被激活后催化4，5-磷脂酰肌醇二磷酸酯水解成為1，4，5_三磷酸肌醇和二酯酰甘油。1，4，5-三磷酸肌醇通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增加胞漿內(nèi)[Ca2+]，二酯酰甘油激活胞漿內(nèi)PKCo PKC通過磷酸化鈉通道增加鈉通道開放幾率，PKC還可以增加活性氧族濃度。活性氧族也可增加鈉通道開放幾率。本發(fā)明推測5-HT2。受體對吸氣神經(jīng)元和呼吸中樞的調(diào)節(jié)作用是通過增高的鈉通道開放幾率依次增加了吸氣神經(jīng)元和呼吸中樞的興奮性。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)并從功能上證實(shí)了在新生大鼠離體延髓腦片上存在5-肌2。受體參與對基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)，5-HT2。受體通過調(diào)節(jié)延髓呼吸神經(jīng)元興奮性來調(diào)節(jié)延髓呼吸中樞基本節(jié)律性呼吸。


圖1為對照組的結(jié)果。圖2為MK212組的結(jié)果。圖3為RS102221組的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。將每次吸氣性放電開始至放電結(jié)束的時(shí)間作為吸氣時(shí)程(inspiratorytime, TI),以一次吸氣性放電開始至下一個(gè)放電開始的時(shí)間作為呼吸周期(respiratorycycle, RC),把一次放電的原始圖進(jìn)行積分獲得放電積分幅度(integral amplitude, ΙΑ)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以Mean± SD表示，使用SPSS13.0軟件(SPSS, Chicago, USA)重復(fù)測量方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a =0.05, P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2-Chloro-6-(1-piperazinyl)-pyrazine hydrochloride,6-Chloro-2-(1-piperazinyl)pyrazine hydrochloride (簡稱 MK212,是一種5-HT2C受體特異性激動(dòng)劑)=Sigma, USA。4-dionehydrochloridehydrate, 8-[5-(2, 4-Dimethoxy-5-(4~trifluoromethylphenylsulphonamido) phenyl-5-oxopentyl] -1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-2 (簡稱 RS102221,是一種5-HT2。受體特異性阻斷劑)=Sigma, USA。直流前置放大器(FZG-81DCpreamplifier):Shanghai Jialong TeachingApparatus, China。BL-420 生物信號采集和處理系統(tǒng)(BL-420F intelligent biologicalsignal collection and management system):成都泰盟科技公司(Chengdu TMETechnology, China)。
Sprague - Dawley大鼠(1-3天SPF級新生大鼠):購自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，
5.47±1.53g，許可證號為 SCXK(YU) 2010-0002。人工腦脊液(artificialcerebrospinal fluid, ACSF):將 NaC1124mmol、KC15mmol>CaCl2 2.4mmol、MgS04 1.3mmol、NaHC03 26mmol 和 Glucose30mmol 溶于雙蒸水并用雙蒸水定容至IL ;使用前用95% O2和5% CO2平衡Ih以上。MK212和RS102221均先溶于少量二甲基亞砜后加入人工腦脊液至所需濃度(需保證二甲基亞砜濃度低于0.1%)。所有的實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)步驟均經(jīng)過新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會批準(zhǔn)。實(shí)施例1、一、制備包含面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)的新生大鼠離體延髓腦片(保留腦片腹側(cè)面的舌下神經(jīng)根)USprague _ Dawley大鼠用乙醚麻醉后在C3-C4節(jié)段斷頭,在延髓-腦橋之間迅速橫斷腦干，去除顱骨及腦橋以上的腦組織，剪開延髓背側(cè)顱骨，小心分離至C1-C2段脊髓，游離出延髓-脊髓，完整保留舌下神經(jīng)根。整個(gè)過程均在持續(xù)充以95% O2和5% CO2的0°C人工腦脊液中進(jìn)打，3min內(nèi)完成標(biāo)本制作。2、迅速將標(biāo)本頭端向上移至切片槽內(nèi)，腹側(cè)面朝向刀刃，刀刃朝向頭端傾斜20°，在閂前600 μ m至閂后100 μ m間切下延髓腦片(含舌下神經(jīng)根)。二、分組處理取60只步驟 一制備的腦片，隨機(jī)分為10組(每組6只)，分別進(jìn)行以下平行處理:對照組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流60min, pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29°C;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電(RRDA)經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；MK212-1組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有I μ mol/L MK212的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29 °C ;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；MK212-1I組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有5μπι01/1 ΜΚ212的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29 °C ;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；MK212-1II組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有10 μ mol/L MK212的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27_29°C ;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；MK212-1V組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有20 μ mol/L MK212的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27_29°C ;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；
