銀杏葉提取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開的銀杏葉提取物的制備方法，包括水洗、甩干、粉碎、水提、上柱、解析、萃取和干燥8個步驟，本發(fā)明的制備方法使用HCl溶液進行水提，在酸性環(huán)境下迅速破壞銀杏葉的細胞膜和細胞壁，將銀杏葉中的有效成分充分地溶解于提取液中，進而使得最終的銀杏葉中有效成分的含量提高至85%；利用大孔樹脂在酸性條件下增強吸附的特點，減少了回收工序，并且有效去除雜質(zhì)，進一步提高了產(chǎn)品的收率和有效成分的含量，分別采用石油醚和無水乙醇作為萃取的溶劑，溶劑成本低，并且由于溶劑易揮發(fā)，溶劑的殘留量也很低，最終制得純天然高含量的低酸的銀杏葉提取物。
【專利說明】銀杏葉提取物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥制備【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種銀杏葉提取物的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國的銀杏葉資源占全世界的70%，從銀杏葉中提取的產(chǎn)品銀杏葉提取物(GBE)是國內(nèi)和國際市場上預(yù)防和治療心腦血管類疾病藥的首選原料。銀杏葉提取物的有效成分主要是黃酮苷類和萜類物質(zhì)。黃酮苷類占24%，以槲皮素、山奈素、異鼠李素為主；萜類占6%，以銀杏內(nèi)酯(GA、GB、GC)、白果內(nèi)酯(BB)為主。而GBE中的萜類內(nèi)酯中的銀杏內(nèi)酯B是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的血小板活化因子拮抗劑，在臨床上治療血栓、急性胰腺炎和心血管疾病，其療效優(yōu)于其他同類藥。近年來研究發(fā)現(xiàn)，該提取物還可用于轉(zhuǎn)移性癌癥的治療。
[0003]銀杏葉提取物制備方法主要有2種，分別為水蒸氣蒸餾法、有機溶劑萃取法(如乙醇、甲醇、乙酸乙酯等)。水蒸氣蒸餾法具有設(shè)備簡單、成本低、對環(huán)境和人類無毒害的優(yōu)點，但提取率低、雜質(zhì)含量較高，且后處理難度大。有機溶劑萃取法選擇性高，產(chǎn)品提取率高，但溶劑損耗大，成本高，且溶劑殘留量大，對人類和環(huán)境有不良的影響。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種銀杏葉提取物的制備方法，解決了現(xiàn)有的水蒸氣蒸餾法提取率低、雜質(zhì)含量高的問題，同時解決了現(xiàn)有的有機溶劑萃取法溶劑成本高、溶劑殘留量大的問題。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:銀杏葉提取物的制備方法，包括如下步驟:
[0006]第一步，水洗`
[0007]將采摘好的銀杏葉用清水沖洗，以去除葉面的灰塵和雜質(zhì)；
[0008]第二步，甩干
[0009]將第一步洗凈的銀杏葉放入離心機中，對銀杏葉進行甩干；
[0010]第三步，粉碎
[0011]將經(jīng)過第二步處理的銀杏葉放入粉碎機中，對銀杏葉進行粉碎處理，制得銀杏葉粉末；
[0012]第四步，水提
[0013]將經(jīng)過第三步處理的銀杏葉粉末使用HCl溶液進行多次提取，獲得混合提取液；
[0014]第五步，上柱
[0015]將第四步制得的混合提取液依次進行過濾、冷卻、靜置和離心過濾后，采用大孔樹脂柱對混合提取液進行吸附，使得混合提取液中的有效成分被大孔樹脂完全吸附；
[0016]第六步，解析
[0017]將第五步中吸附了銀杏葉提取液中有效成分的大孔樹脂，使用純凈水沖洗，以去除蛋白質(zhì)及多糖類大分子雜質(zhì)，再使用乙醇對大孔樹脂進行梯度解析，得到混合解析液，混合解析液經(jīng)過濃縮得到粗浸膏；[0018]第七步，萃取
[0019]向第六步制得的粗浸膏中加入石油醚進行數(shù)次萃取，得到混合有石油醚的細浸膏，然后使用旋蒸法使得細浸膏中的石油醚揮發(fā)干凈，再向細浸膏中加入無水乙醇使得細浸膏完全溶解，然后依次進行冷卻、沉降、離心過濾和濃縮處理，制得銀杏葉提取物浸膏。
