專利名稱：一種具酪氨酸酶抑制活性的混合物的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種來源于菠蘿蜜木材的具酪氨酸酶抑制活性的混合物制備方法與用途，屬于醫(yī)藥、化妝品和食品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
波羅蜜，又稱大樹菠蘿或木波羅，屬桑科波羅蜜屬常綠喬木，在海南、廣西、廣東和云南等地有種植。其果實是我國南亞熱帶特產(chǎn)水果之一，果實大而美觀、味極甜、香氣濃郁。波羅蜜的木材化學成分有黃酮，萜類，二苯乙烯類，長鏈脂肪酸類等?，F(xiàn)代藥理學研究表明，從該植物中獲得的一些成分具有抗炎、抗氧化、抑制黑色素生物合成、抑制血小板聚集等諸多藥理作用。
酪氨酸酶作為黑色素合成的關(guān)鍵酶，其表達和活性與果蔬的褐變及人體色素沉著性疾病均密切相關(guān)。因此，酪氨酸酶抑制劑可作為黑色素抑制劑應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具酪氨酸酶抑制活性的混合物，是從波羅蜜木材中提取的、具有較強酪氨酸酶抑制活性的六種多酚類化合物的混合物，這六種多酹類化合物是二氫桑色素(Dihydromorin)、草大戟素(Steppogenin)、去甲木菠蘿黃銅(Norartocarpetin)、桂木二氧黃素(Artocarpanone)、桂木生黃素(Artocarpesin)和異桂木生黃素(Isoartocarpesin),其結(jié)構(gòu)如圖1所示。所含的六種多酹類化合物的含量達20% 40%。
本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供所述具有酪氨酸酶抑制劑活性的化合物及混合物的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn):
(I)取2000g波羅蜜木材，用鋸子刨成碎末，然后用IOL的95%乙醇超聲(50Hz，250w)提取三次，每次Ih，提取液減壓濃縮至干燥物，稱重，得62.6g提取物；
(2) 60g提取物用300mL95%乙醇溶解，定性濾紙過濾；
(3)上述過濾液與Amberlite XAD16混合拌樣(固體提取物與Amberlite XAD16的質(zhì)量比為1:2)，減壓濃縮至干；
(4)將上述攪拌物上Amberlite XAD16大孔樹脂柱層析，分別用20%、30%、40%、50%及95%乙醇洗脫，得到30%、40%、50%的洗脫液，減壓回收溶劑至干，得到固體，即具有酪氨酸酶抑制劑活性的混合物。
(5)收集步驟(4)的30%乙醇洗脫部分，收集6個柱體積，濃縮干燥得樣品，稱重，得2.8g ;固體用甲醇溶解，稱取5.4g200-300目硅膠拌樣，然后用200-300目硅膠柱層析分離，氯仿-甲醇(v/v, 15/1)洗脫，即得382mg化合物Dihydromorin0
(6)收集步驟(4)的40%乙醇洗脫部分，收集6柱個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，得7.28g ;樣品用甲醇溶解， 然后用葡聚糖凝膠柱層析進行分離，甲醇-水(1:1)洗脫，即得580mg 化合物 Steppogenin 和 610mg 的化合物 Norartocarpetin。
(7)收集步驟(4)的50%乙醇洗脫部，收集分6個柱體積，濃縮得干燥樣品，稱重，得2.25g ;固體用甲醇溶解，稱取5.4g200-300目硅膠拌樣，然后用200-300目硅膠柱層析進行分離，乙酸乙酯-正己燒(1:2)洗脫，即得75mg化合物Artocarpanone。
(8)收集步驟(4)的50%乙醇洗脫部分，收集6柱個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，2.5g ;樣品用甲醇溶解，然后用凝膠柱層析進行分離，甲醇-水(1:1)洗脫，即得130mg化合物 Artocarpesin 和 88mg 的 Isoartocarpesin。
本發(fā)明所解決的另一個技術(shù)問題是提供所述的具有酪氨酸酶抑制活性的混合物在制備果蔬酶促褐變抑制劑、化妝品美白劑，以及制備具酪氨酸酶抑制活性的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的六種從波羅蜜木材中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚類化合物及其混合物可以作為活性成分，按照相應(yīng)劑型的制備方法添加到食品添加劑、化妝品輔料或藥劑中制成制劑。
