流感病毒m1蛋白及其編碼基因和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種流感病毒M1蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明了M1蛋白，為如下（a）或（b）或（c）：（a）由序列表的序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；（b）由序列表的序列3所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；（c）將（a）或（b）經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且可以形成病毒樣顆粒的由其衍生的蛋白質(zhì)。M1蛋白可以作為形成病毒樣顆粒的功能組件，將其與其他功能蛋白片段融合，可以形成病毒樣顆粒狀的融合蛋白，大大增加功能片段的效果。
【專利說(shuō)明】流感病毒M1蛋白及其編碼基因和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種流感病毒Ml蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]流行性感冒病毒，簡(jiǎn)稱流感病毒，是一種造成人、狗、馬、豬及禽類等患流行性感冒的RNA病毒，在分類學(xué)上，流感病毒屬于正黏液病毒科，它會(huì)造成急性上呼吸道感染，并借由空氣迅速的傳播，在世界各地常會(huì)有周期性的大流行。
[0003]流感病毒分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒(流感)的病原體。其中甲型流感病毒抗原性易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行。
[0004]禽流感是禽流行性感冒的簡(jiǎn)稱，它是一種由甲型流感病毒的一種亞型(也稱禽流感病毒)引起的傳染性疾病，被國(guó)際獸疫局定為甲類傳染病，又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟。按病原體類型的不同，禽流感可分為高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大類。非致病性禽流感不會(huì)引起明顯癥狀，僅使染病的禽鳥(niǎo)體內(nèi)產(chǎn)生病毒抗體。低致病性禽流感可使禽類出現(xiàn)輕度呼吸道癥狀，食量減少，產(chǎn)蛋量下降，出現(xiàn)零星死亡。高致病性禽流感最為嚴(yán)重，發(fā)病率和死亡率均高,人感染高致病性禽流感死亡率約是60%，家禽感染的死亡率幾乎是
100% ο

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種流感病毒Ml蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明提供了一種 人工設(shè)計(jì)的Ml蛋白，為如下(a)或(b)或(C):
[0007](a)由序列表的序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0008](b)由序列表的序列3所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0009](c)將(a)或(b)經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且可以形成病毒樣顆粒的由其衍生的蛋白質(zhì)。
[0010]編碼所述Ml蛋白的基因也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0011]編碼所述Ml蛋白的基因優(yōu)選為如下(I)或(2)或(3)或(4)所述的DNA分子:
[0012](I)序列表的序列2所示的DNA分子；
[0013](2)序列表的序列4所示的DNA分子；
[0014](3)在嚴(yán)格條件下與(I)或(2)限定的DNA序列雜交且編碼可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子；
[0015](4)與(I)或(2)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子。
[0016]上述嚴(yán)格條件可為在6XSSC，0.5%SDS的溶液中，在65°C下雜交，然后用2XSSC、
0.1%SDS 和 I X SSC,0.1%SDS 各洗膜一次。
[0017]所述Ml蛋白形成的病毒樣顆粒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0018]本發(fā)明還保護(hù)所述Ml蛋白或所述Ml蛋白形成的病毒樣顆粒的應(yīng)用，為如下(I )或(II)或(III)或(IV):( I)作為功能蛋白片段的載體；(II)制備功能蛋白片段的載體；(III)作為細(xì)胞骨架；(IV)制備細(xì)胞骨架。所述功能蛋白片段可為具有疫苗功能的蛋白片段，具體可為具有禽流感疫苗功能的蛋白片段，更具體可為HA蛋白片段。所述HA蛋白片段具體可由序列表的序列5自N末端第253至267位氨基酸殘基組成。
