從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物及其提取方法和用途
【專利摘要】從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物及其提取方法和用途，涉及從動物胚胎，特別是從羊、豬和狗等動物胚胎皮膚及肌肉中提取胚胎素的工藝【技術(shù)領(lǐng)域】。將于從冷凍保存的動物胚胎中取得的胚胎皮膚及肌肉采用雙蒸水浸泡后機(jī)械粉碎，再經(jīng)反復(fù)冷凍和解凍后，以冷凍離心機(jī)處理10～15分鐘，取得水提溶液，將水提溶液的Ph值調(diào)至2～4后采用冷凍離心去除沉淀物，取上清再調(diào)Ph值至4～6，再經(jīng)冷凍離心去除沉淀物，取得水提溶液經(jīng)超濾，分離出分子量為5000D以下的水溶性胚胎素。本發(fā)明可利用的胚胎原量廣泛，易得，利于工業(yè)化大批量生產(chǎn)，可確保提取液中物質(zhì)易被人體皮膚和粘膜組織吸收。
【專利說明】從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物及其提取方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及從動物胚胎，特別是從羊、豬和狗等動物胚胎皮膚及肌肉中提取胚胎素的工藝【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]1912年瑞士科學(xué)家卡爾教授因首次發(fā)現(xiàn)羊胚胎細(xì)胞中有一種能使人體細(xì)胞恢復(fù)活力的神奇物質(zhì)，即羊胚胎素而獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)獎，找到可以延緩人類衰老的純天然動物制品羊胚胎素，從而使人們追求年輕和延年益壽的夢想成為現(xiàn)實(shí)。
[0003]據(jù)科學(xué)考證，生物細(xì)胞分裂的次數(shù)與壽命有相關(guān)性，比如，壽命為30年的雞，細(xì)胞分裂為25次；而壽命僅為3年的小白鼠，只分裂12次。而導(dǎo)致人體衰老的根本原因是構(gòu)成生命肌體最基本的單位細(xì)胞出現(xiàn)了老化；隨著年齡的增大，細(xì)胞分裂越來越慢，老化細(xì)胞使器官機(jī)能不斷下降，甚至引起病變，人也隨之衰老。卡爾教授在羊胚胎中發(fā)現(xiàn)的羊胚胎素可以使動物機(jī)體細(xì)胞分裂次數(shù)增加，能使已衰退或老化的細(xì)胞重新活化或使其發(fā)生凋亡，從而使老化的組織機(jī)能得到恢復(fù)。
[0004]1931年，瑞士保羅.尼翰教授首次通過注射的方式將小羊的甲狀旁腺提取物用于一位甲狀旁腺受損的臨危病人并成功地挽救了其生命，這項(xiàng)具有里程碑式意義的發(fā)現(xiàn)為人類日后羊胚胎素在生物醫(yī)學(xué)和抗衰老領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，羅馬教皇為了表示對他的敬意，授封其為梵蒂岡科學(xué)院院士。1950年,瑞士 Dr.Alfred Pf ister與尼翰教授經(jīng)過多年的合作與努力，發(fā)現(xiàn)羊胚胎細(xì)胞的提取物是活性細(xì)胞物質(zhì)的最佳載體。
[0005]1952年，Dr.Alfred Pfister成立了瑞士雷曼納健康醫(yī)療中心,推廣羊胚胎素活細(xì)胞療法。1955年，在瑞士Batelle研究院的支持下他解決了細(xì)胞提取時(shí)(凍干或凍結(jié))造成的損傷和惡化過程，以及保存時(shí)存在的技術(shù)缺陷，此成果被命名為Cellvital。1956年，研究成果Cellvital又得到曾在1931年獲諾貝爾醫(yī)學(xué)獎的奧托.海因里希.瓦爾堡細(xì)胞生物學(xué)家的論證。
