山慈菇有效部位在治療老年癡呆的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及到從中藥山慈菇（植物來源于獨蒜蘭和云南獨蒜蘭）中提取的有效部位，其制備方法，及其在治療老年性癡呆和血管性癡呆的用途。經動物試驗證實，該有效部位能夠明顯改善東莨菪堿致小鼠膽堿能損傷擬癡呆動物模型的學習記憶障礙；可以提高雙側頸總動脈結扎引起血管性癡呆大鼠對新物體的識別能力，改善血管性癡呆引起的物體識別障礙和空間學習記憶障礙；具有抗氧化能力，可以通過減少氧化損傷反應從而達到延緩神經細胞退行性變化的作用。
【專利說明】山慈菇有效部位在治療老年癡呆的用途

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及從中藥山慈菇(植物來源于獨蒜蘭和云南獨蒜蘭)提取的有效部位，這種有效部位的制備方法，含有這種有效部位的藥物組合物，以及含有這種有效部位和其藥物組合物在預防和治療老年癡呆、血管性癡呆的用途，屬于醫(yī)藥【技術領域】。

【背景技術】
[0002]隨著社會的發(fā)展，人類壽命的延長，社會老齡化現(xiàn)象日益嚴重，老年性癡呆癥的患病率明顯升高，已成為導致死亡的第四位主要原因。老年性癡呆主要包括阿爾茨海默氏病(Alzheimer，Disease,AD)和血管性癡呆(Vascular dementia, VD)。老年性癡呆是一種進行性的神經退行性疾病，主要表現(xiàn)為漸進性記憶障礙、認知功能障礙、人格改變及語言障礙等神經精神癥狀，嚴重影響社交、職業(yè)與生活功能。臨床上主要表現(xiàn)為中樞認知功能障礙，老年斑、淀粉樣蛋白沉積及神經元纖維纏結是其腦部主要的病理學特征。據統(tǒng)計我國現(xiàn)有310萬左右老年性癡呆患者，65歲以上人群患病率高達5.9%。臨床特征是進行性認知功能障礙，至疾病后期，患者生活不能自理，不能說話甚至連自己的近親都不認識。這不但給病人自身帶來很大的痛苦，同時也給病人家庭以及社會造成極大負擔，影響社會和經濟的發(fā)展。
[0003]由于其病因和發(fā)病機制尚不明確，目前沒有特效方法逆轉和阻止病情進展。但早期進行對癥治療，包括藥物治療改善認知功能、改善精神癥狀、心理社會治療和良好的護理，對延緩患者生活質量減退十分重要。國內外批準用于阿爾茨海默病治療的藥物主要有
(I)膽堿酯酶抑制劑:通過抑制膽堿酯酶而抑制乙酰膽堿降解并提高活性，改善神經遞質的傳遞功能。常用藥物有多奈哌齊(donepezil),重酒石酸卡巴拉汀(rivastigmine),加蘭他敏(galantamine)等。(2)谷氨酸受體拮抗劑:鹽酸美金剛(memantine)是N-甲基-天冬氨酸(NMDA)受體激動劑。但上述藥物治療老年性癡呆作用單一，治療效果有限，具有一定的副作。因此，研究與開發(fā)防治老年性癡呆的有效藥物成為當今醫(yī)藥領域的重要研究課題。
[0004]山慈菇為傳統(tǒng)少常用中藥，始載于唐《本草拾遺》，具有清熱解毒，消腫散結之功效。其來源為蘭科植物杜醇蘭Cremastra appendiculata、獨蒜蘭Ple1ne bulbocod1ides和云南獨蒜蘭P.yunnanensis的干燥假鱗莖。經前期研究發(fā)現(xiàn)中藥山慈菇中的主要基源植物獨蒜蘭和云南獨蒜蘭(俗稱“冰球子”)中提取、精制得到的有效部位具有預防和治療老年性癡呆活性。
[0005]迄今為止，未見到山慈菇治療老年性癡呆的研究報道。