[0020]第八步，干燥
[0021]將第七步制得的銀杏葉提取物浸膏放入真空干燥機中進行干燥處理，最終制得銀杏葉提取物。
[0022]本發(fā)明的特點還在于，
[0023]第三步中粉碎機使用的篩網(wǎng)每平方英寸有20-40個網(wǎng)孔。
[0024]第四步中多次提取具體為:第一次提取，將銀杏葉粉末與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:45-60的比例進行混合形成第一次混合物，并將第一次混合物加熱至80-90°C，浸泡3-4小時，然后過濾，分別獲得濾渣以及第一次提取液；第二次提取，將濾渣與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:25-30的比例進行混合形成第二次混合物，并將第二次混合物加熱至95-100°C，浸泡2-3小時，然后過濾，獲得第二次提取液；然后將第一次提取液和第二次提取液進行混合，得到混合提取液。
[0025]第五步中吸附過程中，每噸大孔樹脂柱吸附I噸混合提取液。
[0026]第六步中梯度解析具體為:先使用質(zhì)量為大孔樹脂I-1.5倍的濃度為15%的乙醇溶液進行第一次解析，得到第一次解析液，再使用質(zhì)量為大孔樹脂2-3倍的濃度為80%的乙醇溶液進行第二次解析，得到第二次解析液，將兩次的解析液混合后，得到混合解析液。
[0027]第七步中數(shù)次萃取時，每次所用石油醚與粗浸膏的質(zhì)量比為2-3:1。
[0028]第七步中無水乙醇與細浸膏的質(zhì)量比為7-8:1。
[0029]第八步制得的銀杏葉提取物為棕黃色粉末狀。
[0030]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明的銀杏葉提取物的制備方法綜合了水蒸氣蒸餾法和有機溶劑萃取法的優(yōu)點，既解決了水蒸氣蒸餾法提取率不高和有機溶劑萃取法殘留大的問題，又能大大提高GBE中黃酮含量，具有制備工藝簡單、GBE純度高、提取率高、有機溶劑殘留小、溶劑損耗少、成本低的優(yōu)點。提取時加入HCL，利用酸性在短時間內(nèi)破壞銀杏葉的細胞膜和細胞壁，使銀杏葉中有效成分可以被充分析出，提高提取液中有效成分(銀杏內(nèi)酯)的含量。
【具體實施方式】
[0031]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明進行詳細說明。
[0032] 實施例1
[0033]銀杏葉提取物的制備方法，包括如下步驟:
[0034]第一步，水洗
[0035]將采摘好的銀杏葉用清水沖洗，以去除葉面的灰塵和雜質(zhì)；
[0036]第二步，甩干
[0037]將第一步洗凈的銀杏葉放入離心機中，對銀杏葉進行甩干；
[0038]第三步，粉碎[0039]將經(jīng)過第二步處理的銀杏葉放入粉碎機中，對銀杏葉進行粉碎處理，制得銀杏葉粉末，其中粉碎機所用篩網(wǎng)每平方英寸有20個網(wǎng)孔；
[0040]第四步，水提
[0041]將經(jīng)過第三步處理的銀杏葉粉末與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:45的比例進行混合形成第一次混合物，并將第一次混合物加熱至80°C，浸泡3小時，然后過濾，分別獲得濾渣以及第一次提取液；再將濾渣與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:25的比例進行混合形成第二次混合物，并將第二次混合物加熱至95°C，浸泡2小時，然后過濾，獲得第二次提取液；然后將第一次提取液和第二次提取液進行混合，得到混合提取液；
[0042]第五步，上柱
[0043]將第四步制得的混合提取液依次進行過濾、冷卻、靜置和離心過濾后，采用大孔樹脂柱對混合提取液進行吸附，使得混合提取液中的有效成分被大孔樹脂完全吸附，其中大孔樹脂和混合提取液的質(zhì)量比為1:1;
[0044]第六步，解析
