一種聲敏止血劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種聲敏止血劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明將止血劑包封于脂質(zhì)體內(nèi)，通過生物素-親和素系統(tǒng)將其連接于超聲微泡表面，制得一種新型聲敏止血劑。該聲敏止血劑可高效載藥，性質(zhì)穩(wěn)定，粒徑分布均勻，可被低機械指數(shù)超聲識別，并被高機械指數(shù)超聲擊破釋藥，且體外止血試驗充分證明，該聲敏止血劑可有效縮短凝血時間。本發(fā)明聲敏止血劑可用于閉合性肝外傷無創(chuàng)止血，經(jīng)低MI和高M(jìn)I超聲反復(fù)切換、互相配合進(jìn)行控釋和評估，可獲得一種針對閉合性肝外傷診斷、治療與評估一體化的無創(chuàng)止血新方法，這對腹部其它實質(zhì)臟器閉合傷救治也具有重要的理論和實踐意義。
【專利說明】一種聲敏止血劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種聲敏止血劑及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]外傷是威脅青壯年生命健康的“頭號殺手”。WHO的數(shù)據(jù)顯示:2005年全球各種外傷青壯年致死人數(shù)約320萬,預(yù)計2020年會增至480萬人。閉合性肝外傷(Blunt hepatictrauma, BHT)占腹部實質(zhì)臟器外傷的15%~55%，病死率達(dá)10%~35%，其首要的致死病因是活動性出血。外科手術(shù)治療是治療外傷首選的方法，卻不適用于活動性出血患者。傳統(tǒng)的外科開腹止血對患者創(chuàng)傷大、操作繁瑣、并發(fā)癥多，因此過度手術(shù)是導(dǎo)致死亡的重要原因。故，亟需進(jìn)行BHT無創(chuàng)止血的研究。[0003]若將止血劑包封于藥物載體，并在BHT出血部位針對性釋放，不僅有望實現(xiàn)無創(chuàng)止血，而且可以明顯降低藥物對機體的不良作用。要實現(xiàn)以上設(shè)想需滿足以下兩個條件:第一，止血劑能被高效包封和安全運載；第二，止血劑與載體復(fù)合物能被清晰識別，并可高效釋藥。
[0004]脂質(zhì)體和超聲微泡(Microbubble，MB )是傳統(tǒng)的藥物載體。脂質(zhì)體于上世紀(jì)七十年代開始作為藥物載體，其包封范圍廣泛，親水性藥物、兩性藥物和疏水性藥物均可被包封。它是一種殼膜由雙分子層脂質(zhì)組成(主要是磷脂和膽固醇)、內(nèi)部為水相的閉合囊泡，殼膜磷脂的尾部相對，具有典型的雙親分子特性。親水性藥物可被包封于中央的水相部，疏水性藥物包封于雙層脂質(zhì)分子之間。雖然載藥脂質(zhì)體可受化學(xué)和生物方法激發(fā)而釋藥，也可受物理方法:如電場、磁場、溫度及可見光等激發(fā)而釋藥，但是，因其結(jié)構(gòu)不含氣體，所以難以實現(xiàn)超聲對其準(zhǔn)確“控釋”。MB于上世紀(jì)末開始作為藥物載體，可直接將疏水性藥物、基因、腺病毒、脂溶性藥物等包封于內(nèi)或嵌于脂質(zhì)包膜內(nèi)，它是一種殼膜由單分子層脂質(zhì)構(gòu)成、內(nèi)部為氣體的微氣泡，單分子層脂質(zhì)的疏水端朝向內(nèi)部的氣體面，親水端朝向脂質(zhì)分子。MB對超聲波的敏感性高，易于被低MI超聲波識別，被高M(jìn)I超聲波擊破。但是，MB無法直接包封親水性藥物，而只能將其吸附于殼膜表面，若親水性止血劑吸附于殼膜表面，暴露于血液循環(huán)中，不僅會使部分藥物過早降解或失活，還會使其與血液發(fā)生反應(yīng)，對機體產(chǎn)生不利影響。臨床上用于控制外傷出血的止血劑大多為親水性藥物(如立芷雪、蛇毒血凝酶、白眉蛇毒血凝酶等)，所以，MB不能直接運載止血劑。
[0005]脂質(zhì)體可以直接包封親水性藥物，但無法被超聲識別和擊破釋藥；MB對超聲敏感性高，但不能直接“包封”親水性藥物。集合脂質(zhì)體和MB的優(yōu)勢，制備一種既具有“包封”能力又易受超聲“控釋”的聲敏載體是近年該領(lǐng)域的研究熱點。