[0019]本發(fā)明還保護(hù)具有所述Ml蛋白和功能蛋白片段的融合蛋白。所述功能蛋白片段可為具有疫苗功能的蛋白片段，具體可為具有禽流感疫苗功能的蛋白片段，更具體可為HA蛋白片段。所述HA蛋白片段具體可由序列表的序列5自N末端第253至267位氨基酸殘基組成。[0020]所述融合蛋白具體可為如下(d)或(e)或(f):
[0021](d)由序列表的序列5自N端第I至267位氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；
[0022](e)由序列表的序列5所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0023](f)將(d)或(e)經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且可以形成病毒樣顆粒的由其衍生的蛋白質(zhì)。
[0024]編碼所述融合蛋白的基因也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0025]編碼所述融合蛋白的基因優(yōu)選為如下(5)或(6)或(7)或(8)所述的DNA分子:
[0026](5)序列表的序列6自5’末端第I至801位核苷酸所不的DNA分子；
[0027](6)序列表的序列6所示的DNA分子；
[0028](7)在嚴(yán)格條件下與(5)或(6)限定的DNA序列雜交且編碼可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子；
[0029](8)與(5)或(6)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子。
[0030]所述融合蛋白形成的病毒樣顆粒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0031 ] 本發(fā)明還保護(hù)所述融合蛋白或所述融合蛋白形成的病毒樣顆粒在制備疫苗中的應(yīng)用。所述疫苗可為禽流感疫苗，具體可為針對(duì)禽H9N2亞型流感病毒的禽流感疫苗，進(jìn)一步具體可為針對(duì)AIV-SD株的禽流感疫苗。所述疫苗可為預(yù)防和/或治療疫苗。
[0032]本發(fā)明還保護(hù)一種疫苗，其活性成分為所述融合蛋白或所述融合蛋白形成的病毒樣顆粒。所述疫苗可為禽流感疫苗，具體可為針對(duì)禽H9N2亞型流感病毒的禽流感疫苗，進(jìn)一步具體可為針對(duì)AIV-SD株的禽流感疫苗。所述疫苗可為預(yù)防和/或治療疫苗。
[0033]禽H9N2 亞型流感病毒(Avian H9N2Influenza A Virus) AIV-SD 株，已于 2011 年3月22日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào))，保藏號(hào)為CGMCC N0.4689。禽H9N2亞型流感病毒又稱H9N2亞型禽流感病毒。禽H9N2亞型流感病毒(Avian H9N2Influenza A Virus)AIV_SD株CGMCC N0.4689 簡(jiǎn)稱 AIV-SD 株。
[0034]本發(fā)明提供的Ml蛋白可以作為形成病毒樣顆粒的功能組件，將其與其他功能蛋白片段融合，可以形成病毒樣顆粒狀的融合蛋白，大大增加功能片段的效果?；谠摍C(jī)理，本發(fā)明將Ml蛋白與HA蛋白片段融合，該融合蛋白形成病毒樣顆粒，其對(duì)禽流感病毒的保護(hù)效果大大優(yōu)于HA蛋白片段本身。本發(fā)明對(duì)于疫苗的研制具有重大價(jià)值。本發(fā)明對(duì)于禽流感病毒的預(yù)防或治療具有重大價(jià)值?！緦＠綀D】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1為實(shí)施例1中的SDS-PAGE電泳圖。
[0036]圖2為實(shí)施例1中電鏡觀察的照片。
[0037]圖3為實(shí)施例2中的SDS-PAGE電泳圖。
[0038]圖4為實(shí)施例2中電鏡觀察的照片。
【具體實(shí)施方式】
[0039]以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。
[0040]大腸桿菌BL21:北京博凌科為生物科技有限公司，貨號(hào)CCOSOSopET-SZaG)質(zhì)粒:北京諾博萊德科技有限公司。
[0041]禽H9N2 亞型流感病毒(Avian H9N2Influenza A Virus) AIV-SD 株，已于 2011 年3月22日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào))，保藏號(hào)為CGMCC N0.4689。禽H9N2亞型流感病毒又稱H9N2亞型禽流感病毒。禽H9N2亞型流感病毒(Avian H9N2Influenza A Virus)AIV_SD株CGMCC N0.4689 簡(jiǎn)稱 AIV-SD 株。
