一種復(fù)方丹參提取物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種復(fù)方丹參提取物及其制備方法，所述提取物的制備方法包括以下步驟：取丹參、三七，加醇提取，得醇提液，濃縮，得醇提物；然后藥渣再用水提，得水提液，所得水提取液通過(guò)大孔樹脂精制，所得洗脫液濃縮，加堿水解，濃縮成稠膏或干燥，得水提物；合并所述醇提物和所述水提物即得。本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物中去除了傳統(tǒng)技術(shù)中的糖類、蛋白類等雜質(zhì)成分，同時(shí)大幅提高了藥效成分的含量。本發(fā)明還公開復(fù)方丹參提取物在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】一種復(fù)方丹參提取物及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，尤其是涉及一種復(fù)方丹參提取物及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]隨著生活水平的提高、世界人口老齡化以及發(fā)病群體的年輕化，心腦血管疾病逐年增加，已成為嚴(yán)重危害人類健康和生活質(zhì)量的疾病。心腦血管疾病具有“發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高、并發(fā)癥多”即“四高一多”的特點(diǎn)，目前，我國(guó)心腦血管疾病患者已經(jīng)超過(guò)2.7億人！我國(guó)每年死于心腦血管疾病近300萬(wàn)人，占我國(guó)每年總死亡病因的51%。而幸存下來(lái)的患者75%不同程度喪失勞動(dòng)能力，40%重殘。
[0003]丹參又名赤參，紫丹參，紅根等?？?，微寒。歸心、肝經(jīng)。能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈流量，改善心肌缺血、梗塞和心臟功能，調(diào)節(jié)心律，并能擴(kuò)張外周血管，改善微循環(huán)；能提高機(jī)體耐缺氧能力；有抗凝血，促進(jìn)纖溶，抑制血小板凝聚，抑制血栓形成的作用；能降低血脂，抑制冠脈粥樣硬化形成；能抑制或減輕肝細(xì)胞變性、壞死及炎癥反應(yīng)，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，并有抗纖維化作用；能縮短紅細(xì)胞及血色素的恢復(fù)期，使網(wǎng)織細(xì)胞增多，能促進(jìn)組織的修復(fù)，加速骨折的愈合；有中樞神經(jīng)有抑制作用；有抗腫瘤作用；能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；能降低血糖；對(duì)結(jié)核桿菌等多種細(xì)菌有抑制作用。
[0004]三七具有散瘀止血作用，是血證的常用藥?！锻蹰彼幗狻氛f(shuō)它“和營(yíng)止血，通脈行瘀，行瘀血而斂新血。凡產(chǎn)后、經(jīng)期、跌打、癰腫，一切瘀血皆破；凡吐衄、崩漏、刀傷、箭傷，一切新血皆止?！薄侗静菪戮帯分赋?“三七根，止血之神藥也。無(wú)論上、中、下之血，凡有外越者，一味獨(dú)用亦效。加入于補(bǔ)血補(bǔ)氣藥中則更神。蓋此藥得補(bǔ)而無(wú)沸騰之患，補(bǔ)藥得此而有安靜之體也?！?br> [0005]臨床上，丹參、三七通常聯(lián)合應(yīng)用，治療心血管疾病，上市的藥物有復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參注射液等。但普通片劑、膠囊生產(chǎn)工藝落后，有效成分含量低，無(wú)質(zhì)量控制指標(biāo)，需口服經(jīng)胃腸道吸收，在肝臟發(fā)生首過(guò)效應(yīng)后吸收入血，生物利用度低，吸收慢.并不能適合心絞痛病人的急救之需。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]復(fù)方丹參滴丸是一種起效快、療效好的冠心病治療藥物,臨床上深受患者的歡迎。針對(duì)復(fù)方丹參滴丸的制備工藝，本發(fā)明從提取工藝方面進(jìn)行了深入研究，利用大孔樹脂精制去除了糖類、蛋白質(zhì)等成分，提高了有效成分的含量，降低了服用量。從節(jié)約藥材資源方面，提高了藥材所含有效成分的綜合利用率。
[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方丹參提取物及其制備方法。
[0008]本發(fā)明的另一目的在于提供所述復(fù)方丹參提取物的應(yīng)用。
[0009]根據(jù)本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物，其制備方法包括以下步驟:取丹參、三七，加醇提取，得醇提液，濃縮干燥，得醇提物；然后取所述醇提物的制備中生成的藥渣，再用水提，得水提液，所得水提液通過(guò)大孔樹脂精制，所得洗脫液濃縮，加堿水解，濃縮成稠膏或干燥，得水提物；合并所述醇提物和所述水提物即得。
