一種抗犬偽狂犬病藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗犬偽狂犬病藥物組合物。該藥物組合物含豬偽狂犬病疫苗和用于將所述豬偽狂犬病疫苗稀釋至相當(dāng)于豬用標(biāo)準(zhǔn)1頭份/ml的0.5-0.05倍的稀釋用無菌生理鹽水或無菌水。將該抗犬偽狂犬病藥物組合物作為疫苗接種于犬類，既未出現(xiàn)犬類死亡，又能達到有效預(yù)防該病的效果，并可以顯著降低犬食用病豬肉后所致的發(fā)病率和死亡率。
【專利說明】一種抗犬偽狂犬病藥物組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及獸用生物制品【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種抗犬偽狂犬病藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 偽狂犬?。≒seudorabies，PR)又名奧葉茲基氏病（Aujeszky，s Disease，AD)、 豬皰疹病毒I型、奇癢癥等，是由皰疹病毒科、α-皰疹病毒亞科中的偽狂犬病病毒 (Pseudorabies virus，PRV 或 Aujeszky's Disease virus，ADV)引起的一種或多種動物感 染的急性傳染病。偽狂犬病毒可引起除人類和無尾猿以外多種家畜和野生動物的發(fā)病。在 自然界里，病毒可能存在于野生嚙齒類動物體內(nèi)，豬是PRV的貯存宿主，病豬、帶毒鼠和病 犬是犬偽狂犬病的主要傳染源，病毒通過的鼻液、唾液、乳汁、尿液和陰道分泌物排出，可經(jīng) 消化道感染，亦可經(jīng)呼吸道、體表傷口和生殖道感染。
[0003] 從上述可以看出，PRV在分類上屬皰疹病毒科，甲型皰疹病毒亞科。核酸型為雙股 DNA。雖然PRV僅有1個血清型，但從世界各地分離的不同毒株毒力有所差異，而且，即使是 同一毒株對不同動物的致病性有所不同。
[0004] 犬是除了兔外對該病毒最為敏感的動物，目前犬感染偽狂犬病毒引起的發(fā)病和死 亡屢有發(fā)生，例如劉蕾等人在"關(guān)注偽狂犬病患犬，它就在你面前，中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會小動 物醫(yī)學(xué)分會第六次學(xué)術(shù)研討會暨獸醫(yī)外科學(xué)分會第十八次學(xué)術(shù)研討會論文集第一部分，小 動物醫(yī)學(xué)文集，56-59,2011。"報道了犬因為食用患偽狂犬的豬肉而發(fā)生偽狂犬病，并且從 組織中的PCR方法僅在腦組織中擴增出了目的基因片段。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)沒有公開抗犬偽狂犬病疫苗或相關(guān)的藥物，因此，目前存在的問題是需 要研究開發(fā)一種能夠預(yù)防犬偽狂犬病的疫苗，用于降低犬偽狂犬病后所致的發(fā)病率和死亡 率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種抗犬偽狂犬病藥物 組合物。該藥物組合物主要含有豬偽狂犬病疫苗，將該組合物作為疫苗用于免疫犬類，既不 會出現(xiàn)犬類死亡，又能達到有效預(yù)防該病的效果，并可以顯著降低犬食用病豬肉后所致的 發(fā)病率和死亡率。
[0007] 為此，本發(fā)明提供了一種抗犬偽狂犬病藥物組合物，其中，所述組合物中包含豬偽 狂犬病疫苗和用于將所述豬偽狂犬病疫苗稀釋至相當(dāng)于豬用標(biāo)準(zhǔn)1頭份/ml的0. 5-0. 05 倍濃度的稀釋用無菌生理鹽水或無菌水。
