一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物及其制備方法，所述提取物中環(huán)磷酸腺苷的濃度為每100g大于15mg，采用棗的固體或半固體原料，經(jīng)高壓差連續(xù)式低溫提取器提取，提取液濃縮后，真空干燥，粉碎得棗的粗提物；采用超臨界萃取技術(shù)萃取粗提物，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物；所述棗環(huán)磷酸腺苷提取物抗缺氧，抗疲勞，改善生活質(zhì)量方面效果突出，其制備方法具有以下明顯優(yōu)點(diǎn)：（1）提取轉(zhuǎn)移率高；（2）生產(chǎn)效率高；（3）質(zhì)量可控性高；（4）操作可控程度高；（5）資源綜合利用率高；（6）綜合運(yùn)行成本低；（7）自動(dòng)化程度高；（8）環(huán)境污染低。
【專利說(shuō)明】一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物有效成分的提取和富集生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其是一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]環(huán)憐酸腺苷(cyclicademodsine monophosphate,簡(jiǎn)稱 cAMP)是一種蛋白激酶制活劑，廣泛存在于生物體的組織與細(xì)胞內(nèi)。其受神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的控制，作為肽類激素、兒茶酚胺和前列腺素等激素的第二信使發(fā)揮生物效應(yīng)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)研究證明，cAMP可以通過(guò)促進(jìn)腦細(xì)胞代謝、修復(fù)衰老和疲勞腦細(xì)胞，阻止腦細(xì)胞衰老，從而改善睡眠與記憶力；對(duì)機(jī)體淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、抗體的形成與釋放、細(xì)胞免疫等生理功能有重要的調(diào)節(jié)作用，從而增強(qiáng)免疫力、選擇性抑制機(jī)體免疫反應(yīng)，改善過(guò)敏性皮炎、麻疹、哮喘等免疫功能；抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞分化，起到抗腫瘤的作用；通過(guò)營(yíng)養(yǎng)心肌、正性肌力、舒張血管等途徑改善心血管功能；調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)合成，促進(jìn)激素分泌，維持正常的人體生理活動(dòng)。
[0003]1991年，劉孟軍等借助蛋白結(jié)合法對(duì)14種園藝植物的cAMP含量進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)大棗中cAMP的含量最高，其成熟果肉中cAMP的含量為一般動(dòng)植物材料的數(shù)千至數(shù)萬(wàn)倍，范圍在60-800 μ g/g，其中，被譽(yù)為“中華金絲小棗第一縣”的無(wú)棣縣盛產(chǎn)的金絲小棗中cAMP的含量較高；韓利文等人報(bào)道，山東沂蒙山大雪棗中cAMP與金絲小棗含量相當(dāng)。
[0004]目前，環(huán)磷酸腺苷制劑的制備方法主要包括化學(xué)合成法、微生物發(fā)酵法和傳統(tǒng)提取工藝合并柱層析純化。其中，化學(xué)合成法例如申艷紅等(2003)以腺苷為原料，三氯氧磷為磷酰化試劑，用磷酸三乙酯作溶劑，低溫下生成腺苷的5’位二氯磷酸酯，將此中間體與反應(yīng)體系分離，融入適當(dāng)?shù)娜軇?，于攪拌下慢慢加入到?Η的水和乙腈溶液中，強(qiáng)堿環(huán)化得到3’，5’ -環(huán)磷酸腺苷，從乙醇和水中重結(jié)晶后純度可達(dá)到98.5%，總收率58% ；微生物發(fā)酵法例如日本研究者(Kok·ai Tokyyo Koho，1997)采用基因重組的手段獲得了菌種Escherichiacoli K_ll,可發(fā)酵生產(chǎn)cAMP,米用搖床在28°C培養(yǎng)14h,培養(yǎng)基為葡萄糖0.5%, KH2P041.4%, (NH4) 2S040.2%, MgS04.7H20 0.02%,蛋白胨 0.4%,酵母粉 0.02%,培養(yǎng)液中cAMP的濃度為3.9%mg/150mL ；CN 100425620C公開了一種從棗中提取環(huán)磷酸腺苷的工藝，采用浸泡-超聲提取紅棗，得到澄清棗汁，棗汁通過(guò)陰離子交換柱，甲酸水溶液洗脫，氨水溶液調(diào)節(jié)pH值，再過(guò)陰離子交換柱，收集的洗脫液通過(guò)層析柱(硅膠型，或者大孔樹脂型，或者聚酰胺型)，再用水或乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮后加入無(wú)水乙醇結(jié)晶，得到高純度環(huán)磷酸腺苷粉。
[0005]然而，上述化學(xué)合成法所用的試劑有一定毒性，污染環(huán)境；且技術(shù)復(fù)雜，價(jià)格昂貴，難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)；由于合成過(guò)程中的副產(chǎn)物原因，適用范圍很小，主要用于心絞痛、心肌梗死、心肌炎及心源性休克等心血管疾病的治療，使用過(guò)量會(huì)有毒副作用。柱層析法在分離過(guò)程中使用了一些刺激性的試劑，對(duì)層析柱填料的安全性要求也很高。微生物發(fā)酵法由于受到菌種限制且難以分離，使用起來(lái)也有一定的局限性。常用的提取方法采用的設(shè)備大部分是單元批次式，難以形成連續(xù)化生產(chǎn)的規(guī)模，影響提取過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程。[0006]可見，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的溶劑消耗量大、周期長(zhǎng)、自動(dòng)化水平低，化學(xué)合成過(guò)程中副產(chǎn)物多等技術(shù)問(wèn)題，尋求一種新的環(huán)磷酸腺苷的生產(chǎn)工藝具有非常重要的生產(chǎn)實(shí)踐意義。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
