一種合成靶向性放射性碘標(biāo)記甲狀腺球蛋白納米膠囊的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種合成靶向性放射性碘標(biāo)記甲狀腺球蛋白納米膠囊的方法，制備步驟包括，1)、合成甲狀腺球蛋白納米膠囊，在甲狀腺球蛋白表面合成一層聚合物凝膠，合成蛋白納米膠囊；2)、合成靶向性甲狀腺球蛋白納米膠囊，將改性的葡萄糖或葡萄糖類似物化學(xué)鍵合在膠囊表面，賦予納米膠囊對腫瘤部位的靶向性作用；3)、放射性碘標(biāo)記，對納米膠囊進(jìn)行放射性碘-131或碘-125標(biāo)記。通過本方法合成的放射性碘標(biāo)記甲狀腺球蛋白納米膠囊具有碘-131攜帶量大、生物半衰期長、非靶組織攝取碘-131量低，治療副作用少等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種合成靶向性放射性碘標(biāo)記甲狀腺球蛋白納米膠囊的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療甲狀腺癌的藥物，尤其涉及一種治療甲狀腺癌的納米微膠囊。
【背景技術(shù)】
[0002]甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的腫瘤，其發(fā)病率正在逐年上升，其中最常見的是分化型甲狀腺癌(DTC，約占94% )，通過甲狀腺全切+放射性131I治療+T4抑制治療，較其他腫瘤，往往預(yù)后較好。然而30% DTC病灶在治療過程中會發(fā)生失分化，失分化病灶攝碘功能喪失，常規(guī)直接口服碘-131無法奏效，病人預(yù)后差。目前對于促進(jìn)DTC失分化病灶再分化、提高其碘攝取能力，主要有兩種嘗試。第一種是利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將NIS和TPO基因引入DTC失分化病灶，恢復(fù)其攝碘能力，但是攝取的碘迅速外流，難以殺死腫瘤細(xì)胞，且這種嘗試仍停留在基礎(chǔ)研究，臨床實(shí)用性差。第二種嘗試是使用具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化作用的藥物誘導(dǎo)DTC失分化病灶再分化恢復(fù)攝碘能力，但存在的問題是副作用大、甲狀腺癌細(xì)胞攝碘功能不能穩(wěn)定上升。
[0003]因此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員致力于開發(fā)一種靶向性的治療甲狀腺癌特別是分化型甲狀腺癌的有效藥物，以提高甲狀腺癌的治療效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，本發(fā)明設(shè)計(jì)合成了一種全新的靶向性單蛋白納米膠囊系統(tǒng)，具有碘-131攜帶量大、生物半衰期長、非靶組織攝取碘-131量低，治療副作用少等優(yōu)點(diǎn)。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種合成靶向性放射性碘標(biāo)記甲狀腺球蛋白納米膠囊的方法，包括如下步驟:
[0006]I)、合成甲狀腺球蛋白納米膠囊
[0007]在甲狀腺球蛋白表面合成一層聚合物凝膠，聚合物包括但不限于聚乙二醇、單甲醚聚乙二醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酰胺，合成蛋白納米膠囊，針對合成的納米膠囊，以SDS-PAGE、瓊脂糖凝膠電泳、動態(tài)光散射(DLS)、Zeta電位測定等方法對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。
[0008]具體操作為，取IOmg甲狀腺球蛋白與Img N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺室溫下反應(yīng)一個小時(shí)后，用截留分子量3000的透析袋在PBS中透析24小時(shí)。在透析后的蛋白溶液中依次加入5mg甲基丙烯酸、Img N, N-亞甲基雙丙烯酰胺、0.1mg過硫酸鉀和I μ L四甲基二乙胺，溫和攪拌室溫下反應(yīng)2小時(shí)；反應(yīng)完成后在截留分子量100000透析袋中透析3天，以制得羧基化的甲狀腺球蛋白納米膠囊。針對合成的納米膠囊，以SDS-PAGE、瓊脂糖凝膠電泳、動態(tài)光散射(DLS)、Zeta電位測定等方法對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。