[0010]優(yōu)選的，所述丹參、三七藥材的重量百分比為丹參20-98%，三七2%_80%。
[0011]根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式之一，所述醇提物的制備方法為:取丹參、三七藥材，加2-8倍量乙醇回流提取1-3次，每次0.5-3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮、干燥，即得。
[0012]優(yōu)選的，所述乙醇為70%_100%的乙醇溶液。
[0013]最優(yōu)選的，所述乙醇為95%的乙醇溶液。
[0014]根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，所述水提取液的制備方法為:取所述醇提物的制備中生成的藥渣，加2-12倍量水回流提取1-3次，每次1-3小時(shí)，過(guò)濾，合并所得濾液，即得所述水提取液。
[0015]根據(jù)本發(fā)明的再一實(shí)施方式，所述洗脫液的制備方法為:取所述提取液，上大孔樹脂柱，依次用水、70%-100%乙醇洗脫，所得乙醇洗脫液即為所述洗脫液。
[0016]優(yōu)選的，所述大孔樹脂柱使用前通過(guò)以下方法預(yù)處理:取大孔樹脂，以70%_100%乙醇濕法裝柱，然后用70%-100%乙醇洗至濾液與水混合不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗至無(wú)醇味。
[0017]更優(yōu)選的，所述大孔樹脂柱使用前通過(guò)以下方法預(yù)處理:取大孔樹脂，以95%乙醇濕法裝柱，然后用95%乙醇洗至濾液與水(I:3)混合不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗至無(wú)醇味。
[0018]最優(yōu)選的，所述大孔樹脂與所述丹參三七的重量比為0.5-2。
[0019]根據(jù)本發(fā)明再一實(shí)施方式，所述水解方法為:取所述洗脫液，減壓濃縮至無(wú)醇味，然后加入堿液，加熱回流，即得。
[0020]優(yōu)選的，所述堿液選自碳酸氫鈉，碳酸鈉，氫氧化鈉，氫氧化鉀的溶液，pH值為7-10。
[0021]更優(yōu)選的，所述堿液為10%碳酸氫鈉溶液。
[0022]根據(jù)本發(fā)明再一實(shí)施方式，所述水解時(shí)間為0.5-8小時(shí)。
[0023]最優(yōu)選的，本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物，其制備方法包括以下步驟:
[0024](I)取丹參、三七藥材，加3倍量95%乙醇提取2小時(shí)，然后再加2倍量95%乙醇提取Ih小時(shí)，合并提取液，60°C減壓濃縮、干燥，即得醇提物；
[0025](2)取醇提藥渣，加5倍量水提取2小時(shí)，然后再加4倍量水提取I小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次所得濾液，即得水提液；
[0026](3)大孔樹脂預(yù)處理:取干AB-8型大孔樹脂的量:生藥量(上述步驟(I)中丹參三七藥材的量)=1:1,以95%乙醇濕法裝柱，然后用95%乙醇洗至濾液與水(I:3)混合不呈白色渾濁即可，再用大量的蒸餾水洗至無(wú)醇味，備用；
[0027](4)取所述水提液，以lBV/hr流速上到已處理好的AB-8大孔樹脂柱(大孔樹脂量:生藥量=1:1)，然后用IBV水以lBV/hr水洗除雜，最后用2.5BV的95%乙醇作為洗脫液，以lBV/hr洗脫，收集洗脫液，備用；
[0028](5)取步驟(4)所得洗脫液，60°C減壓濃縮，回收乙醇至無(wú)醇味(約為藥材量的1/4)，得精制復(fù)方丹參濃縮液。加入10%碳酸氫鈉溶液16.1ml，加熱回流2小時(shí)，得復(fù)方丹參水解液，70°C減壓濃縮至干，即得水提物；
[0029](6)合并步驟(I)所得醇提物與步驟(5)所得水提物即得本發(fā)明所述復(fù)方丹參提取物。
[0030]本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物，作為藥物活性物質(zhì)，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成的所需的制劑。制劑中的藥物活性物質(zhì)，可以是0.1-99.9%，其余為藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物制劑，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋等。
[0031]本發(fā)明的制劑可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括:片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、滴丸劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑。
[0032]優(yōu)選的，本發(fā)明的制劑是口服劑型，如:滴丸劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、丹劑、膏劑等。