[0008]本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法。
[0009]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0010]一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，所述提取物中環(huán)磷酸腺苷的濃度為每15mg/100g以上，環(huán)磷酸腺苷自原料的轉(zhuǎn)利率達(dá)90%以上，該提取物是由下述方法得到的:采用棗的固體或半固體原料，經(jīng)高壓差連續(xù)式低溫提取器提取，提取液濃縮后，真空干燥，粉碎得棗的粗提物；采用超臨界萃取技術(shù)萃取粗提物，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
[0011]一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，采用棗的固體或半固體原料，經(jīng)高壓差連續(xù)式低溫提取器提取，提取液濃縮后，真空干燥，粉碎得棗的粗提物；采用超臨界萃取技術(shù)萃取粗提物，得到高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
[0012]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，具體步驟如下:
[0013](1)放置物料:選取含水量在5-30%的棗為原料，粉碎原料，使粒徑為180-850 μ m(80-24 目)；
[0014](2)抽真空:在反應(yīng)系統(tǒng)溫度-10-0°C條件下，在高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)形成真空，真空度保持在-100—20pa，加入水或5-70% (v/v)乙醇水溶液，保持5_30min，其中，所述原料與水或5-70% (v/v)乙醇水溶液的重量比為1:6-20 ；
[0015](3)減真空:通入凈化壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力升至OMpa，保持 Ι-lOmin ；
[0016](4)加壓:繼續(xù)通入壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力達(dá)到8-12Mpa，保持 l-20min ；
[0017](5)減壓:停止加壓，抽真空，使高壓差連續(xù)式低溫提取器中的壓力降至OMpa ；
[0018](6)循環(huán)提取:將步驟(2)- (5)進(jìn)行循環(huán)，循環(huán)10次；
[0019](7)分離:通過(guò)過(guò)濾、離心，使固液分離，收集提取液；
[0020](8)干燥:將步驟(7)所得提取液濃縮，真空干燥，粉碎過(guò)20-80目篩，得粗提物粉末；
[0021](9)超臨界萃取:以5-99% (v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為
8-15% (此處，夾帶比指夾帶劑與粗提物粉末的體積質(zhì)量比，ml/g)，平衡10-30min后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力15-60Mpa，萃取溫度35_60°C，萃取時(shí)間0.5-5小時(shí)，分離釜壓力5-30Mpa，分離釜溫度10-50°C，分離時(shí)間0.5-5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量10-100L/h的條件下，減壓分離，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
[0022]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(1)中粉碎原料后，環(huán)磷酸腺苷的含量為0.01-0.08%。
[0023]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(1)中選取含水量在5-15%的棗為原料。
[0024]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(1)中選取含水量在10%的棗為原料，粉碎原料，使粒徑為250 μ m (65目)。
[0025]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(1)中棗為金絲小棗(河北滄州)或大雪棗(山東沂蒙山區(qū))。
[0026]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(2)抽真空的真空度保持在_70pa，加入50% (v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料與50% (v/v)乙醇水溶液的重量比為1:10。
[0027]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(2)中反應(yīng)系統(tǒng)溫度-10-0°c，是通過(guò)高壓差連續(xù)式低溫提取器外周冷凝循環(huán)系統(tǒng)中的冷卻水實(shí)現(xiàn)的。
[0028]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述冷卻水為95% (v/v)乙醇。
