一種疫苗組合物及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種疫苗組合物，該疫苗組合物包括：免疫量的支氣管敗血波氏桿菌抗原、免疫量的多殺性巴氏桿菌的類毒素抗原及獸醫(yī)學上可接受的佐劑。該疫苗組合物能有效的防治由支氣管波氏桿菌、多殺性巴氏桿菌引起的混合感染的豬萎縮性鼻炎，及進一步包括其他其他抗原成分，防治由豬萎縮性鼻炎繼發(fā)感染的呼吸系統(tǒng)綜合征。本發(fā)明通過減少抗原成分，用多殺性巴氏桿菌類毒素來替代多殺性巴氏桿菌不同血清型的抗原，達到了預防豬萎縮性鼻炎的目的；還通過提高疫苗組合物單位體積的抗原含量，使疫苗組合物免疫劑量降低到現(xiàn)有疫苗的1/4劑量，免疫效果沒有降低。因此，本發(fā)明提供了一種免疫劑量更低，抗原成分更少，免疫成本更低，使用方便的疫苗組合物。
【專利說明】一種疫苗組合物及其制備方法和應用

【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種預防和治療混合感染豬萎縮性鼻炎的疫苗組合物，特別是指一種 抗原成分少、免疫劑量小的豬萎縮性鼻炎的水性佐劑滅活疫苗。

【背景技術(shù)】
[0002] 豬萎縮性鼻炎（atrophic rhinitis, AR)是豬群的一種重要的呼吸系統(tǒng)傳染病，它 會引起豬的慢性鼻炎、打噴嚏、流眼淚、顏部變性和鼻甲骨萎縮等癥狀，嚴重的還可以導致 鼻吻變形并影響全身骨骼發(fā)育，從而導致豬生長遲緩，使豬容易感染繼發(fā)性復合性肺炎，給 養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的損失。該病可感染任何年齡階段的豬，其中4周齡以內(nèi)的豬感染率最高， 癥狀一般出現(xiàn)在8-12周齡。
[0003] 豬萎縮性鼻炎可分為進行性豬萎縮性鼻炎（progressive atrophic rhinitis, PAR)和非進行性豬萎縮性鼻炎（nonprogressive atrophic rhinitis, NPAR)。 進行性豬萎縮性鼻炎主要由產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌（toxigenic Pasteurella multocida， Pm)引起，病原通常為莢膜D型或A型，是豬萎縮性鼻炎的主要形式；非進行性豬萎縮性鼻 炎，單純由支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica，Bb)引起，由于其通常只引 起輕微的鼻甲骨萎縮，往往觀察不到鼻吻部的典型病變，而常常為人們所忽視。
[0004] 當前，我國所用的豬萎縮性鼻炎疫苗還主要是支氣管敗血波氏桿菌（Bb)滅活苗 或支氣管敗血波氏桿菌（Bb)加有產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌D型（Pm-D)和A型（Pm-A)的滅 活苗。由于產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌（Pm)莢膜D型和A型均可以分泌一種皮膚壞死毒素 (Pasteurella multocida toxin, PMT)，發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)將PMT滅活后作為一種抗原成 分組成支氣管敗血波氏桿菌（Bb)加有產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌D型（Pm-D)和A型（Pm-A)力口 PMT類毒素的多種抗原成分的疫苗組合物，能提供對豬萎縮性鼻炎有效的防控(公開于中國 專利CN102302771A)。然而本發(fā)明人在進行工藝改進時，意外的發(fā)現(xiàn)PMT類毒素即能提供 對產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌（Pm)莢膜D型和A型兩種病原的完全保護，有效的減少了抗原成 分，極大地減少了免疫刺激。