[0009]2)、合成靶向性甲狀腺球蛋白納米膠囊[0010]將改性的葡萄糖或葡萄糖類似物(比如氨基葡萄糖)化學(xué)鍵合在膠囊表面,借此賦予納米膠囊對腫瘤部位的靶向性作用。選用表面進(jìn)行了羧基化的甲狀腺球蛋白納米膠囊，利用羧基與氨基葡萄糖之間的酰胺化反應(yīng)，完成葡萄糖及其類似物在納米膠囊表面的修飾。
[0011]具體操作為，取IOmg甲狀腺球蛋白納米膠囊依次加入Img N-羥基丁二酰亞胺和2mgl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和5mg氨基葡萄糖，室溫反應(yīng)一個小時(shí)后，透析除去過量的投料，得到表面氨基化的甲狀腺球蛋白納米膠囊，借此賦予納米膠囊對腫瘤部位的靶向性作用。
[0012]3)、放射性碘標(biāo)記
[0013]由于每個納米膠囊內(nèi)部包裹有一個甲狀腺球蛋白，而甲狀腺球蛋白上存在大量的酪氨酸殘基，因此可以利用已有的成熟方法-1ogogen標(biāo)記技術(shù)對其進(jìn)行放射性碘-131/碘-125直接標(biāo)記。利用放射性薄層色譜儀測定(Radio-TLC)標(biāo)記率；將標(biāo)記物置于生理鹽水或小牛血清其體外/體內(nèi)穩(wěn)定性。
[0014]優(yōu)選地，步驟I)和步驟2)之間可以添加如下步驟，以調(diào)控甲狀腺球蛋白納米膠囊的表面物理化學(xué)特性。
[0015]選擇合適的單體調(diào)節(jié)納米膠囊的體內(nèi)分布和循環(huán)、表面改性能力和細(xì)胞攝碘能力。所選用單體包括但不限于聚乙二醇、丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺。通過單體的用料比例，調(diào)節(jié)所得納米膠囊的尺寸分布；通過選用特定性能的單體，調(diào)節(jié)所得納米膠囊的表明性能。
[0016]以下將結(jié)合附圖對本發(fā)明的構(gòu)思、具體結(jié)構(gòu)及產(chǎn)生的技術(shù)效果作進(jìn)一步說明，以充分地了解本發(fā)明的目的、特征和效果。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1是本發(fā)明的一個較佳實(shí)施例的流體力學(xué)尺寸分布
[0018]圖2是本發(fā)明的一個較佳實(shí)施例的Zeta電位
[0019]圖3是本發(fā)明的一個較佳實(shí)施例的透射電鏡照片
【具體實(shí)施方式】
[0020]實(shí)施例1
[0021]本實(shí)施例提供了一種優(yōu)選地合成靶向性放射性碘標(biāo)記甲狀腺球蛋白納米膠囊的方法，包括如下步驟:
[0022]I)、合成甲狀腺球蛋白納米膠囊
[0023]首先，IOmg甲狀腺球蛋白與Img N-丙烯酰氧基琥拍酰亞胺室溫下反應(yīng)一個小時(shí)后，用截留分子量3000的透析袋在PBS中透析24小時(shí)。在透析后的蛋白溶液中依次加入5mg甲基丙烯酸、Img N, N-亞甲基雙丙烯酰胺、0.1mg過硫酸鉀和IyL四甲基二乙胺,溫和攪拌室溫下反應(yīng)2小時(shí)；反應(yīng)完成后在截留分子量100000透析袋中透析3天，以制得羧基化的甲狀腺球蛋白納米膠囊。針對合成的納米膠囊，以SDS-PAGE、瓊脂糖凝膠電泳、動態(tài)光散射(DLS)、Zeta電位測定等方法對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。
[0024]2)、合成靶向性甲狀腺球蛋白納米膠囊[0025]IOmg甲狀腺球蛋白納米膠囊依次加入Img N-羥基丁二酰亞胺和2mgl-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和5mg氨基葡萄糖，室溫反應(yīng)一個小時(shí)后，透析除去過量的投料，得到表面氨基化的甲狀腺球蛋白納米膠囊，借此賦予納米膠囊對腫瘤部位的靶向性作用。