[0006]70多年來，全球數(shù)十萬人進(jìn)行過羊胚胎素的相關(guān)治療，其中包括前羅馬教皇保羅十二世、英國女王及皇室成員、菲律賓馬克斯總統(tǒng)、沙特阿拉伯和也門國王們、日本裕仁天皇、丘吉爾首相、法國戴高樂總統(tǒng)、查理.卓別林，以及瑪麗蓮夢露、黛德麗、嘉寶，球星馬拉多納等等。
[0007]羊胚胎素含有多種能夠調(diào)節(jié)人體組織器官機(jī)能的活性成分，其中包括表皮生長因子(EGF)、透明質(zhì)酸刺激因子(HASF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)等具有美化肌膚功效的成分。特別是羊胚胎素中的EGF，作為一種新興的美容護(hù)膚因子正成為時(shí)尚； 最新研究表明人的角質(zhì)層細(xì)胞和纖維細(xì)胞等均有特異性EGF受體存在，為人體皮膚細(xì)胞具有吸收EGF的能力提供了理論依據(jù)。
[0008]另外，羊胚胎素中還含有多種小分子活性肽、核酸、維生素、多種礦物元素和豐富的氨基酸等活性成分，在促進(jìn)皮膚細(xì)胞更新的同時(shí)，還能增加其內(nèi)源性生長因子的含量，促進(jìn)細(xì)胞分泌透明質(zhì)酸和糖蛋白，具有調(diào)整皮膚結(jié)構(gòu)，延緩衰老，減少皺紋，抑制粉刺和防治青春痘生長的作用。因此，羊胚胎素作為一種具有獨(dú)特生物學(xué)效應(yīng)的化妝品添加劑將具有越來越強(qiáng)的生命力和良好的發(fā)展前景。
[0009]經(jīng)過百年的研究可見，羊胎素在延緩機(jī)體衰老方面的作用是肯定的；而其所含的小分子活性物質(zhì)在提高機(jī)體免疫力方面作用也是十分顯著的；另外，在調(diào)節(jié)和平衡機(jī)體激素水平、改善貧血、增強(qiáng)新陳代謝和促進(jìn)機(jī)體活力等方面也具有顯著效果，羊胚胎素是一種既可以內(nèi)用，也可以外用的活性小分子多肽類物質(zhì)，其被機(jī)體吸收和利用的方式也是多種多樣的，其對人類的美容和健康事業(yè)必將發(fā)揮越來越大的作用。
[0010]目前羊胎素的提取過程大約可分為三個(gè)階段:首先從小羊胚胎組織細(xì)胞中提取活性成分，去除雜質(zhì)、熱敏感蛋白質(zhì)及過敏因子；其次通過分離技術(shù)，得到具有不同功效的活性物質(zhì)，如胚胎胸腺素、各種生長因子等不同類型的活性肽，最后采用凍干技術(shù)進(jìn)行冷凍干燥，保證其活性。值得注意的是羊胎素的提取是一項(xiàng)非常復(fù)雜的生物技術(shù)過程，如今只能在實(shí)驗(yàn)室中完成，很難進(jìn)行大量工業(yè)化生產(chǎn)和長期保存。在我國有實(shí)驗(yàn)室采用蛋白水解酶酶解的方法提取羊胚胎素，雖然這種方法可以大幅度提高水解液中總蛋白含量，但經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)所檢測到的蛋白質(zhì)中主要增加的是沒有生物調(diào)節(jié)活性的氨基酸和活性肽的碎片，而真正能夠發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的胚胎素含量卻不高，說明通過蛋白水解酶的酶解處理后所提取出的羊胚胎素活性較低，蛋白水解酶對羊胚胎素具有一定的破壞作用，現(xiàn)在這種提取方法逐漸被新的提取方法所淘汰。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明第一目的在于提出一種從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物。
[0012]本發(fā)明所述胚胎素水提取物為從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的分子量小于5000D的水溶性胚胎素。
