水飛薊黃酮木脂素的去甲基衍生物及其制備方法和其用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一類水飛薊黃酮木脂素的衍生物及其制備方法和其用途。本發(fā)明使用具有脫甲基活性的人體腸道菌E.limosum ZL-II對水飛薊黃酮木脂素成分進行生物轉化，分離得到四個去甲基衍生物。本發(fā)明提供的水飛薊黃酮木脂素的衍生物對β-淀粉樣蛋白42的聚集表現(xiàn)出抑制活性，且明顯優(yōu)于原型化合物及表沒食子兒茶素沒食子酸酯，具有開發(fā)成防治阿爾茲海默癥等神經(jīng)退行性疾病的藥物前景。同時本發(fā)明提供的水飛薊黃酮木脂素的衍生物對癌細胞也表現(xiàn)出一定的抑制活性。本發(fā)明成果為充分利用水飛薊資源和提高其經(jīng)濟附加值奠定了工作基礎。
CGMCC NO 6846
20121120
【專利說明】水飛割黃鋼木脂轟的去甲基衍生物及其制備方法和其用途
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，具體涉及一種水飛葫黃麗木脂素的衍生物及其制備方 法和其用途。
【背景技術】
[0002] 水飛葫（Silybi Rruc^s)為菊科植物水飛葫 Silybum marianum(X.)Gaertn. (Milk thistle)的干燥成熟果實，原產(chǎn)于南歐、北非，收載于《中華人民共和國藥典》（2010 版），性涼，味苦，歸肝、膽經(jīng)，具有清熱解毒、疏肝利膽的功效，臨床上用于肝膽濕熱，脅痛， 黃痘等肝膽疾病。水飛葫主要包括6個黃麗木脂素類化合物的同分異構體，分別為水飛葫 賓A/B(silybin A/B，兩個非對映異構體）、異水飛葫賓A/B(isosilybin A/B，兩個非對映異 構體）、水飛葫亭（silychristin)和水飛葫寧（silydianin)。該類黃麗木脂素化合物已被 開發(fā)成中成藥水飛葫素（又名益肝靈、利肝泰、西利馬靈、利肝隆，CAS NO. 65666-07-1)，臨 床上用于急、慢性肝炎，早期肝硬化，中毒性肝損傷等疾病的治療；水飛葫黃麗類成分也是 保肝寧、飛當片等保肝利膽藥的重要原料；在美國及歐洲將其有效成分水飛葫賓作為抗氧 化食品添加劑。
【發(fā)明內容】
[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種水飛葫黃麗木脂素的衍生物及其制備方法和其用途。
[0004] 本發(fā)明提供的一種水飛葫黃麗木脂素是如式I或式II所示的化合物：
[0005]
【權利要求】
1. 一種如式I或式II所示的化合物：
2. 權利要求1所述化合物、式III所示化合物或式IV所示化合物的制備方法，
包括下述步驟1)和2): 1) 將含有式V-式VDI所不化合物的混合物加入培養(yǎng)基基礎中；所述培養(yǎng)基基礎為適合 菌株EubacteriumlimosumZL-IICGMCCNO. 6846生長或發(fā)酵的培養(yǎng)液；
2) 將含EubacteriumlimosumZL-IICGMCCNO. 6846的菌液接種于步驟1)制備的培 養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)48h即得。
3. 根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基基礎具體為庖肉培養(yǎng)基基 礎，其組成為：蛋白胨30.Og/L，牛肉粉5.Og/L，酵母5.Og/L，葡萄糖3.Og/L，磷酸二氫鉀 5.Og/L，可溶性淀粉2.Og/L，溶劑為水。
4. 根據(jù)權利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述含EubacteriumlimosumZL-II CGMCCNO. 6846 的菌液的制備方法為：取EubacteriumlimosumZL-IICGMCCNO. 6846 的 凍存液室溫融化，加入?yún)捬跻后w培養(yǎng)基中37°C培養(yǎng)24h，如此循環(huán)進行菌株的擴增。