本發(fā)明的有益之處在于:提供六種從波羅蜜木材中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚類化合物及其混合物比波羅蜜提取物具有更強的酪氨酸酶抑制活性，制成相應(yīng)制劑易于質(zhì)量控制，可在果蔬酶促褐變抑制劑、化妝品美白劑、預(yù)防和治療黑色素異常導致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病癥的藥物中的應(yīng)用。


圖1為從波羅蜜木材中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的六種多酚類化合物的結(jié)構(gòu)式
圖2波羅蜜木材粗提取物和含六種主要酪氨酸酶抑制劑的HPLC圖
圖3為蘋果切片用各種溶液處理后抗褐變的a*值(初始用5%乙醇溶解)具體實施方式
樣品的減壓濃縮:提取液用濾紙過濾后，于東京理化旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓回收溶劑，得濃縮液或固體。
Amberlite XAD16層析柱的性能參數(shù)及分離步驟:(I)主要性能參數(shù):pH范圍1-14，最高耐受溫度150度，最小柱床75cm，載樣量720g/L ;(2)分離步驟:上樣以后，先用水洗脫，然后用不同濃度乙醇-水洗脫，濃度從低到高，最后用95%洗脫，洗脫完之后，再用水洗至無醇味，留下次備用。
高效液相色譜檢測條件:
(I)儀器:島津LC-20AT液相色譜儀配以DAD檢測器。
(2)色譜柱:Alltima C18 (250 X 4.6mm, 5 u m)。
(3)流動相:A相:含0.2%甲酸的去離子水出相:乙腈。線性洗脫梯度:0min，20%B ；20min，40%B ；30min,60%B ；40min,80%B ；50min, 100%B。流速:1.0mL/min，檢測波長:285nm。
酪氨酸酶抑制活性評價:將波羅蜜粗提取物、含有6種主要化合物的混合物或單獨化合物溶于DMS0，先配成lmg/mL溶液，使用時稀釋到需要濃度。將各種預(yù)定濃度的提取物、含有6種主要化合物的混合物或單獨化合物溶液各30 ii L，用970 u L磷酸鹽緩沖溶液配成lmL，加入0.lmg/mL的酪氨酸lmL，然后加入由磷酸鹽緩沖溶液配成的ImL酪氨酸酶(200U/mL),混勻后，于37°C下孵育20min，于490nm處測定吸光值。酶活抑制率用下列公式計算:
酶活性抑制率=[(六241)-(82-81)]/02-六1)X 100%
Al為Omin時候未加抑制劑的吸收值；A2為20min后未加抑制劑的吸收值。
BI為Omin時候加抑制劑的吸收值；B2為20min后加了抑制劑的吸收值。
實施例1具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的制備
將2kg波羅蜜木材(木材采自海南省文昌縣)用6倍量95%乙醇超聲波提取2次，每次lh，減壓濃縮至干燥，稱重。然后以95 %乙醇溶解，定性濾紙過濾，加入AmberliteXAD16中，自然晾干或減壓蒸干，上Amberlite XAD16層析柱，分別用20%、30%、40%、50%及95%的乙醇洗脫6個柱體積，收集洗脫液，分別減壓回收乙醇至干。將用30%、40%及50 %乙醇洗脫所得的部分用高效液相檢測，將含有化合物Dihydromorin, Steppogenin,Norartocarpetin, Artocarpanone, Artocarpesin, Isoartocarpesin 的組分合并，為含有六個主要化合物(有效部位)的混合物(圖2 )。
實施例2Dihydromorin 的制備
波羅蜜木材的提取及大孔樹脂分離過程同實施例1。所不同的是收集30%乙醇洗脫部分，，濃縮干燥得樣品，稱重，得2.Sg ;固體用甲醇溶解，稱取5.4g200-300目硅膠拌樣，然后用200-300目硅膠柱層析分離，氯仿-甲醇(v/v，15:1)洗脫，即得382mg化合物Dihydromorin。
Dihydromorin的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