[0033]最優(yōu)選的，本發(fā)明的劑型為滴丸劑。
[0034]根據(jù)本發(fā)明，所述滴丸劑是通過(guò)以下方法制備的:取本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物，加適量水溶化，與預(yù)溶化的輔料按照藥輔比為1:2-5混合均勻，加入冰片適量，進(jìn)行化料，化料溫度為60-100°C?；暇鶆蚝?，轉(zhuǎn)移至滴丸機(jī)的滴灌中；藥液滴至0-10°C的液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
[0035]優(yōu)選的，所述輔料為PEG6000。
[0036]優(yōu)選的，藥輔比為1:3。
[0037]優(yōu)選的，化料溫度為80°C。
[0038]最優(yōu)選的，所述滴丸劑是通過(guò)以下方法制備的:取本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物，加適量水溶化，與預(yù)溶化的輔料按照藥輔比為1:3混合均勻，加入冰片適量，進(jìn)行化料，化料溫度為80°C?；暇鶆蚝?，轉(zhuǎn)移至滴丸機(jī)的滴灌中；藥液滴至0-10°C的液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
[0039]根據(jù)本發(fā)明，所述復(fù)方丹參提取物的制備方法，包括以下步驟:取丹參、三七，加醇提取，得醇提液，濃縮干燥，得醇提物；然后取所述醇提物的制備中生成的藥渣，再用水提，得水提液，所得水提液通過(guò)大孔樹脂精制，所得洗脫液濃縮，加堿水解，濃縮成稠膏或干燥，得水提物；合并所述醇提物和所述水提物即得。
[0040]優(yōu)選的，所述丹參、三七藥材的重量百分比為丹參20-98%，三七2%_80%。
[0041]根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式之一，所述醇提物的制備方法為:取丹參、三七藥材，加2-8倍量乙醇回流提取1-3次，每次0.5-3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮、干燥，即得。
[0042]優(yōu)選的，所述乙醇為70%_100%的乙醇溶液。
[0043]最優(yōu)選的，所述乙醇為95%的乙醇溶液。
[0044]根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，所述水提取液的制備方法為:取所述醇提物的制備中生成的藥渣，加2-12倍量水回流提取1-3次，每次1-3小時(shí)，過(guò)濾，合并所得濾液，即得所述水提取液。
[0045]根據(jù)本發(fā)明的再一實(shí)施方式，所述洗脫液的制備方法為:取所述提取液，上大孔樹脂柱，依次用水、70%-100%乙醇洗脫，所得乙醇洗脫液即為所述洗脫液。
[0046]優(yōu)選的，所述大孔樹脂柱使用前通過(guò)以下方法預(yù)處理:取大孔樹脂，以70%_100%乙醇濕法裝柱，然后用70%-100%乙醇洗至濾液與水混合不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗至無(wú)醇味。
[0047]更優(yōu)選的，所述大孔樹脂柱使用前通過(guò)以下方法預(yù)處理:取大孔樹脂，以95%乙醇濕法裝柱，然后用95%乙醇洗至濾液與水(I:3)混合不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗至無(wú)醇味。
[0048]最優(yōu)選的，所述大孔樹脂與所述丹參三七的重量比為0.5-2。
[0049]根據(jù)本發(fā)明再一實(shí)施方式，所述水解方法為:取所述洗脫液，減壓濃縮至無(wú)醇味，然后加入堿液，加熱回流，即得。
[0050]優(yōu)選的，所述堿液選自碳酸氫鈉，碳酸鈉，氫氧化鈉，氫氧化鉀的溶液，pH值為7-10。
[0051]更優(yōu)選的，所述堿液為10%碳酸氫鈉溶液。
[0052]根據(jù)本發(fā)明再一實(shí)施方式，所述水解時(shí)間為0.5-8小時(shí)。
[0053]最優(yōu)選的，本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物的制備方法包括以下步驟:
[0054](I)取丹參、三七藥材，加3倍量95%乙醇提取2小時(shí)，然后再加2倍量95%乙醇提取Ih小時(shí)，合并提取液，60°C減壓濃縮、干燥，即得醇提物；
[0055](2)取醇提藥渣，加5倍量水提取2小時(shí)，然后再加4倍量水提取I小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次所得濾液，即得水提液；
[0056](3)大孔樹脂預(yù)處理:取干AB-8型大孔樹脂的量:生藥量(上述步驟(I)中丹參三七藥材的量)=1:1,以95%乙醇濕法裝柱，然后用95%乙醇洗至濾液與水(I:3)混合不呈白色渾濁即可，再用大量的蒸餾水洗至無(wú)醇味，備用；
[0057](4)取所述水提液，以lBV/hr流速上到已處理好的AB-8大孔樹脂柱(大孔樹脂量:生藥量=1:1)，然后用IBV水以lBV/hr水洗除雜，最后用2.5BV的95%乙醇作為洗脫液，以lBV/hr洗脫，收集洗脫液，備用；