[0005] 在本發(fā)明人工重現(xiàn)豬萎縮性鼻炎混合感染試驗中，發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)，豬體在感 染少量的支氣管敗血波氏桿菌，并未有明顯的臨床癥狀，甚至也檢測不到支氣管敗血波氏 桿菌病原的存在，但是當豬體繼發(fā)混合感染產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌（Pm)A型或D型時，會產(chǎn) 生嚴重的豬萎縮病鼻炎癥狀，比單獨感染產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌（Pm) A型或D型時癥狀明 顯嚴重。且在豬體攜帶支氣管敗血波氏桿菌病原的情況下，感染其他呼吸系統(tǒng)疾病病原，往 往產(chǎn)生嚴重的繼發(fā)感染，尤其是豬萎縮性鼻炎混合感染其他呼吸系統(tǒng)疾病病原，往往產(chǎn)生 極其嚴重的繼發(fā)感染癥狀。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種治療和預防混合感染豬萎縮性鼻炎的 疫苗組合物，包含免疫量的支氣管敗血波氏桿菌（Bb)抗原，免疫量多殺性巴氏桿菌的類毒 素（PMT)抗原及獸藥學上可接受的佐劑。
[0007] 所述的支氣管敗血波氏桿菌抗原是指含有至少一種支氣管敗血波氏桿菌抗原形 式的任何組合物，所述支氣管敗血波氏桿菌抗原接種豬可誘導、刺激或增強抵抗支氣管敗 血波氏桿菌感染的免疫應答，包括本領域技術(shù)人員熟知的臨床分離的野毒株，如支氣管敗 血波氏桿菌JB5株。
[0008] 所述的多殺性巴氏桿菌的類毒素抗原是指含有至少一種多殺性巴氏桿菌的類毒 素抗原形式的任何組合物，所述多殺性巴氏桿菌的類毒素抗原接種豬可誘導、刺激或增強 抵抗產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌感染的免疫應答，包括本領域技術(shù)人員熟知的臨床分離的不 同血清型野毒株天然類毒素，以及經(jīng)人工基因工程手段合成的類毒素及多肽。
[0009] 優(yōu)選地，所述支氣管敗血波氏桿菌抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式 的支氣管敗血波氏桿菌抗原，含有支氣管敗血波氏桿菌免疫原性氨基酸序列的嵌合細菌， 含有支氣管敗血波氏桿菌免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分；所述多殺性巴氏桿菌 的類毒素抗原為天然毒素的滅活形式、人工合成的多肽形式的多殺性巴氏桿菌類毒素，含 有多殺性巴氏桿菌的類毒素免疫原性氨基酸序列的嵌合細菌，含有多殺性巴氏桿菌類毒素 免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分。
[0010] 本發(fā)明所用的術(shù)語"活的形式抗原"指的是從已經(jīng)減毒但仍可復制宿主生物體的 細胞的細菌制備的抗原。本發(fā)明所用的術(shù)語"減毒"用于指以使基因喪失致病性、但保持抗 原性的方式對涉及病原體基本代謝的基因進行突變來人工降低病原體毒性。通常，通過UV 輻射、化學處理或體外連續(xù)高階繼代培養(yǎng)實現(xiàn)減毒。外顯的基因改變，如使已知序列中的特 定核苷酸缺失以降低毒性或?qū)⒑塑账岵迦爰毦蚪M中，也可能導致減毒。
[0011] 所用的術(shù)語"滅活形式抗原"，也稱作失活抗原，指的是用以制備疫苗產(chǎn)生免疫力 的滅活細菌的混懸液。滅活抗原的例子包括全菌體抗原和裂解型抗原。使用已知方法可以 很容易地產(chǎn)生滅活抗原。例如，通過用甲醛溶液處理細菌可獲得全菌體抗原。裂解型抗原 可在用醚處理后由細菌莢膜制備得到。
[0012] 術(shù)語"亞單位抗原"指的是包含通過提取從病原性生物體分離出來的純化的抗原 決定簇成分。它比全菌體疫苗引起副反應的可能性小。
[0013] 術(shù)語"合成抗原"指的是主要由化學合成方法或基因工程方法形成的抗原決定簇 或肽。
[0014] 優(yōu)選地，本發(fā)明的支氣管敗血波氏桿菌為支氣管敗血波氏桿菌HN8株。
[0015] 優(yōu)選地，本發(fā)明的多殺性巴氏桿菌的類毒素為使用甲醛滅活獲得的類毒素或人工 合成的多肽形式的類毒素。
[0016] 優(yōu)選地，本發(fā)明的多殺性巴氏桿菌的類毒素為多殺性巴氏桿菌D型的類毒素或多 殺性巴氏桿菌A型的類毒素或氨基酸序列如SEQ ID NO. 1或SEQ ID NO. 2或SEQ ID NO. 3 中的一種或幾種多肽。