1H NMR (CD3OD, 500MHz) 8:7.20 (1H, d, J=8.9Hz, H-6 ; )，6.34 (1H, dd, J=8.9，2.4Hz,H-5 ; ),6.34(1H, d, J=2.4Hz, H-3 ; )，5.89(1H, d, J=2.1Hz, H_8)，5.85(1H, d, J=2.1Hz, H-6)，5 37(lH，d, J=Il.4Hz，H-2·), 4.77 (lH，d, J=Il.4Hz，H-3) ; 13C NMR (CD3OD, 125MHz) 8: 199.1 (s，C-4)，168.7 (s, C-5)，165.5 (s, C~9), 165.1 (s, C~7), 160.3 (s, C-4 ; )，158.8 (s, C-2 ; )，131.0 (d, C-6, ), 115.7 (s, C-1 ; )，108.0 (d, C-5 ; )，103.8 (d, C-3 ; )，102.1 (s, C_10)，97.3 (d, C_8)，96.4(d, C-6), 80.2 (d, C_2)，72.7 (d, C-3)。ES1-MS: m/z305.6 [M+H]+ (C15H13O7)。結(jié)構(gòu)解析表明該化合物為Dihydromorin。
實施例3Steppogenin 和 Norartocarpetin 的制備
波羅蜜木材的提取及大孔樹脂分離過程同實施例1。所不同的是收集40%乙醇洗脫部分，收集6柱個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，得7.28g;樣品用甲醇溶解，然后用葡聚糖凝膠柱層析進行分離，甲醇-水(v/v, 1:1)洗脫，即得580mg化合物Steppogenin和6IOmg的化合物 Norartocarpetin。
Steppogenin的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
1H NMR(CD3OD, 500MHz) 8:7.22 (1H, d, J=8.2Hz, H-6' )，6.33 (1H, dd, J=8.2，2.4Hz,H-5 ; ),6.31 (1H, d, J=2.1Hz, H-3 ; )，5.90 (1H, d, J=2.2Hz, H_8)，5.86 (1H, d, J=2.2Hz, H-6)，5.59 (1H, dd, J=13.2，2.9Hz, H_2)，3.06 (1H, dd, J=17.2，13.1Hz, H_3 a)，2.69 (1H, dd, J=17.2，2.9Hz, H-3 ^ ) ; 13C NMR(DMS0-d6, 75MHz) 8: 196.9 (s, C-4)，166.6 (s, C_7)，163.6 (s, C-5)，163.5 (s, C-9), 158.7(8,0-2' ), 155.8 (s, C-4 ; ), 128.4((1,0-6' ), 115.4 (s, C-1; ), 106.5 (d, C-5 ; )，102.4 (d, C-3' )，101.7 (s, C_10)，95.7 (d, C-6)，94.9 (d, C_8)，73.9 (d, C_2)，41.1 (t,C-3)。ES1-MS:m/z [M+H]+289.4 (C15H13O6)。結(jié)構(gòu)解析表明該化合物為 St印pogenin。
Norartocarpetin的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
1H NMR (DMS0-d6, 300MHz) 8:6.15 (1H, d, J=L 8Hz, H-6)，6.42 (1H, dd, J=3.0，8.7Hz,H-5 ; ),6.48 (1H, d, J=L 8Hz, H_8)，6.43 (1H, d, J=3.0Hz, H-3 ; )，7.00 (1H, s, H-3)，7.75 (1H,d, J=8.7Hz, H-6’);13C NMR(DMS0-d6, 75MHz) 8:181.9 (s, C-4), 164.2 (s, C_7)，161.8 (s, C-4;),161.8(8,02),161.4(8,09),159.0(8,05),157.3(8,02' ), 129.8((1,0-6' ), 108.5 (s,C-1 ; )，108.0 (d, C-3)，106.7 (d, C-5 ; )，103.6 (s, C_10)，103.2 (d, C-3 ; )，98.6 (d, C-6)，93.8 (d, C-8) o ES1-MS:m/z287.3 [M+H]+ (C15H11O6)。結(jié)構(gòu)解析表明該化合物為 Norartocarpetin。
實施例4Artocarpanone 的制備
波羅蜜木材的提取，大孔樹脂分離過程同實施例1。收集50%乙醇洗脫部，收集分6個柱體積，濃縮得干燥樣品，稱重，得2.25g ;固體用甲醇溶解，稱取5.4g200-300目硅膠拌樣，然后用200-300目硅膠柱層析進行分離，乙酸乙酯-正己烷(1:2)洗脫，即得75mg化合物 Artocarpanone。