[0006]Ryo Suzuki 等(Ryo suzuki, Tomoko Takizawa, Yoichi Negishi, NaokiUtoguchij Kazuo Maruyama.Effective gene delivery with novel liposomalbubbles and ultrasonic destruction technology.1nternational Journalof Pharmaceutics, 2008，354( 1- 2): 49-55.)將基因包封入經(jīng)聚乙烯二醇(Polyethyleneglycol，PEG)修飾的脂質(zhì)體內(nèi)，之后將單分子層納米微泡也包封其內(nèi)，制備成納米微泡脂質(zhì)體(Nanobubbles liposome),其平均直徑約950 nm。研究證實,載DNA的納米微泡脂質(zhì)體對超聲波具有良好的增強效應(yīng)，在超聲波(2 MHz, 2.5 ff/cm2,10 s)作用下，可激發(fā)其攜帯的DNA成功轉(zhuǎn)染入靶細(xì)胞內(nèi)部。但是，此載體體積偏小，既影響了藥物包封量，又限制了納米微泡的包入數(shù)量，從而影響了其對超聲波的敏感性。此外，由于納米微泡殼膜可能來源于內(nèi)層脂質(zhì)，并且納米微泡包封于局限的脂質(zhì)體內(nèi)，會影響脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，因此該載體的重現(xiàn)及可行性仍存有爭議。
[0007]Shao-Ling Huang 等(Shao—LingHuang, Robert C， MacDonald.Acousticallyactive liposomes for drug encapsulation and uitrasound—triggered release.Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes.2004,1665 (1- 2):134-141.)將親水性藥物包封于脂質(zhì)體內(nèi)，并將空氣包封于雙層脂質(zhì)分子之間，制備出聲敏脂質(zhì)體(Acoustically active liposomes,AAL),平均直徑約 711 ± 105 nm。這種載體實際上被分為空氣和液體兩部分:空氣約占1/3，液體約占2/3。該載體具有超聲敏感性，且在超聲波(I MHz, 2 ff/cm2,10 s)作用下AAL可被擊破，從而打開載藥部分雙分子層殼膜，釋放被包封的藥物。但是，該載體以空氣作為聲敏材料，空氣易滲漏，會影響其在血液循環(huán)中的穩(wěn)定性。并且氣體表面積小，減低了超聲波對其識別效果。此外，該載體體積偏小，不僅影響了載藥量，也影響了其對超聲波的敏感性。
[0008]載體包封藥物、超聲激發(fā)釋藥，不但可大大減少藥物的過早降解或失活，而且這種方式使病灶的藥物濃度較靜脈直接給藥提高了十幾倍，甚至幾百倍，因此療效明顯提高，藥物的毒副作用顯著降低。然而，該方法用于BHT無創(chuàng)止血的研究尚屬空白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種聲敏止血劑及其制備方法和應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明所采取的技術(shù)`方案是:
一種聲敏止血剤，其特征在于:止血劑包封于脂質(zhì)體內(nèi)，脂質(zhì)體通過生物素-親和素系統(tǒng)連接于超聲微泡表面，所述止血劑為血凝酶、凝血酶、氨甲環(huán)酸中的至少ー種。
[0011]優(yōu)選的，止血劑為血凝酶。
[0012]優(yōu)選的，超聲微泡與脂質(zhì)體的體積比為1.5~2.5:1。
[0013]優(yōu)選的，脂質(zhì)體的脂膜材料為二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇、二硬脂酸磷酯酰こ醇胺-聚乙二醇-生物素，其摩爾比為12~14:6~8:1。
[0014]優(yōu)選的，超聲微泡的脂膜材料為二硬脂酰磷酯酰膽堿、二硬脂酸磷酯酰こ醇胺-聚乙二醇、二硬脂酸磷酯酰こ醇胺-聚乙二醇-生物素，其摩爾比為16~18:1~2:1~2。
[0015]優(yōu)選的，止血劑與脂質(zhì)體的脂膜材料的體積比為1:3~3.5。
[0016]上述聲敏止血劑的制備方法，包括以下步驟:
1)超聲微泡的制備:采用薄膜水化法將超聲微泡的脂膜材料制成脂質(zhì)體混懸液，聲振處理至溶液澄清，充入氟碳惰性氣體，進(jìn)行機械振蕩，洗滌，得生物素化的超聲微泡；