[0045]將第五步中吸附了銀杏葉提取液中有效成分的大孔樹脂，使用純凈水沖洗，以去除蛋白質(zhì)及多糖類大分子雜質(zhì)，再使用質(zhì)量為大孔樹脂I倍的濃度為15%的乙醇溶液進行第一次解析，得到第一次解析液，再使用質(zhì)量為大孔樹脂2倍的濃度為80%的乙醇溶液進行第二次解析，得到第二次解析液，將兩次的解析液混合后，得到混合解析液，混合解析液經(jīng)過濃縮得到粗浸膏；
[0046]第七步，萃取
[0047]向第六步制得的粗浸膏中加入石油醚進行數(shù)次萃取，每次萃取時所用石油醚與粗浸膏的質(zhì)量比為2:1，得到混合有石油醚的細浸膏，然后使用旋蒸法使得細浸膏中的石油醚揮發(fā)干凈，再向細浸膏中加入無水乙醇使得細浸膏完全溶解，其中無水乙醇與細浸膏的質(zhì)量比為7:1，然后依次進行冷卻、沉降、離心過濾和濃縮處理，制得銀杏葉提取物浸膏。
[0048]第八步，干燥
[0049]將第七步制得的銀杏葉提取物浸膏放入真空干燥機中進行干燥處理，最終制得棕黃色粉末狀的銀杏葉提取物。
[0050]本實施例使用HCl溶液進行水提，在酸性環(huán)境下迅速破壞銀杏葉的細胞膜和細胞壁，將銀杏葉中的有效成分充分地溶解于提取液中，進而使得最終的銀杏葉中有效成分的含量提高至85% ;利用大孔樹脂在酸性條件下增強吸附的特點，減少了回收工序，并且有效去除雜質(zhì)，進一步提高了產(chǎn)品的收率和有效成分的含量，分別采用石油醚和無水乙醇作為萃取的溶劑，溶劑成本低，并且由于溶劑易揮發(fā)，溶劑的殘留量也很低，最終制得純天然高含量的低酸的銀杏葉提取物。
[0051]本實施例制得的銀杏葉提取物，經(jīng)HPLC檢測，按照質(zhì)量份數(shù)計算，黃酮苷類占25% ;萜類占 8.81%，其中銀杏內(nèi)酯(GA,GB,GC)的 GA 占 2.61%, GB 占 1.47%, GC 占 1.02%,白果內(nèi)酯(BB)占3.7%，達到了藥用GBE的標準。
[0052]實施例2[0053]銀杏葉提取物的制備方法，包括如下步驟:
[0054]第一步，水洗[0055]將采摘好的銀杏葉用清水沖洗，以去除葉面的灰塵和雜質(zhì)；
[0056]第二步，甩干
[0057]將第一步洗凈的銀杏葉放入離心機中，對銀杏葉進行甩干；
[0058]第三步，粉碎
[0059]將經(jīng)過第二步處理的銀杏葉放入粉碎機中，對銀杏葉進行粉碎處理，制得銀杏葉粉末，其中粉碎機所用篩網(wǎng)每平方英寸有40個網(wǎng)孔；
[0060]第四步，水提[0061]將經(jīng)過第三步處理的銀杏葉粉末與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:60的比例進行混合形成第一次混合物，并將第一次混合物加熱至90°C，浸泡4小時，然后過濾，分別獲得濾渣以及第一次提取液；再將濾渣與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:30的比例進行混合形成第二次混合物，并將第二次混合物加熱至100°C，浸泡3小時，然后過濾，獲得第二次提取液；然后將第一次提取液和第二次提取液進行混合，得到混合提取液；
[0062]第五步，上柱
[0063]將第四步制得的混合提取液依次進行過濾、冷卻、靜置和離心過濾后，采用大孔樹脂柱對混合提取液進行吸附，使得混合提取液中的有效成分被大孔樹脂完全吸附，其中大孔樹脂和混合提取液的質(zhì)量比為1:1;
[0064]第六步，解析
[0065]將第五步中吸附了銀杏葉提取液中有效成分的大孔樹脂，使用純凈水沖洗，以去除蛋白質(zhì)及多糖類大分子雜質(zhì)，再使用質(zhì)量為大孔樹脂1.5倍的濃度為15%的乙醇溶液進行第一次解析，得到第一次解析液，再使用質(zhì)量為大孔樹脂3倍的濃度為80%的乙醇溶液進行第二次解析，得到第二次解析液，將兩次的解析液混合后，得到混合解析液，混合解析液經(jīng)過濃縮得到粗浸膏；
[0066]第七步，萃取
[0067]向第六步制得的粗浸膏中加入石油醚進行數(shù)次萃取，每次萃取時所用石油醚與粗浸膏的質(zhì)量比為3:1，得到混合有石油醚的細浸膏，然后使用旋蒸法使得細浸膏中的石油醚揮發(fā)干凈，再向細浸膏中加入無水乙醇使得細浸膏完全溶解，其中無水乙醇與細浸膏的質(zhì)量比為8:1，然后依次進行冷卻、沉降、離心過濾和濃縮處理，制得銀杏葉提取物浸膏。
[0068]第八步，干燥