[0058](5)取步驟(4)所得洗脫液，60°C減壓濃縮，回收乙醇至無(wú)醇味(約為藥材量的1/4)，得精制復(fù)方丹參濃縮液。加入10%碳酸氫鈉溶液16.1ml，加熱回流2小時(shí)，得復(fù)方丹參水解液，70°C減壓濃縮至干，即得水提物；
[0059](6)合并步驟(I)所得醇提物與步驟(5)所得水提物即得本發(fā)明所述復(fù)方丹參提取物。
[0060]本發(fā)明的目的還在于提供一種復(fù)方丹參制劑。
[0061]本發(fā)明的復(fù)方丹參制劑，以本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物，作為藥物活性物質(zhì)，需要時(shí)加入其他活性成分和/或藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成的制劑。本發(fā)明的制劑可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括:片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、滴丸劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑。
[0062]優(yōu)選的，本發(fā)明的制劑是口服劑型，如:滴丸劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、丹劑、
膏劑等。
[0063]最優(yōu)選的，本發(fā)明的制劑為滴丸劑。
[0064]根據(jù)本發(fā)明，所述滴丸劑是通過(guò)以下方法制備的:取本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物，加適量水溶化，與預(yù)溶化的輔料按照藥輔比為1:2-5混合均勻，加入冰片適量，進(jìn)行化料，化料溫度為60-100°C?；暇鶆蚝螅D(zhuǎn)移至滴丸機(jī)的滴灌中；藥液滴至0-10°C的液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
[0065]優(yōu)選的，所述輔料為PEG6000。
[0066]優(yōu)選的，藥輔比為1:3。
[0067]優(yōu)選的，化料溫度為80°C。
[0068]最優(yōu)選的，所述滴丸劑是通過(guò)以下方法制備的:取本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物，加適量水溶化，與預(yù)溶化的輔料按照藥輔比為1:3混合均勻，加入冰片適量，進(jìn)行化料，化料溫度為80°C。化料均勻后，轉(zhuǎn)移至滴丸機(jī)的滴灌中；藥液滴至0-10°C的液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
[0069]與未經(jīng)醇提和大孔樹脂精制，而采用傳統(tǒng)水提醇沉的技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢(shì):
[0070]在產(chǎn)品質(zhì)量方面，本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物中去除了糖類、蛋白類等非藥效成分，大幅提高了藥效成分的含量。與按照傳統(tǒng)的水提醇沉工藝制成的復(fù)方丹參提取物進(jìn)行比較，丹參素含量提高83%，三七皂苷含量提高28.6%，丹參酮類成分含量提高了 31.1倍，單糖和二糖的含量由8.6%降低到0%，體現(xiàn)了現(xiàn)代中藥特點(diǎn)，也有利于制劑工藝的控制。
[0071]在服用劑量方面，以本發(fā)明所述復(fù)方丹參提取物為原料制備的精制復(fù)方丹參滴丸在保證藥效的前提下，日服用量下降16.7%。服用更加方便，從而提高了服藥患者的依從性。
[0072]本發(fā)明所述的提取物在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0073]優(yōu)選的，本發(fā)明所述提取物在制備治療心肌缺血引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0074]優(yōu)選的，本發(fā)明所述提取物在制備治療抑制心肌損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0075]試驗(yàn)表明，本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物能顯著緩解大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎所致急性心梗的主要癥狀指標(biāo)，可以用于治療心肌缺血引起的各種疾病，包括心肌梗死、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、房室阻滯、心律失常、冠心病心絞痛等。