Artocarpanone的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
1H NMR (CD3OD, 500MHz) 8:7.22 (1H, d, J=8.0Hz, H-6 ; )，6.33 (1H, dd, J=8.0，2.3Hz,H-5 ; ),6.32 (1H, d, J=2.3Hz, H-3 ; )，6.04 (1H, d, J=2.3Hz, H_8)，6.02 (1H, d, J=2.3Hz, H-6)，5 62 (1H, dd, J=13.2，3.0Hz, H_2)，3.80 (3H, s, OMe)，3.09 (1H, dd, J=17.2，13.2Hz, H_3 a)，2.72(1H, dd, J=17.2, 3.0Hz,H-30) ; 13C NMR(CD30D，125MHz) 8: 199.1 (s, C_4)，169.6 (s, C_7)，165.4 (s, C-4)，165.4 (s, C-9)，160.0 (s, C-5)，157.0 (s, C~2 ; )，129.1 (d, C-6 ; )，117.9 (s, C-1;)，107.9 (d, C-5 ; )，104.2 (s, C-10)，103.6 (d, C-3 ; )，95.8 (d, C-8)，95.0 (d, C-6)，76.3 (d,C-2), 56.4(q, OMe), 43.3 (t, C-3)。ES1-MS:m/z303.3 [M+H]+ (C16H15O6)。結(jié)構(gòu)解析表明該化合物為 Artocarpanone。
實施例5Artocarpesin 和 Isoartocarpesin 的制備
波羅蜜木材的提取，大孔樹脂分離過程同實施例1。所不同的是收集50%乙醇洗脫部分，收集6柱個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，2.5g ;樣品用甲醇溶解，然后用凝膠柱層析進行分離，甲醇-水(1:1)洗脫，即得130mg化合物Artocarpesin和88mg的Isoartocarpesino
Artocarpesin的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
1H NMR (DMS0_d6，300MHz) 8:1.62 (3H, s, H_4 " ),1.72 (3H, s, H-5 " ), 3.18 (2H, brd, J=6.6Hz，H-3" ), 5.17 (1H, br t, J=6.6Hz, H_2 " ), 6.43 (1H, dd, J=8.7, 2.1Hz, H-5 ; ), 6.48(1H, d, J=2.1Hz, H-3’ ),6.48 (1H, s, H_8)，6.98(1H, s, H-3)，7.73(1H, d, J=8.7Hz, H-6 ; )，10 75 (s, OH), 10.17 (s, OH) ;13C NMR(DMS0-d6, 75MHz) 8:181.9 (s, C-4), 161.7(s, C_7)，161.7(s, C-2), 161.5 (s, C-9), 158.6 (s, C-4 ; ), 158.3 (s, C-2 ; )，155.1 (s, C_5)，130.7 (s, C_3" ),129.8 (d, C-6 ; ), 122.3 (d, C-2/7 ), 110.6 (s, C-1 ; ), 108.7 (s, C-6), 108.1 (d, C-5 ; ), 106.8 (d,C-3 ; )，103.3 (s, C-10)，103.2 (d, C-3)，93.1 (d, C-8)，25.6 (q, C_4" ),21.0(t, C-1" ), 17.8 (q,C-5" )。ES1-MS:m/z355.4[M+H]+ (C20H19O6)。結(jié)構(gòu)解析表明該化合物為 Artocarpesin。
Isoartocarpesin的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