[0042]實(shí)施例1、Ml蛋白的制備
[0043]一、重組質(zhì)粒的制備
[0044]1、合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA分子(表達(dá)序列表的序列I所示的Ml蛋白)。
[0045]2、以步驟I合成的DNA分子為模板,用Primer-Ml-F和Primer-Ml-R組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
[0046]Primer-Ml-F:5’ -GGAATTCCATATGAGTCTTCTAACCG-3，；
[0047]Primer-Ml-R:5’ -CCGCTCGAGTACATTCTTTTCTAGT-3，。
[0048]3、用限制性內(nèi)切酶Nde I和Xho I雙酶切步驟2的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，回收酶切產(chǎn)物。
[0049]4、用限制性內(nèi)切酶Nde I和Xho I雙酶切pET_32a(+)質(zhì)粒，回收約5400bp的載體骨架。
[0050]5、將步驟3的酶切產(chǎn)物和步驟4的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒甲。根據(jù)測(cè)序結(jié)果,對(duì)重組質(zhì)粒甲進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下:在pET-32a(+)質(zhì)粒的Nde I和Xho I酶切位點(diǎn)之間插入了序列表的序列2自5’末端第4-756位核苷酸所示的雙鏈DNA分子。重組質(zhì)粒甲中，插入的DNA分子與pET-32a(+)質(zhì)粒上的部分DNA融合，形成序列表的序列4所示的融合基因，表達(dá)序列表的序列3所示的融合蛋白(序列3中，最后6個(gè)氨基酸殘基組成組氨酸標(biāo)簽)。
[0051]二、Ml蛋白溶液的制備
[0052]1、將步驟一得到的重組質(zhì)粒甲導(dǎo)入大腸桿菌BL21，得到重組菌。
[0053]2、將步驟I得到的重組菌接種至IOml含50 μ g/ml氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基，37°C>200rpm振蕩培養(yǎng)6_8h，得到種子液。
[0054]3、將步驟2得到的種子液接種至IOOOml含50 μ g/ml氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基，37°C、200rpm振蕩培養(yǎng)，OD600nm=I時(shí)加入IPTG并使其濃度為0.lmg/ml，繼續(xù)37°C、200rpm振蕩培養(yǎng)4h。
[0055]4、取步驟3的培養(yǎng)體系，離心收集菌體。
[0056]5、用Binding buffer重懸步驟4獲得的菌體,8000rpm離心IOmin,收集菌體。
[0057]6、用Binding buffer重懸步驟5得到的菌體,超聲破碎(超聲破碎儀購(gòu)自寧波新芝生物科技股份有限公司，型號(hào)為SCIENTZ-1I D ;超聲探頭為10Φ ;超聲6s，間歇12s，超聲100次),4°C、12000rpm離心15min,收集上清液。
[0058]7、將步驟6得到的上清液上樣于鎳柱(購(gòu)自廣州譽(yù)維生物科技儀器有限公司，貨號(hào)為7324610)，4°C靜置孵育l_2h，然后打開(kāi)鎳柱底部的塞子，棄除穿透液；然后用30個(gè)柱體積(實(shí)際應(yīng)用中，20-50個(gè)柱體積均可)的Wash Buffer洗滌鎳柱，以除去非特異性結(jié)合的雜蛋白；然后用2個(gè)柱體積(實(shí)際應(yīng)用中，1-3個(gè)柱體積均可)的Elution Buffer洗脫,收集過(guò)柱后溶液，即為Ml蛋白溶液。
[0059]純化過(guò)程中的SDS-PAGE電泳圖見(jiàn)圖1，泳道I為加入IPTG前的菌體的破碎液，泳道2為步驟6中超聲破碎后得到的上清液，泳道3和泳道4為步驟7得到的Ml蛋白溶液。
[0060]Binding buffer:含 20mM Tris>500mM NaCl、20mM imidazole, ρΗ8.0。
[0061]Wash Buffer:含 20mM Tris>500mM NaCl、60mM imidazole, pH8.0。
[0062]Elution Buffer:含 20mM Tris>500mM NaCl、500mM imidazole, pH8.0。
[0063]三、對(duì)照溶液的 制備
[0064]用PET_32a(+)質(zhì)粒代替重組質(zhì)粒甲進(jìn)行步驟二，得到對(duì)照溶液。