[0076]試驗(yàn)表明，本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物能顯著改善中毒性心肌炎的主要癥狀指標(biāo)，可以用于治療心肌炎、心肌梗死等疾病引起的心肌細(xì)胞損傷，抑制心肌炎等疾病引起的心肌缺血。
[0077]本發(fā)明附加的方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0078]本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從下面結(jié)合附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中:
[0079]圖1:本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物的酚酸類成分指紋圖譜。
[0080]圖2:本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物的皂苷類成分指紋圖譜。
[0081]圖3:本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物的糖類成分指紋圖譜。
[0082]圖4:本發(fā)明的復(fù)方丹參提取物的丹參酮類成分圖譜。
[0083]圖5:復(fù)方丹參提取物對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎所致急性心梗的影響試驗(yàn)不同給藥組的心臟切片數(shù)碼照片。
[0084]圖6:復(fù)方丹參提取物對(duì)中毒性心肌炎的影響試驗(yàn)(體內(nèi)中毒性心肌炎模型)中，不同給藥組的心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)電鏡圖，a-f分別為空白對(duì)照組、模型組、卡托普利組、提取物低組、提取物中組、提取物高組。

【具體實(shí)施方式】
[0085]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能解釋為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0086]試驗(yàn)例一復(fù)方丹參提取物工藝流程:
[0087](I)取450g丹參藥材、88g三七藥材，加3倍量95%乙醇提取2小時(shí)，然后再加2倍量95%乙醇提取Ih小時(shí)，合并提取液，60°C減壓濃縮、干燥，即得醇提物；
[0088](2)取醇提藥渣，加5倍量水提取2小時(shí)，然后再加4倍量水提取I小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次所得濾液，即得水提液；
[0089](3)大孔樹脂預(yù)處理:取干AB-8型大孔樹脂的量:生藥量(上述步驟(I)中丹參三七藥材的量)=1:1,以95%乙醇濕法裝柱，然后用95%乙醇洗至濾液與水(I:3)混合不呈白色渾濁即可，再用大量的蒸餾水洗至無(wú)醇味，備用；
[0090](4)取所述水提液，以lBV/hr流速上到已處理好的AB-8大孔樹脂柱(大孔樹脂量:生藥量=1:1)，然后用IBV水以lBV/hr水洗除雜，最后用2.5BV的95%乙醇作為洗脫液，以lBV/hr洗脫，收集洗脫液，備用；
[0091](5)取步驟(4)所得洗脫液，60°C減壓濃縮，回收乙醇至無(wú)醇味(約為藥材量的1/4)，得精制復(fù)方丹參濃縮液。加入10%碳酸氫鈉溶液16.1ml，加熱回流2小時(shí)，得復(fù)方丹參水解液，70°C減壓濃縮至干，即得水提物；
[0092](6)合并步驟(I)所得醇提物與步驟(5)所得水提物即得本發(fā)明所述復(fù)方丹參提取物。
[0093]4、復(fù)方丹參提取物滴丸的制備:
[0094]取復(fù)方丹參提取物，加適量水溶化，與預(yù)溶化的PEG6000按照藥輔比為1:3混合均勻，加入冰片I克，進(jìn)行化料，化料溫度為80°C。化料均勻后，轉(zhuǎn)移至滴丸機(jī)的滴灌中；藥液滴至0-10°C的液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
[0095]試驗(yàn)例二復(fù)方丹參提取物與未經(jīng)醇提及精制樣品的檢測(cè)數(shù)據(jù)及分析
[0096]分別測(cè)定本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物的丹參素、三七皂苷及單糖和二糖的含量，并與按照傳統(tǒng)的水提醇沉工藝制成的復(fù)方丹參提取物進(jìn)行比較，數(shù)據(jù)顯示:復(fù)方丹參提取物的丹參素含量提高83%，三七皂苷含量提高28.6%，單糖和二糖的含量由8.6%降低到0%(見(jiàn)圖1、圖2和圖3)。本發(fā)明所述的復(fù)方丹參提取物中丹參酮的含量提高了 31.1倍(圖4)。按照相同的藥輔比制成制劑，日服用量下降16.7%。
[0097]試驗(yàn)例三復(fù)方丹參提取物藥效學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)
[0098]1.藥物與試劑:
[0099]1.1復(fù)方丹參提取物(按本發(fā)明的實(shí)施例一制備，分為3個(gè)劑量組，分別為提取物低、提取物中、提取物高)。配制方法:稱取樣品，用蒸餾水溶解配制成所需濃度的藥液。
[0100]1.2卡托普利片(陽(yáng)性藥):中美上海施貴寶制藥有限公司，批號(hào):1203032 ;配制方法:
[0101]將卡托普利片研磨成粉末，用蒸餾水溶解配制成所需濃度的藥液。
[0102]1.30.9%氯化鈉注射液:南京小營(yíng)藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào):2012011301。
[0103]1.4注射用鹽酸多柔比星:浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):120101。
[0104]1.5水合氯醛:國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):20100111。
[0105]1.6肌酸激酶(CK)測(cè)定試劑盒，批號(hào):20120713 ;乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)定試劑盒，批號(hào):20120712 ;丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒，批號(hào):20120717 ;超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒，批號(hào):20120709 ;肌酸激酶同工酶(CK-MB)測(cè)定試劑盒，批號(hào):20120720 ;乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)定試劑盒，批號(hào):20120709 ;谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒，批號(hào):20120713。均由南京建成生物工程研究所提供。
[0106]1.7紅四氮唑(TTC)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，批號(hào):F20120308 ;配制方法:稱取TTC粉末，用PBS緩沖液溶解配制成1%的TTC溶液。
[0107]1.8高糖DMEM:美國(guó)GIBCO BRL公司產(chǎn)品。
[0108]1.9小牛血清:由杭州四季青公司提供，_20°C保存。
[0109]1.10胰蛋白酶:由南京sunshine科技有限責(zé)任公司提供。
[0110]1.11 二甲基亞砜:上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):051123。
[0111]1.12青霉素:山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào):B041103。
[0112]1.13鏈霉素:山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào):040601。
[0113]2.主要試劑配制:
[0114]2.1高糖DMEM的配制:1L DMEM培養(yǎng)液中加入NaHC033.7g加青霉素G鈉，0.05g硫酸鏈霉素0.05g,用7.4%NaHC03或lmol/L HCl調(diào)至pH為7.2-7.4。加小牛血清(20%的濃度)用于細(xì)胞培養(yǎng)。
[0115]2.2PBS 緩沖鹽溶液(g/L):NaC18.0g，KC10.20g，Na2HPO4.12Η201.56g，KH2PO40.20g。用 7.4%NaHC03 溶液或 lmol/L HCl 調(diào) pH 值至 7.4。
[0116]2.3消化液:胰酶，AMRESC0公司產(chǎn)品；EDTA_2Na，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。胰酶用PBS配至0.25%，過(guò)濾除菌；EDTA用PBS配至0.02%,高壓滅菌。胰酶、EDTAl:1混合，4°C冰箱保存。
[0117]3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:
[0118]清潔級(jí)SD大鼠2批，230?250g，第一批大鼠由蘇州工業(yè)園區(qū)愛(ài)爾麥特科技有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)=SCXK(蘇)2009-0001，第二批大鼠由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)=SCXK (浙)2008-0033 ;新生I?3天SD大鼠乳鼠，雌雄不限，由南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。
[0119]4.實(shí)驗(yàn)儀器:
[0120]4.1HX-300呼吸機(jī):成都泰盟科技有限公司。
[0121]4.2ECG-6511心電圖機(jī):上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司。