5. 根據(jù)權利要求2-4任一所述的方法，其特征在于：所述含有式V-式VDI所示化合物 的混合物具體為從菊科水飛薊屬植物水飛薊Silybummarianum果實中采用甲醇提取的黃 酮類化合物的混合物，該黃酮類化合物的混合物主要包括水飛薊素，所述水飛薊素包括水 飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭。
6. 根據(jù)權利要求2-5任一所述的方法，其特征在于：還包括分離純化步驟；所述分離純 化步驟包括大孔吸附樹脂XAD-2分離純化過程、ODS中壓色譜分離純化過程和制備型高效 液相色譜分離純化過程。
7. 根據(jù)權利要求2-6任一所述的方法，其特征在于： 所述大孔吸附樹脂XAD-2分離純化過程的條件為：將權利要求2中步驟2)所得的培 養(yǎng)液進行如下操作，每24L的培養(yǎng)液，過濾得上清液，上樣于XAD-2大孔吸附樹脂柱，分別 依次用去離子水、10%乙醇水溶液、30%乙醇水溶液、50%乙醇水溶液各6個柱體積和60%乙 醇水溶液8個柱體積進行洗脫，收集60%乙醇洗脫液流分，去除溶劑得7. 48gFr. 1 ;所述柱 子填料為XAD-2大孔吸附樹脂，I. 7kg，粒度20-60目，平均表面積330m2/g，柱高X內徑為 450X90mm;所述柱體積具體指一個柱體積為IL;所述％指乙醇在乙醇水溶液中的體積百分 數(shù)； 所述ODS中壓色譜分離純化過程的條件為：將7. 48gFr. 1與11. 22g反相硅膠ODS拌樣 后干法上樣，柱子體積為36X460mm，填料為0DS，粒徑20-45μm，經(jīng)ODS中壓色譜甲醇-水 系統(tǒng)洗脫分離，洗脫液的流速20ml/min，先以250ml40 %甲醇水溶液洗脫，收集洗脫開始至 第250ml的洗脫液，去除溶劑后獲得100. 3mg的Fr. 1-1 ;再以45%甲醇水溶液洗脫，收集洗 脫開始至第700ml初的洗脫液，去除溶劑后得325. 3mg的Fr. 1-2 ;再收集第700ml末至第 1600ml末的洗脫液，去除溶劑后得776. 3mg的Fr. 1-3 ;所述％指甲醇在甲醇水溶液中的體 積百分數(shù)； 所述制備型高效液相色譜分離純化過程的條件為：采用制備型高效液相色譜儀SHIMADZULC-20A，制備柱Inertsil0DS-3column，柱高X內徑為 250X20mm，粒徑 5μπι， 以甲醇和0. 1 %甲酸水溶液的混合液作為洗脫緩沖液進行等度洗脫，分別純化Fr. 1-1、 Fr. 1-2和Fr. 1-3,所述洗脫緩沖液中，甲醇體積百分含量為48% ;所述0. 1%甲酸水溶液 中，甲酸的體積百分含量為〇· 1% ;將100. 3mg的Fr. 1-U325. 3mg的Fr. 1-2和776. 3mg 的Fr. 1-3分別用甲醇溶解為20.Omg/mL的制備母液，將母液分別進行高效液相色譜分離純 化；每次進樣量I.OmL,流速10.OmL/min;針對Fr. 1-1樣品，收集保留時間為38?41min的 流分，去除溶劑后得到43. 2mg的式IV所示化合物；針對Fr. 1-2樣品，收集保留時間為45? 53min的流分，去除溶劑后得到57. 9mg的式III所示化合物；針對Fr. 1-3樣品中，先收集保 留時間為63?72min的流分，去除溶劑后得到61. 5mg的式II所示的化合物，再收集保留時 間為75?78min的流分，去除溶劑后得到26. 3mg的式I所示的化合物。
8. 權利要求2-7所述方法直接制備得到的化合物。
9. 權利要求1所述化合物或權利要求8所述化合物在制備具有下述任一用途的產(chǎn)品中 的應用： 1) 治療阿爾茨海默??； 2) 抑制Aβ42蛋白聚集； 3) 治療癌癥； 4)抑制人宮頸癌細胞、人前列腺癌細胞、人胃癌細胞和/或人結腸癌細胞的活性。 10.EubacteriumlimosumZL-IICGMCCNO. 6846菌株在制備下述式I-式IV任一所不 化合物中的應用：
&
【文檔編號】A61P25/28GK104447717SQ201310428712
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權日:2013年9月18日
【發(fā)明者】楊東輝, 張瑩, 張英濤, 蔡少青 申請人:北京大學