1H NMR(CD3OD, 500MHz) S:1.10 (6H，d，J=6.7Hz，H-4"，5" )，2.42 (1H, m, H—3"; ),6.42 (1H, dd, J=8.7，2.3Hz, H_5’)，6.44(1H, d, J=2.3Hz, H-3 ; )，6.46 (1H, s, H_8)，6.55 (1H，dd, J=16.2，1.0Hz, H-1 " ), 6.69 (1H, dd, J=16.2，7.2Hz, H_2 " ),1.14 (1H, s, H-3), 7.75 (1H, d, J=8.7Hz, H-6’) ; 13C NMR (CD3OD, 125MHz) 8: 184.7 (s, C-4)，164.0 (s, C-2)，163.5 (s,C-7), 163.5 (s, C-5)，160.5 (s, C-2 ; )，157.3 (s, C-9)，142.7 (d, C_2 " ),131.0 (d, C_6’ ),117 6 (d, C-l，，)，110.9 (s, C-1 ' ),110.3 (s, C-6)，109.2 (d, C-5 ; )，108.4 (d, C-3)，105.1 (d,C-10), 104.3 (s, C-3 ; )，94.4 (d, C-8), 34.5 (d, C-3" )，23.4 (q, C_4"，5" ) ES1-MS:m/z355.4[M+H]+ (C20H19O6) 結(jié)構(gòu)解析表明該化合物為 Isoartocarpesin。
實施例6波羅蜜粗提取物和具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的酪氨酸酶抑制活性評價
將波羅蜜粗提取物和具有酪氨酸酶抑制活性的混合物溶于DMS0，先配成lmg/mL溶液，使用時稀釋到需要濃度。檢測三種濃度的粗提取物和具有酪氨酸酶抑制活性的有效部位混合物抑制酪氨酸酶的活性，三種濃度為10、5、2.g/mL。陽性對照曲酸配成25、20、10,7.5、5 ii g/mL濃度的溶液。將上述三種溶液各30 y L，用970 u L磷酸鹽緩沖溶液配成lmL，加入0.lmg/mL的酪氨酸lmL，然后加入由磷酸鹽緩沖溶液配成的ImL酪氨酸酶(200U/mL)，在37° C下孵育20min，于490nm處測定吸光值。
酶活性抑制率=[(六241)-(82-81)]/0241)\100%
Al為Omin時候未加抑制劑的吸收值；A2為20min后未加抑制劑的吸收值。
BI為Omin時候 加抑制劑的吸收值；B2為20min后加了抑制劑的吸收值。
波羅蜜木材粗提取物和有效部位在3個濃度的抑制率分別為84.42%, 74.54%,57.00%和93.65%,89.80%,80.24%，陽性對照曲酸在6.67 u g/mL濃度的抑制率為50%，這一結(jié)果說明六種化合物混合物的酪氨酸酶抑制活性大大好于粗提取物，并且都好于陽性對照物曲酸。
實施例7六個活性化合物的酪氨酸酶抑制活性評價
將 Dihydromorin、Steppogenin、Norartocarpetin、Artocarpanone、Artocarpesin和 Isoartocarpesin 均分別配成 3.33、1.67、0.84、0.33、0.17 和 0.03 u g/mL 的溶液，測定對酪氨酸酶的抑制活性。得到活性化合物抑制酪氨酸酶的IC5tl分別為10.2,0.6,0.5，1.8，0.5,0.7u M,曲酸的IC5tl為47.0ii M，這一結(jié)果說明六種化合物的酪氨酸酶抑制活性遠遠高于陽性對照物曲酸，具有顯著性差別。
實施例8具有酪氨酸酶抑制活性的混合物對蘋果切片的抗褐變效果評價
將蘋果切成4mm厚薄片，分別浸入水、0.01%的4_己基間苯二酹、0.03%含主要六種化合物(有效部位)波羅蜜的混合物、0.5%維生素C、0.03%含主要六種化合物(有效部位)波羅蜜的混合物加0.5%維生素C及0.01%的4-己基間苯二酚加0.5%維生素C，然后在0h、3h、6h、12h和24h時分別用色差儀檢測其顏色變化程度，結(jié)果表明(圖3)，在0.03%含主要六種化合物波羅蜜混合物加0.5%維生素與0.01%的4-己基間苯二酚這兩種條件下，蘋果切片在在24h內(nèi)的抗褐變效果沒有顯著性差別，這一結(jié)果說明含主要六種化合物波羅蜜的混合物在果蔬抗酶促褐變方面有著潛在的應(yīng)用前景。
實施例9含具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的美白乳液配制
將從波羅蜜木材中提取得到的具有酪氨酸酶抑制活性的混合物0.2%，1，3- 丁二醇6.0 %，硬脂酸0.4%，甘油4.0 %，十六醇與十八醇混合物1.2%，聚山梨醇酯601.5 %，甘油硬脂酸1.0%，三乙醇胺0.25%，Ve3.0%，礦物油5.0%，角鯊烯3.0%，山豆油2.0%，山梨坦倍半油酸酯0.6%，羧基乙烯聚合物0.15%，二苯酮-90.05%, a -紅沒藥醇0.5%，維生素B30.5%，玻尿酸1.0%，膠原蛋白2.0%，防腐劑適量，香料適量，去離子水加至100%。