[0122]4.3HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋:國(guó)華電器有限公司產(chǎn)品。
[0123]4.4BS224s型電子天平:北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品。
[0124]4.5BS110S型電子天平:北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品。
[0125]4.6DHG-9053A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。
[0126]4.7LDZ5-2離心機(jī):北京醫(yī)用離心機(jī)廠。
[0127]4.8超凈工作臺(tái):蘇州凈化設(shè)備廠。
[0128]4.9倒置顯微鏡:0LYMPUS公司出廠，型號(hào)CKX41。
[0129]4.10 水套式 CO2 無(wú)菌孵育箱:Thermo Electron Corporat1n, made in USA,F0RMA3111, S/N:304481_7185。
[0130]4.11臺(tái)式低速離心機(jī):上海醫(yī)療器械(集團(tuán))有限公司手術(shù)器械廠，型號(hào):CH80_2。
[0131]4.12恒溫磁力攪拌器:上海司樂(lè)儀器有限公司，型號(hào):85_2。
[0132]4.13電熱鼓風(fēng)干燥箱:上海福瑪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào):DGX-9143B_1。
[0133]4.14立式自控電熱壓力蒸汽滅菌器:上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠，型號(hào):YXQ-LS-50S II。
[0134]4.15電子天平:北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，型號(hào):BS224S。
[0135]4.16B1-RAD Model680 型酶標(biāo)儀:英國(guó) B1-RAD Laboratories Ltd。
[0136]5.復(fù)方丹參提取物對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎所致急性心梗的影響:
[0137]取清潔級(jí)雄性SD大鼠，按體重隨機(jī)分為9組，分別為偽手術(shù)組(蒸餾水)，模型組(蒸餾水)，提取物低(生藥劑量81.15mg/kg)，提取物中(生藥劑量162.3mg/kg)，提取物高(生藥劑量324.6mg/kg),每組10只。各組大鼠每天灌胃給藥一次,連續(xù)給藥7天。給藥容積為0.5ml/100g體重。于末次給藥后lh，腹腔注射水合氯醛300mg/kg麻醉，仰位固定，手術(shù)切口部位先后用碘酒和酒精消毒，之后在第三、四根肋骨開胸，并進(jìn)行人工呼吸，暴露心臟，用醫(yī)用無(wú)損傷縫合針5/0結(jié)扎冠脈左前降支，迅速關(guān)閉胸腔并常規(guī)消毒，手術(shù)操作過(guò)程不超過(guò)30s，術(shù)后繼續(xù)人工呼吸I?2min，肌注(1.m)20萬(wàn)單位青霉素預(yù)防感染。手術(shù)開始前5min、結(jié)扎后Os、lmin、5min、15min、lh、4h分別記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，考察心電圖J點(diǎn)的變化。
[0138]實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即取出心臟，用生理鹽水洗去血液，剪去心房及心底部血管，稱心室重量，將心室沿房室溝平均切成5片放入1%TTC溶液內(nèi)，在37°C恒溫水浴染色5min，取出后首先拍數(shù)碼照片，而后分離未染色部分(即梗塞部分)并稱重計(jì)算其占整個(gè)心室重量的百分率(心肌梗塞百分率)，并與缺血模型組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。計(jì)算梗塞百分率公式如下:
[0139]梗塞百分率(％)=蒼白區(qū)重量/ (心室重量)X100%
[0140]取心臟之前，對(duì)大鼠進(jìn)行眼眶靜脈叢取血I?2ml, 2000rpm速度離心25min分離出血清，按試劑盒方法測(cè)定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量或活性。結(jié)果見(jiàn)表1、表2、表3及圖5。
[0141]表1.對(duì)冠脈結(jié)扎所致心肌缺血大鼠J點(diǎn)變化(mv)的影響(x±s) ( n=7)
[0142]
組則 7 ι； 手術(shù)前 -
(m8/k8!IibIb5minISminIh4h
獅-0.110±0.0350_242rf.045‘+—+0.277=0.()72^ (O30±0.WWT 0.288±0Λ7(Γ ‘?).260±0.07(Τ'
從取物AX1.15-0.123=0.01!(U24絲.恥I + ++^ (U80±0.卿U.244±H.0?I.""