[0029]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(4)加壓的壓力達(dá)到 llMpa，保持 15min。
[0030]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(7)中提取液為固液分離后經(jīng)400目的濾膜過(guò)濾至澄清的離心液。
[0031]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所述步驟(9)中以90% (v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為15%，平衡30min后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力40Mpa，萃取溫度37°C，萃取時(shí)間5小時(shí)，分離釜壓力6Mpa，分離釜溫度30°C，分離時(shí)間2.5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量20L/h的條件下，減壓分離，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取`物。
[0032]優(yōu)選的，上述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，所得到的環(huán)磷酸腺苷可進(jìn)一步經(jīng)傳統(tǒng)制劑工藝加工生產(chǎn)得到膠囊劑、口服液、露劑、顆粒劑、沖劑、片劑等相關(guān)劑型的
女口
廣叩ο
[0033]本發(fā)明的有益效果是:
[0034]本發(fā)明所述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，抗缺氧，抗疲勞，改善生活質(zhì)量方面效果突出，該高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，將原料棗進(jìn)行低溫干燥處理，總灰分不超過(guò)2.0%，利用同批藥材提取液富集環(huán)磷酸腺苷，采用高壓差低溫連續(xù)提取技術(shù)，通過(guò)瞬時(shí)的真空加壓，將棗中組織細(xì)胞進(jìn)行破裂，使胞內(nèi)相關(guān)成分與溶媒充分接觸、直接溶解，從而達(dá)到高效提取的效果，再通過(guò)超臨界二氧化碳萃取技術(shù)分離得到高收率、高純度的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)，采用特定濃度的乙醇作夾帶劑，選擇條件獲得以高含量的環(huán)磷酸腺苷活性成分，其濃度在15mg/g以上，是食品或藥品的優(yōu)質(zhì)原料。
[0035]與現(xiàn)有提取技術(shù)相比，本發(fā)明所述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法具有以下明顯優(yōu)點(diǎn):
[0036](1)提取轉(zhuǎn)移率高；
[0037](2)生產(chǎn)效率高；
[0038](3)質(zhì)量可控性高；
[0039](4)操作可控程度高；
[0040](5)資源綜合利用率高:溶媒用量大幅減少，提取液中環(huán)磷酸腺苷含量高，后期濃縮成本降低；
[0041](6)綜合運(yùn)行成本低；
[0042](7)自動(dòng)化程度高；
[0043](8)環(huán)境污染低。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0044]圖1是環(huán)磷酸腺苷標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖；
[0045]圖2是實(shí)施例1所得高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0046]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0047]實(shí)施例1
[0048]一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，其具體制備步驟如下:
[0049](1)放置物料:將含水量10%的河北滄州金絲小棗10kg，粉碎過(guò)65目篩，使粒徑250 μ m，置于高壓差連續(xù)式低溫提取器中；
[0050](2)抽真空:通過(guò)高壓差連續(xù)式低溫提取器外周冷凝循環(huán)系統(tǒng)中的冷卻水(95%(v/v )乙醇)使反應(yīng)系統(tǒng)溫度_7 V條件下，在高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)形成真空，真空度保持在_70pa，恒壓后，加入50% (v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料與50% (v/v)乙醇水溶液的重量比為1:10 ;
[0051](3)減真空:緩慢通入凈化的壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)壓力升至OMpa,時(shí)間約為3min ；
[0052](4)加壓:繼續(xù)通入壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力達(dá)llMpa，保持 15min ；
[0053]( 5 )減壓:停止加壓，打開放氣閥，抽真空，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力降至 OMpa ；
[0054](6)循環(huán)提取:繼續(xù)步驟(2)- (5)，循環(huán)10次；
[0055](7)分離:經(jīng)過(guò)濾、離心，將固液分離，離心液經(jīng)400目的濾膜過(guò)濾至澄清，收集提取液；
[0056](8)干燥:將步驟(7)所得提取液濃縮，真空干燥，粉碎過(guò)65目篩，得棗的粗提物粉末；