[0008] 在本發(fā)明的一個【具體實施方式】中，利用豬偽狂犬病疫苗制備抗犬偽狂犬病藥物組 合物，并將該抗犬偽狂犬病藥物組合物作為疫苗用于犬偽狂犬病的預(yù)防，具體方法如下：將 豬偽狂犬病疫苗用無菌生理鹽水先稀釋成豬用標(biāo)準(zhǔn)1頭份/ml，再用生理鹽水進行2-20倍 稀釋，混勻后制成抗犬偽狂犬病藥物組合物，對健康犬通過皮下注射(或肌肉注射，或滴鼻） 進行接種，lml/只。所述2-20倍稀釋，對于1周歲以下的犬，稀釋倍數(shù)優(yōu)選為10-20倍稀 釋，對于1周歲以上的犬，稀釋倍數(shù)優(yōu)選為2-10倍稀釋。
[0009] 本發(fā)明中，所述豬偽狂犬病疫苗為用于預(yù)防豬偽狂犬病的疫苗。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明，所述豬偽狂犬病疫苗包括豬偽狂犬病滅活疫苗、活疫苗、亞單位疫苗 和合成疫苗。優(yōu)選所述豬偽狂犬病疫苗為豬偽狂犬病活疫苗。進一步優(yōu)選的，所述豬偽狂 犬病疫苗為自然缺失毒性基因的自然缺失株或人工缺失毒性基因的基因變異株。
[0011] 在本發(fā)明的一個實施方式中，所述豬偽狂犬病疫苗選自豬偽狂犬病活疫苗 (Bartha K-61株)、豬偽狂犬病活疫苗（Bucharest株)、豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株)、豬偽 狂犬病活疫苗（SA215株）中一種或多種。
[0012] 本發(fā)明所用"活疫苗"一詞，指的是從已經(jīng)減毒但仍可復(fù)制宿主生物體的細(xì)胞的病 毒制備的疫苗。
[0013] 本發(fā)明用"減毒"一詞，用于指使病毒喪失致病性、但保持抗原性的方式對涉及病 原體基本代謝的基因進行突變來人工降低病原體毒性。通常，通過UV輻射、化學(xué)處理或體 外連續(xù)高階繼代培養(yǎng)實現(xiàn)減毒。外顯基因的改變，如使已知序列中的特定核苷酸缺失或?qū)?核苷酸插入病毒基因組中，也可能導(dǎo)致減毒。
[0014] 本發(fā)明所述用語"滅活疫苗"，也稱作失活疫苗，指的是用作抗原以產(chǎn)生免疫力的 滅活病毒的混懸液。滅活疫苗的例子包括全病毒疫苗和裂解型疫苗。使用已知方法可以很 容易地產(chǎn)生滅活疫苗。例如，通過用甲醛溶液處理病毒可獲得全病毒疫苗。裂解型疫苗可 在用醚處理后由病毒包膜制備得到。
[0015] 本發(fā)明所述用語"亞單位疫苗"指的是包含通過提取從病毒性生物體分離出來的 純化的抗原決定簇的疫苗。它比全病毒疫苗引起副反應(yīng)的可能性小。例如，從豬偽狂犬病 毒提取的gD或gC蛋白按照現(xiàn)有技術(shù)的可用于制備亞單位疫苗。
[0016] 本發(fā)明所述用語"合成疫苗"指的是主要由化學(xué)合成抗原或基因工程抗原、抗原決 定簇或肽組成的疫苗。
[0017] 本發(fā)明所述用語"犬偽狂犬病"是指犬因感染偽狂犬病毒而出現(xiàn)以下特征一種或 幾種：①病犬表現(xiàn)為極度不安，故意狂吠，對主人的呼喚沒有反應(yīng)，兩眼常呈驚恐狀；②病 犬某一部位奇癢難忍，先以舌舔舐，隨后用牙啃咬，并以周圍的物體摩擦，用爪抓撓，很快奇 癢部位即成爛斑，周圍組織腫脹；③有的病例不見上述癥狀，但病犬呻吟，表現(xiàn)身體某處有 疼痛；④病犬對人畜無攻擊性；⑤病犬后期唾液增多，不能吞咽，食欲減退或廢絕；⑥病程 迅速，病犬常在36小時內(nèi)因衰竭而死。⑦通過PCR能檢測到病死犬腦、肝、肺和脾等組織中 的病毒核酸。
[0018] 本發(fā)明所用述語"預(yù)防"指通過給予根據(jù)本發(fā)明的疫苗組合物抑制偽狂犬病毒感 染或推遲偽狂犬發(fā)作的所有行為。術(shù)語"治療"指通過給予根據(jù)本發(fā)明的疫苗組合物使偽 狂犬病毒感染引起的癥狀減輕或轉(zhuǎn)好的所有行為。
[0019] 本發(fā)明所述用語"犬"是指人類最早馴養(yǎng)的家畜之一，也稱狗。最早由狼（Canis lupus)、胡狼、財（Cuon alpinus)等馴化而來(多起源)，現(xiàn)已有200余個品種，如牧羊犬、柴 犬、雪橇犬、獵犬、貴賓犬等。