[0065]四、將步驟二制備的Ml蛋白溶液4°C靜置12小時(shí)，然后用電鏡觀察形態(tài)，照片見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，Ml蛋白可以形成病毒樣顆粒。所以Ml蛋白可以和功能蛋白(如具有疫苗作用的功能蛋白)形成存在形式為病毒樣顆粒狀的融合蛋白，該融合蛋白的效果將優(yōu)于單獨(dú)的功能蛋白。
[0066]五、將步驟三制備的對(duì)照溶液4°C靜置12小時(shí)，然后用電鏡觀察形態(tài)，觀察不到病
毒樣顆粒。
[0067]實(shí)施例2、融合蛋白的制備
[0068]一、重組質(zhì)粒的構(gòu)建
[0069]1、合成序列表的序列6自5’末端第I至801位所不的雙鏈DNA分子(表達(dá)序列表的序列5自N端第I至267位核苷酸所示的蛋白質(zhì)，序列5中，第I至252位氨基酸殘基組成Ml蛋白，第253至267位氨基酸殘基組成HA蛋白片段)。
[0070]2、以步驟I合成的DNA分子為模板,用Primer-F和Primer-R組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
[0071]Primer-F:5’ -GGAATTCCATATGAGTCTTCTAACCG-3，；
[0072]Primer-R:5’ -CCGCTCGAGCAGCTTGGGGTAGCT-3，。
[0073]3、用限制性內(nèi)切酶Nde I和Xho I雙酶切步驟2的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，回收酶切產(chǎn)物。
[0074]4、用限制性內(nèi)切酶Nde I和Xho I雙酶切pET_32a(+)質(zhì)粒，回收約5400bp的載體骨架。
[0075]5、將步驟3的酶切產(chǎn)物和步驟4的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒乙。根據(jù)測(cè)序結(jié)果,對(duì)重組質(zhì)粒乙進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下:在pET-32a(+)質(zhì)粒的Nde I和Xho I酶切位點(diǎn)之間插入了序列表的序列6自5’末端第4-801位核苷酸所示的雙鏈DNA分子。重組質(zhì)粒乙中，插入的DNA分子與pET-32a (+)質(zhì)粒上的部分DNA融合，形成序列表的序列6所示的融合基因，表達(dá)序列表的序列5所示的融合蛋白(序列5中，最后6個(gè)氨基酸殘基組成組氨酸標(biāo)簽)。
[0076]二、融合蛋白溶液的制備
[0077]用重組質(zhì)粒乙代替重組質(zhì)粒甲，其它同實(shí)施例1的步驟二。
[0078]得到融合蛋白溶液。
[0079]純化過(guò)程中的SDS-PAGE電泳圖見(jiàn)圖3，泳道I為加入IPTG前的菌體的破碎液，泳道2為步驟6中超聲破碎后得到的上清液，泳道3為步驟7得到的融合蛋白溶液。
[0080]三、HA片段溶液的制備
[0081]將序列表的序列6自5’末端第757至801位核苷酸所述的雙鏈DNA分子插入pET-32a(+)質(zhì)粒的Nde I和Xho I酶切位點(diǎn)之間，得到重組質(zhì)粒丙。
[0082]用重組質(zhì)粒丙代替重組質(zhì)粒乙，其它同實(shí)施例1的步驟二，得到HA片段溶液。
[0083]四、對(duì)照溶液的制備
[0084]用pET_32a(+)質(zhì)粒代替重組質(zhì)粒乙，其它同實(shí)施例1的步驟二，得到對(duì)照溶液。
[0085]五、將步驟二制備的融合蛋白溶液4°C靜置12小時(shí)，然后用電鏡觀察形態(tài)，照片見(jiàn)圖4。結(jié)果表明，融合蛋白可以形成病毒樣顆粒。
[0086]六、將步驟三制備的HA片段溶液4°C靜置12小時(shí)，然后用電鏡觀察形態(tài)，觀察不到
病毒樣顆粒。
[0087]七、將步驟四制備的對(duì)照溶液4°C靜置12小時(shí)，然后用電鏡觀察形態(tài)，觀察不到病
毒樣顆粒。
[0088]實(shí)施例3、疫苗的制備
[0089]一、疫苗甲的制備
[0090]油相:弗氏佐劑(購(gòu)自上海博蘊(yùn)生物科技有限公司代理sigma產(chǎn)品，貨號(hào):BY12096)。
[0091]水相:實(shí)施例2制備的融合蛋白溶液(蛋白濃度為0.lmg/ml)。
[0092]乳化:取I體積份油相放于乳化缸內(nèi)，開(kāi)動(dòng)電機(jī)慢速轉(zhuǎn)動(dòng)攪拌，同時(shí)緩慢加入I體積份水相，加完后再以10000轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌2~5分鐘；得到疫苗甲。
[0093]二、疫苗乙的制備
[0094]用實(shí)施例2制備的HA片段溶液等體積代替融合蛋白溶液進(jìn)行步驟一，得到疫苗乙。
[0095]三、對(duì)照品的制備
[0096]用實(shí)施例2制備的對(duì)照溶液等體積代替融合蛋白溶液進(jìn)行步驟一，得到對(duì)照品。