[0057](9)超臨界萃取:以90%(v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為15%(此處，夾帶比指夾帶劑與粗提物粉末的體積質(zhì)量比，ml/g)，平衡30min后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力40Mpa，萃取溫度37°C，萃取時(shí)間5小時(shí)，分離釜壓力6Mpa，分離釜溫度30°C，分離時(shí)間2.5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量20L/h的條件下，減壓濃縮、干燥，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物，對(duì)棗環(huán)磷酸腺苷提取物進(jìn)行高效液相色譜法檢測(cè)，其中，色譜儀:由P200 II高壓恒流泵、UV200 II紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器及Echr0m98色譜工作站等部分組成；樣品處理:準(zhǔn)確量取10ml用蒸餾水定容于50ml容量瓶中，搖勻，離心,0.45 μ m濾膜過(guò)濾，即得；色譜柱:Hydersir BDS C18 ;流動(dòng)相:20mol/LKH2P04-甲醇(90:10);柱溫:25V ;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm;7流速:0.6mL/min ;進(jìn)樣量:10yLo如圖1和圖2所示，其中環(huán)磷酸腺苷含量為15mg/100g的提取物。
[0058]實(shí)施例2[0059]一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，其具體制備步驟如下:
[0060](I)放置物料:選取含水量在5%的大雪棗(山東沂蒙山區(qū))為原料，粉碎原料，使粒徑為 180 μ m (80 目)；
[0061](2)抽真空:在反應(yīng)系統(tǒng)溫度0°C條件下，在高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)形成真空，真空度保持在-lOOpa，加入水溶液，保持30min，其中，所述原料與水溶液的重量比為1:6 ；
[0062](3)減真空:通入凈化壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力升至OMpa，保持IOmin ；
[0063](4)加壓:繼續(xù)通入壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力達(dá)到12Mpa，保持Imin ；
[0064](5)減壓:停止加壓，抽真空，使高壓差連續(xù)式低溫提取器中的壓力降至OMpa ；
[0065](6)循環(huán)提取:將步驟(2)- (5)進(jìn)行循環(huán)，循環(huán)10次；
[0066](7)分離:通過(guò)過(guò)濾、離心，使固液分離，收集提取液；
[0067](8)干燥:將步驟(7)所得提取液濃縮，真空干燥，粉碎過(guò)80目篩，得粗提物粉末；
[0068](9)超臨界萃取:以99% (v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為8% (此處，夾帶比指夾帶劑與粗提物粉末的體積質(zhì)量比，ml/g)，平衡30min后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力60Mpa，萃取溫度35°C，萃取時(shí)間0.5小時(shí)，分離釜壓力30Mpa，分離釜溫度10°C，分離時(shí)間0.5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量IOL/h的條件下，減壓分離，得到環(huán)磷酸腺苷含量為10mg/100g的提取物。
[0069]實(shí)施例3
[0070]一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，其具體制備步驟如下:
[0071](I)放置物料:選取含水量在30%的金絲小棗(河北滄州)為原料，粉碎原料，使粒徑為 850 μ m (24 目);
[0072](2)抽真空:在反應(yīng)系統(tǒng)溫度-10°C條件下，在高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)形成真空，真空度保持在_20pa，加入5% (v/v)乙醇水溶液，保持5min，其中，所述原料與5% (v/v)乙醇水溶液的重量比為1:20 ;
[0073](3)減真空:通入凈化壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力升至OMpa，保持Imin ；
[0074](4)加壓:繼續(xù)通入壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力達(dá)到8Mpa，保持 20min ；
[0075](5)減壓:停止加壓，抽真空，使高壓差連續(xù)式低溫提取器中的壓力降至OMpa ；
[0076](6)循環(huán)提取:將步驟(2)- (5)進(jìn)行循環(huán)，循環(huán)10次；
[0077](7)分離:經(jīng)過(guò)濾、離心，將固液分離，離心液經(jīng)400目的濾膜過(guò)濾至澄清，收集提取液；
[0078](8)干燥:將步驟(7)所得提取液濃縮，真空干燥，粉碎過(guò)20目篩，得粗提物粉末；
[0079](9)超臨界萃取:以5% (v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為15%(此處，夾帶比指夾帶劑與粗提物粉末的體積質(zhì)量比，ml/g)，平衡IOmin后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力15Mpa，萃取溫度60°C，萃取時(shí)間5小時(shí)，分離釜壓力5Mpa，分離釜溫度50°C，分離時(shí)間5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量100L/h的條件下，減壓分離，得到環(huán)磷酸腺苷含量為9.5mg/100g的提取物。