雖然本發(fā)明已以較佳實施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準。
權(quán)利要求
1.一種具有酪氨酸酶抑制活性的混合物，包括二氫桑色素(Dihydromorin)、草大戟素(Steppogenin)、去甲木菠蘿黃銅(Norartocarpetin)、桂木二氫黃素(Artocarpanone)、桂木生黃素(Artocarpesin)和異桂木生黃素(Isoartocarpesin)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種混合物，其特征在于，所含的六種多酚類化合物的含量達 20% 40%。
3.一種制備權(quán)利要求1所述具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn):(I)波羅蜜木材用95%乙醇超聲提取，提取液減壓濃縮至干燥物，稱重；(2)提取物用95%乙醇溶解，過濾；(3)上述過濾液與Amberlite XAD16混合(固體提取物與Amberlite XAD16的的質(zhì)量比例為1:2)，減壓濃縮至干；(4)將上述攪拌物上大孔樹脂，分別用20^,30^,40%, 50%，95%乙醇洗脫，得到各洗脫部分的提取物，減壓回收溶劑，得固體，其中30%至50%洗脫部分固體合并，即具有酪氨酸酶抑制劑活性的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的制備方法，其特征在于，Dihydromorin通過以下步驟獲得:步驟(4)收集30%乙醇洗脫部分6個柱體積,濃縮干燥得樣品，稱重，用200-300目硅膠柱層析分離，氯仿-甲醇(15:1)洗脫，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的制備方法，其特征在于，Steppogenin和Norartocarpetin通過以下步驟獲得:步驟(4)收集40%乙醇洗脫部分6個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，用凝膠柱層析進行分離，甲醇-水(1:1)洗脫，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的制備方法，其特征在于，Artocarpanone通過以下步驟獲得:步驟(4)收集50%乙醇洗脫部分6個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，用硅膠柱層析進行分離，乙酸乙酯-正己烷(1:2)洗脫，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的制備方法，其特征在于，Artocarpesin和Isoartoca rpesin通過以下步驟獲得:步驟(4)收集50%乙醇洗脫部分6個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，用凝膠柱層析進行分離，甲醇-水(1:1)洗脫，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的應(yīng)用，其特征在于用于抑制果蔬的酶促褐變，用于制備美白化妝品，及制備用于預(yù)防和治療黑色素過多導致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種具有酪氨酸酶抑制活性的混合物的制備方法及其用途，包括六種從波羅蜜(Artocarpus heterophyllus)木材中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚類化合物。波羅蜜木材經(jīng)乙醇提取，濃縮，大孔樹脂柱層析分離，收集洗脫液，得到一種主要含有六種化合物的混合物，其特點就是六種化合物的含量達20%～40%。本發(fā)明提供的含六種多酚類化合物的混合物具有較強的酪氨酸酶抑制活性，能夠有效用于果蔬的酶促褐變的抑制，化妝品中的美白，以及用于預(yù)防和治療黑色素過多導致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病癥藥物的各種制劑。
文檔編號A61P17/00GK103211732SQ20131015800
公開日2013年7月24日 申請日期2013年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月28日
發(fā)明者鄭宗平, 王明福 申請人:江南大學