[0020] 如上所述，現(xiàn)有技術(shù)沒有公開抗犬偽狂犬病疫苗或相關(guān)的藥物，并且由于偽狂犬 基因組很大，對于不同種屬，其毒性蛋白不一致，而且，不同種屬的動物對疫苗的敏感性也 不同，因此，如果對犬類接種豬偽狂犬病疫苗，不但不能有效預(yù)防犬偽狂犬病，還容易造成 犬接種疫苗后2-3天犬發(fā)病死亡。
[0021] 本發(fā)明的 申請人:通過大量試驗，克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，研究開發(fā)了一種 利用豬偽狂犬病疫苗制備的抗犬偽狂犬病藥物組合物。將本發(fā)明中的抗犬偽狂犬病藥物組 合物作為疫苗接種于犬類，既未出現(xiàn)犬類死亡，又能達到有效預(yù)防該病的效果。根據(jù)本發(fā)明 用豬偽狂犬活疫苗制成的抗犬偽狂犬病藥物組合物作為疫苗免疫犬后，可以顯著降低犬食 用病豬肉后所致的發(fā)病率和死亡率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022] 下面結(jié)合附圖來對本發(fā)明作進一步詳細(xì)說明：
[0023] 圖1是病死豬內(nèi)臟PCR鑒定結(jié)果；
[0024] 圖1中附圖標(biāo)記的含義如下：
[0025] M DL2000DNA Marker ;1 陰性對照；2 陽性對照；
[0026] 3 1號病豬肝樣品；4 2號病豬肝樣品；5 3號病豬肝樣品；
[0027] 6 1號病豬肺樣品；7 2號病豬肺樣品；8 3號病豬肺樣品。

【具體實施方式】
[0028] 為使本發(fā)明更加容易理解，下面將結(jié)合附圖和實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明，這些實 施例僅起說明性作用，并不局限于本發(fā)明的應(yīng)用范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方 法，通常按照常規(guī)實驗方法進行。
[0029] 實施例
[0030] 實施例1 :
[0031] 本發(fā)明所使用的疫苗有：偽狂犬病活疫苗(批號：1303003A，普萊柯生物工程股份 有限公司生產(chǎn))、豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株)(批號：1303004,中牧實業(yè)股份有限公司成都 藥械廠生產(chǎn))、豬偽狂犬病活疫苗(批號：42LH，西班牙海博萊生物大藥廠生產(chǎn))。
[0032] 本發(fā)明所使用的主要試劑為豬偽狂犬病病毒檢測試劑為豬偽狂犬病毒PCR檢測 試劑盒(批號：PR20120420,北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司）。
[0033] 本實施例在河南省洛陽市周邊三個犬場完成，分別編號為犬場A、犬場B和犬場C。 犬場A和C為藏獒犬場，犬場B為小型犬犬場，經(jīng)營有不同的犬種。
[0034] 1、動物分組：
[0035] 犬場A和C隨機選取1周歲以下的犬20只、1周歲以上的犬各20只，分別隨機分 成2組，10只/組，一組為接種豬偽狂犬病活疫苗的免疫組，另一組為未接種疫苗的對照組； 犬場B隨機選取1周歲以下的犬10只，1周歲以上的犬10只，分別隨機分成2組，5只/組， 一組為接種豬偽狂犬病活疫苗的免疫組，另一組為未接種疫苗的對照組。3個犬場分別使用 3個不同品種的豬偽狂犬病活疫苗。2、疫苗接種：
[0036] 1) 1周歲以下犬的免疫接種：取疫苗，用無菌生理鹽水將疫苗稀釋成1頭份/ml 后，再用無菌生理鹽水進行15倍稀釋，制成抗犬偽狂犬病藥物組合物，并對免疫組犬進行 皮下接種，lml/只，對照組犬皮下接種無菌生理鹽水lml/只。