[0080]實(shí)施例4
[0081]一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，其具體制備步驟如下:
[0082](I)放置物料:選取含水量在15%的金絲小棗為原料，粉碎原料，過(guò)65目篩；
[0083](2)抽真空:在反應(yīng)系統(tǒng)溫度_5°C條件下，在高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)形成真空，真空度保持在_50pa，加入70%(v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料與70%(v/V)乙醇水溶液的重量比為1:8 ；
[0084](3)減真空:通入凈化壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力升至OMpa，保持5min ；
[0085](4)加壓:繼續(xù)通入壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力達(dá)到lOMpa，保持IOmin ；
[0086](5)減壓:停止加壓，抽真空，使高壓差連續(xù)式低溫提取器中的壓力降至OMpa ；
[0087](6)循環(huán)提取:將步驟(2)- (5)進(jìn)行循環(huán)，循環(huán)10次；
[0088](7)分離:經(jīng)過(guò)濾、離心，將固液分離，離心液經(jīng)400目的濾膜過(guò)濾至澄清，收集提取液；
[0089](8)干燥:將步驟(7)所得提取液濃縮，真空干燥，粉碎過(guò)40目篩，得粗提物粉末；
[0090](9)超臨界萃取:以70% (v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為12% (此處，夾帶比指夾帶劑與粗提物粉末的體積質(zhì)量比，ml/g)，平衡25min后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力40Mpa，萃取溫度45°C，萃取時(shí)間4小時(shí)，分離釜壓力25Mpa，分離釜溫度40°C，分離時(shí)間4小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量90L/h的條件下，減壓分離，得到環(huán)磷酸腺苷含量為13mg/100g的提取物。
[0091]實(shí)施例5
[0092]一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，其具體制備步驟如下:
[0093]( I)放置物料:選取含水量在20%的金絲小棗為原料，粉碎原料，過(guò)40目篩；
[0094](2)抽真空:在反應(yīng)系統(tǒng)溫度_8°C條件下，在高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)形成真空，真空度保持在_60pa，加入70%(v/v)乙醇水溶液，保持15min，其中，所述原料與70%(v/V)乙醇水溶液的重量比為1:15 ;
[0095](3)減真空:通入凈化壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力升至OMpa，保持5min ；
[0096](4)加壓:繼續(xù)通入壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力達(dá)到12Mpa，保持5min ；
[0097](5)減壓:停止加壓，抽真空，使高壓差連續(xù)式低溫提取器中的壓力降至OMpa ；
[0098](6)循環(huán)提取:將步驟(2)- (5)進(jìn)行循環(huán)，循環(huán)10次；
[0099](7)分離:經(jīng)過(guò)濾、離心，將固液分離，離心液經(jīng)400目的濾膜過(guò)濾至澄清，收集提取液；
[0100](8)干燥:將步驟(7)所得提取液濃縮，真空干燥，粉碎過(guò)65目篩，得粗提物粉末；
[0101](9)超臨界萃取:以90%(v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為13%(此處，夾帶比指夾帶劑與粗提物粉末的體積質(zhì)量比，ml/g)，平衡20min后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力50Mpa，萃取溫度40°C，萃取時(shí)間2.5小時(shí)，分離釜壓力15Mpa，分離釜溫度20°C，分離時(shí)間2.5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量30L/h的條件下，減壓分離，得到環(huán)磷酸腺苷含量為11.5mg/100g的提取物。
[0102]上述實(shí)施例中所得高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物可用于制備液體飲料，例如，取2g實(shí)施例1中所得高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，溶解在4L純水中，無(wú)菌灌封，每瓶10mL。
[0103]以實(shí)施例1所述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物進(jìn)行如下試驗(yàn):
[0104]通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)前后血氧飽和度、血紅蛋白含量、血乳酸含量、血尿素氮含量的變化，對(duì)本發(fā)明所述高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物的抗缺氧、抗疲勞功效進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0105]采用隨機(jī)雙盲對(duì)照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將120例符合納入標(biāo)準(zhǔn)/排除標(biāo)準(zhǔn)的志愿受試者按照1:1:1的比例進(jìn)行分配，將120人隨機(jī)分成高劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組三組。