【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明提供了一種新的治療老年性癡呆的藥物，即從中藥山慈菇(冰球子)中提取的有效部位。
[0007]本發(fā)明的另一目的是提供了山慈菇有效部位的制備方法。
[0008]本發(fā)明的再一目的是提供了含山慈菇有效部位的藥物組合物。
[0009]本發(fā)明的又一目的是提供了山慈菇有效部位在預防和治療老年性癡呆、血管性癡呆的用途。
[0010]為了解決本發(fā)明的技術問題，本發(fā)明采取如下技術方案:
[0011 ] 本發(fā)明中所稱的山慈菇，植物來源于獨蒜蘭和云南獨蒜蘭，俗稱“冰球子”。本發(fā)明提供了從山慈菇中提取的有效部位。
[0012]有效部位的制備方法如下:
[0013]1.提取方法:將原料藥材(來源于冰球子的藥材)經干燥后，適當粉碎，然后用溶劑提取，提取的溶劑包括水、醇類或水與醇類的混合溶劑。其中醇類溶劑優(yōu)選:甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一種或幾種的混合溶劑。水與醇的混合物，為40-95% (體積比)的醇溶液；提取方法包括:滲漉、浸提或加熱回流提??；提取時溶劑用量為藥材重量的5-20倍，提取可以在動態(tài)或靜態(tài)下進行，為提高提取效率還可以選用超聲波提取；提取的溫度可以從室溫到溶劑回流的溫度范圍內；提取可以連續(xù)進行或間歇進行，提取次數1-4次。提取液可以選用常壓或減壓濃縮得浸膏或無醇的濃縮液。
[0014]2.精制方法:
[0015](I)將上述濃縮液，過濾，稀釋后經苯乙烯型大孔吸附樹脂(如D101，HPD-1OO0HP-20等)精制，用水和5-15%乙醇洗脫除去雜質，用20-50%乙醇洗脫，減壓蒸干，得山慈菇有效部位。
[0016](2)將上述濃縮浸膏經硅膠或硅藻土拌樣，正相硅膠層析精制，石油醚、氯仿、乙醚等低極性有機溶劑洗脫，再用氯仿-甲醇(5:1)洗脫，減壓蒸干，得山慈菇有機酸芐酯苷有效部位。
[0017](3)將上述濃縮浸膏經硅膠或硅藻土拌樣，反相硅膠層析精制，水、醇和水的混合溶劑(如10%，20%乙醇)等極性有機溶劑洗脫，再用50%醇洗脫，減壓蒸干，得山慈菇有機酸芐酯苷有效部位。
[0018](4)將上述濃縮得浸膏或無醇的濃縮液，稀釋后，分別用石油醚、乙酸乙酯萃取，再用正丁醇萃取，減壓蒸干，得山慈菇有機酸芐酯苷有效部位。
[0019]本發(fā)明還涉及以山慈菇有效部位作為活性成份的藥物組合物。該藥物組合物可根據本領域公知的方法制備?？赏ㄟ^將山慈菇有效部位與一種或多種藥學上可以接受的固體或液體賦型劑和/或輔料結合，制成適用于人使用的任何劑型。山慈菇有效部位在其藥物組合物中的含量通常為1-95% (重量比)。
[0020]本發(fā)明的山慈菇有效部位或組合物可以單獨服用，或與其它治療藥物或對癥藥物合并使用。
[0021]本發(fā)明還涉及了山慈菇有效部位在預防和治療老年性癡呆、血管性癡呆的用途。該有效部位經動物試驗證實，能夠明顯改善東莨菪堿致小鼠膽堿能損傷擬癡呆動物模型的學習記憶障礙；可以提高雙側頸總動脈結扎引起血管性癡呆大鼠對新物體的識別能力，改善血管性癡呆引起的物體識別障礙和空間學習記憶障礙；具有抗氧化能力，可以通過減少氧化損傷反應從而達到延緩神經細胞退行性變化的作用。該有效部位具有預防和治療老年性癡呆、血管性癡呆的用途。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1山慈菇中有效部位中主要化學成分有機酸芐酯苷類化合物的紫外光譜特征。
[0023]圖2山慈菇不同精制方法得到的有效部位高效液相色譜圖。
[0024]圖3定位航行實驗。

