阿魏酰低聚糖及其制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖及其制備方法及用途。具體方法為：向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和1g/L蛋白胨制得培養(yǎng)基；利用該培養(yǎng)基進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵，控制起始發(fā)酵pH4.0、起始溫度33℃，在發(fā)酵至36h時(shí)，將pH和溫度分別調(diào)控為6.0和29℃，發(fā)酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。本發(fā)明制得的阿魏酰低聚糖具有抗腫瘤活性及免疫增強(qiáng)活性，可用作制備保健食品及天然藥物，同時(shí)也提升了麥麩利用的附加值。
【專利說明】阿魏酰低聚糖及其制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及ー種具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖及其制備方法和用途，屬于天然藥物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]阿魏酰低聚糖(FOs)是ー類廣泛存在于禾本科植物中的不同糖鏈位置上的羥基與阿魏酸(FA)羧基酯化形成的功能性低聚糖。FOs具有阿魏?；c親水性的低聚糖基團(tuán)，兼具水溶性和耐熱性。目前的研究主要集中在其制備方法及抗氧化的生物活性上，由于FOs具有較強(qiáng)的抗氧化性和生物活性，其抗氧化活性強(qiáng)于阿魏酸及膳食纖維，對Fe2+、H2O2和羥自由基具有較強(qiáng)的清除能力，F(xiàn)Os還具有抑制金黃色葡萄球菌的生長、増殖雙歧桿菌和對蛋白非酶糖基化反應(yīng)具有抑制作用等功能，因而，F(xiàn)Os在保健食品和醫(yī)藥エ業(yè)中具有廣闊的應(yīng)用前景，但其體內(nèi)生物活性有待深入研究，低聚糖的生物活性與其結(jié)構(gòu)有著密切的關(guān)系，F(xiàn)Os組分及聚合度對抗腫瘤活性及免疫增強(qiáng)活性的影響未見報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]有鑒于此，提供ー種具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖及其制備方法和用途實(shí)為必要。
[0004]ー種具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖，由以下方法制得:
[0005](I)配置培養(yǎng)基:向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨；
[0006](2)發(fā)酵培養(yǎng)基:利用該培養(yǎng)基進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵，控制起始發(fā)酵pH4.0、起始溫度33°C，在發(fā)酵至36h時(shí)，將pH和溫度分別調(diào)控為6.0和29°C，發(fā)酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
[0007]上述阿魏酰低聚糖由聚合度分別為6、5、4，由分子量分別為1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)構(gòu)成。
[0008]上述具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖在制備抗腫瘤藥物中增強(qiáng)免疫保健品中的用途。
[0009]本發(fā)明提供一種制備阿魏酰低聚糖的方法，由其制得的阿魏酰低聚糖具有抗腫瘤活性及免疫增強(qiáng)活性，將阿魏酰低聚糖在保健食品及醫(yī)藥中的應(yīng)用變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)，同時(shí)也提升了麥麩利用的附加值。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)ー步說明
[0011]制備具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖，具體方法為:向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨制得培養(yǎng)基；利用該培養(yǎng)基進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵，控制起始發(fā)酵pH4.0、起始溫度33 °C，在發(fā)酵至36h時(shí)，將pH和溫度分別調(diào)控為6.0和29°C，發(fā)酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
[0012]經(jīng)液相色譜及氣相色譜分析表明，上述阿魏酰低聚糖由木糖、阿拉伯糖和阿魏酸三種成分組成；紫外光譜分析表明，F(xiàn)Os在MOPS緩沖液中在325nm處具有最大值；紅外光譜分析表明，F(xiàn)Os中存在羥基、酯鍵及阿拉伯糖基等特征基團(tuán)；電噴霧電離質(zhì)譜分析表明，F(xiàn)Os聚合度分別為6、5、4，由分子量分別為1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)構(gòu)成。
[0013]阿魏酰低聚糖抗腫瘤及免疫增強(qiáng)活性藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
[0014]一、FOs體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)
[0015]1.受試藥物的配制
[0016]精密稱取樣品FOs，加入DMSO溶解，在37°C超聲條件下充分稀釋成均勻溶液，按比例稀釋，濃度范圍為1000ug/ml-7.8ug/ml。
[0017]2.腫瘤細(xì)胞株的培養(yǎng)
[0018]細(xì)胞株BGC-823和H印G2采用添加10%胎牛血清的RPM1-1640培養(yǎng)液，細(xì)胞株A549采用添加10%胎牛血清的F-12Nutrient Mixture培養(yǎng)液，在37.(TC、空氣濃度95%和CO2濃度5%的條件下培養(yǎng)。
[0019]3.細(xì)胞生長抑制實(shí)驗(yàn)
[0020]將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞BGC-823、H印G2和A549采用0.02% EDTA消化，制成細(xì)胞懸液。以I X IO5的細(xì)胞濃度加入96孔培養(yǎng)板100 u I/孔，設(shè)三重復(fù)孔，置于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時(shí)后，分別加入終濃度水平從1000ug/ml-7.8ug/ml的樣品FOs，培養(yǎng)48小吋。然后加5mg/ml MTT溶液20 yl/孔，于37°C繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄去全部上清，カロ入DMSO100 u I/孔，微型振蕩器 上振5min，使結(jié)晶完全溶解，用酶聯(lián)儀570nn波長處測定吸光度值(A)，計(jì)算細(xì)胞抑制率。生長抑制率用量效曲線計(jì)算的IC5tl(與對照品相比使細(xì)胞生長下降50%的藥物濃度)來表示，采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評價(jià)。
[0021 ] 4.FOs對細(xì)胞株生長抑制作用
[0022]FOs在體外對人肝癌細(xì)胞H印G2、人胃癌細(xì)胞BGC-823、人肺腺癌細(xì)胞A549的生長均具有一定的抑制作用，且生長抑制率隨藥物濃度的増加呈上升趨勢，如表1、2、3所示。當(dāng)藥物濃度達(dá)到1000 u g/mL吋，F(xiàn)Os對各癌細(xì)胞株的抑制活性都最高，且對人肝癌細(xì)胞H印G2的生長抑制效果最好。
[0023]表IFOs對人肝癌細(xì)胞H印G2生長抑制作用
[0024]
【權(quán)利要求】
1.ー種具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖，由以下方法制得: (1)配置培養(yǎng)基:向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨； (2)發(fā)酵培養(yǎng)基:利用該培養(yǎng)基進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵，控制起始發(fā)酵pH4.0、起始溫度33°C，在發(fā)酵至36h吋，將pH和溫度分別調(diào)控為6.0和29°C，發(fā)酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
2.如權(quán)利要求1所述阿魏酰低聚糖，其特征在于:由聚合度分別為6、5、4，分子量分別為1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)構(gòu)成。
3.如權(quán)利要求1所述具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求1所述具有抗腫瘤和免疫增強(qiáng)活性的阿魏酰低聚糖在制備增強(qiáng)免疫保健品中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P37/04GK103450290SQ201310354823
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月15日
【發(fā)明者】余曉紅, 顧振新, 李成, 申玉香, 李鳳偉 申請人:鹽城工學(xué)院