[0017] 優(yōu)選地，本發(fā)明的多殺性巴氏桿菌D型為多殺性巴氏桿菌D型HB4株，多殺性巴氏 桿菌A型為多殺性巴氏桿菌A型HN5株。
[0018] 優(yōu)選地，本發(fā)明的支氣管敗血波氏桿菌HN8株（Bordetella bronchiseptica HN8)保藏號為CCTCC NO :M2011223,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2011年 06月28日，保藏地址為中國武漢?武漢大學；多殺性巴氏桿菌D型HB4株（Pasteurella multocida D Type HB4)保藏號為CCTCC N0:M2011221，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心， 保藏日期為2011年06月28日，保藏地址為中國武漢?武漢大學；多殺性巴氏桿菌A型HN5 株（Pasteurella multocida A Type HN5)保藏號為 CCTCC NO :M2011222,保藏于中國典型 培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2011年06月28日，保藏地址為中國武漢?武漢大學。
[0019] 優(yōu)選地，本發(fā)明的支氣管敗血波氏桿菌含量為3X109?I. 5X1010CFU/ml。
[0020] 優(yōu)選地，本發(fā)明的多殺性巴氏桿菌的類毒素含量為1?150 g/ml。
[0021] 優(yōu)選地，本發(fā)明的獸藥學上可接受的佐劑為水佐劑。
[0022] 本發(fā)明所用術(shù)語"水佐劑"又稱"水基佐劑"或"水溶性佐劑"，是一種聚合物水溶 性分散體，用于提高水溶性疫苗的功效和安全性，可以由高分子量聚丙烯酸類合成聚合物 組成。
[0023] 優(yōu)選地，本發(fā)明的獸藥學上可接受的佐劑為gel佐劑。
[0024] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種治療和預防混合感染豬萎縮性鼻炎的疫苗組合 物的制備方法，包括以下步驟：
[0025] (1)培養(yǎng)增殖支氣管敗血波氏桿菌，并滅活；
[0026] (2)培養(yǎng)增殖多殺性巴氏桿菌，收集PMT毒素并滅活，或者人工合成PMT多肽抗 原；
[0027] (3)按比例混合所述滅活的支氣管敗血波氏桿菌抗原，多殺性巴氏桿菌PMT類毒 素抗原或者PMT多肽抗原，加入佐劑，乳化。
[0028] 優(yōu)選地，本發(fā)明的治療和預防混合感染豬萎縮性鼻炎的疫苗組合物的制備方法， 已滅活的支氣管敗血波氏桿菌的含量為3X10 9?1.5X101(lCFU/ml、多殺性巴氏桿菌D型 PMT類毒素的含量為1?150ii g/ml。
[0029] 另外，豬萎縮性鼻炎感染后容易繼發(fā)感染其他呼吸系統(tǒng)疾病病原，造成嚴重繼發(fā) 感染的呼吸系統(tǒng)綜合征，造成嚴重的損失。而且在豬體攜帶豬萎縮性鼻炎少量病原時，表現(xiàn) 不太明顯的癥狀，但是當此時感染其他呼吸系統(tǒng)疾病病原，不僅會直接誘發(fā)豬萎縮性鼻炎 的嚴重發(fā)生，也同時造成了感染的其他病原的疾病的發(fā)生。
[0030] 多價疫苗為現(xiàn)今疫苗發(fā)展的主要趨勢，其優(yōu)點是經(jīng)過免疫后能同時預防多種疾病 的感染，并可大幅降低因免疫多種疫苗所導致的多重壓力以及減少接種疫苗的人工成本。 本發(fā)明疫苗組合物可以和其他呼吸系統(tǒng)疾病抗原通過合理組合成多聯(lián)疫苗來防控豬萎縮 性鼻炎繼發(fā)感染的呼吸系統(tǒng)綜合征。特別是，由于年齡越小的豬在感染豬萎縮性鼻炎后所 產(chǎn)生的癥狀會越嚴重，而以本發(fā)明疫苗組合物同其他疾病抗原通過合理組合成多聯(lián)疫苗來 防控豬萎縮性鼻炎繼發(fā)感染，尤其對仔豬免于相關疾病的早期感染，有著重要的作用。
[0031] 在現(xiàn)有情況下，豬萎縮性鼻炎的預防需要支氣管敗血波氏桿菌抗原、多殺性巴氏 桿菌A型抗原、多殺性巴氏桿菌D型抗原等多種抗原成分，且免疫劑量大，一般需要加強免 疫，免疫應激增大，特別不適合小日齡的仔豬。因此，當前研制出抗原成分少，免疫劑量小， 免疫效果好，成本更低的預防豬萎縮性鼻炎疫苗組合物成為一項緊迫的任務。