[0069]將第七步制得的銀杏葉提取物浸膏放入真空干燥機中進行干燥處理，最終制得棕黃色粉末狀的銀杏葉提取物。
[0070]本實施例使用HCl溶液進行水提，在酸性環(huán)境下迅速破壞銀杏葉的細胞膜和細胞壁，將銀杏葉中的有效成分充分地溶解于提取液中，進而使得最終的銀杏葉中有效成分的含量提高至85% ;利用大孔樹脂在酸性條件下增強吸附的特點，減少了回收工序，并且有效去除雜質(zhì)，進一步提高了產(chǎn)品的收率和有效成分的含量，分別采用石油醚和無水乙醇作為萃取的溶劑，溶劑成本低，并且由于溶劑易揮發(fā)，溶劑的殘留量也很低，最終制得純天然高含量的低酸的銀杏葉提取物。
[0071]本實施例制得的銀杏葉提取物，經(jīng)HPLC檢測，按照質(zhì)量份數(shù)計算，黃酮苷類占32% ;萜類占 11.39%，其中銀杏內(nèi)酯(GA、GB、GC)的 GA 占 3.7%, GB 占 1.79%, GC 占 1.1%、白果內(nèi)酯(BB)占4.8%，達到了藥用GBE的標準。
[0072]實施例3
[0073]銀杏葉提取物的制備方法，包括如下步驟:
[0074]第一步，水洗
[0075]將采摘好的銀杏葉用清水沖洗，以去除葉面的灰塵和雜質(zhì)；
[0076]第二步，甩干
[0077]將第一步洗凈的銀杏葉放入離心機中，對銀杏葉進行甩干；
[0078]第三步，粉碎
[0079]將經(jīng)過第二步處理的銀杏葉放入粉碎機中，對銀杏葉進行粉碎處理，制得銀杏葉粉末，其中粉碎機所用篩網(wǎng)每平方英寸有30個網(wǎng)孔；
[0080]第四步，水提
[0081]將經(jīng)過第三步處理的銀杏葉粉末與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:50的比例進行混合形成第一次混合物，并將第一次混合物加熱至85°C，浸泡3.5小時，然后過濾，分別獲得濾渣以及第一次提取液；再將濾渣與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:28的比例進行混合形成第二次混合物，并將第二次混合物加熱至97°C，浸泡2.5小時，然后過濾，獲得第二次提取液；然后將第一次提取液和第二次提取液進行混合，得到混合提取液；
`[0082]第五步，上柱
[0083]將第四步制得的混合提取液依次進行過濾、冷卻、靜置和離心過濾后，采用大孔樹脂柱對混合提取液進行吸附，使得混合提取液中的有效成分被大孔樹脂完全吸附，其中大孔樹脂和混合提取液的質(zhì)量比為1:1;
[0084]第六步，解析
[0085]將第五步中吸附了銀杏葉提取液中有效成分的大孔樹脂，使用純凈水沖洗，以去除蛋白質(zhì)及多糖類大分子雜質(zhì)，再使用質(zhì)量為大孔樹脂1.3倍的濃度為15%的乙醇溶液進行第一次解析，得到第一次解析液，再使用質(zhì)量為大孔樹脂2.5倍的濃度為80%的乙醇溶液進行第二次解析，得到第二次解析液，將兩次的解析液混合后，得到混合解析液，混合解析液經(jīng)過濃縮得到粗浸膏；
[0086]第七步，萃取
[0087]向第六步制得的粗浸膏中加入石油醚進行數(shù)次萃取，每次萃取時所用石油醚與粗浸膏的質(zhì)量比為2.5:1，得到混合有石油醚的細浸膏，然后使用旋蒸法使得細浸膏中的石油醚揮發(fā)干凈，再向細浸膏中加入無水乙醇使得細浸膏完全溶解，其中無水乙醇與細浸膏的質(zhì)量比為7.5:1，然后依次進行冷卻、沉降、離心過濾和濃縮處理，制得銀杏葉提取物浸膏。
[0088]第八步，干燥
[0089]將第七步制得的銀杏葉提取物浸膏放入真空干燥機中進行干燥處理，最終制得棕黃色粉末狀的銀杏葉提取物。
[0090]本實施例使用HCl溶液進行水提，在酸性環(huán)境下迅速破壞銀杏葉的細胞膜和細胞壁，將銀杏葉中的有效成分充分地溶解于提取液中，進而使得最終的銀杏葉中有效成分的含量提高至85% ;利用大孔樹脂在酸性條件下增強吸附的特點，減少了回收工序，并且有效去除雜質(zhì)，進一步提高了產(chǎn)品的收率和有效成分的含量，分別采用石油醚和無水乙醇作為萃取的溶劑，溶劑成本低，并且由于溶劑易揮發(fā)，溶劑的殘留量也很低，最終制得純天然高含量的低酸的銀杏葉提取物。
