專利名稱：一種降血糖藥物組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中醫(yī)制藥技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供一種降血糖藥物組合物及制備方法。經(jīng)多次體外蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB抑制實(shí)驗(yàn)表明，該組合物具有明顯的抑制PTPlB活性，可在制備糖尿病、肥胖癥及并發(fā)癥藥物應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前臨床上常將糖尿病分為胰島素依賴型(IDDM，I型糖尿病)和非胰島素依賴型(NIDDM, II型糖尿病)兩類，其中II型糖尿病在糖尿病中占90%。WHO預(yù)計(jì)，由于人口老齡化、肥胖、不健康的飲食以及缺乏運(yùn)動(dòng)的生活方式，到2025年，糖尿病患者的數(shù)目將由1995年的1.35億上升為3億。II型糖尿病的特征是胰島素敏感組織如骨骼肌、肝、脂肪組織對(duì)胰島素作用的抵抗。雖然其具體機(jī)制尚不清楚，但胰島素信號(hào)在其傳導(dǎo)通路中的減弱甚至阻斷必定是直接關(guān)系。PTPases在 胰島素信號(hào)通路中多個(gè)環(huán)節(jié)起作用，如將自身磷酸活化的IR去磷酸化，從而降低受體激酶活性；或?qū)RS-l、IRS_2、Shc等胰島素受體的底物中蛋白酪氨酸殘基至去磷酸化，從而負(fù)調(diào)控胰島素作用受體后通路。特定PTPases和胰島素通路中的酪氨酸激酶間的酶活性不平衡可能是引起II型糖尿病胰島素抵抗的原因。因此，通過(guò)尋找選擇性作用于該通路中PTPases的抑制劑抑制其活性，加強(qiáng)和延長(zhǎng)胰島素信號(hào)，成為越來(lái)越受重視的治療II型糖尿病的新途徑。PTPlB選擇性抑制劑的研究取得了一定的進(jìn)展，但大多研究局限于肽類和類肽化合物，例比如根據(jù)PTPIB去磷酸化的底物序列設(shè)計(jì)的抑制劑EEDE (F2PMP ) M、G1U-F2PMP-F2PMP，雖然這些肽類化合物具有較強(qiáng)高的選擇性和較強(qiáng)的抑制活性，但它們的不易穿透細(xì)胞膜和其肽類磷酸結(jié)構(gòu)使很難成為藥物候選化合物。最近，在非肽類PTPlB抑制劑的報(bào)道中2-羧甲氧基苯甲酸類化合物對(duì)PTPlB有很強(qiáng)的抑制作用，更重要的事，其中
(2S)-2- [4^ - (2-芐基-苯并呋喃)-3-聯(lián)苯-4-氧]-3-苯基-丙酸化合物不僅對(duì)PTPlB有很強(qiáng)的選擇抑制性，還對(duì)降低ob/ob小鼠血漿中的葡萄糖和胰島素水平有顯著作用。這是第一例從藥理學(xué)上直接證明PTPlB抑制劑具有抗糖尿病活性的證據(jù)[Malamas，M.S.etal.J.Med.Chem.2000，43，1293—1310]。本發(fā)明涉及的人參屬于五加科,主要生長(zhǎng)在東亞,特別是寒冷地區(qū)，是亞洲常見(jiàn)藥材，用于愈后恢復(fù)、增強(qiáng)體力、調(diào)節(jié)荷爾蒙、降低血糖和控制血壓、控制肝指數(shù)和肝功能保健等。本發(fā)明涉及的刺五加Acanthopanacis五加科五加屬，主要生長(zhǎng)在山坡林中及路旁灌叢中；藥圃常有栽培。分布于華中、華東、華南和西南。主要用于抗腫瘤、抗疲勞、降低全血粘度、防止動(dòng)脈粥樣硬化形成等作用。經(jīng)檢索未見(jiàn)用人參和刺五加活性成分制備降血糖藥物的文獻(xiàn)報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的一種血糖藥物組合物，以人參和刺五加醇提活性成分，其目的是用于治療糖尿病、肥胖癥及并發(fā)癥疾病。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供如上限定的藥物組合物在生產(chǎn)用于抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB (PTPlB)的抑制劑和胰島素增敏劑、治療各種糖尿病、肥胖癥及其它由此引發(fā)的并發(fā)癥。本發(fā)明公開(kāi)的一種血糖藥物組合物，主要由以下藥物按重量份數(shù)比制成的:
人參醇提物4(Γ60、刺五加醇提物6(Γ40。本發(fā)明所述的藥物組合物的制備方法，包括以下步驟:
將人參加廣2倍量的50%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得人參醇提物；將人參醇提物經(jīng)過(guò)150 μ m反相色譜，用以甲醇/水(V/V，0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集的分離組分利用反相薄層層析檢測(cè)，成份相同的分離組分合并、濃縮后得到Fl至FlO十個(gè)分離組分。從Fl-FlO組分中篩選出抑制PTPlB活性最強(qiáng)的F2(IC5Q=12.5Pg/L)組份再經(jīng)HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V，0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V，3:7)的分離組分、濃縮后得到人參活性組分。將刺五加加f 2倍的75%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得刺五加醇提物；將刺五加醇提·物溶于1.0-0.6L水中，成混懸液后用3.0-2.0L正己烷萃取，收集水層萃取液、減壓濃縮成浸膏。水層浸膏再利用HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V, 0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V，4:6)的分離組分、濃縮后得到刺五加活性組分；