[0026]3)、放射性碘標(biāo)記
[0027]由于每個納米膠囊內(nèi)部包裹有一個甲狀腺球蛋白，而甲狀腺球蛋白上存在大量的酪氨酸殘基，因此我們可以利用已有的成熟方法對其進(jìn)行放射性碘-131/碘-125直接標(biāo)記，如采用-1ogogen標(biāo)記技術(shù)。利用放射性薄層色譜儀測定(Radio-TLC)標(biāo)記率；將標(biāo)記物置于生理鹽水或小牛血清其體外/體內(nèi)穩(wěn)定性。
[0028]以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的較佳具體實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域的普通技術(shù)無需創(chuàng)造性勞動就可以根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思作出諸多修改和變化。因此，凡本【技術(shù)領(lǐng)域】中技術(shù)人員依本發(fā)明的構(gòu)思在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上通過邏輯分析、推理或者有限的實(shí)驗(yàn)可以得到的技術(shù)方案，皆應(yīng)在由權(quán)利要 求書所確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種合成靶向性放射性碘標(biāo)記甲狀腺球蛋白納米膠囊的方法，包括如下步驟: 1)、合成甲狀腺球蛋白納米膠囊 在甲狀腺球蛋白表面合成一層聚合物凝膠，合成蛋白納米膠囊； 2)、合成靶向性甲狀腺球蛋白納米膠囊 將改性的葡萄糖或葡萄糖類似物化學(xué)鍵合在膠囊表面，賦予納米膠囊對腫瘤部位的靶向性作用； 3)、放射性碘標(biāo)記 對納米膠囊進(jìn)行放射性碘-131或碘-125標(biāo)記。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟I)中，所述聚合物凝膠為聚乙二醇、單甲醚聚乙二醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸或聚丙烯酰胺。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟I)和步驟2)之間還包括以下步驟， 選擇化合物單體調(diào)節(jié)納米 膠囊的體內(nèi)分布和循環(huán)、表面改性能力和細(xì)胞攝碘能力，所述化合物單體包括聚乙二醇、丙烯酸、甲基丙烯酸或丙烯酰胺。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟2)中，所述葡萄糖類似物為氨基葡萄糖。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟I)中，具體操作為， 取IOmg甲狀腺球蛋白與Img N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺室溫下反應(yīng)一個小時(shí)后，用截留分子量3000的透析袋在PBS中透析24小時(shí)； 在透析后的蛋白溶液中依次加入5mg甲基丙烯酸、Img N,N-亞甲基雙丙烯酰胺、0.1mg過硫酸鉀和I μ L四甲基二乙胺，溫和攪拌室溫下反應(yīng)2小時(shí)；反應(yīng)完成后在截留分子量100000透析袋中透析3天，制得羧基化的甲狀腺球蛋白納米膠囊。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟2)中，具體操作為， 取IOmg甲狀腺球蛋白納米膠囊依次加入Img N-羥基丁二酰亞胺和2mgl_乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和5mg氨基葡萄糖，室溫反應(yīng)一個小時(shí)后，透析除去過量的投料，得到表面氨基化的甲狀腺球蛋白納米膠囊，借此賦予納米膠囊對腫瘤部位的靶向性作用。
【文檔編號】A61P35/00GK103463617SQ201310376896
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月27日
【發(fā)明者】王輝, 梁勝, 盧云峰 申請人:王輝