治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，其制備方法為：先從甘草廢渣中用微波輔助超生提取出甘草查爾酮，并進行濃縮、精制；再將甘草查爾酮制備成微囊劑。該微囊劑原料來源經(jīng)濟，制作工藝簡單、成本較低，具有良好的抗菌消炎作用，可用于治療家畜乳房炎、子宮內(nèi)膜炎、豬鏈球菌病及家畜的呼吸系統(tǒng)等方面的疾病。
【專利說明】治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于獸藥領(lǐng)域，尤其是一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]甘草化學成分包括三萜類化合物，包括甘草根和甘草甜素；黃酮類化合物，包括黃酮類、二氫黃酮類、黃銅醇類、查爾酮類和雙黃酮蕾，其中以二氫黃酮類和查爾酮類含量較聞。
[0003]甘草查爾酮是甘草的另一種主要有效成分，具有良好的抗炎，抗菌作用。有研究表明，甘草查爾酮能明顯降低顯著降低促炎因子TNF-α、IL-1 β和IL_6的分泌，說明該藥物從一定程度上能夠抑制RAW264.7巨噬細胞分泌促炎因子，對LPS引起的炎癥有一定的抑制作用。此外，應用肉湯微量稀釋法測定甘草查爾酮對金黃色葡萄球菌的抗菌活性，并通過溶血試驗、Westernblot分析和熒光定量PCR試驗考察亞抑菌濃度的甘草查爾酮對金葡菌-溶血素表達的影響。結(jié)果顯示，甘草查爾酮對7株金葡菌的最低抑菌質(zhì)量濃度為28mg/L亞抑菌濃度的甘草查爾酮能顯著降低金葡菌-溶血素的表達且呈現(xiàn)劑量依賴性。
[0004]長期以來，工業(yè)化生產(chǎn)只對甘草中的甘草苷和甘草酸作為主要有效成分進行提取，分離工藝比較成熟。而對甘草查爾酮的提取及其制劑的研究的較少。
[0005]二〇一〇年版《中華人民共和國獸藥典》二部收載有甘草的流浸膏和浸膏兩種提取物，前者以甘草酸，后者以甘草酸和甘草苷作為有效成分進行含量測定。
[0006]甘草浸膏提取工藝為水提后沉淀，取上清液濃縮，烘干得甘草浸膏粉。浸膏粉以甘草苷和甘草酸為主要有效成分進行含量測定。此工藝提取物后的藥渣一般都會當成廢物，舍棄不用。為了更加合理地利用有限的甘草資源，使甘草最大限度地發(fā)揮其藥用價值，本課題組從甘草廢渣中提取甘草查爾酮并將其制備成微囊劑。
[0007]課題組首先采用高效液相色譜法對甘草藥材中的甘草查爾酮的進行含量測定，測定甘草查爾酮的色譜條件為:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(70: 30)為流動相，檢測波長為276nm，柱溫30°C，流速1.0mL.π?η_1。測得甘草查爾酮的含量為0.5%。之后按同樣的提取方法測得甘草藥渣中甘草查爾酮的含量為0.47%，由此可見，提取甘草浸膏后的甘草殘渣中甘草查爾酮的含量損失不嚴重，可作為提取甘草查爾酮的藥材。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑，該中藥微囊劑起效速度快、無毒副作用、無藥物殘留，使用方便，節(jié)約生產(chǎn)成本，生物利用度高。
[0009]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法。
[0010]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0011]一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，其制備方法的步驟如下:
[0012](I)從甘草廢渣中提取甘草查爾酮:
[0013]a、將甘草廢渣加入1.5-10倍有機溶劑浸泡0.5_3h后加入濃度為45% -75%等重量的乙醇溶液，微波處理3次，即得到微波輔助提取液，備用；
[0014]b、向上述步驟(a)所得微波輔助提取液中加入3-15倍濃度為45% -75%乙醇溶液，靜置15-60min后用超聲儀提取兩次，15?40min/次，即得到超聲儀提取液，備用；
[0015]C、將上述步驟(b)所得超聲儀提取液減壓濃縮，用2-10倍有機溶劑連續(xù)萃取后再進行減壓濃縮，即得到濃縮物，備用；
[0016]d、將上述步驟(C)所得濃縮物進行大孔樹脂柱洗脫分離，用高效液相色譜儀或薄層層析法檢查流出液，根據(jù)檢測數(shù)據(jù)收集含甘草查爾酮的流出液，備用；
[0017]e、將上述步驟(d)所收集的流出液用有機溶劑進行結(jié)晶，即得到高純度甘草查爾酮。
[0018](2)甘草查爾酮微囊劑的制備:
[0019]a、將上述步驟(I)所得高純度甘草查爾酮在研缽中研細后加入明膠溶液，水浴上加熱，繼續(xù)研磨成混懸液，備用；
[0020]b、取液體石蠟水浴加熱到同一溫度，加入吐溫-80，將上述步驟(a)所得混懸液倒入，中速攪拌5-10min，看到圓球狀微囊形成后立即放入冰水浴中冷卻，且不斷攪拌10-15min,再加入5°C異丙醇脫水，抽濾，再將微囊放到37%甲醛中固化30_60min，抽濾，用水洗至無甲醛味后置恒溫烘箱中45°C左右干燥1-2小時即得治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑。