[0032] 基于豬萎縮性鼻炎與豬肺炎支原體皆為豬的高傳染性疾病， 申請人:進一步嘗試將 由本發(fā)明制備的豬萎縮性鼻炎疫苗與豬肺炎支原體疫苗組合，由此制造能對豬萎縮性鼻炎 繼發(fā)感染的呼吸系統(tǒng)綜合征產(chǎn)生良好保護效用的多聯(lián)疫苗。以及用于預防由豬萎縮性鼻炎 繼發(fā)感染的其他呼吸系統(tǒng)綜合征，本發(fā)明疫苗組合物可以包括其他抗原，比如容易繼發(fā)及 混合感染的豬肺炎支原體、豬鼻支原體、藍耳病病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病毒、副豬 嗜血桿菌、傳染性胸膜肺炎、豬流感等，及其他加重豬萎縮性鼻炎癥狀的病原。
[0033] 優(yōu)選地，本發(fā)明豬肺炎支原體為豬肺炎支原體HN0613 (Mycoplasma hyopneumoniae strain HN0613)，保藏號為CCTCC NO :M2012230,保藏于中國典型培養(yǎng)物保 藏中心，保藏日期為2012年06月13日，保藏地址為中國武漢?武漢大學。
[0034] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述的疫苗組合物在制備預防和/或治療感染豬萎 縮性鼻炎相關疾病的藥物中的應用。
[0035] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述的疫苗組合物在制備預防和/或治療混合感染 豬萎縮性鼻炎的藥物中的應用。
[0036] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述的疫苗組合物在制備預防和/或治療繼發(fā)感染 豬萎縮性鼻炎引起的呼吸系統(tǒng)綜合征的藥物中的應用。
[0037] 本發(fā)明所用的術(shù)語"預防"指通過給予根據(jù)本發(fā)明的疫苗組合物抑制或推遲豬萎 縮性鼻炎及繼發(fā)感染的呼吸系統(tǒng)綜合征發(fā)作的所有行為。術(shù)語"治療"指通過給予根據(jù)本 發(fā)明的疫苗組合物使豬萎縮性鼻炎及繼發(fā)感染的呼吸系統(tǒng)綜合征引起的癥狀減輕或轉(zhuǎn)好 的所有行為。
[0038] 本發(fā)明所用的術(shù)語"豬萎縮性鼻炎相關疾病"用于指由支氣管敗血波氏桿菌或產(chǎn) 毒多殺性巴氏桿菌或由產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌及支氣管敗血波氏桿菌共同感染引起的疾病。 它的例子包括發(fā)病豬表現(xiàn)出鼻炎癥狀，打噴嚏，呼吸有鼾聲，進一步發(fā)展引起鼻甲骨萎縮， 生長發(fā)育遲緩，育肥時間延長；有的病癥在鼻炎癥狀發(fā)生后幾周，癥狀漸漸消失，并不出現(xiàn) 鼻甲骨萎縮；有的感染豬只只是少量病菌的攜帶者，并無癥狀出現(xiàn)；但不限于此。
[0039] 本發(fā)明所用術(shù)語"混合感染豬萎縮性鼻炎"用于指由產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌及支氣 管敗血波氏桿菌共同感染引起的疾病。
[0040] 本發(fā)明所用術(shù)語"繼發(fā)感染豬萎縮性鼻炎引起的呼吸系統(tǒng)綜合征"用于指有些感 染豬萎縮性鼻炎的病豬或攜帶豬萎縮性鼻炎相關病原的豬只由于某些繼發(fā)細菌或病毒及 其他病原體通過損傷的鼻粘膜侵入呼吸系統(tǒng)而引起病癥，如，發(fā)生鼻甲骨萎縮的豬群往往 同時發(fā)生肺炎，并出現(xiàn)相應的癥狀。
[0041] 由本發(fā)明下面的實施例可以看出，本發(fā)明通過提高疫苗組合物單位體積的抗原含 量，使疫苗免疫劑量降低到現(xiàn)有疫苗的1/4劑量，即對于3周齡仔豬，每只2ml，加強免疫一 次，共4ml，降低到lml，從而減小疫苗免疫對機體的應激反應，而且適應于小日齡雞群，增 大疫苗的適用范圍。此外，在降低疫苗劑量的前提下，本發(fā)明的疫苗免疫效果沒有降低。 艮P，本發(fā)明提供了一種免疫劑量小、免疫效果好、成本更低的預防和治療豬萎縮性鼻炎的疫 苗組合物。