[0013]本發(fā)明所指動物不僅是羊，還可以擴(kuò)大至豬和狗等動物，本發(fā)明可利用的胚胎原量廣泛，易得，利于工業(yè)化大批量生產(chǎn)。本發(fā)明水溶性胚胎素的分子量小于5000D可確保提取液中物質(zhì)易被人體皮膚和粘膜組織吸收。
[0014]本發(fā)明第二目的在于發(fā)明一種利于規(guī)模化生產(chǎn)、提高利用率、降低生產(chǎn)成本的從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的分子量小于5000D的水溶性胚胎素的方法。
[0015]本發(fā)明包括以下步驟:
1)將于-15~-25°c溫度條件下冷凍保存的動物胚胎用雙蒸水洗凈后，取得胚胎皮膚及肌肉；
2)在常壓條件下，采用溫度為O~5°C的雙蒸水浸泡經(jīng)過機(jī)械粉碎的胚胎皮膚及肌肉20~30分鐘，所述雙蒸水與所述胚胎皮膚及肌肉的混合重量比I~4: I ；
3)將由雙蒸水與胚胎皮膚及肌肉混合形成的混合液反復(fù)冷凍和解凍2~4次，每次冷凍的環(huán)境溫度為-15~_30°C，每次冷凍時(shí)間為24~48小時(shí)，每次解凍溫度至<10°C ；
4)以4000~15000轉(zhuǎn)/分的冷凍離心機(jī)對上述混合液處理10~15分鐘，取得水提溶液A ；
5)將水提溶液A的Ph值調(diào)至2~4，采用冷凍離心的方法去除沉淀物，取上清再調(diào)Ph值至4~6，再經(jīng)冷凍離心的方法去除沉淀物，取得水提溶液B ;6)在I~5°C的環(huán)境溫度下超濾水提B溶液，分離出分子量為5000D以下的水溶性胚胎素。
[0016]本發(fā)明原料采用冷凍保存的動物胚胎，最大程度地保持胚胎中胚胎素的活性；采用雙蒸水浸泡的目的是提高提取胚胎素時(shí)的純度，減少水中雜質(zhì)帶來的污染，雙蒸水溫度保持O~5°C，有利于保護(hù)提取液中胚胎素的活性；經(jīng)過反復(fù)冷凍和解凍的處理方法，使混合液呈肉糜狀，目的都是為了提高提取效率，增加提取液中胚胎素的含量，并最大程度地保證提取過程中胚胎素的活性，利于后續(xù)的分離；采用先調(diào)水提溶液A的Ph值調(diào)至2~4、再調(diào)Ph值至4~6的兩次冷凍離心方法，可高效去除去除水提液A中的大蛋白，利于后續(xù)的超濾提?。辉贗~5°C的環(huán)境溫度下對水提溶液B進(jìn)行超濾，目的是確保提取胚胎素的活性不受溫度的影響，利于高效地提取活性有效成分。最終產(chǎn)品PH值與胚胎素存在的自然條件相近，能夠充分保證提取出的胚胎素的天然活性。
[0017]發(fā)明無需蛋白水解酶的酶解就能夠提取出天然結(jié)構(gòu)的高活性胚胎素，提高胚胎素含量，利于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)，提高生產(chǎn)效率、提高原料的利用率，以降低生產(chǎn)成本，能夠滿足化妝品和食品生廣。
[0018]為了使原料胚胎中所含的胚胎素較多，本發(fā)明所述步驟I)的動物胚胎日齡為30~145天。
[0019]所述步驟5)中將O~5°C的水提溶液A進(jìn)行Ph值調(diào)整，也是更有利地保持水提溶液A中的有效成分的活性。
[0020]本發(fā)明所述步驟5)中冷凍離心時(shí)采用4000~10000轉(zhuǎn)/分的冷凍離心機(jī)處理10~15分鐘。目的是有效去除水提混合液中固體雜質(zhì)，使提取液澄清，透明，使提取液得到進(jìn)一步提純，得到水提溶液A。
[0021]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提出以上分子量小于5000D的水溶性胚胎素的用途。
[0022]用途之一:從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產(chǎn)中的用途，其特點(diǎn)是:在生產(chǎn)化妝品時(shí)，將分子量小于5000D的水溶性胚胎素按投料質(zhì)量占5~50%的比例代替化妝品中原有的水。