RS102221-1組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有I μ mol/L RS102221的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29 °C;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；RS102221-1I組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有5 μ mol/L RS102221的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29 °C;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；RS102221-1II組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有10 μ mol/L RS102221的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29 °C;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；RS102221-1V組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，用含有20 μ mol/L RS102221的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29 °C;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析；MK212+RS102221組:將腦片置于灌流槽內(nèi)，先用人工腦脊液以2_4mL/min持續(xù)灌流lOmin，然后用含有10 μ mol/L MK212的人工腦脊液以2_4mL/min持續(xù)灌流15min，然后用人工腦脊液沖洗20min，然后 用含有10 μ mol/L RS102221和10 μ mol/L MK212的人工腦脊液以2-4mL/min持續(xù)灌流15min，pH保持7.35-7.45，溫度保持27-29 °C;用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根，將舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420生物信號采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理和分析。三、結(jié)果分析1、對照組的結(jié)果分析對照組腦片的RRDA在60min內(nèi)無變化，說明本模型穩(wěn)定可靠。0_60分鐘內(nèi)，每10分鐘的檢測結(jié)果見圖1和表2 (均為從該檢測時(shí)間點(diǎn)開始連續(xù)6個(gè)呼吸的平均值)。表I中，將IOmin時(shí)間點(diǎn)的檢測結(jié)果作為100，表格中顯示的是其它各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的檢測結(jié)果與IOmin時(shí)間點(diǎn)的檢測結(jié)果的比值。IOmin時(shí)間點(diǎn)的檢測結(jié)果為:TI=0.69s，IA=349.26 μ V.s,RC=18.92s。表I對照組的RRDA在60min內(nèi)的變化(Γ 土S，n=6)
權(quán)利要求
1.5-HT2。受體特異性阻斷劑在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述產(chǎn)品的功能為為如下(a)和/或(b)和 / 或(C): Ca)縮短舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的吸氣時(shí)程； (b)延長舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的呼吸周期； (c)降低舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的放電積分幅度。
2.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述5-HT2。受體特異性阻斷劑為RS102221。
3.5-HT2C受體特異性阻斷劑的應(yīng)用，為如下(a)和/或(b)和/或(c): Ca)縮短舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的吸氣時(shí)程； (b)延長舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的呼吸周期； (c)降低舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的放電積分幅度。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述5-HT2。受體特異性阻斷劑為RS102221。
5.5-HT2C受體特異性阻斷劑在對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)作用。
6.如權(quán)利要求5所述的調(diào)節(jié)作用，其特征在于:所述5-HT2。受體特異性阻斷劑為RS102221。
7.5-HT2C受體特異性阻斷劑在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述產(chǎn)品的功能為:對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼 吸 放電進(jìn)行調(diào)節(jié)。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于:所述5-HT2。受體特異性阻斷劑為RS102221。
全文摘要
本發(fā)明公開了5-HT2C受體特異性阻斷劑的新用途，即5-HT2C受體特異性阻斷劑對哺乳動(dòng)物延髓的基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)作用。本發(fā)明提供了5-HT2C受體特異性阻斷劑在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述產(chǎn)品的功能為如下(a)和/或(b)和/或(c)(a)縮短舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的吸氣時(shí)程；(b)延長舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的呼吸周期；(c)降低舌下神經(jīng)根基本節(jié)律性呼吸放電的放電積分幅度。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)并從功能上證實(shí)了在新生大鼠離體延髓腦片上存在5-HT2C受體參與對基本節(jié)律性呼吸放電的調(diào)節(jié)。
文檔編號A61P11/16GK103239445SQ20131015069
公開日2013年8月14日 申請日期2013年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月26日
發(fā)明者千智斌, 姬明麗, 王洪興, 李生瑩, 楊秀麗, 李霞飛, 官立萍, 吳云紅 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院