2)載藥脂質(zhì)體的制備:將脂質(zhì)體的脂膜材料溶于こ醚或甲醇與三氯甲烷的混合溶劑中，加入止血剤，混勻，聲振處理，蒸發(fā)溶劑，洗滌，得生物素化的載藥脂質(zhì)體；3)超聲微泡與載藥脂質(zhì)體的連接:將超聲微泡與親和素混勻，室溫下孵育15~30min后，洗滌，與載藥脂質(zhì)體混合，室溫下孵育15~30min后，洗滌純化，得聲敏止血劑。
[0017]優(yōu)選的，步驟I)中，在60~65°C下進(jìn)行聲振處理。
[0018]優(yōu)選的，步驟2)中，乙醚或甲醇與三氯甲烷的體積比為1:5~7。
[0019]上述聲敏止血劑在閉合性肝外傷無創(chuàng)止血中的應(yīng)用。
[0020]本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明將止血劑包封于脂質(zhì)體內(nèi)，通過生物素-親和素系統(tǒng)將其連接于超聲微泡表面，制得一種新型聲敏止血劑。該聲敏止血劑可高效載藥，性質(zhì)穩(wěn)定，粒徑分布均勻，可被低機械指數(shù)超聲識別，并被高機械指數(shù)超聲擊破釋藥。體外止血試驗充分證明，該聲敏止血劑可有效縮短凝血時間。
[0021]本發(fā)明聲敏止血劑可用于閉合性肝外傷無創(chuàng)止血，經(jīng)低MI和高M(jìn)I超聲反復(fù)切換、互相配合進(jìn)行控釋和評估，可獲得一種針對閉合性肝外傷診斷、治療與評估一體化的無創(chuàng)止血新方法，這對腹部其它實質(zhì)臟器閉合傷救治也具有重要的理論和實踐意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為本發(fā)明聲敏止血劑的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2為實施例1制備的聲敏止血劑的形態(tài)觀察圖；
圖3為實施例1制備的聲敏止血劑的粒徑分布圖；
圖4為實施例1制備的聲敏止血劑的超聲顯影圖；
圖5為體外止血試驗的凝血時間比較。
【具體實施方式】
[0023]一種聲敏止血劑，其特征在于:止血劑包封于脂質(zhì)體內(nèi)，脂質(zhì)體通過生物素-親和素系統(tǒng)連接于超聲微泡表面，所述止血劑為血凝酶、凝血酶、氨甲環(huán)酸中的至少一種。
[0024]優(yōu)選的，止血劑為血凝酶。
[0025]優(yōu)選的，超聲微泡與脂質(zhì)體的體積比為1.5~2.5:1。
[0026]優(yōu)選的，脂質(zhì)體的脂膜材料為二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇、二硬脂酸磷酯酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素，其摩爾比為12~14:6~8:1。
[0027]優(yōu)選的，超聲微泡的脂膜材料為二硬脂酰磷酯酰膽堿、二硬脂酸磷酯酰乙醇胺-聚乙二醇、二硬脂酸磷酯酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素，其摩爾比為16~18:1~2:1~2。
[0028]優(yōu)選的，所用聚乙二醇平均分子量為1800~2200Da。
[0029]優(yōu)選的，止血劑與脂質(zhì)體的脂膜材料的體積比為1:3~3.5。
[0030]聲敏止血劑的制備方法，包括以下步驟:
1)超聲微泡的制備:采用薄膜水化法將超聲微泡的脂膜材料制成脂質(zhì)體混懸液，聲振處理至溶液澄清，充入氟碳惰性氣體，進(jìn)行機械振蕩，洗滌，得生物素化的超聲微泡，具體步驟如下:將超聲微泡的脂膜材料溶于有機溶劑(三氯甲烷或無水乙醇)中，通入氮氣，旋轉(zhuǎn)吹干成膜，抽真空去除有機溶劑；加入脂膜材料體積4~6倍的水合劑(體積比Tris-buffer:甘油:1-2-丙二醇=80:10:10)，30~40kHz聲振處理，至溶液澄清；充入氟碳惰性氣體，機械振蕩30~45s，將氟碳惰性氣體包進(jìn)微泡內(nèi)；洗滌，得生物素化的超聲微泡；
2)載藥脂質(zhì)體的制備:將脂質(zhì)體的脂膜材料溶于乙醚或甲醇與三氯甲烷的混合溶劑中，加入止血劑，15~25kHz聲振處理3~4min混勻，蒸發(fā)溶劑,洗漆,得生物素化的載藥脂質(zhì)體；