提取物中KO-d.l!9±?.(l!2?'277±" (W...0.24?±(ι.0?5": * ?.220土ft.fWTft.16te().()4<)%".*
提取物高324.6-0.085=().()160.22 Iii UWl "'?.25%(ωΦΓ *(UM±W.W(r * IU70±(WI5X'".*
[0143]注:#P〈0.05，##P〈0.01，造模后各時(shí)間點(diǎn)與造模前進(jìn)行自身前后比較；aP〈0.05， P〈0.0I，各組同時(shí)間點(diǎn)與模型組進(jìn)行組間比較。
[0144]由表I可見(jiàn)，各手術(shù)組大鼠冠脈結(jié)扎手術(shù)后心電圖J點(diǎn)顯著高于手術(shù)前(p〈0.01)，說(shuō)明造模成功。與模型組比較，術(shù)后15min，提取物中、提取物高組能顯著性抑制J點(diǎn)的抬高(p〈0.05)，術(shù)后Ih，提取物高組能顯著性抑制J點(diǎn)的抬高(p〈0.05)，術(shù)后4h，提取物中、提取物高組能顯著性抑制J點(diǎn)的抬高(P〈0.05)。其他各組間比較均無(wú)顯著性差異。
[0145]表2.對(duì)大鼠冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞的影響n=7)
[0146]

【權(quán)利要求】
1.一種復(fù)方丹參提取物，其特征在于，所述提取物的制備方法包括以下步驟:取丹參、三七，加醇提取，得醇提液，濃縮干燥，得醇提物；然后取所述醇提物的制備中生成的藥渣，再用水提，得水提液，所得水提液通過(guò)大孔樹脂精制，所得洗脫液濃縮，加堿水解，濃縮成稠膏或干燥，得水提物；合并所述醇提物和所述水提物即得。
2.如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述醇提物的制備方法為:取丹參、三七藥材，加2-8倍量乙醇回流提取1-3次，每次0.5-3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮、干燥，即得。
3.如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述水提取液的制備方法為:取所述醇提物的制備中生成的藥渣，加2-12倍量水回流提取1-3次，每次1-3小時(shí)，過(guò)濾，合并所得濾液，即得所述水提取液。
4.如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述洗脫液的制備方法為:取所述提取液，上大孔樹脂柱，依次用水、70%-100%乙醇洗脫，所得乙醇洗脫液即為所述洗脫液。
5.如權(quán)利要求4所述的提取物，其特征在于，所述大孔樹脂柱使用前通過(guò)以下方法預(yù)處理:取大孔樹脂，以70%-100%乙醇濕法裝柱，然后用70%-100%乙醇洗至濾液與水混合不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗至無(wú)醇味。
6.如權(quán)利要求5所述的提取物，其特征在于，所述大孔樹脂與所述丹參三七的重量比為 0.5-2。
7.如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述水解方法為:取所述洗脫液，減壓濃縮至無(wú)醇味，然后加入堿液，加熱回流，即得。
8.如權(quán)利要求7所述的提取物，其特征在于，所述堿液選自碳酸氫鈉，碳酸鈉，氫氧化鈉，氫氧化鉀的溶液，PH值為7-10。
9.如權(quán)利要求7所述的提取物，其特征在于，所述水解時(shí)間為0.5-8小時(shí)。
10.如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:取丹參、三七，加醇提取，得醇提液，濃縮干燥，得醇提物；然后取所述醇提物的制備中生成的藥渣，再用水提，得水提液，所得水提取液通過(guò)大孔樹脂精制，所得洗脫液濃縮，加堿水解，濃縮成稠膏或干燥，得水提物；合并所述醇提物和所述水提物即得。
11.一種復(fù)方丹參制劑，其特征在于，以權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的復(fù)方丹參取物，作為藥物活性物質(zhì)，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)成的制劑。
12.如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的提取物在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P9/10GK104161798SQ201310183285
【公開日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2013年5月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月17日
【發(fā)明者】徐波, 牛濤, 陳紅, 劉巖 申請(qǐng)人:天津天士力現(xiàn)代中藥資源有限公司