[0097]實(shí)施例4、融合蛋白的應(yīng)用
[0098]一、對(duì)雛雞免疫的效力
[0099]將雛雞(品種為SPF白杭雞， 購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)分為6組，每組10只，分別進(jìn)行如下處理:
[0100]第一組:單次注射實(shí)施例3制備的疫苗甲，每只雛雞皮下注射0.1ml ；
[0101]第二組:單次注射實(shí)施例3制備的疫苗甲，每只雛雞皮下注射0.2ml ；[0102]第三組:單次注射實(shí)施例3制備的疫苗甲，每只雛雞皮下注射0.4ml ；
[0103]第四組:單次注射實(shí)施例3制備的疫苗乙，每只雛雞皮下注射0.4ml ；
[0104]第五組:單次注射實(shí)施例3制備的對(duì)照品，每只雛雞皮下注射0.4ml ；
[0105]第六組:單次注射生理鹽水，每只雛雞皮下注射0.1ml0
[0106]免疫后第14天，用AIV-SD株病毒液對(duì)雛雞進(jìn)行攻毒(注射雛雞腿部肌肉)，每只雛
雞的攻毒劑量為IO7EID5tl，之后再連續(xù)觀察14天。攻毒后第14天統(tǒng)計(jì)攻毒保護(hù)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0107]表1雛雞疫苗的效力試驗(yàn)結(jié)果
[0108]
【權(quán)利要求】
1.Ml蛋白，為如下(a)或(b)或(C): (a)由序列表的序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (b)由序列表的序列3所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (c)將(a)或(b)經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且可以形成病毒樣顆粒的由其衍生的蛋白質(zhì)。
2.編碼權(quán)利要求1所述Ml蛋白的基因，所述基因優(yōu)選為如下(I)或(2)或(3)或(4)所述的DNA分子: (1)序列表的序列2所不的DNA分子； (2)序列表的序列4所不的DNA分子； (3)在嚴(yán)格條件下與(I)或(2)限定的DNA序列雜交且編碼可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子； (4)與(I)或(2)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子。
3.權(quán)利要求1所述Ml蛋白形成的病毒樣顆粒。
4.權(quán)利要求1所述Ml蛋白或權(quán)利要求4所述病毒樣顆粒的應(yīng)用，為如下(I)或(II)或(ΠΙ)或(IV):( I )作為功能蛋白片段的載體；(II)制備功能蛋白片段的載體；(III)作為細(xì)胞骨架；(IV)制備細(xì)胞骨架。.
5.具有權(quán)利要求1所述Ml蛋白和功能蛋白片段的融合蛋白。
6.如權(quán)利要求5所述的融合蛋白，其特征在于:所述融合蛋白為如下(d)或(e)或(f): (d)由序列表的序列5自N端第I至267位氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)； Ce)由序列表的序列5所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； Cf)將(d)或(e)經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且可以形成病毒樣顆粒的由其衍生的蛋白質(zhì)。
7.編碼權(quán)利要求6所述融合蛋白的基因，所述基因優(yōu)選為如下(5)或(6)或(7)或(8)所述的DNA分子: (5)序列表的序列6自5’末端第I至801位核苷酸所示的DNA分子； (6)序列表的序列6所示的DNA分子； (7 )在嚴(yán)格條件下與(5 )或(6 )限定的DNA序列雜交且編碼可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子； (8)與(5)或(6)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且可以形成病毒樣顆粒的蛋白的DNA分子。
8.權(quán)利要求5或6所述融合蛋白形成的病毒樣顆粒。
9.權(quán)利要求5或6所述融合蛋白或權(quán)利要求8所述病毒樣顆粒在制備疫苗中的應(yīng)用。
10.一種疫苗，其活性成分為權(quán)利要求5或6所述融合蛋白或權(quán)利要求8所述病毒樣顆粒。
【文檔編號(hào)】A61P31/16GK103467581SQ201310384342
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月26日
【發(fā)明者】劉文軍, 范文輝, 李晶, 畢玉海, 楊利敏, 賈曉娟 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院微生物研究所