將人參活性組分和刺五加活性組分按比例混合后，加入一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑混合。本發(fā)明所述的降血糖藥物組合物在預(yù)防糖尿病、肥胖癥及其并發(fā)癥藥物中應(yīng)用。藥理學(xué)研究表明，本發(fā)明的藥物組合物的兩種基本活性成分具有明顯地協(xié)同抑制PTPlB活性和降血糖作用。因此，本發(fā)明的藥物組合物的抑制PTPlB活性及降血糖作用顯著優(yōu)于單獨(dú)的人參和刺五加的降血糖作用。本發(fā)明藥物組合物不僅可用于蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB (PTPlB)的抑制劑和胰島素增敏劑、治療各種糖尿病、肥胖癥及其它由此引發(fā)的并發(fā)癥。另外，也可以使用蒸餾水、注射用水、等滲氯化鈉溶液活者低濃度(如1-100 mM)磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)作為載體加入助溶劑制成口服給藥的溶液劑和懸浮劑。本發(fā)明的積極效果在于:藥物組合物的兩種基本活性成分能夠協(xié)同抑制PTPlB活性和降血糖作用，并且抑制PTPlB活性及降血糖作用顯著優(yōu)于單獨(dú)的人參和刺五加的降血糖作用。本發(fā)明藥物組合物不僅可用于蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB (PTPlB)的抑制劑和胰島素增敏劑、治療各種糖尿病、肥胖癥及其它由此引發(fā)的并發(fā)癥。


圖1:為本發(fā)明提取物分別對(duì)STZ致高血糖大鼠胰島素敏感性的影響。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步舉例說(shuō)明，而不是限制本發(fā)明。在不違背本發(fā)明的精神和原則的前提下，對(duì)發(fā)明個(gè)別技術(shù)步驟進(jìn)行的任何改動(dòng)和改變都將落入本發(fā)明待批權(quán)利要求范圍。實(shí)施例1:
稱取人參干燥品300g，加入f 2倍量的50%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得人參醇提物；將人參醇提物經(jīng)過(guò)150 μ m反相色譜，用以甲醇/水(V/V, 0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集的分離組分利用反相薄層層析檢測(cè)，成份相同的分離組分合并、濃縮后得到Fl至FlO十個(gè)分離組分。從Fl-FlO組分中篩選出抑制PTPlB活性最強(qiáng)的F2(IC5Q=12.5Pg/L)組分再經(jīng)HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V，0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V, 3:7)的分離組分、濃縮后得到人參活性組分。稱取刺五加300g，加入f 2倍的75%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得刺五加醇提物；將刺五加醇提物溶于1.0-0.6L水中，成混懸液后用
3.0-2.0L正己烷萃取，收集水層萃取液、減壓濃縮成浸膏。水層浸膏再利用HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V，0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V，4:6)的分離組分、濃縮后得到刺五加活性組分。實(shí)施例2
稱取人參干燥品400g，加入f 2倍量的50%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得人參醇提物；將人參醇提物經(jīng)過(guò)150 μ m反相色譜，用以甲醇/水(V/V, 0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集的分離組分利用反相薄層層析檢測(cè)，成份相同的分離組分合并、濃縮后得到Fl至FlO十個(gè)分離組分。從Fl-FlO組分中篩選出抑制PTPlB活性最強(qiáng)的F2 (IC5Q=12.5Pg/L)再經(jīng)HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V, 0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V，3:7)的分離組分、濃縮后得到人參活性組分。稱取刺五加600g，加入f 2倍的75%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得刺五加醇提物；將刺五加醇提物溶于1.0-0.6L水中，成混懸液后用