【具體實施方式】
[0042] 下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述更 為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領域技術(shù)人 員應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進 行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0043] 實施例1治療和預防混合感染豬萎縮性鼻炎的疫苗組合物的制備
[0044] 1.菌液的制備
[0045] 將支氣管敗血波氏桿菌HN8株劃線于改良鮑姜氏血平板，與37°C培養(yǎng)48h，挑取溶 血環(huán)明顯的單克隆于含5ml BHI的試管中，于150-220rpm，37°C振蕩培養(yǎng)16-24h，之后將菌 液以1%的接種量于37°C擴大培養(yǎng)12-16h，轉(zhuǎn)速150-220rpm。取樣作系列十倍稀釋，涂平板 計數(shù)。
[0046] 將巴氏桿菌D型HB4株的菌種劃線于TSA平板，與37°C培養(yǎng)16-20h，挑取單克隆 于含5mlBHI的試管中，于150-220rpm，37°C振蕩培養(yǎng)16-24h，之后將菌液以1%的接種量于 37°C擴大培養(yǎng)12-16h，轉(zhuǎn)速150-220rpm。取樣作系列十倍稀釋，涂平板計數(shù)。
[0047] 取支氣管敗血波氏桿菌HN8株菌液，加入甲醛，使甲醛的最終濃度為0. 2% -0. 4% 體積，37°C滅活24-48h，其間不斷搖動。滅活后取樣涂布于BHI平板，37°C培養(yǎng)16-24h，無 菌落生長。將滅活后的菌液離心濃縮，棄上清，用PBS懸浮稀釋菌體，使細菌含量相當于滅 活前活菌數(shù)為IxIO 11CFU / mL。
[0048] 將離心收集的巴氏桿菌D型HB4株菌體用滅菌雙蒸水重懸，使細菌濃度達到 1012CFU/mL。將重懸菌液置冰浴中經(jīng)超聲波破碎后，IOOOOr / min離心30min，上清用0. 22pm 濾膜過濾，濾液為粗制 PMT 類毒素。用 TE (IOmmol / L Tris-HCl pH7. 4, lmmol / L EDTA) 平衡DEAE-52柱，以含0?0. 5mol / L NaCI的TE線性梯度洗脫，流速30mL / h。收集 各峰，取50 ii L進行SDS-PAGE分析。將DEAE-52分離到的樣品用蔗糖濃縮后上S印hadex G-200柱，用TE以6mL / h流速洗脫，分段收集各峰，進行SDS-PAGE分析。收集的PMT蛋白 用超濾管濃縮，并用考馬斯亮藍法測定PMT蛋白濃度。將濃縮的蛋白加入甲醛，使甲醛的最 終濃度為〇. 2% -0. 4%體積，37°C滅活24-48h，其間不斷搖動。PMT類毒素滅活后取0. Iml 于豚鼠背部皮膚注射，無皮膚壞死。
[0049] 2?疫苗組合物的配制
[0050] 取滅活后的支氣管敗血波氏桿菌HN8株和PMT類毒素緩緩加入到一定量的Gel佐 齊U(法國賽比克公司）中，加的過程中不斷用玻璃棒攪拌，最后加入柳硫汞鈉，使最終濃度為 0.01%體積，混勻、檢驗、分裝，即為豬萎縮性鼻炎的疫苗組合物，其中疫苗中菌體含滅活前 支氣管敗血波氏桿菌HN8株含量為3 X IO9CFU / mL-1. 5 X IOltlCFU / mL，PMT類毒素含量為 1-150 y g/ml〇
[0051] 實施例2治療和預防混合感染豬萎縮性鼻炎的疫苗組合物的制備2
[0052] 菌種及菌種的滅活，PMT類毒素的提取和滅活同實施例1。
[0053] 實施例2的各個抗原的比例參見下表1。
[0054] 實施例3治療和預防混合感染豬萎縮性鼻炎的疫苗組合物的制備3
[0055] 菌種及菌種的滅活，PMT類毒素的提取和滅活同實施例1。
[0056] 實施例3的各個抗原的比例參見下表1。
[0057] 實施例1-3的疫苗的具體配比如表1 :
[0058] 表1豬萎縮性鼻炎的疫苗組合物的成分配比
[0059]

【權(quán)利要求】