[0106]觀察周期為40天，時(shí)間窗為±7天，詳細(xì)過(guò)程參見表1臨床試驗(yàn)流程表。
[0107]表1臨床試驗(yàn)流程表
【權(quán)利要求】
1.一種高含量棗環(huán)磷酸腺苷提取物，其特征在于:所述提取物中環(huán)磷酸腺苷的濃度為每100g大于15mg，該提取物是由下述方法得到的:采用棗的固體或半固體原料，經(jīng)高壓差連續(xù)式低溫提取器提取，提取液濃縮后，真空干燥，粉碎得棗的粗提物；采用超臨界萃取技術(shù)萃取粗提物，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
2.權(quán)利要求1所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:采用棗的固體或半固體原料，經(jīng)高壓差連續(xù)式低溫提取器提取，提取液濃縮后，真空干燥，粉碎得棗的粗提物；采用超臨界萃取技術(shù)萃取粗提物，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:具體步驟如下:(1)放置物料:選取含水量在5-30%的棗為原料，粉碎原料，使粒徑為180-850μ m ；(2)抽真空:在反應(yīng)系統(tǒng)溫度-10-0°C條件下，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)形成真空，真空度保持在-100—20pa，加入水或5-70% (v/v)乙醇水溶液，保持5_30min，其中，所述原料與水或5-70% (v/v)乙醇水溶液的重量比為1:6-20 ；(3)減真空:通入凈化壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力升至OMpa，保持Ι-lOmin ；(4)加壓:繼續(xù)通入壓縮空氣，使高壓差連續(xù)式低溫提取器內(nèi)的壓力達(dá)到8-12Mpa，保持 l-20min ；(5)減壓:停止加壓，抽真空，使高壓差連續(xù)式低溫提取器中的壓力降至OMpa；(6)循環(huán)提取:將步驟(2)- (5)進(jìn)行循環(huán)，循環(huán)10次；(7)分離:通過(guò)過(guò)濾、離心，使固液分`離，收集提取液；(8)干燥:將步驟(7)所得提取液濃縮，真空干燥，粉碎過(guò)20-80目篩，得粗提物粉末；(9)超臨界萃取:以5-99%(v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為8-15%,平衡10_30min后,進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取,在萃取爸壓力15_60Mpa,萃取溫度35_60°C,萃取時(shí)間0.5-5小時(shí)，分離釜壓力5-30Mpa，分離釜溫度10_50°C，分離時(shí)間0.5-5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量10-100L/h的條件下，減壓分離，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:所述步驟(1)中選取含水量在5-15%的棗為原料。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:所述步驟(1)中選取含水量在10%的棗為原料，粉碎原料，使粒徑為250 μ m。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)抽真空的真空度保持在_70pa，加入50% (v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料與50% (v/v)乙醇水溶液的重量比為10:1 ;所述步驟(2)中反應(yīng)系統(tǒng)溫度-10-0°C，是通過(guò)高壓差連續(xù)式低溫提取器外周冷凝循環(huán)系統(tǒng)中的冷卻水實(shí)現(xiàn)的。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:所述冷卻水為95% (v/v)乙醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)加壓的壓力達(dá)到llMpa,保持15min。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:所述步驟(7)中提取液為固液分離后經(jīng)400目的濾膜過(guò)濾至澄清的離心液。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的棗環(huán)磷酸腺苷提取物的制備方法，其特征在于:所述步驟(9)中以90% (v/v)乙醇作夾帶劑與粗提物粉末均勻混合，夾帶比為15%，平衡30min后，進(jìn)行動(dòng)態(tài)萃取，在萃取釜壓力40Mpa，萃取溫度37°C，萃取時(shí)間5小時(shí)，分離釜壓力6Mpa，分離釜溫度30°C，分離時(shí)間2.5小時(shí)，同一流程中分離釜壓力始終小于萃取釜壓力，二氧化碳流量20L/h的條件下，減壓 分離，得到棗環(huán)磷酸腺苷提取物。
【文檔編號(hào)】A61K31/7076GK103623080SQ201310443550
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年9月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月25日
【發(fā)明者】吳樂(lè)斌, 周甄鴻, 胡晨旭, 劉紅彥, 姜佳 申請(qǐng)人:中恩（天津）醫(yī)藥科技有限公司