3.0-2.0L正己烷萃取，收集水層萃取液、減壓濃縮成浸膏。水層浸膏再利用HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V，0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V，4:6)的分離組分、濃縮后得到刺五加活性組分。；
實(shí)施例3可以按照藥劑學(xué)的常規(guī)方法，將實(shí)施例1或2制得的干粉，按人參醇提物4(Γ60、刺五加醇提物6(Γ40的比例，加入一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑混合，制備成各種適用于經(jīng)胃腸道途徑給藥的各種常規(guī)劑型。如，按照常規(guī)方法將如上制得的干粉無(wú)菌裝入膠囊，既得到膠囊劑型的本發(fā)明藥物組成物。可能按照制藥工業(yè)中已知的方法將本發(fā)明的藥物組合物制成片劑、膠囊劑、丸劑、粉末劑、栓劑以及溶液劑和懸浮劑。其中優(yōu)先適用于胃腸道給藥的膠囊劑和片劑。在制備適用于口服給藥劑型時(shí)，可以使用蔗糖、乳糖、半乳糖、玉米淀粉、明膠、微晶纖維素、羧甲基纖維素等作為載體或賦形劑。以下試驗(yàn)例表明本發(fā)明藥物的藥理活性:
試驗(yàn)例I
本發(fā)明藥物組合物抑制PTPlB活性試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)方法:用于篩選的蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTPlB是從大腸桿菌中表達(dá)并純化的GST融合蛋白。采用紫外底物ΡΝΡΡ，觀察不同濃度對(duì)重組酶的活性抑制，以初步評(píng)價(jià)化合物的藥用效果。PTPlB水解底物/7ΝΡΡ的磷脂得到的產(chǎn)物在410nm處有很強(qiáng)的光吸收。因此可以直接檢測(cè)410nm處光吸收的變化以觀察酶的活性變化以及化合物對(duì)其的抑制情況。陽(yáng)性對(duì)
照正釩酸鈉的IC50為2.0 uM。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:_
權(quán)利要求
1.一種降血糖藥物組合物，主要由以下藥物按重量份數(shù)比制成的: 人參醇提物4(Γ60、刺五加醇提物6(Γ40。
2.根據(jù)要求I的降血糖藥物組合物的制備方法，包括以下步驟: 稱取人參干燥品300g，加入f 2倍量的50%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得人參醇提物；將人參醇提物經(jīng)過(guò)150 μ m反相色譜，用以甲醇/水(V/V, 0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集的分離組分利用反相薄層層析檢測(cè)，成份相同的分離組分合并、濃縮后得到Fl至FlO十個(gè)分離組分；從Fl-FlO組分中篩選出抑制PTPlB活性最強(qiáng)的F2 (IC50=12.5Pg/L)組分經(jīng)HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V, 0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V，3:7)的分離組分、濃縮后得到人參活性組分；稱取刺五加300g，加入f 2倍的75%乙醇浸泡I小時(shí)，利用超聲波提取I至3小時(shí)，抽濾并收集濾液；濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，收集濃縮液，放涼，加入2-3倍量水并攪拌，常溫靜置24小時(shí)，析出沉淀，過(guò)濾或離心取沉淀，沉淀物置于表面皿中加熱，除去乙醇和水，直至無(wú)醇味，即得刺五加醇提物；將刺五加醇提物溶于1.0-0.6L水中，成混懸液后用3.0-2.0L正己烷萃取，收集水層萃取液、減壓濃縮成浸膏；水層浸膏再利用HP-20大孔色譜，用以甲醇/水(V/V, 0:10-10:0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇/水(V/V，4:6)的分離組分、濃縮后得到刺五加活性組分； 將人參和刺五加活性物按比例混合后，加入一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑混合。
3.權(quán)利要求1所述的降血糖藥物組合物在預(yù)防糖尿病、肥胖癥及其并發(fā)癥藥物中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種降血糖藥物組合物及制備方法，將人參活性組分和刺五加活性組分按比例混合后，加入一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑混合。本發(fā)明所述的降血糖藥物組合物在預(yù)防糖尿病、肥胖癥及其并發(fā)癥藥物中應(yīng)用。本發(fā)明藥物組合物不僅可用于蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)的抑制劑和胰島素增敏劑、治療各種糖尿病、肥胖癥及其它由此引發(fā)的并發(fā)癥。
文檔編號(hào)A61P3/10GK103239493SQ20131019938
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月27日
發(fā)明者崔龍, 杜培革, 王喜斌, 李娜, 李佳琳, 張南, 馬坤 申請(qǐng)人:北華大學(xué)