3)超聲微泡與載藥脂質(zhì)體的連接:將超聲微泡與親和素混勻，室溫下孵育15~30min后，洗滌，與載藥脂質(zhì)體混合，室溫下孵育15~30min后，洗滌純化，得聲敏止血劑。
[0031]4)優(yōu)選的，步驟I)中，在60~65°C下進(jìn)行聲振處理。
[0032]優(yōu)選的，步驟I)中，抽真空3~5小時去除有機溶劑。
[0033]所述氟碳惰性氣體為全氟丙烷、六氟化硫或全氟丁烷。
[0034]優(yōu)選的，步驟2)中，乙醚或甲醇與三氯甲烷的體積比為1:5~7。
[0035]本發(fā)明將止血劑包封于脂質(zhì)體內(nèi)，通過生物素-親和素系統(tǒng)將其連接于超聲微泡(MB)表面,制備得到一種新型止血劑AAH (Acoustically Active Hemocoagulase,簡稱AAHo)(其結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示)。
[0036]考慮到凝血酶為凝血過程的關(guān)鍵酶而嚴(yán)禁用于靜脈注射，其聲敏止血劑具有滲漏的風(fēng)險而可能引起血管內(nèi)凝血，故本發(fā)明以血凝酶作為更優(yōu)選的止血劑。血凝酶是從巴西蝮蛇的毒液中提取的一種生物酶類止血劑，可經(jīng)靜脈注射、肌注及皮下注射，促進(jìn)生理性止血過程，常用于各種創(chuàng)傷及手術(shù)止血。血凝酶為蛋白質(zhì)，容易變性失活，故本發(fā)明選擇逆相蒸發(fā)法將其包封入脂質(zhì)體內(nèi)，從而避免制備中進(jìn)行加熱導(dǎo)致蛋白失活。
[0037]AAH不但可以高效運載止血劑，并且AAH可被超聲識別和擊破釋藥，用于閉合性肝外傷無創(chuàng)止血的過程中，可用低`機械指數(shù)(MI)和高M(jìn)I超聲反復(fù)切換、互相配合進(jìn)行“控釋”和評估，從而獲得一種針對BHT診斷、治療與評估一體化的無創(chuàng)止血新方法，這對腹部其它實質(zhì)臟器閉合傷救治也具有重要的理論和實踐意義。
[0038]下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本
【發(fā)明內(nèi)容】
。
[0039]實施例1
聲敏止血劑的制備工藝:
I)超聲微泡的制備
將脂膜材料 DSPC、DSPE-PEG2000、Biotin-DSPE-PEG2000 以 18:1:1 摩爾比溶解于三氯甲烷，通入氮氣，旋轉(zhuǎn)吹干成膜，抽真空3小時去除三氯甲烷；加入體積為脂膜材料5倍的水合劑，65°C下40kHz聲振處理，直至溶液澄清后，充入全氟丙烷氣體，機械振蕩45s后，300X g離心3min，去下清，然后加入適量去離子水重懸，300 X g離心3min，重復(fù)洗滌3次，得生物素化的超聲微泡。
[0040]2)載藥脂質(zhì)體的制備
將脂膜材料DPPC、膽固醇和Biotin-DSPE-PEG2000以摩爾比12:8:1溶解于三氯甲烷/乙醚(體積比20:3)混合溶劑中，加入體積為脂質(zhì)體脂膜材料1/3的血凝酶，20kHz聲振處理4min混合均勻，而后置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)，完全蒸發(fā)溶劑，洗滌，得到生物素化的載藥脂質(zhì)體；
3)超聲微泡與載藥脂質(zhì)體的連接
將所得ImL生物素化的超聲微泡與過量親和素混勻，室溫下孵育15min，用去離子水以300 X g3 min的離心參數(shù)反復(fù)離心3次；然后與500 μ L生物素化的載藥脂質(zhì)體混合，室溫下孵育15min，再以同樣條件離心三次洗滌純化，得到聲敏止血劑成品(ΑΑΗ-1)。[0041]實施例2
聲敏止血劑的制備エ藝:
1)超聲微泡的制備
將脂膜材料 DSPC、DSPE-PEG2000、Biotin-DSPE-PEG2000 以 16:2:2 摩爾比溶解于無水こ醇,通入氮氣,旋轉(zhuǎn)吹干成膜,抽真空4小時去除無水こ醇；加入體積為脂膜材料6倍的水合剤，60°C下40kHz聲振處理，直至溶液澄清后，充入六氟化硫氣體，機械振蕩30s后，300X g離心3min，去上清，然后加入適量生理鹽水重懸，300 X g離心3min，重復(fù)洗滌3次，得生物素化的超聲微泡。
[0042]2)載藥脂質(zhì)體的制備