【具體實施方式】
[0025]有效部位的制備
[0026]實施例1
[0027]山慈菇藥材(來源于獨蒜蘭或云南獨蒜蘭)Ikg,加入8倍量50%乙醇浸泡后,加熱回流提取三次，每次1.0小時。提取液減壓回收乙醇并濃縮至無醇溶液，過濾，濾液通過經處理的D-101大孔吸附樹脂(藥材重量:樹脂體積為1:1),先用8倍量樹脂柱體積的水和4倍量樹脂柱體積15%乙醇依次洗脫后,再用8倍量樹脂體積的40%乙醇洗脫，減壓回收40%乙醇洗脫液，減壓蒸干即得山慈菇有機酸芐酯苷有效部位。
[0028]實施例2
[0029]山慈菇藥材(來源于獨蒜蘭或云南獨蒜蘭)Ikg,加入12倍量75%乙醇浸泡后,力口熱回流提取三次，每次1.0小時。提取液減壓回收乙醇并濃縮至浸膏，經硅膠或硅藻土拌樣(樣品與娃膠或娃藻土比例為1:1?2),正相娃膠層析(樣品與娃膠比例為1:50?100)精制，5倍量體積的石油醚-丙酮(100:0?1:1)梯度洗脫除去脂溶性雜質，再用5倍柱體積的氯仿，氯仿-甲醇(10:1)，及氯仿-甲醇(5:1)洗脫，收集氯仿-甲醇(5:1)洗脫部位減壓蒸干，得山慈菇有機酸芐酯苷有效部位。
[0030]實施例3
[0031]山慈菇藥材(獨蒜蘭或云南獨蒜蘭)Ikg,加入12倍量75%乙醇浸泡后,加熱回流提取三次，每次1.0小時。提取液減壓回收乙醇并濃縮至浸膏，將上述濃縮浸膏經反相硅膠或硅藻土拌樣(樣品與反相硅膠比例為1:2?5)，反相硅膠層析(樣品與反相硅膠比例為1:80?200)精制，4倍柱體積的水、10%乙醇和30%乙醇溶劑洗脫，再用3倍柱體積50%乙醇洗脫，減壓蒸干，得山慈菇有機酸芐酯苷有效部位。
[0032]實施例4
[0033]山慈菇藥材(獨蒜蘭或云南獨蒜蘭)lkg,加入15倍量95%乙醇浸泡后,加熱回流提取三次，每次1.0小時。提取液減壓回收乙醇并濃縮至無醇溶液，過濾，濾液分別用石油醚、乙酸乙酯(體積比1:1)萃取，再用正丁醇(體積比1:1)萃取，減壓蒸干，得山慈菇有機酸芐酯苷有效部位。
[0034]實施例5
[0035]山慈燕(植物來源于獨蒜蘭和云南獨蒜蘭)50%有機酸節(jié)酯苷類化合物(蘋果酸和酒石酸芐酯苷類化合物)有效部位含量的確證。
[0036]山慈菇中治療老年性癡呆的有效部位中主要化學成分是有機酸芐酯苷類化合物，該類化合物的紫外光譜中，在λ 224ηπι左右有最大吸收峰特征(見圖1)，便于高效液相在線紫外檢測樣品中該類化合物。
[0037]高效液相色譜法含量測定條件:Alltech Prevail C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)色譜柱；以乙腈為流動相Α，以水為流動相B，按照下表中規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為224nm。高效液相色譜圖見圖2。
[0038]

【權利要求】
1.山慈菇的有效部位，其特征在于，有效部位含有50%有機酸芐酯苷類化合物，所述的有機酸芐酯苷類化合物選自蘋果酸和酒石酸芐酯苷類化合物。
2.權利要求1中有效部位的制備方法，其特征在于，包括下面步驟: (1)將原料藥山慈菇粉碎，然后用溶劑滲漉、浸提或加熱回流提取，提取液常壓或減壓濃縮得浸膏； (2)此浸膏經各種層析方法精制、純化得到山慈菇有效部位。
3.根據權利要求2的制備方法，其特征在于，所用的藥材原料為山慈菇的基原植物:獨蒜蘭和云南獨蒜蘭，俗稱“冰球子”或其同屬的親緣植物。
4.根據權利要求2的制備方法，其特征在于，步驟(I)提取所用的溶劑為水、醇類或水與醇類的混合溶劑。其中醇類溶劑包括:甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一種或幾種的混合溶劑。
5.根據權利要求2的制備方法，其特征在于，步驟(2)所用的精制、純化方法為大孔吸附樹脂層析、正相硅膠和反相硅膠層析，或者是這些方法的組合，或者將浸膏拌于硅膠或硅藻土中，用有機溶劑洗脫。
6.根據權利要求2的制備方法，其特征在于，步驟(2)所用的精制方法中所使用的溶劑為石油醚、甲苯、乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、水中的一種或數種混合溶劑。
7.權利要求2-6中任一所述的任意方法或組合方法所制備的有效部位。
8.根據權利要求1或7的任一的有效部位，其特征在于，有效部位含有50%有機酸芐酯苷類化合物即蘋果酸和酒石酸芐酯苷類化合物，是指通過高效液相色譜檢識，以峰面積歸一化法計算，該類化合物的色譜峰的峰面積總和占整個有效部位所有色譜峰面積總和的50%以上。
9.一種藥物組合物，其特征在于，含有其治療劑量的權利要求1或7的任一有效部位及其藥用載體的組合物。
10.根據權利要求9中所述的藥用組合物，其特征在于，所述的藥物組合物包括將其制成注射液、片劑、膠囊、丸劑、口服液或滴丸劑型。
11.根權利要求1或7的任一有效部位在預防和治療老年性癡呆和血管性癡呆的用途。
【文檔編號】A61K36/898GK104173741SQ201310204452
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2013年5月28日 優(yōu)先權日:2013年5月28日
【發(fā)明者】李帥, 張建軍, 石建功, 崔保松, 李新婭, 徐瑞明, 王曉娟, 王超, 冀呈雪 申請人:中國醫(yī)學科學院藥物研究所