[0023]用途之二:從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產(chǎn)中的用途，其特點(diǎn)是:在生產(chǎn)化妝品時(shí)，將分子量小于5000D的水溶性胚胎素經(jīng)過冷凍干燥后，密封包裝制成化妝品。
[0024]經(jīng)試用，以上兩類化妝品對美容效果顯著，且無副作用，而且費(fèi)用低廉，簡單易行。
[0025]用途之三:從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物在食品生產(chǎn)的用途，其特點(diǎn)是:將5000D的水溶性胚胎素用于制備保健口服液和膠囊。
[0026]本發(fā)明作為保健口服液和膠囊的優(yōu)點(diǎn)是使用方便、吸收效果好、價(jià)格低廉，可作為一般保健品和免疫增強(qiáng)劑使用。
【具體實(shí)施方式】
[0027]一、分子量小于5000的水溶性胚胎素的提取方法:
1、將取出30~145日齡的新鮮動物胚胎置于-15~_25°C溫度條件下冷凍保存。
[0028]2、將冷凍保存的動物胚胎用雙蒸水洗凈，并分離取得胚胎皮膚及肌肉。再將分離后的胚胎皮膚及肌肉采用機(jī)械粉碎，待用。、[0029]3、在常壓條件下，采用溫度為O~5°C的雙蒸水浸泡經(jīng)過機(jī)械粉碎的胚胎皮膚及肌肉20~30分鐘。雙蒸水與胚胎內(nèi)臟器的混合重量比I~4: I。
[0030]4、將由雙蒸水與胚胎皮膚及肌肉混合形成的混合液反復(fù)冷凍和解凍2~4次，每次冷凍的環(huán)境溫度為-15~_30°C，每次冷凍時(shí)間為24~48小時(shí)，每次解凍溫度至 10°C。
[0031]5、以4000~15000轉(zhuǎn)/分的冷凍離心機(jī)對經(jīng)過上述反復(fù)循環(huán)冷凍和解凍的混合液處理10~15分鐘，除去固體雜質(zhì)，得到水提溶液A。
[0032]6、將O~5°C的水提溶液A以I~2N鹽酸調(diào)整Ph值至2~4，采用冷凍離心的方法去除沉淀物，取上清，將O~5°C的上清以I~2N氫氧化鈉調(diào)整Ph值至4~6，再經(jīng)冷凍離心的方法去除沉淀物，取得水提溶液B。
[0033]7、在I~5°C的環(huán)境溫度下對水提溶液B采用5000D的超濾器，超濾水提B溶液，分離出分子量為5000D以下的水溶性胚胎素。
[0034]二、分子量為5000D以下的水溶性胚胎素水溶性胚胎素的鑒定:
采用nanodrop2000紫外分光法測定超濾后的上清中胚胎素含量，經(jīng)測定本發(fā)明胚胎素含量可以達(dá)到為0.4%~4%，是傳統(tǒng)胚胎素提取方法含量的2~10倍，能夠大幅度提高胚胎素的提取效率和活性。
[0035]三、制備化妝品:
1、化妝品一:
如化妝水的生產(chǎn)配方:
分別稱取分子量小于5 000D的水溶性胚胎素5kg、凈化水95kg將以上原料混合均勻，進(jìn)行瓶裝，即制成化妝水。
[0036]2、化妝品之二:
如胚胎素水提取物的冷凍干燥制劑:
將分子量小于5000D的水溶性胚胎素經(jīng)過冷凍干燥后，密封包裝制成冷凍干燥制劑。
[0037]將以上化妝水分別直接用于清潔后的臉部，將冷凍干燥制劑直接或采用導(dǎo)入器用于清潔后的臉部，吸收快于普通產(chǎn)品。
[0038]應(yīng)用于皮膚老化人群，皮膚恢復(fù)彈性效果顯著，且無副作用。
[0039]四、制備保健品:
1、制備胚胎素口服制劑A:
將分子量小于5000D的水溶性胚胎素與蜂蜜或其他食品添加劑調(diào)勻，經(jīng)超濾和巴氏消毒滅菌后，灌裝瓶裝口服液備用。
2、制備胚胎素口服制劑B:
將分子量小于5000D的水溶性胚胎素冷凍干燥后得到凍干粉作為生產(chǎn)各種膠囊的原料，待用。
[0040]3、制備胚胎素膠囊:
將分子量為5000D以下的本發(fā)明水溶性胚胎素冷凍干燥后得到凍干粉5公斤，茶花粉冷凍干燥后的凍干粉95公斤，二者混合后制粒，灌裝每粒凈含量250毫克的硬膠囊即可。