[0091]本實施例制得的銀杏葉提取物，經(jīng)HPLC檢測，按照質(zhì)量份數(shù)計算，黃酮苷類占35% ;萜類占12.39%，其中銀杏內(nèi)酯(GA、GB、GC)的占GA4.1%，GBl.98%, GC占1.3%,白果內(nèi)酯(BB)占5.2%，達到了藥 用GBE的標準。
【權(quán)利要求】
1.銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 第一步，水洗 將采摘好的銀杏葉用清水沖洗，以去除葉面的灰塵和雜質(zhì)； 第二步，甩干 將第一步洗凈的銀杏葉放入離心機中，對銀杏葉進行甩干； 第三步，粉碎 將經(jīng)過第二步處理的銀杏葉放入粉碎機中，對銀杏葉進行粉碎處理，制得銀杏葉粉末； 第四步，水提 將經(jīng)過第三步處理的銀杏葉粉末使用HCl溶液進行提取，獲得混合提取液； 第五步，上柱 將第四步制得的混合提取液依次進行過濾、冷卻、靜置和離心過濾后，采用大孔樹脂柱對混合提取液進行吸附，使得混合提取液中的有效成分被大孔樹脂完全吸附； 第六步，解析 將第五步中吸附了銀杏葉提取液中有效成分的大孔樹脂，使用純凈水沖洗，以去除蛋白質(zhì)及多糖類大分子雜質(zhì)，再使用乙醇對所述大孔樹脂進行梯度解析，得到混合解析液，混合解析液經(jīng)過濃縮得到粗浸膏； 第七步，萃取 向第六步制得的粗浸膏中加入石油醚進行數(shù)次萃取，得到混合有石油醚的細浸膏，然后使用旋蒸法使得細浸膏中的石油醚揮發(fā)干凈，再向細浸膏中加入無水乙醇使得細浸膏完全溶解，然后依次進行冷卻、沉降、離心過濾和濃縮處理，制得銀杏葉提取物浸膏； 第八步，干燥 將第七步制得的銀杏葉提取物浸膏放入真空干燥機中進行干燥處理，最終制得銀杏葉提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，第三步中所述粉碎機使用的篩網(wǎng)每平方英寸有20-40個網(wǎng)孔。
3.如權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，第四步中所述提取具體為:第一次提取，將銀杏葉粉末與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:45-60的比例進行混合形成第一次混合物，并將所述第一次混合物加熱至80-90°C，浸泡3-4小時，然后過濾，分別獲得濾渣以及第一次提取液；第二次提取，將濾渣與PH值為2.8-3.2的HCl溶液按照質(zhì)量比為1:25-30的比例進行混合形成第二次混合物，并將所述第二次混合物加熱至95-100°C，浸泡2-3小時，然后過濾，獲得第二次提取液；然后將第一次提取液和第二次提取液進行混合，得到混合提取液。
4.如權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，第五步中所述吸附過程中，每噸大孔樹脂柱吸附I噸混合提取液。
5.如權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，第六步中所述梯度解析具體為:先使用質(zhì)量為大孔樹脂I-1.5倍的濃度為15%的乙醇溶液進行第一次解析，得到第一次解析液，再使用質(zhì)量為大孔樹脂2-3倍的濃度為80%的乙醇溶液進行第二次解析，得到第二次解析液，將兩次的解析液混合后，得到混合解析液。
6.如權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，第七步中所述數(shù)次萃取時，每次所用石油醚與所述粗浸膏的質(zhì)量比為2-3:1。
7.如權(quán)利要求1所述的銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于，第七步中無水乙醇與細浸膏的質(zhì)量比為7-8 :1。
【文檔編號】A61P7/02GK103446195SQ201310370709
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月22日
【發(fā)明者】謝志建, 白培芬 申請人:陜西洋縣志建藥業(yè)科技有限公司, 陜西洋縣瑞建有機保健食品有限公司