[0021]而且，所述的甘草廢渣為甘草浸膏或流浸膏提取物后的藥渣。
[0022]而且，所述的有機溶劑為氯仿、甲醇、丙酮、乙醇、乙醚、三氯乙烷、異丙醇等其中的一種或兩種以上混合物。
[0023]而且，所述的超聲儀的頻率為20Hz?50Hz，溫度控制為20°C。
[0024]而且，所述的微波處理采用的參數(shù)為微波功率340?510W，壓力0.lOMPa，恒壓時間I?5min。
[0025]而且，所述的治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，該中藥微囊劑的成分中甘草查爾酮、明膠、液體石蠟、吐溫-80的重量比為1: 10: 2: 0.1。
[0026]本發(fā)明的優(yōu)點及有益效果是:
[0027]1、本發(fā)明能充分利用甘草浸膏提取后的藥物殘渣，原料利用率高。
[0028]2、本發(fā)明的囊材無毒無刺激、化學性質(zhì)穩(wěn)定、具有適宜的釋藥性、有一定的強度、有合格的粘度。
[0029]3、本發(fā)明具有良好的抗菌消炎作用，將其用于治療家畜乳房炎、子宮內(nèi)膜炎、豬鏈球菌病及家畜的呼吸系統(tǒng)等方面的疾病。
【具體實施方式】
[0030]本發(fā)明通過以下實施例進一步詳述。需要說明的是:下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。
[0031]實施例1
[0032]一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，其制備方法的步驟如下:
[0033](I)從甘草廢渣中提取甘草查爾酮:
[0034]a、將甘草廢渣加入1.5倍有機溶劑浸泡0.5h后加入濃度為45%等重量的乙醇溶液，微波處理3次，即得到微波輔助提取液，備用；
[0035]b、向上述步驟(a)所得微波輔助提取液中加入3倍濃度為45%乙醇溶液，靜置15min后用超聲儀提取兩次，15min/次，即得到超聲儀提取液，備用；
[0036]C、將上述步驟(b)所得超聲儀提取液減壓濃縮，用2倍有機溶劑連續(xù)萃取后再進行減壓濃縮，即得到濃縮物，備用；
[0037]d、將上述步驟(C)所得濃縮物進行大孔樹脂柱洗脫分離，用高效液相色譜儀或薄層層析法檢查流出液，根據(jù)檢測數(shù)據(jù)收集含甘草查爾酮的流出液，備用；
[0038]e、將上述步驟(d)所收集的流出液用有機溶劑進行結(jié)晶，即得到高純度甘草查爾酮。
[0039](2)甘草查爾酮微囊劑的制備:
[0040]a、將上述步驟(I)所得高純度甘草查爾酮在研缽中研細后加入明膠溶液，水浴上加熱，繼續(xù)研磨成混懸液，備用；
[0041]b、取液體石蠟水浴加熱到同一溫度，加入吐溫-80，將上述步驟(a)所得混懸液倒入，中速攪拌5min，看到圓球狀微囊形成后立即放入冰水浴中冷卻，且不斷攪拌lOmin，再加入5°C異丙醇脫水，抽濾，再將微囊放到37%甲醛中固化30min，抽濾，用水洗至無甲醛味后置恒溫烘箱中45°C左右干燥I小時即得治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑。
[0042]實施例2
[0043]一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，其制備方法的步驟如下:
[0044](I)從甘草廢渣中提取甘草查爾酮:
[0045]a、將甘草廢渣加入5倍有機溶劑浸泡2h后加入濃度為55%等重量的乙醇溶液，微波處理3次，即得到微波輔助提取液，備用；
[0046]b、向上述步驟(a)所得微波輔助提取液中加入10倍濃度為55%乙醇溶液，靜置40min后用超聲儀提取兩次，35min/次，即得到超聲儀提取液，備用；
[0047]C、將上述步驟(b)所得超聲儀提取液減壓濃縮，用6倍有機溶劑連續(xù)萃取后再進行減壓濃縮，即得到濃縮物，備用；
[0048]d、將上述步驟(C)所得濃縮物進行大孔樹脂柱洗脫分離，用高效液相色譜儀或薄層層析法檢查流出液，根據(jù)檢測數(shù)據(jù)收集含甘草查爾酮的流出液，備用；
[0049]e、將上述步驟(d)所收集的流出液用有機溶劑進行結(jié)晶，即得到高純度甘草查爾酮。
[0050](2)甘草查爾酮微囊劑的制備:
[0051]a、將上述步驟(I)所得高純度甘草查爾酮在研缽中研細后加入明膠溶液，水浴上加熱，繼續(xù)研磨成混懸液，備用；
[0052]b、取液體石蠟水浴加熱到同一溫度，加入吐溫-80，將上述步驟(a)所得混懸液倒入，中速攪拌8min，看到圓球狀微囊形成后立即放入冰水浴中冷卻，且不斷攪拌13min，再加入5°C異丙醇脫水，抽濾，再將微囊放到37%甲醛中固化40min，抽濾，用水洗至無甲醛味后置恒溫烘箱中45°C左右干燥1.5小時即得治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑。
[0053]實施例3