[0041]4、應(yīng)用:
服用對象:身體虛弱者。
[0042]服用劑量:口服液使用時(shí)按照每人每天4~10毫升，連接服用20~30天?？诜z囊，如膠囊含量為凍干粉10~50毫克/粒，每人按照I~4粒/天，連續(xù)服用20~30天。
[0043]經(jīng)常易感冒者和高血脂癥患者，服用本發(fā)明產(chǎn)品20天左右，身體免疫力提高不易感冒，高血脂指標(biāo)能夠恢復(fù)正 常。
【權(quán)利要求】
1.從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物，其特征在于所述胚胎素水提取物為從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的分子量小于5000D的水溶性胚胎素。
2.如權(quán)利要求1所述從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物的提取方法，其特征在于包括以下步驟: 1)將于-15~_25°C溫度條件下冷凍保存的動物胚胎用雙蒸水洗凈后，取得胚胎皮膚及肌肉； 2)在常壓條件下，采用溫度為O~5°C的雙蒸水浸泡經(jīng)過機(jī)械粉碎的胚胎皮膚及肌肉20~30分鐘，所述雙蒸水與所述胚胎皮膚及肌肉的混合重量比I~4: I ； 3)將由雙蒸水與胚胎皮膚及肌肉混合形成的混合液反復(fù)冷凍和解凍2~4次，每次冷凍的環(huán)境溫度為-15~_30°C，每次冷凍時(shí)間為24~48小時(shí)，每次解凍至溫度≤10°C ； 4)以4000~15000轉(zhuǎn)/分的冷凍離心機(jī)對上述混合液處理10~15分鐘，取得水提溶液A ； 5)將水提溶液A的Ph值調(diào)至2~4，采用冷凍離心的方法去除沉淀物，取上清再調(diào)Ph值至4~6，再經(jīng)冷凍離心的方法去除沉淀物，取得水提溶液B ; 6)在I~5°C的環(huán)境溫度下超濾水提B溶液，分離出分子量為5000D以下的水溶性胚胎素。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于所述步驟I)的動物胚胎日齡為30~145天。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于所述步驟5)中將O~5°C的水提溶液A進(jìn)行Ph值調(diào)整。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述方法，其特征在于所述步驟5)中冷凍離心時(shí)采用4000~10000轉(zhuǎn)/分的冷凍離心機(jī)處理10~15分鐘。
6.如權(quán)利要求1所述從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產(chǎn)中的用途，其特征在于，在生產(chǎn)化妝品時(shí)，將分子量小于5000D的水溶性胚胎素按投料質(zhì)量占5~50%的比例代替化妝品中原有的水。
7.如權(quán)利要求1所述從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產(chǎn)中的用途，其特征在于，在生產(chǎn)化妝品時(shí)，將分子量小于5000D的水溶性胚胎素經(jīng)過冷凍干燥后，密封包裝制成化妝品。
8.如權(quán)利要求1所述從動物胚胎皮膚及肌肉中提取的胚胎素水提取物在食品生產(chǎn)的用途，其特征在于，將5000D的水溶性胚胎素用于制備保健口服液和膠囊。
【文檔編號】A61K8/98GK103462865SQ201310230707
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年6月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月10日
【發(fā)明者】周斌, 葉滿紅 申請人:周斌, 葉滿紅