1. 一種疫苗組合物，包括：免疫量的支氣管敗血波氏桿菌抗原，免疫量的多殺性巴氏 桿菌的類毒素抗原及獸醫(yī)學上可接受的佐劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中所述支氣管敗血波氏桿菌抗原選自下列形 式的一種或幾種： 1) 滅活形式的支氣管敗血波氏桿菌抗原， 2) 改良的活的形式或減毒形式的支氣管敗血波氏桿菌抗原， 3) 含有支氣管敗血波氏桿菌免疫原性氨基酸序列的嵌合細菌， 4) 含有支氣管敗血波氏桿菌免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分； 優(yōu)選地，所述支氣管敗血波氏桿菌抗原選自滅活形式的支氣管敗血波氏桿菌全菌抗 原； 更優(yōu)選地，所述支氣管敗血波氏桿菌抗原為支氣管敗血波氏桿菌HN8株滅活株。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中所述多殺性巴氏桿菌的類毒素抗原選自下 列形式的一種或幾種： 1) 天然毒素的滅活形式的多殺性巴氏桿菌類毒素， 2) 人工合成的多肽形式的多殺性巴氏桿菌類毒素， 3) 含有多殺性巴氏桿菌的類毒素免疫原性氨基酸序列的嵌合細菌， 4) 含有多殺性巴氏桿菌類毒素免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分； 優(yōu)選地，所述多殺性巴氏桿菌的類毒素抗原選自天然毒素的滅活形式、人工合成的多 肽形式的多殺性巴氏桿菌類毒素； 更優(yōu)選地，所述多殺性巴氏桿菌的類毒素抗原為多殺性巴氏桿菌D型HB4株類毒素和 /或氨基酸序列如SEQ ID NO. 1或SEQ ID NO. 2或SEQ ID NO. 3中的一種或幾種多肽。
4. 一種用于豬萎縮性鼻炎合成肽疫苗的多肽，其中所述的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1 或 SEQ ID NO. 2 或 SEQ ID NO. 3 所示。
5. -種疫苗組合物，包含氨基酸序列如SEQ ID NO. 1或SEQ ID NO. 2或SEQ ID NO. 3 所示的多肽的一種或幾種組合。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的支氣管敗血波氏桿菌抗原含量為 3\109?1.5\10 1(^"1111，所述多殺性巴氏桿菌的類毒素抗原含量為1?1501^/1111。
7. -種制備所述疫苗組合物的方法，包括： 1) 培養(yǎng)增殖支氣管敗血波氏桿菌，并滅活； 2) 培養(yǎng)增殖多殺性巴氏桿菌，收集PMT毒素并滅活，或者人工合成PMT多肽抗原； 3) 按比例混合所述滅活的支氣管敗血波氏桿菌抗原，多殺性巴氏桿菌PMT類毒素抗原 或者PMT多肽抗原，加入佐劑，乳化。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中所述的疫苗組合物進一步包括至少一種 能有效對抗豬萎縮性鼻炎繼發(fā)感染的呼吸系統(tǒng)綜合征的其他生物的免疫原活性成分；優(yōu)選 地，所述能有效對抗豬萎縮性鼻炎繼發(fā)感染的呼吸系統(tǒng)綜合征的其他生物的免疫原活性成 分選自下列生物的抗原：豬肺炎支原體；豬鼻支原體；藍耳病病毒；豬圓環(huán)病毒2型；豬偽 狂犬病毒；副豬嗜血桿菌；傳染性胸膜肺炎；豬流感病毒。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1?6任一項所述的疫苗組合物在預防和/或治療混合感染豬萎縮性 鼻炎的藥物中的應用。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的疫苗組合物在預防和/或治療繼發(fā)感染豬萎縮性鼻炎引起 的呼吸系統(tǒng)綜合征的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P31/04GK104208666SQ201310213645
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年5月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月31日
【發(fā)明者】張許科, 孫進忠, 田克恭 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司