將脂膜材料DPPC、膽固醇和Biotin-DSPE-PEG2000以摩爾比14:6:1溶解于三氯甲烷/甲醇(體積比5:1)混合溶劑中，混合均勻；加入體積為脂質(zhì)體脂膜材料1/3的凝血酶，混合均勻，25kHz聲振處理3min，而后置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)，完全蒸發(fā)溶劑，得到生物素化的脂質(zhì)體。
[0043]3)超聲微泡與載藥脂質(zhì)體的連接
將所得ImL生物素化的超聲微泡與過量親和素混勻，室溫下孵育20min，用生理鹽水以300 X g3min的離心參數(shù)反復(fù)離心3次；然后與750 u L生物素化的載藥脂質(zhì)體混合，室溫下孵育20min，再以同樣條件離心三次洗滌純化，得到聲敏止血劑成品(AAH-2)。
[0044]實施例3
聲敏止血劑的制備エ藝:
I)超聲微泡的制備
將脂膜材料 DSPC、DSPE-PEG2000、Biotin-DSPE-PEG2000 以 18:1:1 摩爾比溶解于三氯甲烷，通入氮氣，旋轉(zhuǎn)吹干成膜，抽真空5小時去除三氯甲烷；加入體積為脂膜材料4倍的水合剤，65°C下30kHz聲振處理，直至溶液澄清后，充入全氟丁烷氣體，機械振蕩40s后，300X g離心3min，去上清，然后加入適量PBS重懸，300 X g離心3min，重復(fù)洗滌3次，得生物素化的超聲微泡。
[0045]2)載藥脂質(zhì)體的制備
將脂膜材料DPPC、膽固醇和Biotin-DSPE-PEG2000以摩爾比14:6:1溶解于三氯甲烷/こ醚(體積比5:1)混合溶劑中，混合均勻；加入體積為脂質(zhì)體脂膜材料1/3.5的氨甲環(huán)酸，混合均勻，15kHz聲振處理4min，而后置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)，完全蒸發(fā)溶劑，得到生物素化的脂質(zhì)體。
[0046]3)超聲微泡與載藥脂質(zhì)體的連接
將所得1250 UL生物素化的超聲微泡與過量親和素混勻，室溫下孵育30min，用PBS以300 X g3 min的離心參數(shù)反復(fù)離心3次；然后與500 u L生物素化的載藥脂質(zhì)體混合，室溫下孵育30min，再以同樣條件離心三次洗滌純化，得到聲敏止血劑成品(AAH-3)。
[0047]試驗例
1、形態(tài)觀察:將純化后的AAH-1用去離子水稀釋100倍，于倒置系統(tǒng)顯微鏡明視野下觀察其形態(tài)與分布。20X10倍光鏡下觀察到制備的聲敏止血劑呈圓形，中心透亮，分布較均勻，無粘附聚集(如圖2所示)。
[0048]2、粒徑和濃度檢測^fAAH-1經(jīng)去離子水稀釋后加入納米粒度及電位分析儀內(nèi)進(jìn)行表面電位檢測，結(jié)果測得其平均粒徑約為4.01 ±0.40 ii m，粒徑范圍約3.67~4.54 y m，較典型分布，如圖3所示。顆粒計數(shù)分析儀內(nèi)檢測其濃度約為1.80±0.48/mL。
[0049]3、血凝酶包封率的檢測:采用BCA蛋白檢測法進(jìn)行血凝酶包封率的檢測，經(jīng)計算，本實施例1方法制備的血凝酶包封率為35%。
[0050]4、聲學(xué)性質(zhì)檢測:將純化后的AAH-1分別稀釋為約7.11 X 106/mL (A)、2.76X IO7/mL (B)U.15XlOVmL(C)和5.05X 108/mL (D)濃度，通過40MHz高頻探頭經(jīng)透聲軟管實時觀察，實時超聲顯影如圖4所示，在1.15 X IOVmL和5.05X 108/mL時會因氣體的強反射而產(chǎn)生聲影。表明本發(fā)明AAH具有聲學(xué)特性，隨著AAH濃度的增加回聲增強，且由于強反射，濃度達(dá)到一定值會產(chǎn)生后方聲影。
[0051]5、體外止血試驗:
試驗組:將 AAH-1 稀釋 10 倍后取 100 μ L，通過 2.25MHz、4.17w/cm2 和 2.25ΜΗζ、8.34w/cm2作用30 s擊破后，加入450 μ L兔血漿。而后加入40 mg/mL CaCL2啟動凝血過程，分別于25°C和37°C以挑取纖維蛋白為標(biāo)準(zhǔn)計算凝血時間。
[0052]對照組:為排除AAH-1本身對凝血時間的影響，分別以水及AAH-1復(fù)合物(未經(jīng)超聲處理)代替上述經(jīng)超聲處理的AAH-1作為對照組。