[0054]一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，其制備方法的步驟如下:
[0055](I)從甘草廢渣中提取甘草查爾酮:
[0056]a、將甘草廢渣加入10倍有機溶劑浸泡3h后加入濃度為75%等重量的乙醇溶液，微波處理3次，即得到微波輔助提取液，備用；
[0057]b、向上述步驟(a)所得微波輔助提取液中加入15倍濃度為75%乙醇溶液，靜置60min后用超聲儀提取兩次，40min/次，即得到超聲儀提取液，備用；
[0058]C、將上述步驟(b)所得超聲儀提取液減壓濃縮，用10倍有機溶劑連續(xù)萃取后再進行減壓濃縮，即得到濃縮物，備用；
[0059]d、將上述步驟(C)所得濃縮物進行大孔樹脂柱洗脫分離，用高效液相色譜儀或薄層層析法檢查流出液，根據(jù)檢測數(shù)據(jù)收集含甘草查爾酮的流出液，備用；
[0060]e、將上述步驟(d)所收集的流出液用有機溶劑進行結(jié)晶，即得到高純度甘草查爾酮。
[0061](2)甘草查爾酮微囊劑的制備:
[0062]a、將上述步驟(1)所得高純度甘草查爾酮在研缽中研細后加入明膠溶液，水浴上加熱，繼續(xù)研磨成混懸液，備用；
[0063]b、取液體石蠟水浴加熱到同一溫度，加入吐溫-80，將上述步驟(a)所得混懸液倒入，中速攪拌lOmin，看到圓球狀微囊形成后立即放入冰水浴中冷卻，且不斷攪拌15min，再加入5°C異丙醇脫水，抽濾，再將微囊放到37%甲醛中固化60min，抽濾，用水洗至無甲醛味后置恒溫烘箱中45°C左右干燥2小時即得治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑。
[0064]臨床應用試驗一
[0065]2012年于湖北隨州某大型牛場選取60頭患有不同程度乳房炎的奶牛，相同飼養(yǎng)條件下，隨機平均分為4組，每組15頭，各組處理如下表。
[0066]本發(fā)明對奶牛乳房炎的治療效果:
[0067]表1本發(fā)明對臨床型奶牛乳房炎的治療效果
[0068]
【權(quán)利要求】
1.一種治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，其特征在于:該制備方法的步驟如下: (1)從甘草廢渣中提取甘草查爾酮: a、將甘草廢渣加入1.5-10倍有機溶劑浸泡0.5-3h后加入濃度為45% -75%等重量的乙醇溶液，微波處理3次，即得到微波輔助提取液，備用； b、向上述步驟(a)所得微波輔助提取液中加入3-15倍濃度為45%-75%乙醇溶液，靜置15-60min后用超聲儀提取兩次，15?40min/次，即得到超聲儀提取液，備用； C、將上述步驟(b)所得超聲儀提取液減壓濃縮，用2-10倍有機溶劑連續(xù)萃取后再進行減壓濃縮，即得到濃縮物，備用； d、將上述步驟(C)所得濃縮物進行大孔樹脂柱洗脫分離，用高效液相色譜儀或薄層層析法檢查流出液，根據(jù)檢測數(shù)據(jù)收集含甘草查爾酮的流出液，備用； e、將上述步驟(d)所收集的流出液用有機溶劑進行結(jié)晶，即得到高純度甘草查爾酮。 (2)甘草查爾酮微囊劑的制備: a、將上述步驟(I)所得高純度甘草查爾酮在研缽中研細后加入明膠溶液，水浴上加熱，繼續(xù)研磨成混懸液，備用； b、取液體石蠟水浴加熱到同一溫度，加入吐溫-80，將上述步驟(a)所得混懸液倒入，中速攪拌5-10min，看到圓球狀微囊形成后立即放入冰水浴中冷卻，且不斷攪拌10_15min，再加入5°C異丙醇脫水，抽濾，再將微囊放到37%甲醛中固化30-60min，抽濾，用水洗至無甲醛味后置恒溫烘箱中45°C左右干燥1-2小時即得治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草廢渣為甘草浸膏或流浸膏提取物后的藥渣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的有機溶劑為氯仿、甲醇、丙酮、乙醇、乙醚、三氯乙烷、異丙醇等其中的一種或兩種以上混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲儀的頻率為20Hz?50Hz，溫度控制為20°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微波處理采用的參數(shù)為微波功率340?510W，壓力0.1OMPa,恒壓時間I?5min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療奶牛乳房炎的中藥微囊劑及其制備方法，該中藥微囊劑的成分中甘草查爾酮、明膠、液體石蠟、吐溫-80的重量比為1: 10: 2: 0.1。
【文檔編號】A61P31/04GK104173319SQ201310198333
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2013年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月27日
【發(fā)明者】陳慶忠, 安同偉, 李迎梅 申請人:天津中敖生物科技有限公司