[0037] 2) 1周歲以上犬的免疫接種：取疫苗，用無菌生理鹽水將疫苗稀釋成1頭份/ml 后，再用無菌生理鹽水進行5倍稀釋，制成抗犬偽狂犬病藥物組合物，并對免疫組犬進行皮 下接種，lml/只，對照組犬皮下接種無菌生理鹽水lml/只。
[0038] 3)疫苗接種后每天觀察試驗犬的臨床癥狀。
[0039] 3、免疫效果的檢測：
[0040] 免疫后3周，將試驗犬隔離飼養(yǎng)，取豬偽狂犬病病死小豬(約50日齡）肝臟或肺臟 (共3只病死豬，分別編號為1、2和3號病豬，來自同一發(fā)病豬場，死前均表現(xiàn)為不同程度的 神經(jīng)癥狀、昏睡、嘔吐和發(fā)熱，死后取肝臟和肺臟使用豬偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒檢測， 結(jié)果均為陽性，見圖1)，連同豬肉剁成小塊后同時喂食免疫組和對照組犬，1天內(nèi)喂食2次， 1周歲以上犬約l〇〇g/只/次，1周歲以下犬約50g/只/次，然后正常飼養(yǎng)，每天觀察犬的 臨床癥狀和死亡情況，連續(xù)觀察7天。
[0041] 4、結(jié)果：
[0042] 1)將制成抗犬偽狂犬病藥物組合物作為疫苗對犬類進行接種后，三個犬場中25 只接種疫苗的犬僅2只出現(xiàn)了體溫升高，食欲降低的犬，且這2只犬均為1周歲以下的犬，2 天后即恢復(fù)正常。其余犬只的臨床表現(xiàn)均正常，表明該疫苗對犬是安全的。
[0043] 2)免疫效果：免疫后3周，喂食2次豬偽狂犬病死豬內(nèi)臟和豬肉后，三個犬場的對 照組犬只100%發(fā)病并死亡，均于喂食病豬內(nèi)臟和豬肉后3-4天發(fā)病，發(fā)病后36小時內(nèi)死 亡；免疫組犬只僅1只死亡，發(fā)病和死亡時間、臨床癥狀均與對照組相似，其余均鍵活，詳見 表1，表明豬偽狂犬活疫苗可以在犬體內(nèi)誘導(dǎo)有效的免疫反應(yīng)。結(jié)果詳見表2。
[0044] 表1 :喂食病死豬內(nèi)臟和豬肉后試驗犬臨床表現(xiàn)記錄表
[0045]

【權(quán)利要求】
1. 一種抗犬偽狂犬病藥物組合物，其特征在于，所述組合物中包含豬偽狂犬病疫苗和 用于將所述豬偽狂犬病疫苗稀釋至相當(dāng)于豬用標(biāo)準(zhǔn)1頭份/ml的0. 5-0. 05倍濃度的稀釋 用無菌生理鹽水或無菌水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述豬偽狂犬病疫苗包括豬偽狂 犬病滅活疫苗、活疫苗、亞單位疫苗和合成疫苗。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述豬偽狂犬病疫苗為豬偽狂犬 病活疫苗。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，所述豬偽狂犬病疫苗為自然缺失 毒性基因的自然缺失株或人工缺失毒性基因的基因變異株。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述豬偽狂犬病疫苗選自豬偽 狂犬病活疫苗（Bartha K-61株)、豬偽狂犬病活疫苗（Bucharest株)、豬偽狂犬病活疫苗 (HB-98株)、豬偽狂犬病活疫苗（SA215株）中一種或多種。
【文檔編號】A61K39/245GK104248756SQ201310263505
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2013年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月27日
【發(fā)明者】張許科, 孫進忠, 田克恭 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司