[0053]體外止血試驗的凝血時間對比如圖5所示。使用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件，通過2X4兩因素析因設(shè)計資料的方差分析顯示，25°C和37°C組的凝血時間具有顯著性差異(/7< 0.001)，說明25°C和37°C的不同處理溫度對凝血時間具有影響。不同的處理方式間也具有顯著性差異(/7 < 0.001)，說明血漿中加入水、復(fù)合物、4.17w/cm2和8.34w/cm2超聲處理組對凝血時間具有影響，并且平均凝血時間8.34w/cm2 ( 15.233 min)< 4.17w/cm2 (18.789min)<復(fù)合物(20.756 min)<水(24.625 min)。綜上，認(rèn)為不同的溫度與在血漿中加入不同處理方式間的AAH交互作用顯著。Student-Newman-Keuls法進(jìn)行多重比較進(jìn)一步分析，.4組處理間兩兩比較均存在顯著性差異。因此，可應(yīng)用該聲敏止血劑，通過低MI和高M(jìn)I超聲反復(fù)切換、互相配合進(jìn)行“控釋”和評估，從而獲得一種針對BHT診斷、治療與評估一體化的無創(chuàng)止血新方法。
【權(quán)利要求】
1.一種聲敏止血剤，其特征在于:止血劑包封于脂質(zhì)體內(nèi)，脂質(zhì)體通過生物素-親和素系統(tǒng)連接于超聲微泡表面，所述止血劑為血凝酶、凝血酶、氨甲環(huán)酸中的至少ー種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聲敏止血剤，其特征在于:止血劑為血凝酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聲敏止血剤，其特征在于:超聲微泡與脂質(zhì)體的體積比為L 5 ~2.5:1 o
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聲敏止血剤，其特征在于:脂質(zhì)體的脂膜材料為二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇、二硬脂酸磷酯酰こ醇胺-聚乙二醇-生物素，其摩爾比為12~14:6~8:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聲敏止血剤，其特征在于:超聲微泡的脂膜材料為二硬脂酰磷酯酰膽堿、二硬脂酸磷酯酰こ醇胺-聚乙二醇、二硬脂酸磷酯酰こ醇胺-聚乙二醇-生物素，其摩爾比為16~18:1~2:1~2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~4任意一項所述的聲敏止血剤，其特征在于:止血劑與脂質(zhì)體的脂膜材料的體積比為1:3~3.5。
7.權(quán)利要求1~6任意一項所述的聲敏止血劑的制備方法，包括以下步驟: . 1)超聲微泡的制備:采用薄膜水化法將超聲微泡的脂膜材料制成脂質(zhì)體混懸液，聲振處理至溶液澄清，充入氟碳惰性氣體，進(jìn)行機械振蕩，洗滌，得生物素化的超聲微泡； . 2)載藥脂質(zhì)體的制備:將脂質(zhì)體的脂膜材料溶于こ醚或甲醇與三氯甲烷的混合溶劑中，加入止血剤，混勻，聲振處理，蒸發(fā)溶劑，洗滌，得生物素化的載藥脂質(zhì)體；. 3)超聲微泡與載藥脂質(zhì)體的連接:將超聲微泡與親和素混勻，室溫下孵育15~30min后，洗滌，與載藥脂質(zhì)體混合，室溫下孵育15~30min后，洗滌純化，得聲敏止血剤。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的聲敏止血劑的制備方法，其特征在于:步驟I)中，在60~65 °C下進(jìn)行聲振處理。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的聲敏止血劑的制備方法，其特征在于:步驟2)中，こ醚或甲醇與三氯甲烷的體積比為1:5~7。
10.權(quán)利要求1~6任意一項所述的聲敏止血劑在閉合性肝外傷無創(chuàng)止血中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K47/48GK103495168SQ201310436607
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】李葉闊, 李婷, 鄭海榮, 嚴(yán)飛, 許瑞雪, 周群芳, 靳巧峰 申請人:廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院